cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 for use on the cobas s 201 system

cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 for use on the cobas s 201 system IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA. cobas TaqScreen MPX Test, v2.0 MPX v2.0 96 Tests P/N: 05969492 190 cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 MPX CTL v2.0 6 Sets P/N: 05965411 190 cobas TaqScreen Wash Reagent TS WR 5.1 L P/N: 04404220 190 FELHASZNÁLÁS MÓDJA A cobas TaqScreen MPX Teszt, 2.0-s verzió (v2.0) a cobas s 201 rendszerrel való együttes használatra egy kvalitatív, in vitro vizsgálat az 1-es típusú, M csoportú humán immundeficiencia vírus (HIV-1) RNS, az O csoportú HIV-1 RNS, a 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-2) RNS, a hepatitis C vírus (HCV) RNS és a hepatitis B vírus (HBV) DNS direkt kimutatására humán plazmából. A vizsgálat célja donorminták szűrése HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatására egyéni humán donorok plazmamintáiból, beleértve a teljes vér és véralkotórészek (vörösvértest, vérlemezke és plazma) donorait és egyéb élő donorokat. A vizsgálat használható továbbá szerv- és szövetdonorok szűrésére is, amennyiben a mintákat akkor vették le, amikor a donor szíve még dobogott. A szűrés során az összes donortól származó plazmát egyéni mintaként kell kezelni. Teljes vér és véralkotórészek donorainak esetében a plazmaminták vizsgálhatóak külön-külön, illetve egyéni minták részleteiből álló csoportokba gyűjtve, a HIV-, HCV- és HBV-szerológiával egybekötve. Egyéni minta esetén a vizsgálat párhuzamosan kimutatott, de külön eredményt ad HIV, HCV és HBV vírusokra. Ez a vizsgálat nem a HIV-, HCV- vagy HBV-fertőzés diagnosztizálásának elősegítésére való. A VIZSGÁLAT ÖSSZEGZÉSE ÉS MAGYARÁZATA A vér és véralkotórészek transzfúziója során lényeges problémát jelentenek a vírusfertőzések, különösen az 1-es és 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1, HIV-2), hepatitis C vírus (HCV) és hepatitis B vírus (HBV) esetleges átvitele. Ezen ágensek átvitele elsősorban fertőzött vér vagy vér- és plazmakészítmények, bizonyos szövetek vagy testfolyadékok által, nemi érintkezés során, illetve fertőzött anyáról újszülöttre lehetséges. A HIV-1 az egész világon elterjedt, becsült előfordulási gyakorisága világszerte 1,1% (0,56% Észak- Amerikában és 0,25% Nyugat-Európában). A HIV-1 fertőzött személyek rövid, kezdetben akut, influenzaszerű megbetegedést tapasztalhatnak, amelyhez a perifériás vérben magas szintű virémia társul a fertőzéstől számított 3-6 hét múlva. 1 Jelenleg a HIV-1 három fő genetikai csoportja ismert: M csoport (main, fő), N csoport (nem-m-nem-o) és O csoport (outlier, kívülálló) Az M csoport igen elterjedt, és 9 szubtípusba, valamint számos cirkuláló rekombináns formába (CRF) sorolható. 2 A HIV-2-t 1986-ban izolálták először nyugat-afrikai betegekből. Mind a HIV-1, mind a HIV-2 azonos módokon vihető át, és hasonló opportunista fertőzésekkel, valamint szerzett immunhiányos tünetegyüttes (Acquired Immunodeficiency Syndrome - AIDS) kialakulásával társul. 3 A HIV-2 elterjedése egyes afrikai népek körében több, mint 1%-ra tehető, és a HIV-2 Európa bizonyos részein és Indiában is növekvő problémát jelent. 4 A HCV-t tartják a poszttranszfúziós non-a, non-b hepatitis esetek 90% 95%-áért felelős fő fertőző ágensnek. 5,6 A HCV világszerte előfordul, de incidenciája a fertőzés általános tünetmentessége miatt kevéssé ismert. Akárhogy is, a jelentett elterjedése a nyugat-európai 0,5 2,0%-tól az egyiptomi 20%-ig változhat. A Dokumentum verzióinformációi rész a dokumentum végén található. 1

A ma élő emberek közül több, mint 2 milliárdan fertőződtek életük folyamán valamikor HBV-vel. Közülük világszerte nagyjából 350 millióan maradtak krónikus fertőzöttek, és váltak vírushordozóvá. 7-11 A világ népességének háromnegyede él magas átfertőzöttségű területeken. Évente több, mint 4 millió akut klinikai HBV eset fordul elő. A szerológiai szűrővizsgálatok jelentősen csökkentették, de nem számolták fel a vírusfertőzések vér és vérkészítmények transzfúziójával történő átvitelének kockázatát. A donoroktól levett teljes vér és plazma HBV szűrését az 1970-es évek elején kezdték meg HBsAg vizsgálattal, és az 1980-as években anti-hbc vizsgálattal. A HBV-szűrésen kívül rutinszerűen végzik a vér és plazma HIV-1, HIV-2 és anti-hcv szűrését enzim immunoassay (EIA) vizsgálatokkal. A transzfúziós készítmények fertőző ágensekre történő magasabb szintű szűrésére támasztott közigény előmozdította a nukleinsav-vizsgálati (nucleic acid test, NAT) technológiák fejlődését. Klinikai vizsgálatok szerint a vírusnukleinsavak (HIV-1 RNS, 12-14 HCV RNS 5,13-16 és HBV DNS 17-20 ) kimutatása tovább csökkentheti az ágensek ablakperiódus alatti véradásból eredő átviteli kockázatát. Az ablakperiódust átlagosan 22 napra becsülik, de a HIV-1 esetében akár 6 hónap is lehet. 21 A HIV-1 kis csoportos minta (mini-pool) NAT vizsgálat kivitelezésével a fertőző ablakperiódus jelentősen lerövidíthető, így a HIV-1 átvitelének jelenlegi kockázatát hozzávetőleg 1-re becsülik 2 millió véradásból. 13-15 Hasonlóan, a HCV RNS NAT bevezetése az antitestnegatív ablakperiódust körülbelül 60 nappal csökkentette 13-15, a jelenlegi becsült kockázat hozzávetőleg 1 millió véradásból 1 2. A HBV DNS NAT szűrését egyre több helyen alkalmazzák. Az alacsony, közepes és magas HBV prevalenciájú országokban végzett klinikai vizsgálatok megmutatták a NAT eredményességét az ablakperiódus és késői HBV-fertőzött donorok esetében, és bebizonyították a HBV transzfúziós átviteli esélyének csökkenését. 15,19,20,22,23 A többszörös target vizsgálatok hatásfokának javítása érdekében a többféle vírus egyidejű kimutatására egy multiplex (MPX) polimeráz láncreakciót (PCR) fejlesztettek ki. A MPX PCR folyamán egy reakciócsőben egynél több targetszekvencia amplifikálása és kimutatása zajlik többféle primerpár és próba segítségével. A cobas TaqScreen MPX Teszt, 2.0-s verzió egy minőségi multiplex vizsgálat, amely lehetővé teszi a HIV RNS, HCV RNS és HBV DNS, illetve a belső kontroll egyidejű kimutatását és megkülönböztetését egyetlen vizsgálatban fertőzött csoportos és egyéni plazmamintákból. A cobas TaqScreen MPX Teszt, 2.0-s verzió általános nukleinsav-előkészítési eljárást alkalmaz a COBAS AmpliPrep készüléken. A HIV RNS (HIV-1 M és O csoport RNS, HIV-2 RNS), HCV RNS és HBV DNS amplifikációja, kimutatása és megkülönböztetése automatizált, valós idejű PCR eljárással történik a COBAS TaqMan Analizátoron. A vizsgálat nem tesz különbséget a HIV-1 M csoport, a HIV-1 O csoport és a HIV-2 között. Az eljárás egy belső kontrollt is magába foglal a teljesítmény monitorozására minden egyes vizsgálat során, és a megelőzően amplifikált anyag (amplikon) által okozott potenciális szennyezés csökkentésére AmpErase enzimet alkalmaz. HIV-1 O csoport és HIV-2 megkülönböztetésére alkalmas teszt nem áll rendelkezésre a Roche-tól. AZ ELJÁRÁS ALAPELVEI A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas s 201 rendszeren való használatra 4 fő eljáráson alapul: 1. Automatizált mintacsoportosítás/pipettázás és kontroll pipettázás az opcionális Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral 2. Automatizált minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készülékkel 3. Nukleinsavak automatizált amplifikációja és PCR termékek valósidejű kimutatása és megkülönböztetése a COBAS TaqMan Analizátorral 4. Automatizált adatkezelés a csoportosító és adatkezelő (Pooling and Data Management, PDM) szoftverrel 2

Automatizált mintacsoportosítás és pipettázás a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral A Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor a cobas s 201 rendszer részeként automatizálja a csoportok és egyéni donorminták pipettázását, a részletek átvitelét mély lyukú lemezekre (opcionális) és a vizsgálati kontrollok pipettázását. A cobas s 201 rendszer donor csoportok vizsgálatára, valamint a reaktív csoportok megerősítő vizsgálatára használatos, hogy azonosítsa a reaktív egyéni donormintákat. A cobas s 201 rendszert a minták tételekben történő feldolgozására tervezték. Egy tétel meghatározása a minták és kontrollok olyan gyűjteménye, amelyek pipettázása, kivonása, amplifikációja és kimutatása egyszerre zajlik. Miután a tétel pipettázása megtörtént a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral, a tétel a COBAS AmpliPrep készülékbe kerül az eljárás következő fázisának elvégzésére. Rendelkezésre áll olyan lehetőség is, hogy manuálisan pipettázott mintákat közvetlenül a COBAS AmpliPrep készülékbe töltse. Automatizált minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készülékkel A targetből és a hozzáadott Armored RNA belső kontroll (internal control, IC) molekulákból (amelyek a minta-előkészítési és amplifikációs/kimutatási eljárás során kontrollként szolgálnak) származó nukleinsavak feldolgozása egyszerre zajlik. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagensei segítségével öt egymást követő lépés megy végbe a COBAS AmpliPrep készüléken. A proteinázoldat a fehérjék emésztésével elősegíti a lízist, inaktiválja a nukleázokat és lehetővé teszi az RNS és DNS felszabadítását a vírusrészecskékből. A lízisreagens hozzáadása a vírusok lízisét és a nukleázok inaktiválását eredményezi a fehérjék denaturálása által a mintában. Az RNS és DNS felszabadul és egyidejűleg védve van a nukleázok hatásától. A felszabadult nukleinsavak a hozzáadott mágneses üvegpartikulumok szilikonfelületéhez kötnek. Ez elsősorban az üvegpartikulumok felszínének nettó pozitív töltése és a nukleinsavak nettó negatív töltése miatt következik be a kaotróp sókoncentráció alatt és a lízisreakció ionerőssége miatt. A mosóreagens eltávolítja a nem kötött anyagokat és a szennyeződéseket, mint denaturált fehérjék, sejttörmelék és lehetséges PCR inhibitorok (például hemoglobin stb.), valamint csökkenti a sókoncentrációt. A mágneses üvegpartikulumokról a tisztított nukleinsavakat emelt hőmérsékleten az eluáló puffer szabadítja fel. Nukleinsavak automatizált amplifikációja a COBAS TaqMan analizátor segítségével Az automatizált minta-előkészítés során a tisztított nukleinsavak humán plazmából történő izolálását követően a HIV RNS (HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport és HIV-2) és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS amplifikálása, kimutatása és megkülönböztetése a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix (MPX2 MMX) segítségével történik. A mangán-acetátos aktiválást követően a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix lehetővé teszi az RNS targetek reverz transzkripcióját, majd ezt követően a HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2 és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS nagyfokban konzervált régióinak PCR amplifikációját specifikus primerekkel. Az amplifikált nukleinsavak párhuzamos kimutatása a master mixben ugyancsak jelenlevő HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV és IC próbák 5'-nukleolitikus bontása során keletkező fluoreszcens jelek segítségével megy végbe. Négy egyedi fluoreszcens festék használatos: egyik festék az IC próbát jelöli, a másik három pedig a HIV, HCV és HBV próbákat, lehetővé téve ezáltal a HIV, HCV és HBV targetek és az IC független azonosítását. A rendszer mindhárom HIV target azonosításához ugyanazt a festéket használja, így azokat nem különbözteti meg egymástól. Reverz transzkripció és PCR-amplifikálás A reverz transzkripciós és amplifikációs reakciókat egy hőstabil rekombináns enzim, a Z05D DNSpolimeráz végzi. Mangán (Mn 2+ ) jelenlétében a Z05D DNS-polimeráz reverz transzkriptáz és DNSpolimeráz aktivitással rendelkezik. Ez lehetővé teszi a reverz transzkripció és a PCR-amplifikálás megtörténését ugyanazon reakcióelegyben. A PCR-amplifikálás a Z05D DNS-polimeráz segítségével megy végbe, amely a targettemplátok mentén meghosszabbítja a kapcsolódott primereket és dupla szálú DNS-t (amplikon) hoz létre. Ez a folyamat sok cikluson keresztül ismétlődik, és az amplikon DNS mennyisége minden ciklus során megduplázódik. Az targetgenomok amplifikálása csak a primerek közötti régiókban zajlik; a teljes genom nem amplifikálódik. 3

