Immunológia II GY. 1. Bevezetés febr. 9. Bajtay Zsuzsa

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Immunológia II GY. 1. Bevezetés. 2016. febr. 9. Bajtay Zsuzsa"

Erika Szőke
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 Immunológia II GY 1. Bevezetés febr. 9. Bajtay Zsuzsa

2 Oktatók: Bajtay Zsuzsa, Sándor Noémi Tankönyv: Immunológiai módszerek szerkesztette: Erdei Anna (Medicina, 2006) Immunológia II Gy tárgyra épül: Laboratóriumi gyakorlatok: - Immunológia Gyakorlatok I. (bb2n4m02) - Immunológiai Gyakorlatok II. (bb2n4m05) Letölthető tananyag:

Laboratóriumi gyakorlatok: - Immunológia Gyakorlatok I.

3 Immunológia II. Módszerek tematika Bevezető előadás. Az immunrendszer elemeinek áttekintése. Kísérleti állatok tartása, kezelése. Beltenyésztett törzsek. Állatmodellek. KO, Tg állatok Antigén ellenanyag kapcsolódáson alapuló módszerek II. A kapcsolódást követő másodlagos reakciókon alapuló módszerek (precipitáció, agglutináció, komplement mediált lízis). A komplement rendszer vizsgálata Ellenanyag-reagensek előállítása I. Immunizálás, poliklonális és monoklonális ellenanyag-reagensek előállítása, az ellenanyagok tisztítása, fragmentálása és jelölése Ellenanyag-reagensek előállítása II. Molekuláris biológiai módszerekkel módosított ellenanyagok Antigén ellenanyag kapcsolódáson alapuló módszerek I. A kapcsolódás kimutatásán alapuló (jelöléses) módszerek (ELISA, Western blot, immunprecipitáció) Sejtanalitikai módszerek (FACS, FM, CLSM). Membránfehérjék kölcsönhatásainak vizsgálata Tavaszi szünet Sterilitás, in vitro sejttenyésztés, sejtvonalak. Az immunrendszer sejtjeinek izolálása, azonosítása és funkcionális vizsgálata I. T limfociták Az immunrendszer sejtjeinek izolálása, azonosítása és funkcionális vizsgálata II. B limfociták Az immunrendszer sejtjeinek izolálása, azonosítása és funkcionális vizsgálata III. Monociták, makrofágok, dendritikus sejtek Beszámoló ZH Javító ZH

A kapcsolódást követő másodlagos reakciókon alapuló módszerek (precipitáció, agglutináció, komplement mediált lízis). A komplement rendszer vizsgálata. 3. 2016. 02. 23.

4 Bev. 1. ábra Immunhomeosztázis

5 3.25. ábra Elsődleges és másodlagos nyirokszervek

6 3.3. ábra Hemopoézis

7 Bev. 2. ábra Az immunválasz kialakulása

8 1.3. ábra A veleszületett és az adaptív immunrendszer receptorainak jellemzői

9 3.5. ábra Mintázat-felismerő és fagocitótikus receptorok kifejeződése fagocitákon

10 2.1. ábra Az antigének felépítése

11 2.2. ábra Antigén-determinánsok

12 10.1. Az immunglobulin-szupercsalád

13 A monovalens TCR és a bivalens BCR antigén-felismerő tulajdonságai A nagy mértékű variabilitás az antigének sokféleségének felismerésére, a TCR-gének, Ig-gének szomatikus rekombinációja, szomatikus mutációja etc. kizárólag a magasabbrendű gerincesek limfocitáiban

14 12.1. ábra Az endogén és az exogén fehérjék bemutatása eltérő funkciójú T-limfocitáknak

15 Az immunglobulin nehéz- és könnyűláncát kódoló gének rekombinációja és expressziója

16 1.9. ábra Klónszelekció

17 A sejtaktiváció folyamatainak időbeni megjelenése

18 3.22. B limfociták membránfehérjéi és funkcióik

19 10.4. Az Ig molekula általános szerkezeti felépítése - kb.160 Kd-os glikoprotein - 2 könnyű lánc (L light chain) - 2 nehéz lánc (H heavy chain) diszulfid hidakkal és nem-kovalens kötésekkel összekötve - domén szerkezet: Ig domén

chain) - 2 nehéz lánc (H heavy chain) diszulfid hidakkal

20 10.3. Humán immunglobulinok Antitest, ellenanyag, immunglobulin (Ig)