Szelektív amplifikálás A mintában található targetnukleinsav szelektív amplifikálását a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 az AmpErase (uracil-n-glikoziláz) enzim és dezoxiuridin-trifoszfát (dutp) használatával hajtja végre. Az AmpErase enzim felismeri és katalizálja az olyan DNS-szálak lebontását, amelyek dezoxiuridint tartalmaznak 24, a dezoxitimidint tartalmazó DNS-ét és a ribouridint tartalmazó RNS-ét viszont nem. 25,26 A dezoxiuridin a természetes DNS-ben nincs jelen, ugyanakkor az amplikonban mindig megtalálható, miután az MPX2 master mix reagens a dntp-k egyikeként dezoxiuridin-trifoszfátot használ; így csak az amplikon tartalmaz dezoxiuridint. A dezoxiuridinnak köszönhetően a szennyező amplikont az AmpErase enzim még a target DNS amplifikálását megelőzően lebontja. Az AmpErase enzim lebont továbbá minden olyan nem specifikus terméket, amely a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix kezdeti, mangán okozta aktiválódása után képződik. Az MPX2 master mix reagensben lévő AmpErase enzim katalizálja a dezoxiuridint tartalmazó DNS hasítását a dezoxiuridin-csoportoknál úgy, hogy a dezoxiribózlánc felnyílását okozza a C1 helyen. Az első hevítési lépésben az amplikon DNS-lánc eltörik a dezoxiuridin helyén, tehát a DNS nem lesz amplifikálható. Az AmpErase enzim, ha egyszer 55 C feletti hőmérsékletnek lett kitéve, hosszabb ideig inaktív marad, ezért nem semmisíti meg a PCR után képződött targetamplikont. A PCR-termékek valósidejű automatizált kimutatása a COBAS TaqMan Analizátor segítségével A PCR-amplifikálás ciklusai során a váltakozó magas hőmérsékleten a target- és IC-amplikon denaturálódik, és egyszálú DNS-molekula keletkezik. A specifikus kimutatási oligonukleotid próbák az amplifikált DNS egyszálú molekuláihoz hibridizálnak. Az amplifikálás, hibridizáció és kimutatás egymással egyidőben zajlik. A PCR-termékek kimutatása 27,28 A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix a HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV, illetve IC nukleinsavra specifikus kimutatási próbákat tartalmaz. A HIV, HCV, HBV és IC kimutatási próbák mindegyike jelölve van 1) a négy közül egy, jelzőfestékként viselkedő, és 2) egy másik, blokkolófestékként viselkedő fluoreszcens festékkel. Három egyedi jelzőfesték a HIV-, HCV- vagy HBVspecifikus próbákhoz kapcsolódik, és mérésük adott hullámhosszakon történik. Egy negyedik jelzőfesték pedig az IC-specifikus próbához kapcsolódik, és mérése egy eltérő hullámhosszon történik. Minden próba esetében egyféle blokkolófesték használatos. Ez a rendszer lehetővé teszi az amplifikált HIV-, HCV- és HBV-targetek és az IC egyidejű kimutatását és megkülönböztetését négy hullámhosszon. A PCR-amplifikálás kezdete előtt a próbák még érintetlenek, és a blokkoló festék a jelzőfesték fluoreszcenciáját Förster-típusú energiatranszfer-effektus révén gátolja. A PCR-amplifikálás során a próbák a specifikus, egyszálú DNS-szekvenciákhoz hibridizálnak, amit az amplifikálással egyidőben a Z05D DNS-polimeráz 5' 3' nukleáz aktivitása révén hasít. Amint a hasítás következtében a jelző- és a gátlófesték elválik, a jelzőfesték fluoreszcens aktivitásának gátlása megszűnik. Minden egyes PCRciklus során megnő a hasított próbák mennyisége, és ennek velejárójaként növekszik a jelzőfestékből származó jel összesített nagysága is. A PCR-termékek valós idejű kimutatása és megkülönböztetése a felszabadult, vírustargeteket és IC-t reprezentáló jelzőfestékek fluoreszcencenciájának mérésével megy végbe. Automatizált adatkezelés a PDM szoftver segítségével A Roche PDM szoftver lehetővé teszi, hogy a felhasználó áttekintse az eredményeket és jelentést készítsen. A Roche PDM szoftver minden vizsgálati eredményt nem reaktív, reaktív vagy érvénytelen jelöléssel lát el. A PCR-eredmények lekérésén és vizsgálatán felül a Roche PDM szoftver lehetővé teszi, hogy az üzemeltető a jelentéseket visszakeresés és tanulmányozás céljából kinyomtassa, az eredmények között keressen, a donoreredményeket elfogadja, illetve egy LIS kiszolgálóra továbbítsa. 4

A ROCHE ÁLTAL BIZTOSÍTOTT ANYAGOK A HIV-1 RNS (M és O csoport), HIV-2 RNS és HCV RNS és HBV DNS kimutatásához plazmamintákban három készlet szükséges: 1) cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0, 2) cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 és 3) cobas TaqScreen mosóreagens. Az anyagok biztonsági adatlapjai (MSDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. cobas TaqScreen MPX Test, v2.0 (P/N: 05969492 190) MPX2 CS1 (MPX mágneses üvegpartikulum reagenskazetta) MPX2 CS2 (MPX lízis reagenskazetta) MPX2 CS3 (MPX multireagens kazetta) MPX2 CS4 (MPX tesztspecifikus reagenskazetta) cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 (P/N: 05965411 190) MPX M(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX multi-pozitív kontroll, v2.0) (HIV-1 M pozitív kontroll) (HBV pozitív kontroll) (HCV pozitív kontroll) MPX O(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-1 O pozitív kontroll, v2.0) MPX 2(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-2 pozitív kontroll, v2.0) MPX ( ) C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX negatív kontroll, v2.0) cobas TaqScreen Wash Reagent cobas TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190) TS WR (cobas TaqScreen mosóreagens) MPX v2.0 MPX CTL v2.0 TS WR 96 teszt 6 szett 5,1 l 5

EGYÉB SZÜKSÉGES, DE KÜLÖN ÁRUSÍTOTT ANYAGOK (A Roche-tól külön vásárolható) A vizsgálatot a cobas s 201 rendszeren kell végezni. A cobas s 201 rendszert egy Roche Diagnostics területi szerviz képviselőnek kell telepítenie, és egy komplett rendszer-konfigurációként kell azt használni. A cobas s 201 rendszer egyes komponensei nem használhatóak különálló készülékekként, és más komponensek sem helyettesíthetőek. A cobas s 201 rendszer az alábbi komponenseket használja. További részletekért kérjük, tanulmányozza a Termékinformáció kártyát. Műszerezettség és szoftver a cobas s 201 rendszerhez Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor, Pooling Manager munkaállomás és szoftver (opcionális) COBAS AmpliPrep készülék COBAS TaqMan Analizátor AMPLILINK adatállomás és szoftver Roche PDM szerver, adatkezelő munkaállomás és szoftver Vizsgálatdefiníciós fájl a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0-hoz cobas s 201 konfigurációs fájl az AMPLILINK 3.3-as verziójú szoftverrel való használathoz Állványok és egyszer használatos anyagok COBAS AmpliPrep mintaállványok (SK24) (P/N: 28122172001) COBAS AmpliPrep SPU-állványok (P/N: 05471664001) COBAS AmpliPrep reagensállványok (P/N: 28122199001) Mintafeldolgozó egységek (SPU): (P/N: 03755525001) Mintabeviteli csövek (S-csövek) vonalkódklipszekkel (P/N: 03137040001) K-hegy állványok (P/N: 03287343001) K-cső doboz,12 x 96 db-os (P/N: 03137082001) COBAS TaqMan K-hordozó (P/N: 28150397001) Nagy térfogatú CO-RE hegyek (1000 µl), filter (P/N: 04639642001) Mély lyukú lemezek vonalkódcímkékkel (P/N: 04639634001) Mély lyukú lemezek zárótetejei (P/N: 04789288001) Mintahordozó 24 vizsgálati cső számára (P/N: 04639502001) Mintahordozó 32 vizsgálati cső számára (P/N: 04639529001) Hegyhordozó (P/N: 04639545001) Mély lyukú lemez hordozó (P/N: 04639553001) SK24 állványhordozó (P/N: 04639600001) Hamilton fertőtlenítő spray készlet (P/N: 06254250001) Hamilton MICROLAB detergens készlet (P/N: 06254268001) Egyszer használatos kesztyűk, púdermentes 6

REAGENSEK cobas TaqScreen MPX Test, v2.0 (P/N: 05969492 190) MPX2 CS1 MGP (mágneses üvegpartikulumok) mágneses üvegpartikulumok 93% izopropanol Xi 93% (w/w) izopropanol MPX v2.0 96 teszt 2 x 48 teszt 2 x 7,0 ml Irritatív F 93% (w/w) izopropanol Tűzveszélyes MPX2 CS2 LYS (lízisreagens) nátrium-citrát-dihidrát 42,5% guanidin-tiocianát < 14% polidokanol 0,9% ditiotreitol Xn 42,5% (w/w) guanidin-tiocianát 2 x 48 teszt 2 x 78 ml Ártalmas MPX2 CS3 Pase (proteináz oldat) trisz puffer < 0,05% EDTA kalcium-klorid kalcium-acetát 7,8% proteináz glicerin Xn 7,8% (w/w) proteináz 2 x 48 teszt 2 x 3,8 ml Ártalmas EB (eluáló puffer) trisz puffer EDTA 0,09% nátrium-azid 0,002% poli ra RNS (szintetikus) 2 x 7,0 ml 7

MPX2 CS4 MPX v2.0 MMX-R1 (MPX v2.0 master mix reagens 1) kálium-acetát mangán-acetát glicerin 14,4% dimetil-szulfoxid 0,08% nátrium-azid ecetsav MPX MMX-R2, v2.0 (MPX master mix reagens 2, v2.0) tricin puffer kálium-klorid kálium-hidroxid 6% dimetil-szulfoxid glicerin EDTA Tween 20 Igepal CA630 < 0,12% datp, dgtp, dctp, dutp < 0,01% upstream és downstream HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV, HBV és belső kontroll primerek < 0,01% fluoreszcens-jelölt HIV-1, HIV-2, HCV, HBV próbák < 0,01% fluoreszcens-jelölt belső kontroll próba < 0,01% oligonukleotid aptamer < 0,01% Z05D DNS-polimeráz (mikrobiális) < 0,01% AmpErase (uracil-n-glikoziláz) enzim (mikrobiális) 0,09% nátrium-azid MPX IC, v2.0 (MPX belső kontroll, v2.0) trisz puffer 0,002% poli ra RNS (szintetikus) EDTA 0,05% nátrium-azid < 0,001% nem fertőző, szintetikus belső kontroll RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva 2 x 48 teszt 2 x 3,0 ml 2 x 2,5 ml 2 x 8,0 ml cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 (P/N: 05965411 190) MPX CTL v2.0 6 szett MPX M(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX multi-pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 M csoport RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva < 0,001% nem fertőző, szintetikus HBV DNS, lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva < 0,001% nem fertőző, szintetikus HCV RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 6 x 1,6 ml 8

0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. MPX O(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-1 O pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 O csoport RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke 6 x 1,6 ml Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. MPX 2(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-2 pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-2 RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke 6 x 1,6 ml Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. MPX ( ) C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX negatív kontroll, v2.0) Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke 6 x 1,6 ml Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. 9

cobas TaqScreen Wash Reagent cobas TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190) TS WR (cobas TaqScreen mosóreagens) nátrium-citrát-dihidrát 0,1% metilparabén tartósítószer TS WR 5,1 l TÁROLÁSI ÉS KEZELÉSI KÖVETELMÉNYEK A. A szobahőmérséklet meghatározása 15 30 C. B. A reagenseket és kontrollokat ne fagyassza le. C. Az MPX2 CS1, MPX2 CS2, MPX2 CS3 és MPX2 CS4 reagenseket 2 8 C között tárolja. Használaton kívül ezek a reagensek a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. D. Felbontást követően a reagensek 2 8 C-on 20 napig stabilak (vagy a lejárati dátumig, amelyik előbb következik). E. A reagenseket a COBAS AmpliPrep készüléken legfeljebb 5 vizsgálati futtatás alakalmával és legfeljebb 40 összesített órán át lehet felhasználni. A futtatások között a reagenseket 2 és 8 C között tárolja. Az AMPLILINK szoftver ellenőrzi a reagenskazetták COBAS AmpliPrep készülékben töltött összesített idejét, és meggátolja a kazetták felhasználását a 40. összesített óra elérése után. F. A COBAS AmpliPrep készülékben a reagensek egyhuzamban összesen 24 órán keresztül maradnak stabilak. Az AMPLILINK szoftver nem ellenőrzi a reagenskazetták COBAS AmpliPrep készülékben töltött folyamatos idejét, sem a kazettákat felhasználó gépi ciklusok számát. A felhasználó felelőssége, hogy a 24 folyamatos óra vagy 5 gépi ciklus elérése után eldobja a reagenskazettákat. G. Az MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 és MPX ( ) C, v2.0 reagenseket 2 8 C között tárolja. A kontrollok a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. Felbontást követően a fel nem használt részt ki kell dobni. H. A TS WR reagenst 15 30 C között tárolja. Felbontás nélkül a TS WR reagens a feltüntetett lejárati időn belül stabil. Felbontást követően ez a reagens 15 30 C között 30 napig stabil (vagy a lejárati dátumig, amelyik előbb következik). ÓVINTÉZKEDÉSEK IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA. A. A minták fertőzőek lehetnek. A vizsgálat kivitelezése során alkalmazza az általános érvényű óvintézkedéseket. 29,30 Csak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 rendszer használatában jártas és a fertőző anyagok kezelésében képzett személy végezheti ezt az eljárást. Gondosan tisztítson meg, és desztillált vagy ioncserélt vízből frissen készített 10% nátrium-hipoklorit oldattal (hígított fehérítőszer) fertőtlenítsen minden laboratóriumi munkafelületet. Ezután törölje át 70%-os etanollal a felületet. B. FIGYELEM: az MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 és MPX ( ) C, v2.0 emberi vérből származó humán plazmát tartalmaznak. A forrásanyag tesztekkel vizsgálva nem bizonyult reaktívnak HIV-1/2 antitestre, HCV antitestre HIV p24 antigénre, HBsAg-re és anti- HBcAg antitestre. A forrásanyagot a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével ugyancsak vizsgálták. A negatív humán plazma PCR-technikákkal történő vizsgálata során HIV-1 (M és O csoport) RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS vagy HBV DNS nem volt kimutatható. Egyetlen ismert vizsgálati módszer sem nyújthat teljes garanciát arra, hogy a humán vérkészítményekben nincs jelen fertőző anyag. Minden humán vér eredetű anyagot potenciálisan fertőzőnek kell tekinteni, és az általános érvényű óvintézkedések betartásával kezelni. Kiömlés esetén azt azonnal fertőtlenítse frissen készített hígított fehérítőszer-oldattal, illetve kövesse a megfelelő helyszíni eljárásokat. 10

C. Alkalmazza a szokásos laboratóriumi óvintézkedéseket. Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a kijelölt munkaterületen. Viseljen egyszer használatos kesztyűt, köpenyt és szemvédőt a minták és a készlet reagenseinek kezelése közben. A minták és tesztreagensek kezelését követően gondosan mosson kezet. D. Az EB, MPX v2.0 MMX-R1, MPX MMX-R2, v2.0 és MPX IC, v2.0 tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaznak. Ne használjon fém vezetékezést a reagenstranszferhez. Amennyiben azidot tartalmazó oldatot önt a vízvezeték-hálózatba, hígítsa azt fel, és öblítse le nagy mennyiségű folyóvízzel. Ezek az óvintézkedések arra szolgálnak, hogy elkerülje az üledék lerakódását a fém csővezetékben, ahol azáltal robbanásra alkalmas körülmények alakulhatnak ki. E. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Az eljáráshoz ne használjon heparinos plazmát. F. Steril, egyszer használatos pipetták és nukleázmentes pipettahegyek használata javasolt. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő, ha nem ügyel a minták keresztszennyeződésének elkerülésére a mintakezelés és -feldolgozás során. G. Az optimális vizsgálati feltételek biztosítása érdekében csak a szállított vagy az előírtan szükséges egyszer használatos eszközöket alkalmazza. H. A minták és kontrollok keresztszennyeződésének elkerülésére kezeljen minden mintát és kontrollt tartalmazó anyagot a helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) szerint. I. Felhasználás előtt szemrevételezzen minden reagenskazettát, kontrollcsövet és mosóreagenst, hogy nem tapasztal-e szivárgásra utaló jeleket. Szivárgás esetén azt az anyagot ne használja fel a vizsgálathoz. J. Minden anyagot, amely mintákkal vagy reagensekkel kapcsolatba került, az országos, szövetségi, állami és helyi szabályozások szerint semmisítsen meg. K. A cobas TaqScreen MPX v2.0 tesztet, a cobas TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészletet, illetve a cobas TaqScreen mosóreagenst a lejárati idő után ne használja fel. A különböző készletekből származó, illetve eltérő tételszámú reagensek felcserélése, összekeverése vagy kombinálása tilos. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS AmpliPrep készülékbe. L. Az anyagok biztonsági adatlapjai (MSDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. M. Kerülje a reagensek bőrrel, szemmel vagy nyálkahártyákkal való érintkezését. Ha érintkezés mégis bekövetkezik, azonnal mossa le nagy mennyiségű vízzel, ellenkező esetben égési sérülés jelentkezhet. Ha ezek a reagensek kiömlenek, feltörlés előtt hígítsa fel azokat vízzel. Ne engedje, hogy a LYS reagens, amely guanidin-tiocianátot tartalmaz, nátrium-hipoklorit (fehérítőszer) oldattal érintkezzen. Az ilyen keverékből erősen mérgező gáz fejlődhet. N. A vizsgálat helyes kivitelezésének biztosítása végett szigorúan tartsa be a megadott eljárásokat és irányelveket. A megadott eljárásoktól és irányelvektől való bármilyen eltérés befolyásolhatja a vizsgálat teljesítményét. O. Ne használjon nagymértékben hemolizált élő donor mintákat. P. A plazmaminták vörösvértest-szennyezettsége (> 2,5%) gátolhatja a cobas TaqScreen MPX v2.0 vizsgálatot. Q. A vizsgálat egyik szakaszában se használjon sérült vonalkódú összetevőket. 11

KONTROLLOK ÉS REAGENSEK ELŐKÉSZÍTÉSE A. A cobas TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészletet hagyja 30 percen át, hogy felvegye a szobahőmérsékletet, mielőtt betölti a kontrollokat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorba. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagenseit hagyja 30 percen át a COBAS AmpliPrep készülékben, hogy felvegyék a szobahőmérsékletet. MINTAVÉTEL, -TÁROLÁS ÉS -CSOPORTOSÍTÁS MEGJEGYZÉS: Valamennyi mintát fertőző ágensként kell kezelni. Élő donor minták A. EDTA, CPD, CPDA1, CP2D, ACDA és 4% nátrium-citrát antikoagulánssal levett plazmaminták dolgozhatóak fel a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel. Kövesse a mintavevőcső gyártójának utasításait. Az emelkedett hőmérséklet befolyásolja a minták stabilitását. 30 EDTA véralvadásgátló Hőmérséklet ( C) 20 10 Teljes vér Plazma 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Levételt követő napok B. Az EDTA-s vérminták a plazma elválasztását megelőzően 2 30 C-on legfeljebb 72 óráig, 2 8 C-on további 48 óráig tárolhatóak. Öt napnál hosszabb tároláshoz válassza el a plazmát a vörösvértestektől centrifugálással (800 1600 x g, 20 perc). A eltávolítást követően a plazma 2 8 C között legfeljebb hét napig, -18 C-on további 30 napig tárolható. Az EDTA-s plazma legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel. C. A CPD, CPDA1 vagy CP2D antikoagulánssal levett minták a plazma elválasztását megelőzően 2 30 C-on, legfeljebb 72 óráig tárolhatóak. 72 óránál hosszabb tároláshoz válassza el a plazmát a vörösvértestektől centrifugálással (800 1600 x g, 20 perc). A eltávolítást követően a plazma 2 8 C között legfeljebb hét napig, -18 C-on további 30 napig tárolható. A CPD, CPDA1, és CP2D-s plazma legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel. 30 CPD, CPDA1 vagy CP2D véralvadásgátló Hőmérséklet ( C) 20 10 Teljes vér Plazma 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Levételt követő napok 12

D. Az ACDA vagy 4% nátrium-citrát antikoagulánst tartalmazó elválasztott plazma a levételt követően 2 30 C-on, legfeljebb 72 órán át tárolható. Az elválasztott plazma -18 C-on további 30 napig tárolható. E. A következő, plazmatérfogatokra vonatkozó előírások 13 x 100 mm-es üveg vagy műanyag donorcsövekből Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral történő pipettázáson alapulnak. A felsorolt térfogatok a leülepedett vörösvértestek tetejéről vett plazmára vonatkoznak, és a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 futtatásához alkalmazandóak. Csoporttípus Elsődleges csoport * Ismételt csoport Megerősítési csoport *Mély lyukú lemezt használva Legkisebb plazmatérfogat 3 ml 1,5 ml 2 ml F. A teljes vért nem szabad lefagyasztani. G. A lefedett mély lyukú lemezek 2 8 C-on legfeljebb hét napig tárolhatóak attól az időponttól számítva, amikor a plazmát a vörösvértestekről eltávolították. Vagy a lefedett mély lyukú lemezek -18 C-on legfeljebb 7 napig tárolhatóak. H. Háromszori (3) fagyasztás-olvasztás ciklusnak kitett plazmaminták esetén semmiféle a vizsgálatra gyakorolt nemkívánatos hatást nem figyeltek meg. I. Hagyja, hogy az csoportosított vagy egyéni donorminták felhasználás előtt felvegyék a szobahőmérsékletet. J. Eltérő gyűjtési és tárolási feltételeket a felhasználónak validálnia kell. Amennyiben a minták szállítása szükséges, akkor azokat a minták és kóroki ágensek transzportjára vonatkozó szövetségi és nemzetközi előírásoknak megfelelően kell csomagolni és felcímkézni. 31 K. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő a minták keresztszennyeződéséből adódóan, ha azok nem voltak megfelelően kontrollálva a mintakezelés és -feldolgozás során. MINTACSOPORTOSÍTÁS ÉS -PIPETTÁZÁS A. A cobas s 201 rendszer a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort használja pipettázási és csoportosítási tevékenységekhez. A Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor elvégzi a vonalkódleolvasási és csoportosítási műveleteket, minek során a mintákból csoportokat hoz létre. B. A cobas s 201 rendszer telepítése lehetséges Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor nélkül is, ekkor azonban a vonalkódazonosítók manuális bevitele szükséges. Használati útmutatás céljából tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyvét. C. Ha a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reaktív csoportot mutat kit, a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor használható az egyéni minták pipettázásához a mély lyukú lemezekből vagy eredeti mintacsövekből a másodlagos vizsgálathoz. ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS MEGJEGYZÉSEK A. Felszerelés 1. A használathoz készítse elő a cobas s 201 rendszert a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításainak megfelelően. 2. A helyes működés érdekében végezze el a javasolt karbantartást a készülékeken. 13

B. Reagensek 1. Felhasználás előtt a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagenseit hagyja 30 percen át a COBAS AmpliPrep készülékben, hogy felvegyék a szobahőmérsékletet. A cobas TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészletnek és a cobas TaqScreen mosóreagensnek a felhasználáskor szobahőmérsékletűnek kell lennie. A reagensek tárolási körülményeire vonatkozóan tanulmányozza a Tárolási és kezelési követelmények részt. 2. Valamennyi cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlet összesen 96 vizsgálat elvégzéséhez elegendő reagenst tartalmaz, amelyek futtatását SK24 állványonként 24 vizsgálatot tartalmazó tételekben célszerű kivitelezni. Minden egyes tétellel vagy SK24 állvánnyal együtt egy negatív kontrollt (MPX ( ) C, v2.0) és a pozitív kontrollok mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni. 3. Minden kontrollt csak egyszer lehet felhasználni. 4. A rendszer megakadályozza, hogy a COBAS AmpliPrep készülékben tölthető időt (a felbontást követően 40 kumulatív órát vagy 20 napot) túllépő reagenseket, lejárt reagenseket, illetve a rendszerben már korábban használt négykazettás szettből származó kevert kazettákat használjon. C. Mintafeldolgozás 1. A minták és kontrollok kezelése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére. 2. Legyen óvatos, hogy elkerülje a minták és az MPX ( ) C, v2.0 kontroll szennyezését a pozitív kontrollal. D. Egyéni vírustarget azonosítása A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 egyidejűleg kimutatja és megkülönbözteti a HIV, HCV és HBV targeteket. A rendszer a három HIV targetet (HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport és HIV-2) nem különbözteti meg egymástól. HASZNÁLATI UTASÍTÁS A cobas s 201 rendszer négy fő eljárást foglal magában: Minta és kontroll pipettázása az opcionális Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral, minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készüléken a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével, amplifikálás/kimutatás a COBAS TaqMan Analizátoron, valamint adatkezelés. Minden cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlet nyolc kazettát tartalmaz: két MPX2 CS1 kazetta mágneses üvegpartikulumokkal, két MPX2 CS2 kazetta lízisreagenssel, két MPX2 CS3 kazetta proteináz-oldattal és eluáló pufferrel, valamint két MPX2 CS4 kazetta az MPX belső kontroll, v2.0, MPX v2.0 master mix reagens 1 és MPX master mix reagens 2, v2.0 reagensekkel. A tesztkészletet a cobas TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészlettel és a cobas TaqScreen mosóreagenssel együtt kell használni. Megjegyzés: Ne nyissa ki a kazettákat. Megjegyzés: Ne öntsön össze különböző tételekből, vagy azonos tételből, de különböző flakonokból származó reagenseket. Megjegyzés: Ne keverje a különböző készletből származó reagenseket (se a kazettákat). Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS AmpliPrep készülékbe. Megjegyzés: Ne válassza le a kontrollcsöveket az adapterről (a műanyag kontrollcsőtartó). Végezzen el minden szükséges karbantartást a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításait követve. Részletes használati útmutatás céljából tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyvét. Fontos, hogy a felhasználó kövesse a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv ének utasításait a vizsgálat megfelelő kivitelezése érdekében. 14

A. Kontrollok és minták pipettázása a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral Megjegyzés: A minták és kontrollok előkészítése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére. Megjegyzés: Keverje meg a kontrollokat háromszori óvatos döntögetéssel úgy, hogy ne képződjenek buborékok. A1. Helyezze üzembe a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort, majd a képernyőn megjelenő utasításokat követve indítsa el a Roche PDM csoportosítási varázslót. A2. Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a mintacsövek és kontrollcső adaptorok azonosító vonalkódját. Ha sérült, a rendszer nem fogja felismerni a mintákat vagy kontrollokat. A3. Távolítsa el a kontrollcsövek kupakját és helyezze a mintákat, fogyóeszközöket és kontrollokat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorba. A minták, fogyóeszközök és kontrollok betöltése után a készülék átviszi a kontrollokat és mintákat az S-csövekbe. A4. A pipettázási folyamatot követően tekintse át a figyelmeztetéseket és nyomtassa ki a csoportosítási jelentés(eke)t. Ellenőrizze a csoportokat és a mély lyukú lemezek lyukait. Érvénytelenítse a csoportokat és/vagy lyukakat, ha vörösvértest-szennyeződést észlel, illetve a térfogatok nem egyenletesek. A5. Zárja le az S-csöveket, és vigye át az SK24 állvány(oka)t a COBAS AmpliPrep készülékbe a nukleinsavkivonás lépésének elvégzésére. Ha megtörtént az átvitel a COBAS AmpliPrep készülékbe, az S-csövekben minden vírustarget és kontroll 6 óráig stabil. A6. Zárja le és tárolja a mély lyukú lemezeket (amennyiben lemezek készültek a pipettázási futás során). A mély lyukú lemezekben tárolva minden vírustarget 2 8 C-on 7 napig, illetve -18 C-on 7 napig marad stabil. A7. Távolítsa el a tároló- és donorcsöveket. A feltételek végett tanulmányozza a Mintavétel, -tárolás és -csoportosítás részt. A8. Távolítsa el és dobja ki a kontrollcsöveket. (A kontrollcsöveket csak egyszer lehet felhasználni.) B. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagensek előkészítése és betöltése Megjegyzés: Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a kazetták címkéit. A COBAS AmpliPrep készülék vonalkód leolvasója automatikusan leolvassa minden kazetta vonalkódcímkéjét a reagensállvány készülékbe történő betöltése folyamán. B1. A mintafeldolgozás megkezdése előtt a reagenseket hagyja 30 percen át a COBAS AmpliPrep készülékben. Nincs szükség egyéb reagens-előkészítési lépésre. B2. Az indítást megelőzően annyi kazettát kell betölteni, hogy elegendő legyen a feldolgozásra kerülő minták teljes számának befogadására a COBAS AmpliPrep készülék a folyamatos üzeme során. Mindegyik kazetta 48 vizsgálatra elegendő reagenst tartalmaz. A reagensek folyamatos üzem során való betöltéséről a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv vonatkozó fejezetében tájékozódhat. B3. Helyezze az MPX2 CS1 kazettát a reagensállványba úgy, hogy a kazetta vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. Az MPX2 CS1 kazettákat együtt, egy másik reagensállványon kell betölteni, mint a többi kazettát. B4. Helyezze az MPX2 CS1 kazettát tartalmazó reagensállványt az A állványpozícióba. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a készülékbe. B5. Helyezzen egy-egy szett MPX2 CS2, MPX2 CS3 és MPX2 CS4 kazettát mindegyik MPX2 CS1 kazetta számára a reagensállvány(ok)ba úgy, hogy a kazetta vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. B6. Helyezze be a reagensállvány(oka)t a B, C, D, illetve E állványpozícióba. B7. A COBAS AmpliPrep készülék állapotsorán a LED-ek zöldre váltanak, ha minden szükséges készlet és összetevő a készülékben van és a készülék felismerte azokat. 15

C. Nukleinsavak kivonása a pipettázott mintákból és kontrollokból Megjegyzés: Az alábbi lépéseket tiszta munkapadon végezze el. C1. Távolítsa el a mintafeldolgozó egység (SPU) csomagolását, de hagyja a szalagot és a műanyag fedőt érintetlenül. C2. Úgy, hogy az SPU-állvány nagy füle a felhasználó felé nézzen, illessze az SPU-öblítő nyalábot az SPU-állvány jobb oldalához. C3. Távolítsa el a szalagot és a műanyag fedőt az állványba illesztett SPU-król. Ellenőrizze, hogy minden SPU megfelelően benyomva, egy szintben legyen és teljes mértékben illeszkedjen az állványba. Egy elmozdult SPU műszerhibát okozhat. Ne nyomja meg a SPU-ban található S-hegyet. C4. Csúsztassa a betöltött SPU-állványokat a COBAS AmpliPrep készülék I, J, illetve K SPUpozícióiba addig, amíg teljesen nem illeszkednek és a készülék fel nem ismeri azokat. A készülék egyszerre 72 SPU befogadására alkalmas. Töltsön be legalább a futtatáshoz megkívánt számú SPU-t, illetve helyezzen be továbbiakat, ha szükséges. C5. Távolítsa el a gyártó által betöltött K-csövek és K-hegyek celofán csomagolását, és vigyázzon, hogy ne döntse meg az állványokat. Ellenőrizze, hogy megfelelően illeszkednek-e. C6. Csúsztassa be legalább a szükséges számú K-cső és K-hegy állványt a COBAS AmpliPrep készülék M, N, O és P pozícióiba. C7. Töltse be a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral pipettázott mintákat tartalmazó SK24 állványokat a COBAS AmpliPrep készülék F, G, illetve H pozícióiba. Csúsztassa kattanásig az állványokat. Ellenőrizze a rendszer mintaállapot ablakában, hogy a készülék az összes állvány összes mintáját felismerte-e. C8. Az AMPLILINK szoftver segítségével ellenőrizze, hogy elegendő mennyiségű reagens és fogyóeszköz lett-e betöltve a kívánt minta-előkészítési eljáráshoz. C9. Nyomja meg az AMPLILINK szoftver munkaállomás Start gombját, hogy elindítsa a COBAS AmpliPrep készülék minta-előkészítési eljárást. D. Amplifikálás és kimutatás Megjegyzés: Az SK24 állványban lévő master mix munkareagens plusz feldolgozott minták korlátozott stabilitásúak. A COBAS TaqMan Analizátornak késznek kell lennie a minták fogadására, mire a COBAS AmpliPrep készülék végez a minta-előkészítési eljárással. D1. Vigye át a feldolgozott mintákat tartalmazó az SK24 állványokat a COBAS TaqMan Analizátorra. A teljesen megtöltött SK24 állványt a minta-előkészítésnek az adott állványon való befejezését követő 1 órán belül át kell vinni. A COBAS TaqMan analizátor automatikusan megkezdi az amplifikálási és kimutatási eljárást. Az 1 órán belül át nem vitt teljesen megtöltött állványban lévő tétel eredménye érvénytelen lesz. Az 1 órán belül át nem vitt részben megtöltött SK24 állványban lévő tételre kaphat érvényes eredményt is. Az AMPLILINK szoftver nyomon követi a master mix hozzáadása és az amplifikálás/kimutatás megkezdése között engedélyezett időt minden minta esetén, és az egész állványt érvényteleníti, ha az első feldolgozott minta meghaladja az időkorlátot. D2. Ha befejeződött az amplifikálás és kimutatás a COBAS TaqMan Analizátoron, a vizsgált K-csövek automatikusan a hulladékgyűjtőbe kerülnek. D3. Az eredményeket a rendszer automatikusan elfogadja és a PDM szoftverre továbbítja. 16

E. Eredmények áttekintése és kiadása E1. Indítsa el a Roche PDM adatállomást. E2. Keresse ki a még nem értékelt tételeket az adatkezelő munkaállomás Review Batches füle alatt. E3. Tekintse át a figyelmeztetéseket úgy, hogy kijelöli a tételt és a Next gombra kattint. E4. Tekintse át a kontrolleredményeket a Controls Review fül alatt. A kontrollok érvényességi kikötéseinek megismerése céljából tanulmányozza a Minőség-ellenőrzés részt. E5. Tekintse át a csoporteredményeket a kiválasztott tétel Pools Review füle alatt. A nem reaktív csoportok szükség esetén a felhasználó által manuálisan érvényteleníthetőek. Az érvénytelen csoportok minden donormintáját újra kell vizsgálni. E6. Tekintse át és adja ki a donoreredményeket a kiválasztott tétel Donor Review füle alatt. E7. Nyomtassa ki a jelentéseket és küldje tovább a laboratóriumi információs rendszerre (LIS), ha ilyen rendelkezésre áll. MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS 1. Minden egyes tétellel együtt egy negatív kontrollt (MPX ( ) C, v2.0) és a három pozitív kontroll mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni. 2. Tételállapot: A Complete, Valid tételállapot jelenik meg, ha a tételkontrollok érvényesek. Ha a tételen belül bármelyik kontroll érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz, és a vizsgálatot meg kell ismételni. Az eredmények kontrollhibából adódó érvénytelenítését a PDM szoftver automatikusan elvégzi. a. Negatív kontroll Ahhoz, hogy egy tétel érvényes legyen, a negatív kontrollnak (MPX ( ) C, v2.0) érvényesnek kell lennie. Ahhoz, hogy a negatív kontroll érvényes legyen, az eredmény nem reaktív kell, hogy legyen, valamint a járulékos belső kontrollnak érvényesnek kell lennie. Ha a negatív kontroll eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz. b. Pozitív kontrollok Ahhoz, hogy egy tétel érvényes legyen, a 3 pozitív kontrollnak (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) érvényesnek kell lennie. Ahhoz, hogy a 3 pozitív kontroll érvényes legyen, az eredmény mindegyik pozitív kontroll esetén reaktív kell, hogy legyen, valamint a járulékos belső kontrollnak érvényesnek kell lennie. Ha a pozitív kontrollok bármelyike eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz. 3. Donorminták belső kontrollja a. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, nem reaktív ( ) vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes kell, hogy legyen, ellenkező esetben a nem reaktív eredmény érvénytelen lesz, és a donorminta vizsgálatát meg kell ismételni. b. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, reaktív vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes vagy érvénytelen is lehet. 17

EREDMÉNYEK 1. A mintaeredmények csak akkor érvényesek, ha a teljes, őket tartalmazó tétel érvényes. Az elfogadhatóság feltételeit a Minőség-ellenőrzés részben találja. Minden minta esetében négy paraméter mérésére kerül sor, egy-egy mindegyik vírustargetre, és egy másik a belső kontrollra vonatkozik. 2. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 PDM szoftver által jelentett végső donoreredményei a következők: Donorstátusz Completed Non-Reactive Accepted Non-Reactive Completed Reactive Accepted Reactive Completed Unresolved Accepted Unresolved Magyarázat A rendszer meghatározta a végső eredményt mindegyik targetre, és valamennyi target nem reaktív. A Completed Non-Reactive eredményt elfogadták. A rendszer meghatározta a végső eredményt mindegyik targetre, és legalább egy target reaktív. A Completed Reactive eredményt elfogadták. Az életképességi időkorlát lejárt, mielőtt az eredményt elfogadták volna, és egyik eredmény sem volt reaktív. A Completed Unresolved eredményt elfogadták. Egyéni minta ismétlése A vizsgálatot a többi target végső eredményétől függetlenül meg kell ismételni az olyan donorcsövek esetén, amelyek végső eredménye egy targetre érvénytelen. Ugyanakkor a felhasználónak lehetősége van a Force Unresolve gomb kiválasztásával befejezni a donorhoz tartozó munkafolyamatot. A Force Unresolve funkció Accepted Unresolved donorstátuszt ad azoknak a donoroknak, akiknek nincs reaktív végső eredményük egyetlen targetre sem, illetve Accepted Reactive státuszt ad azoknak a donoroknak, akiknek van reaktív eredményük egy vagy több targetre. Másodlagos csoportosítási vizsgálat A vizsgálatot meg kell ismételni az olyan több mintát tartalmazó csoport donorcsövei esetén, amelyek végső eredménye egy targetre érvénytelen, amennyiben a többi target eredménye nem reaktív vagy érvénytelen. Amikor egy több mintát tartalmazó csoport kap reaktív értékelést, a cobas s 201 rendszer a csoportban található összes donort megjelöli, hogy másodlagos csoportosítási vizsgálat szükséges. Ezeket a donormintákat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor pipettázza (a mély lyukú lemezekből vagy az eredeti donorcsövekből) kevesebb donort vagy egyetlen donort tartalmazó kisebb csoportokba, és további vizsgálatuk a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel történik a megerősítő eljárás részeként a reaktív egyéni donorminták azonosítása céljából. A megerősítő vizsgálatra vonatkozó specifikus információk végett tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításait. Ha egy kisebb csoportokra osztott több mintát tartalmazó csoport valamennyi targetre nem reaktívnak bizonyul, akkor az egyedi mintá(ka)t rendszer úgy adja ki, mint Completed, végső eredmény nem reaktív. 18

ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS KORLÁTOZÁSOK 1. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 vizsgálatot kizárólag a cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0, a cobas TaqScreen mosóreagens és a cobas s 201 rendszer együttes használatára értékelték. 2. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Az eljáráshoz ne használjon heparinos plazmát. 3. A megbízható eredmény a megfelelő mintalevételen, valamint a helyes transzporteljárásokon múlik. 4. A plazmacsoportok automatikus előkészítésére csak a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort validálták a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel való együttes használatra. Ragaszkodjon a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv és a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor felhasználói kézikönyv hardver utasításaihoz és biztonsági óvintézkedéseihez. 5. A HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatása függ a mintában jelenlevő vírusrészecskék számától, és befolyásolhatják a mintalevételi módszerek, betegfaktorok (azaz kor, tünetek megléte) és/vagy a fertőzés stádiuma, valamint a mintacsoport mérete. 6. Ritkán bár, de előfordulhat, hogy a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 primerei és/vagy próbája által lefedett virális genom nagyfokban konzervált régióiban levő mutációk következtében a vírus kimutatása sikertelen lesz. 7. A technológiák különbözősége miatt javasolt, hogy az egyik technológiáról a másikra való áttéréskor a felhasználók végezzenek korrelációs laboratóriumi vizsgálatokat, hogy a technológiák közötti különbség minősíthető legyen. A felhasználóknak a helyi specifikus irányelveket/eljárásokat kell követniük. TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK Élő donor minták Reprodukálhatóság A cobas s 201 rendszert használó cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reprodukálhatóság úgy határozták meg, hogy kevert HIV-1 M csoport, HCV és HBV mintából, valamint csak HIV-1 O csoportot, illetve HIV-2-t tartalmazó mintákból álló 3 panelt vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 az egyes vírusokra vonatkozó kimutatási határának (LOD) megközelítően 0,5X, 1X és 3X hígításain. A vizsgálatokhoz 3 különböző tételszámú cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készletet használtak. A 3 panel mindegyikének hatvan-hatvan ismétlését vizsgálták mindegyik tételszámú reagens készlettel. Minden érvényes reprodukálhatósági adatot úgy értékeltek, hogy kiszámították valamennyi paneltag esetében a reaktív vizsgálati eredmények százalékos arányát a különböző tételszámú készletek esetén. A vizsgálat a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 konzisztens teljesítményét mutatta a különböző tételszámú készletek esetén 0,5X, 1X és 3X LOD hígítások mellett (1. táblázat). A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érvénytelenségi csoport aránya 0,25%, az egyéni minta érvénytelenségi aránya pedig 0,22% volt. 19

1. táblázat cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 Reprodukálhatósági eredmények 0,5X, 1X és 3X LOD hígítások mellett Vírus Koncentráció Készlettétel Reaktív eredmény reagenstétel alapján 1 0,0% (0/64) Negatív 0 2 0,0% (0/62) 3 0,0% (0/64) 1 81,7% (49/60) 0,5 X LOD 2 78,3% (47/60) HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2 HCV HBV HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2 HCV HBV HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2 HCV HBV 0,5 X LOD 0,5 X LOD 0,5 X LOD 0,5 X LOD 1 X LOD 1 X LOD 1 X LOD 1 X LOD 1 X LOD 3 X LOD 3 X LOD 3 X LOD 3 X LOD 3 X LOD 3 82,5% (52/63) 1 76,7% (46/60) 2 73,7% (42/57) 3 93,3% (56/60) 1 81,0% (51/63) 2 83,6% (51/61) 3 85,0% (51/60) 1 85,0% (51/60) 2 81,7% (49/60) 3 92,1% (58/63) 1 73,3% (44/60) 2 86,7% (52/60) 3 82,5% (52/63) 1 93,3% (56/60) 2 98,3% (59/60) 3 96,8% (61/63) 1 93,3% (56/60) 2 96,5% (55/57) 3 98,4% (60/61) 1 93,7% (59/63) 2 90,2% (55/61) 3 96,7% (58/60) 1 96,7% (58/60) 2 98,3% (59/60) 3 98,4% (62/63) 1 96,7% (58/60) 2 98,3% (59/60) 3 96,8% (61/63) 1 100% (60/60) 2 100% (60/60) 3 100% (60/60) 1 100% (60/60) 2 100% (57/57) 3 100% (60/60) 1 100% (63/63) 2 100% (61/61) 3 100% (60/60) 1 100% (60/60) 2 100% (60/60) 3 100% (62/62) 1 100% (60/60) 2 100% (60/60) 3 100% (60/60) 20

Analitikai érzékenység WHO nemzetközi szabvány/roche szabvány/cber szabvány A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 kimutatási határ (LOD) meghatározása a HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS esetén az alábbi szabványok szerint történt: a HIV-1 RNS WHO MÁSODIK NEMZETKÖZI STANDARD, MÁSODIK NEMZETKÖZI STANDARD (NIBSC 97/650) 37, a NUKLEINSAV AMPLIFIKÁCIÓS TECHNOLÓGIAI (NAT) VIZSGÁLATOKRA SZOLGÁLÓ HEPATITIS B VÍRUS DNS WHO NEMZETKÖZI STANDARD (NIBSC 97/746) 32, a GENOM AMPLIFIKÁCIÓS TECHNOLÓGIAI VIZSGÁLATOKRA SZOLGÁLÓ HEPATITIS C VÍRUS RNS WHO MÁSODIK NEMZETKÖZI STANDARD (NIBSC 96/798) 33 és a Roche elsődleges HIV-1 O csoport és HIV-2 standardok. Jelenleg nem áll rendelkezésre HIV-1 O csoport RNS nemzetközi standard. A Roche elsődleges HIV-1 O csoport RNS és HIV-2 RNS standardok kereskedelmi forgalomban kapható vírustörzs kultúrák, PN 242O (Boston Biomedica, Inc.) és katalógusszám 10-127-000 (Advanced Biotechnologies, Inc.). A Roche HIV-1 O csoport és HIV-2 standardok visszavezethetőek, ebben a sorrendben: CBER HIV-1 Subtype RNA Reference Panel #1 Lot O1, CBER HIV-2 RNA Lot Release Panel ISD. A WHO és Roche standardok esetén minden egyes vírusstandardból 3 független hígítási sor készült EDTA véralvadásgátlóval gyűjtött poolozott humán plazma segítségével. Mindegyik hígítási sorozatot 3 különböző tételszámú cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel vizsgálták, készletenként körülbelül 20 ismétlésben, összesen mintegy 180 ismétlést végeztek koncentrációnként. A kimutatási határt (LOD) és a kétoldali 95%-os fiduciális konfidencia-intervallumokat úgy határozták meg, hogy a vizsgált ismétlések egyesített adataival minden vírus esetében PROBIT analízist végeztek (2. táblázat). Ugyancsak PROBIT analízissel becsülték meg a kimutatási határt és a kétoldali 95%-os fiduciális konfidencia-intervallumokat az egyes vírusok egyéni tételeredményeinek esetében (8. táblázat). A 3-8. táblázat összefoglalja az analitikai érzékenységi vizsgálatok összesített eredményeit. A szokásos faktorok a nemzetközi egyséről (IU) kópiaszámra való átváltáshoz HIV-1 M csoport, HCV és HBV esetén rendre 0,6 34, 2,7 35 és 5,0 36. 2. táblázat A vírusstandardok PROBIT analízise Analát Standard Mértékegység HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2 HCV HBV WHO második Nemzetközi standard Roche elsődleges standard Roche elsődleges standard WHO második Nemzetközi standard WHO Nemzetközi standard Átlag 95% LOD 95% alsó határ 95% felső határ IU/ml 46,2 35,5 65,9 kópia/ml 18,3 13,1 30,9 kópia/ml 56,2 48,7 66,6 IU/ml 6,8 5,8 8,3 IU/ml 2,3 2,0 2,8 21

3. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: WHO HIV-1 Nemzetközi standard (97/650) HIV-1 M csoport RNS-koncentráció (IU/ml) Reaktívak száma Egyéni vizsgálatok száma Reaktívak % 95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 100,00 180 180 100,0% 98,4% 75,00 182 183 99,5% 97,4% 50,00 176 183 96,2% 92,9% 25,00 148 183 80,9% 75,5% 12,50 119 183 65,0% 58,8% 7,50 65 183 35,5% 29,6% 2,50 23 183 12,6% 8,7% 4. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: Roche elsődleges HIV-1 O csoport standard HIV-1 O csoport RNS-koncentráció (kópia/ml) Reaktívak száma Egyéni vizsgálatok száma Reaktívak % 95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 54,00 178 178 100,0% 98,3% 36,00 178 178 100,0% 98,3% 18,00 172 179 96,1% 92,8% 9,00 145 178 81,5% 76,0% 5,50 101 180 56,1% 49,7% 1,75 45 178 25,3% 20,0% HIV-2 RNSkoncentráció (kópia/ml) 5. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: Roche elsődleges HIV-2 standard Reaktívak száma Egyéni vizsgálatok száma Reaktívak % 95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 184,00 184 184 100,0% 98,4% 123,00 183 184 99,5% 97,4% 91,50 182 182 100,0% 98,4% 61,00 172 184 93,5% 89,6% 31,00 153 184 83,2% 77,9% 18,50 133 185 71,9% 65,9% 6,00 52 185 28,1% 22,7% 22

6. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: WHO HCV Nemzetközi standard (96/798) HCV RNSkoncentráció (IU/ml) Reaktívak száma Egyéni vizsgálatok száma Reaktívak % 95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 32,00 180 180 100,0% 98,4% 25,00 182 183 99,5% 97,4% 16,00 183 183 100,0% 98,4% 8,00 179 183 97,8% 95,1% 4,00 158 183 86,3% 81,4% 2,50 127 183 69,4% 63,3% 1,00 79 183 43,2% 37,0% 7. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: WHO HBV Nemzetközi standard (97/746) HBV DNSkoncentráció (IU/ml) Reaktívak száma Egyéni vizsgálatok száma Reaktívak % 95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 6,00 180 180 100,0% 98,4% 5,00 183 183 100,0% 98,4% 3,00 178 183 97,3% 94,3% 1,50 155 183 84,7% 79,6% 1,00 147 183 80,3% 74,9% 0,50 92 183 50,3% 44,0% 0,25 53 183 29,0% 23,5% 1. reagenstétel Mértékegység 8. táblázat Egyéni reagenstétel kimutatási határok Legkisebb észlelt konc. 95%-os reaktivitással Átlag 95% LOD 95% alsó határ 95% felső határ HIV-1 M csoport IU/ml 75 48,4 38,3 65,6 HIV-1 O csoport kópia/ml 36 21,7 16,7 31,2 HIV-2 kópia/ml 91,5 53,6 42,7 72,4 HCV IU/ml 8 7,2 5,5 10,8 HBV IU/ml 3 2,9 2,3 4,1 2. reagenstétel Mértékegység Legkisebb észlelt konc. 95%-os reaktivitással Átlag 95% LOD 95% alsó határ 95% felső határ HIV-1 M csoport IU/ml 50 48,3 29,1 127,5 HIV-1 O csoport kópia/ml 18 18,8 14,6 26,8 HIV-2 kópia/ml 91,5 62,6 49,5 85,3 HCV IU/ml 8 7,0 5,4 10,1 HBV IU/ml 3 2,0 1,6 2,9 23

3. reagenstétel Mértékegység Legkisebb észlelt konc. 95%-os reaktivitással Átlag 95% LOD 95% alsó határ 95% felső határ HIV-1 M csoport IU/ml 50 41,6 33,1 56,2 HIV-1 O csoport kópia/ml 18 14,3 8,6 50,3 HIV-2 kópia/ml 61 51,7 40,3 72,9 HCV IU/ml 8 6,2 4,1 15,2 HBV IU/ml 3 2,0 1,6 2,8 Genotípus/szubtípus érzékenység és inkluzivitás A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítményét HIV-1 M csoport szubtípusokon, HIV-1 O csoporton és HIV-1 N csoporton, továbbá HCV és HBV genotípusokon határozták meg. HIV-1 M csoport Összesen 68 ismert szubtípusú HIV-1 M csoportú klinikai mintát és 28 ismert szubtípusú HIV-1 M csoportú izolátumkultúrát (10x A szubtípus, 5x AE szubtípus rekombináns, 10x AG szubtípus rekombináns, 10x B szubtípus, 10x C szubtípus, 10x D szubtípus, 9x E szubtípus, 10x F szubtípus, 10x G szubtípus, 10x G vagy BG szubtípus, 1x H szubtípus és 1x J szubtípus) mennyiségi meghatározását végezték el a COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Teszt, v2.0 segítségével, majd a minták normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HIV-1 M csoport kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításait vizsgálták úgy, hogy legalább 7 ismétlést vizsgáltak minden egyes mintából a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Mind a 68 klinikai mintát és a 28 izolátumkultúrát kimuttták 3X és 1X LOD mellett egyaránt. 9. táblázat HIV-1 M csoportú minták és izolátumkultúrák Szubtípus Klinikai minták Kultúra felülúszók Összes izolátum Kimutatva 3X LOD mellett Kimutatva 1X LOD mellett A 7 3 10 96% (74/77) 86% (66/77) AE 5 0 5 86% (36/42) 69% (29/42) AG 10 0 10 100% (70/70) 94% (66/70) B 8 2 10 100% (70/70) 90% (63/70) C 5 5 10 100% (70/70) 89% (62/70) D 7 3 10 100% (74/74) 93% (69/74) E 1 8 9 100% (63/63) 97% (61/63) F 7 3 10 100% (70/70) 99% (69/70) G 8 2 10 100% (70/70) 96% (67/70) G vagy BG 10 0 10 100% (70/70) 96% (67/70) H 0 1 1 100% (24/24) 100% (24/24) J 0 1 1 100% (24/24) 100% (24/24) 24

HIV-1 O csoport és HIV-1 N csoport Összesen 6 HIV-1 O csoportú izolátumkultúrát és 1 HIV-1 N csoportú izolátumkultúrát vizsgáltak. A HIV-1 O csoportú izolátumokból 3-3 ismétlést vizsgáltak minden esetben, és 6-ból 6 izolátumot mutattak ki 10 víruspartikulum/ml koncentrációnál. A HIV-1 N csoportú izolátumkultúra mennyiségi meghatározását a COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Teszt, v2.0 segítségével végezték, majd a minták normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HIV-1 M csoport kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításait vizsgálták úgy, hogy 24 ismétlést vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Az izolátumot kimutatták 3X és 1X LOD mellett egyaránt. 10. táblázat HIV-1 N csoportú és O csoportú izolátumok Szubtípus Kultúra felülúszók Kimutatva 3X LOD mellett Kimutatva 1X LOD mellett HIV-1 (N) 1 100% (24/24) 100% (24/24) Szubtípus Kultúra felülúszók Kimutatva 100 víruspartikulum/ml mellett Kimutatva 10 víruspartikulum/ml mellett HIV-1 O csoport 6 88,8% (16/18) 83% (15/18) HCV Összesen 95 ismert genotípusú HCV klinikai mintát (10x 1a genotípus, 10x 1b genotípus, 1x 2 genotípus, 7x 2a genotípus, 10x 2b genotípus, 7x 2a/c genotípus, 10x 3a genotípus, 6x 4 genotípus, 4x 4a genotípus, 1x 4c genotípus, 2x 4acd genotípus, 1x 4d genotípus, 1x 4p genotípus, 1x 4q genotípus, 10x 5a genotípus, 10x 6 genotípus, 3x 6a/b genotípus és 1x 6d genotípus) mennyiségi meghatározását végezték el a COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Teszt segítségével, majd a minták normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HCV kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításait vizsgálták úgy, hogy legalább 7 ismétlést vizsgáltak minden egyes mintából a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Mind a 95 mintát kimutatták 3X és 1X LOD mellett egyaránt. Összesen 3, további HCV izolátumokból (2x 4 genotípus és 1x 6a genotípus) létrehozott transzkriptum mennyiségi meghatározását végezték el spektrofotométer segítségével, majd a minták RNáz-mentes pufferrel készített ~3 X LOD hígításait a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével vizsgálták. Mind a 3 mintát kimutatták ~3 x LOD mellett. 25

11. táblázat HCV minták Genotípus Klinikai minták Transzkriptumok Kimutatva 3X LOD mellett Kimutatva 1X LOD mellett 1a 10 0 100% (70/70) 91% (64/70) 1b 10 0 100% (77/77) 84% (65/77) 2 1 0 100% (24/24) 100% (24/24) 2a 7 0 100% (49/49) 100% (49/49) 2b 10 0 100% (70/70) 100% (70/70) 2a/c 7 0 98% (48/49) 88% (43/49) 3a 10 0 100% (70/70) 99% (69/70) 4 6 0 100% (52/52) 100% (52/52) 4a 4 0 100% (28/28) 100% (28/28) 4c 1 0 100% (24/24) 100% (24/24) 4acd 2 0 100% (24/24) 100% (24/24) 4d 1 0 100% (24/24) 100% (24/24) 4p 1 0 100% (24/24) 100% (24/24) 4q 1 0 100% (24/24) 96% (23/24) 5a 10 0 100% (70/70) 99% (69/70) 6 10 0 100% (70/70) 87% (61/70) 6a/b 3 0 100% (24/24) 83% (20/24) 6c 1 0 98% (47/48) 85% (41/48) HCV 13 (Gt 4) 0 1 75% (3/4) NT HCV 96-2 (Gt 4) 0 1 100% (4/4) NT 381144-182 (Gt 6a) 0 1 75% (3/4) NT HBV Összesen 58 HBV klinikai minta (10x A genotípus, 6x B genotípus, 10x C genotípus, 10x D genotípus, 10x E genotípus, 3x F genotípus, 2x G genotípus, 2x H genotípus és 5 pre-core mutáns) mennyiségi meghatározását végezték el a COBAS TaqMan HBV Test for Use with the High Pure System segítségével, majd a minták normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HBV kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításait vizsgálták úgy, hogy legalább 7 ismétlést vizsgáltak minden egyes mintából a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. A HBV pre-core mutáns minták mennyiségi meghatározását a COBAS AmpliPrep/ COBAS TaqMan HBV Teszt segítségével végezték. Mind az 58 mintát kimutatták mind 3X, mind 1X LOD hígítás mellett. 26

12. táblázat HBV minták Genotípus Klinikai minták Kimutatva 3X LOD mellett Kimutatva 1X LOD mellett A 10 91% (64/70) 83% (58/70) B 6 100% (59/59) 76% (63/83) C* 10 70% (86/122) 54% (79/146) D 10 92% (71/77) 73% (56/77) E 10 96% (67/70) 96% (67/70) F 3 90% (43/48) 65% (31/48) G 2 100% (24/24) 96% (23/24) H 2 100% (24/24) 92% (22/24) Pre-core mutánsok 5 100% (35/35) 94% (32/35) * 1 HBV C genotípus izolátum reaktivitása 71% (15/21), illetve 100% (21/21) volt rendre 6X, illetve 9X LOD mellett vizsgálva. Szerokonverziós panelek A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítményét a szerokonverzió alatt HIV-1 M csoport, HCV és HBV esetében határozták meg 30, kereskedelmi forgalomban kapható szerokonverziós panel segítségével. HIV-1 O csoportú és HIV-2 szerokonverziós panel nem áll rendelkezésre. HIV-1 szerokonverziós panelek Tíz, kereskedelmi forgalomban kapható, plazmaferezis donoroktól HIV-antitest szerokonverzió során levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Minden mintát tisztán és 1:6 hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálat, az Abbott PRISM anti-hiv 1/2 és a cobas TaqScreen MPX Teszt eredményeivel. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HIV RNS-t átlagosan 13,9 nappal a HIV antitestnek az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálattal, illetve az Abbott PRISM anti-hiv 1/2 vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 5 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 2 panel esetében átlag 4 nappal korábban, és 10-ből 3 panel esetében átlag 4 nappal később mutatta ki a HIV RNS-t, mint a cobas TaqScreen MPX Teszt. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HIV RNS-t átlagosan 13,4 nappal a HIV antitestnek az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálattal, illetve az Abbott PRISM anti-hiv 1/2 vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 7 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 1 panel esetében átlag 3 nappal korábban, és 10-ből 2 panel esetében átlag 3 nappal később mutatta ki a HIV RNS-t, mint a cobas TaqScreen MPX Teszt. Azokat a panelokat, amelyek az első vértől kezdve konzisztensen reaktívnak mutatkoztak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 során, kihagyták a HIV-antitestnél korábbi kimutatást jelző napok minimális, átlagos és maximális számának összegző számítása során. 27

13. táblázat A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítménye HIV szerokonverziós panelekkel Napok a HIV-1/2 antitest vagy HIV RNS kimutatása előtt HIV szerokonverziós panel Abbott PRISM HIV O Plus: Tiszta Abbott PRISM anti-hiv 1/2: Tiszta cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas TaqScreen MPX: Tiszta, 1:6 Tiszta 1:6 Tiszta 1:6 Tiszta 1:6 1 14 9 14 9 5 0 2 14 14 14 14 0-2 3 12 12 12 12-2 0 4 14 14 14 14 0 0 5 11 11 11 11-3 -4 6* 14 14 14 14-7* 0 7 9 9 9 9 0 0 8 14 14 14 14 0 0 9 15 15 15 15 0 3 10 22 22 22 22 3 0 Minimum 9 9 9 9-7 -4 Átlag 13,9 13,4 13,9 13,4-0,4-0,3 Maximum 22 22 22 22 5 3 * HBV koinfekciót mutattak ki a tiszta és az 1:6 hígítású mintákban a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével ugyanazon a paneltagokon, mint ahol a cobas TaqScreen MPX Teszt HIV NAT reaktivitást mutatott. Két másik panel intermittáló HBV reaktivitást mutatott, de nem voltak hatással a HIV NAT kimutatás időpontjára. HCV szerokonverziós panelek Tíz, kereskedelmi forgalomban kapható, plazmaferezis donoroktól HCV-antitest szerokonverzió során levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Minden mintát tisztán és 1:6 hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM HCV vizsgálat és az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System, valamint a cobas TaqScreen MPX Teszt eredményeivel. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HCV RNS-t átlagosan 28 nappal a HCV antitestnek az Abbott PRISM HCV vizsgálattal, illetve az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 10 panel esetében ugyanazon a panel tagon mutatta ki a HCV RNS-t, mint a cobas TaqScreen MPX Teszt. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HCV RNS-t átlagosan 28 nappal a HCV antitestnek az Abbott PRISM HCV vizsgálattal, illetve az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 10 panel esetében ugyanazon a panel tagon mutatta ki a HCV RNS-t, mint a cobas TaqScreen MPX Teszt. Azokat a panelokat, amelyek az első vértől kezdve konzisztensen reaktívnak mutatkoztak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 során, kihagyták a HCV-antitestnél korábbi kimutatást jelző napok minimális, átlagos és maximális számának összegző számítása során. 28

14. táblázat A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítménye HCV szerokonverziós panelekkel Napok a HCV-antitest vagy HCV RNS kimutatása előtt HCV szerokonverziós panelek Megjegyzések Abbott PRISM HCV: Tiszta ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System: Tiszta cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas TaqScreen MPX: Tiszta, 1:6 Tiszta 1:6 Tiszta 1:6 Tiszta 1:6 1 A,B 12 12 23 23 0 0 2 A,B 30 30 32 32 0 0 3 23 23 23 23 0 0 4 A,B 25 25 25 25 0 0 5 A,B 28 28 28 28 0 0 6 A,B 4 4 4 4 0 0 7 A,B 11 11 11 11 0 0 8 A,B 24 24 24 24 0 0 9 A,B 7 7 18 18 0 0 10 33 33 33 33 0 0 Minimum 23 23 23 23 0 0 Átlag 28 28 28 28 0 0 Maximum 33 33 33 33 0 0 A. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredménye reaktív volt az első vérsorozat minden tiszta mintája esetében; az összegző számításokból kihagyták. B. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 1:6 hígítású eredménye reaktív volt az első vérsorozat minden tiszta mintája esetében; az összegző számításokból kihagyták. HBV szerokonverziós panelek Tíz, kereskedelmi forgalomban kapható, plazmaferezis donoroktól HBsAg szerokonverzió során levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Minden mintát tisztán és 1:6 hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM HBsAg vizsgálat és az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3, valamint a cobas TaqScreen MPX Teszt eredményeivel. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 9 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 14,9 nappal a HBsAg-nek az Abbott PRISM HBsAg vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően, és 10-ből 1 panel esetében 14 nappal utána. Az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálattal összehasonlítva, a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 21,9 nappal a HBsAg kimutathatósága előtt. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 7 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 3 panel esetében pedig átlag 4,3 nappal később mutatta ki a HBV DNS-t, mint a cobas TaqScreen MPX Teszt. 29

A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 7 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 13,7 nappal a HBsAg-nek az Abbott PRISM HBsAg vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően, 10-ből 2 panel esetében ugyanazon a paneltagon és 10-ből 1 panel esetében 14 nappal utána. Az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálattal összehasonlítva, a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 16,1 nappal a HBsAg kimutathatósága előtt. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 5 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 4 panel esetében átlag 8 nappal korábban, és 10-ből 1 panel esetében átlag 10 nappal később mutatta ki a HBV DNS-t, mint a cobas TaqScreen MPX Teszt. Azokat a panelokat, amelyek az első vértől kezdve konzisztensen reaktívnak mutatkoztak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 során, kihagyták a HBsAg-nál korábbi kimutatást jelző napok minimális, átlagos és maximális számának összegző számítása során. 15. táblázat A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítménye HBV szerokonverziós panelekkel Napok a HBsAg vagy HBV DNS kimutatása előtt HBV szerokonverziós panelek Megjegyzések Abbott PRISM HBsAg: Tiszta ORTHO HBsAg ELISA Test System 3: Tiszta cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas TaqScreen MPX: Tiszta, 1:6 Tiszta 1:6 Tiszta 1:6 Tiszta 1:6 1 A 3 0 25 22 0 4 2 12 12 19 19 0 0 3 8 0 19 11-2 -10 4-14 -14 14 14 0 0 5 22 13 22 13 0 13 6 A, B 7 7 23 23 0 7 7 20 8 20 8-7 0 8 11 11 11 11 0 0 9 28 14 30 16-4 7 10 33 24 40 31 0 0 Minimum -14-14 11 8-7 -10 Átlag 15 7,6 21,9 16,1-1,6 1,6 Maximum 33 24 40 31 0 13 A. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredménye reaktív volt az első vérsorozat minden tiszta mintája esetében; az összegző számításokból kihagyták. B. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 1:6 hígítású eredménye reaktív volt az első vérsorozat minden tiszta mintája esetében; az összegző számításokból kihagyták. 30

Analitikai specificitás Potenciálisan keresztreagáló és zavarást okozó mikroorganizmusok A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 analitikai specificitását egy 18 mikroorganizmust, ezen belül 11 vírusizolátumot, 6 baktériumtörzset és egy élesztőizolátumot 10 6 partikulum, kópia, illetve PFU/ml koncentrációban tartalmazó panel vizsgálatával értékelték. A mikroorganizmusokat normál, vírus-negatív humán plazmához adták, és HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül, illetve hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett vizsgálták. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 valamennyi, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélküli mikroorganizmus-minta esetében nem reaktív eredményt adott, kivéve egy mintát, ami kezdetben reaktív, az ismételt vizsgálat során azonban nem reaktív eredményt adott. A vizsgált mikroorganizmusok nem adtak keresztreakciót a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel. Valamennyi, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadásával készített mikroorganizmus-minta reaktív eredményt adott. A vizsgált mikroorganizmusok nem zavarják a cobas TaqScreen MPX v2.0 tesztet. 16. táblázat Vizsgált mikroorganizmusok Analitikai specificitás Vizsgált mikroorganizmusok Adenovírus 5 Humán herpes vírus 6 A Candida albicans Cytomegalovírus Humán T-lymphotrop vírus I Propionibacterium acnes Epstein-Barr vírus Influenzavírus A Staphylococcus epidermidis Varicella-zoster vírus West Nile vírus Staphylococcus haemolyticus Herpes simplex vírus 1 Dengue vírus 1, Hawaii törzs Escherichia coli Herpes simplex vírus 2 Staphylococcus aureus Streptococcus viridans Analitikai specificitás Egyéb kórállapotok Minden egyes, a következőkben felsorolt betegségkategóriára (humán cytomegalovírus, Epstein-Barr vírus, herpes simplex vírus 1, herpes simplex vírus 2, humán T-sejtes lymphotrop vírus 1, humán T-sejtes lymphotrop vírus 2, humán T-sejtes lymphotrop vírus 1/2, hepatitis A vírus, West Nile vírus és parvovírus B19) vizsgáltak plazmamintákat HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 valamennyi, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélküli kórállapot-minta esetében nem reaktív eredményt adott. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 valamennyi, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadásával készített kórállapot-minta esetében reaktív eredményt adott, kivéve 6-ból 1 HTLV l/ll mintát, amelyben a HCV nem volt reaktív. Ezek a kórállapotok nem zavarják a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységét, illetve specificitását. Potenciálisan zavaró anyagok Endogén zavarást okozó anyagok Abnormálisan magas szintű trigliceridet (max. 3 300 mg/dl), hemoglobint (max. 500 mg/dl), nem-konjugált bilirubint (50 mg/dl), albumint (max. 9,6 g/dl), illetve humán DNS-t (max. 0,4 mg/dl) tartalmazó plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. A felsorolt anyagok nem zavarják a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységét, illetve specificitását. Abnormálisan nagy mennyiségben hozzáadott vörösvértesteket (max. 10% v/v) tartalmazó plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. A plazma 2,5% (v/v) vörösvértest tartalma nem zavarta a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 vírusérzékenységét, illetve specificitását. A plazma 5,0% (v/v) vörösvértest tartalma csökkentette a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HCV kimutatásának érzékenységét. A plazma 7,5% (v/v) vörösvértest tartalma zavarta a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HBV és HCV kimutatásának érzékenységét. A HIV vírustargetek kimutatása 100%-os volt 10% vörösvértestet tartalmazó plazmában. 31

Vírustargetek 3X LOD melletti jelenlétében a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 belső kontroll (IC) kimutatásának érzékenysége nem csökkent 1,0% (v/v) vörösvértest tartalmú plazmában. Vírustargetek jelenléte nélkül a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 belső kontroll (IC) kimutatásának érzékenysége nem csökkent 2,5% (v/v) vörösvértest tartalmú plazmában. A belső kontroll (IC) a vizsgálati folyamat valamennyi lépését (minta-előkészítés, amplifikálás és kimutatás) monitorozza, és a vizsgálat teljesítményét befolyásoló helyzetekben válik nem kimutathatóvá. Exogén zavaró anyagok Abnormálisan nagy koncentrációjú paracetamol (1324 µmol/l), acetil-szalicilsav (3,62 µmol/l), aszkorbinsav (342 µmol/l), atorvastatin (600 µg/l), fluoxetin (11,2 µmol/l), ibuprofen (2425 µmol/l), loratadin (0,78 µmol/l), nadolol (3,88 µmol/l), naproxen (2170 µmol/l), paroxetin (3,04 µmol/l), fenilefrin HCl (491 µmol/l) és sertralin (1,96 µmol/l) tartalmú humán plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. Az exogén anyagok nem zavarják a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységét, illetve specificitását. Klinikai teljesítmény Korreláció a cobas TaqScreen MPX Teszt és a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 között A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 és a cobas TaqScreen MPX Teszt teljesítményét 100 szeropozitív HIV-1 M csoportú, HCV- és HBV-minta, továbbá mintegy 100 normál szeronegatív donorminta segítségével értékelték. A szeropozitív mintákat tisztán és 1:6 hígításban vizsgálták. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 és a cobas TaqScreen MPX Teszt azonos teljesítményt mutatott normál szeronegatív véradók esetén. Mindkét vizsgálat 100 nem reaktív eredményt adott, így specificitása 100%. A cobas TaqScreen MPX Teszt, 2.0-s verzió és a cobas TaqScreen MPX Teszt 300 tisztán vizsgált mintából 297 esetében adott megegyező eredményt. Ebből két minta megegyezően nem reaktív eredményt adott mindkét vizsgálattal. A 300 mintából három volt nem reaktív a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel, de reaktív a cobas TaqScreen MPX teszttel. A teljes konkordancia 99,0% volt. A cobas TaqScreen MPX Teszt, 2.0-s verzió és a cobas TaqScreen MPX Teszt 300 hígítottan vizsgált mintából 296 esetében adott megegyező eredményt. Kilenc minta megegyezően nem reaktív eredményt adott mindkét vizsgálattal. Két minta reaktív volt a cobas TaqScreen MPX teszttel, de nem reaktív a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel. Két minta reaktív volt a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel, de nem reaktív a cobas TaqScreen MPX teszttel. A teljes konkordancia 98,7% volt. 17. táblázat Tiszta szeropozitív minták cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas TaqScreen MPX Teszt HIV-1 HBV HCV Összes + + 99 99,0% 100 100,0% 96 96,0% 295 98,3% 1 1,0% 0 0,0% 1 1,0% 2 0,7% + 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0% + 0 0,0% 0 0,0% 3* 3,0% 3 1,0% Összes 100 100,0% 100 100,0% 100 100,0% 300 100,0% *Három HCV szeropozitív minta tisztán vizsgálva eltérő eredményt adott az MPX v2.0 teszttel és az MPX teszttel. 1:6 hígítás mellett mind a három minta mindkét vizsgálattal nem reaktív eredményt adott, ami egy alacsony titer jelenlétét jelzi ezekben a mintákban. 32

cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas TaqScreen MPX Teszt 18. táblázat Hígított szeropozitív minták HIV-1 HBV HCV Összes + + 93 93,0% 99 99,0% 95 95% 287 95,7% 3 3,0% 1 1,0% 5 5,0% 9 3,0% + 2* 2,0% 0 0,0% 0 0,0% 2 0,7% + 2** 2,0% 0 0,0% 0 0,0% 2 0,7% Összes 100 100,0% 100 100,0% 100 100,0% 300 100,0% *Két minta tisztán vizsgálva reaktív volt az MPX v2.0 teszttel és az MPX teszttel is. 1:6 hígítás mellett mindkét minta nem reaktív eredményt adott az MPX teszttel, ami egy alacsony titer jelenlétét jelzi ezekben a mintákban. **Két HIV-1 szeropozitív minta 1:6 hígítás mellett vizsgálva eltérő eredményt adott az MPX v2.0 teszttel és az MPX teszttel. Tisztán vizsgálva mindkét minta reaktív volt az MPX v2.0 teszttel és az MPX teszttel is. A 2 mintából az egyik párhuzamosan fertőzöttnek bizonyult HBV-vel tisztán és 1:6 hígítás mellett is az MPX v2.0 teszttel vizsgálva. A HBV jelenlétét szekvenciaanalízissel megerősítették. Az MPX teszt reaktivitását ennek a konkrét mintának az esetében HBV vagy HIV-1 M csoport vagy mindkettő jelenléte magyarázhatja. A második minta tisztán vizsgálva mind MPX v2.0, mind MPX teszttel reaktív volt, ugyanakkor 1:6 hígítás mellett csak az MPX teszt volt reaktív. Klinikai érzékenység HIV, HBV és HCV esetén A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 klinikai érzékenységét összesen 600 HIV-1 (200), HBV (200) vagy HCV (200) szeropozitív betegminta segítségével értékelték. A klinikai érzékenység a tiszta minták vizsgálatakor HIV-1, HBV és HCV esetén rendre 98,5%, 100% és 97,0% volt. 19. táblázat Klinikai érzékenység szeropozitív mintákkal Szeropozitív minták cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 Vizsgált minták száma* Reaktívak száma Százalékos érzékenység HIV-1 200 197 98,5% HBV 200 200 100% HCV 200 194 97,0% Összesen 600 591 98,5% *Magában foglalja a 100-100 darab 17. táblázatban felsorolt HIV-1-, HBV- és HCV-mintát. További 190 HIV-2 szeropozitív mintát vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. A 190 mintából összesen 104 volt reaktív, ami a szerológiához viszonyítva 54,7% klinikai érzékenységet jelent. A 86 nem reaktív mintából egy sem volt reaktív egy alternatív kvantitatív NAT módszer alkalmazása során sem (Csak kutatási célra szolgáló teszt fejlesztette: Dr. Florence Damond, Hopital Bichat Claude Bernard). 38 33

HIVATKOZÁSOK 1. Kahn JO, Walker BD. Current Concepts: acute human immunodeficiency virus type 1 infection. N Engl J Med. 1998; 339:33-39. 2. McCutchan FE. Global Epidemiology of HIV. Journal of Medical Virology, 78:S7-S12 (2006). 3. Centers for Disease Control and Prevention (www.cdc.gov). Fact Sheet Human Immunodeficiency Virus Type 2. October 1998. 4. Reeves JD and Doms WR. Human Immunodeficiency Virus Type 2. Journal of General Virology (2002), 83:1253-1265. 5. Choo Q-L, Weiner AJ, Overby LR, et al. Hepatitis C virus: the major causative agent of viral non-a, non-b hepatitis. Br Med Bull. 1990; 46(2):423-441. 6. Alter HJ. Descartes before the horse: I clone, therefore I am: the hepatitis C virus in current perspective. Ann Intern Med. 1991; 115(8):644-649. 7. Chisari FV, Ferrari C. Viral Hepatitis. In: Nathanson N et al., eds. Viral Pathogenesis, Philadelphia, Lippincott-Raven, 1997: 745-748. 8. Hollinger FB, Liang TJ. Hepatitis B Virus. In: Knipe DM et al., eds. Fields Virology, 4th ed. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, 2001: 2971-3036. 9. Mahoney FJ, Kane M. Hepatitis B Vaccine. In: Plotkin SA and Orenstein WA, eds. Vaccines, 3rd ed. Philadelphia, W.B. Saunders Company, 1999: 158-182. 10. Viral Hepatitis Prevention Board. Prevention and Control of Hepatitis B in the Community. Communicable Disease Series, 1996, 1. 11. World Health Organization. Introduction of Hepatitis B Vaccine into Childhood Immunization Services. Geneva, WHO, 2001 (unpublished document WHO/V&B/01.31 available on request from Department of Vaccines and Biologicals, World Health Organization, 1211 Geneva 27, Switzerland). 12. Murthy KK, Henrard DR, Eichberg JW, et al. Redefining the HIV-infectious window period in the chimpanzee model: evidence to suggest that viral nucleic acid testing can prevent blood-borne transmission. Transfusion. 1999; 39:688-693. 13. Stramer SL, Glynn SA, Kleinman SH, et al. Detection of HIV-1 and HCV infections among antibodynegative blood donors by nucleic acid-amplification testing. N Engl J Med. 2004; 351:760-768. 14. Busch MP, Glynn SA, Stramer SL, et al. A new strategy for estimating risks of transfusion-transmitted viral infections based on rates of detection of recently infected donors. Transfusion. 2005; 45:254-264. 15. Offergeld R, Faensen D, Ritter S, Hamouda O. Human immunodeficiency virus, hepatitis C and hepatitis B infections among blood donors in Germany 2000-2002: risk of virus transmission and the impact of nucleic acid amplification testing. Euro Surveill. 2005; 10(2):8-11. 16. Hitzler WE, Runkel S. Routine HCV PCR screening of blood donations to identify early HCV infection in blood donors lacking antibodies to HCV. Transfusion. 2001; 41:333-337. 17. Roth WK, Weber M, Petersen D, et al. NAT for HBV and anti-hbc testing increase blood safety. Transfusion. 2002; 42:869-875. 18. Biswas R, Tabor E, Hsia CC, et al. Comparative sensitivity of HBV NATs and HBsAg assays for detection of acute HBV infection. Transfusion. 2003; 43:788-798. 19. Minegishi K, Yoshikawa A, Kishimoto S, et al. Superiority of minipool nucleic acid amplification technology for hepatitis B virus over chemiluminescence immunoassay for hepatitis B surface antigen screening. Vox Sang. 2003; 84:287-291. 20. Kleinman SH, Strong DM, Tegtmeier GE, et al. Hepatitis B virus (HBV) DNA screening of blood donations in minipools with the COBAS AmpliScreen HBV test. Transfusion. 2005; 45:1247-1257. 34

21. Busch MP, Lee LL, Satten GA, et al. Time course of detection of viral and serologic markers preceding human immunodeficiency type 1 seroconversion: implications for screening blood and tissue donors. Transfusion. 1995; 35:91-97. 22. Yoshikawa A, Gotanda Y, Itabashi M, et al. Hepatitis B NAT virus-positive blood donors in the early and late stages of HBV infection: analyses of the window period and kinetics of HBV DNA. Vox Sang. 2005; 88:77-86. 23. Comanor L and Holland P. Hepatitis B virus blood screening: unfinished agendas. Vox Sanguinis (2006) 91:1-12. 24. Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990; 93:125-128. 25. Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by uracil-dna glycosylase. Nature. 1995; 373:487-493. 26. Mol CD, Arvai AS, Slupphaug G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracil-dna glycosylase: structural basis for specificity and catalysis. Cell. 1995; 80:869-878. 27. Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (NY). 1992; 10:413-417. 28. Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996; 6:986-994. 29. Richmond JY, McKinney RW, eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 99-8395, 1999. 30. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections. Approved Guideline-Third Edition. CLSI Document M29-A3. Wayne, PA:CLSI, 2005. 31. International Air Transport Association, Dangerous Goods Regulations. 41 st ed. Quebec, Canada. 2000. 32. Saldanha J, Gerlich W, Lelie N, Dawson P, Heermann K, Heath A & The WHO Collaborative Study Group: An international collaborative study to establish a World Health Organization international standard for hepatitis B virus DNA nucleic acid amplification techniques. Vox Sang. 2001; 80: 63-71 33. Saldanha J, Heath A, Aberham C, Albrecht J, Gentili G, Gessner M and Pisani G: WHO Collaborative Study to Establish a Replacement WHO International Standard for HCV RNA NAT Assays. WHO/BS/03.1958 Expert Committee on Biological Standardization, Geneva, 17 to 21 February 2003. 34. Palla P, Vatteroni M L, Vacri L, Maggi F and Baicchi U. HIV-1 NAT minipool during pre-conversion window period: detection of a repeat blood donor. Vox Sanguinis (2006) 90:59-62. 35. Pawlotsky J M. Use and interpretation of virological tests for Hepatitis C. Hepatology (2002) 36:S65- S73. 36. Garson J A, Grant P R, Ayliff U et al, Real-time PCR quantitation of hepatitis B virus DNA using automated sample preparation and murine cytomegalovirus internal control. J. Virol. Methods (2005) 126:207-213. 37. Holmes H et al, WHO ECBS Report, 1999; J. Virol. Meth. (2001) 92:141-150. 38. Damond F, Collin G, Descamps D, et al., Improved Sensitivity of Human Immunodeficiency Virus Type 2 Subtype B Plasma Viral Load Assay. Journal of Clinical Microbiology, 2005; 43: 4234-4236. 35

Dokumentum verzióinformációi Doc Rev. 1.0 01/2011 Első közzététel. Gyártva Svájcban: Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ 08876 USA A Roche csoport tagja Distributed by Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 2, Avenue du Vercors 6343 Rotkreuz, Switzerland 38240 Meylan, France Roche Diagnostics GmbH Distributore in Italia: Sandhofer Straße 116 Roche Diagnostics S.p.A. 68305 Mannheim, Germany Viale G. B. Stucchi 110 20052 Monza, Milano, Italy Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, 171-173 Distribuidor em Portugal: E-08174 Sant Cugat del Vallès Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Barcelona, Spain Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal Roche Diagnostics 201, boulevard Armand-Frappier Roche Diagnostica Brasil Ltda. H7V 4A2 Laval, Québec, Canada Av. Engenheiro Billings, 1729 (For Technical Assistance call: Jaguaré, Building 10 Pour toute assistance technique, 05321-010 São Paulo, SP Brazil appeler le: 1-877 273-3433) A ROCHE, a COBAS, a COBAS S, a TAQMAN, a TAQSCREEN, az AMPLILINK, az AMPERASE és az AMPLIPREP a Roche védjegye. A ROCHE RESPONSE CENTER a Roche szolgáltatási védjegye. Valamennyi egyéb terméknév és védjegy az adott tulajdonosok tulajdona. Az Armored RNA az Ambion, Inc. és Cenetron Diagnostics LLC. által fejlesztett, szabadalommal védett technológia. #5,677,124, #5,919,625 és #5,939,262 U.S. szabadalmak, valamint a folyamatban lévő szabadalmak. Az ARMORED RNA az Ambion és a Cenetron védjegye. A vizsgálati termékben található cianin festékeket a GE Healthcare Bio-Sciences Corp. és a Carnegie Mellon University szabadalmi jogai védik, és a Roche kizárólagos engedéllyel rendelkezik, hogy azokat a kutatásban és in vitro diagnosztikai rendszerek komponenseiként felhasználja. Az ilyen rendszereknek nem kutatási vagy in vitro diagnosztikai célú felhasználása a GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, New Jersey, U.S.A. és a Carnegie Mellon University, Pittsburgh, Pennsylvania, U.S.A. további engedélyét kívánja meg. 2011 Roche Molecular Systems, Inc. Minden jog fenntartva. 01/2011 06327052001-01 Doc Rev. 1.0 36