21 Az ellenanyag közvetített effektor funkciók

22 IMMUNKOMPETENS SEJTEK IZOLÁLÁSA Primer sejtek (állati, emberi): -lép - tímusz - csontvelő - nyirokcsomó - hasüreg -vér Vér - vérplazma ( alakos elemek ) - eritrociták - trombociták - leukociták - granulociták - neutrofil - bazofil - eozinofil - limfociták - monociták Sejtvonalak: Korlátlanul osztódó állati és humán eredetű sejtek

23 1. Primer sejttenyészet közvetlenül élőlényből származó 2. Sejtvonal tumoros transzformáció eredménye (in vitro v. in vivo) 3. Klón in vitro aktivációt követően többszöri klónozással létrehozott, újra és újra aktivációt ill. növekedési faktorokat igényelhet 4. Hibridóma immortalizált sejtvonallal történő in vitro hibridizáció eredménye (nem diploid)

24 Sejtek izolálása egérből tímusz lép - vvs mentesítés csontvelő - szervek dezintegrálása a sejtek festése, számolása: tripán kék életképesség Elpusztult sejt élő sejtek kristályibolya - magfestés limfocita monocita granulocita

25 Kísérleti állatok tartása és kezelése - Az állatkísérletek indoklása Állatvédelmi törvény XXVIII. tv (1998) / munkavédelmi előírások / etikai szempontok -Emberi-, állati sejtek használata kutatási pályázathoz: Egészségügyi Tudományos Tanács, Tudományos és Kutatásetikai Bizottság engedélyével

26 Kísérleti állatok tartása alom táplálék / ivóvíz állatorvosi kontrol eredet / karantén a tartás körülményei / az állatház besorolása (konvencionális, spf, steril (mikroizolátor) a tenyésztés feltételei (egér- és patkánytörzsek / speciális genetikai háttér állatszám / ketrec állatfaj helyigény hőmérséklet / o C páratartalom / % alapterület / cm 2 magasság / cm egér patkány hörcsög nyúl 0,3 0,4 (m 2 )

27 1.3. táblázat Laboratóriumi kisállatok immunizálási módjai egér patkány hörcsög tengerimalac nyúl a beadás módja i.m. helye hátsó-comb v. hátizom hátsó-comb v. hátizom hátsó-comb v. hátizom hátsó-comb v. hátizom hátsó-comb v. hátizom mennyisége 0,05 0,3 0,1 0,3 0,5-1,0 /ml i.v. helye farokvéna farokvéna nyakivéna nyakivéna fülvéna mennyisége 0,1-0,2 0,5 0,3 0,5 1,0-5,0 /ml i.p. helye hasüreg hasüreg hasüreg hasüreg hasüreg mennyisége 0,5-2,5 5,0-10,0 2,0-4,0 5,0-10,0 5,0-20,0 /ml f.p. helye hátsótalppárnák hátsótalppárnák hátsótalppárnák hátsótalppárnák hátsótalppárnák mennyisége 0,05 0,05 0,05 0,05 0,1 /ml i.d. helye háton háton háton háton háton mennyisége 0,05 0,05 0,05 0,05 0,1 /ml s.c. helye háton háton háton háton háton mennyisége 0,5-2,5 5,0-10,0 3,0-4,0 5,0-10,0 5,0-10,0 /ml p.o. helye szájba mennyisége 0,05-0, /ml i.n. helye orrüreg mennyisége 0, /ml c.s. helye talp, fűl, has bőre mennyisége /ml 0,05-0,

28 1.4. táblázat Szérumminták vétele kisállatokból a vérminta vételének helye a vérminta mennyisége/ml egér szemzug vénás plexus, farokvéna vagy szívpunkció 0,3 patkány szemzug vénás plexus, farokvéna vagy szívpunkció 2,5 hörcsög szemzug vénás plexus vagy szívpunkció 0,5 tengerimalac szívpunkció 2,0 nyúl fülvéna vagy szívpunkció 50

29 Néhány egértörzs genetikai jellemzői egértörzs szőrszín H-2 haplotípus Igh-C haplotípus CD90 / Thy-1 CD5 / Ly-1 CD8 / Ly-2 CD45 / Ly-5 CD44 / Ly-24 alaptörzsek AKR/J albino k d lo BALB/c albino d a hi CBA/J agouti k j hi C57BL/10 fekete b b lo C3H/HeJ agouti k j lo DBA/2 világos barna d c hi SJL albino s b lo kongenikus törzsek BALB.B albino b a BALB.K albino k a B10.BR fekete k b B10.D2 fekete d b C3H.SW agouti b j B10.A fekete a b rekombináns törzsek B10.A (1R) fekete h1 b B10.A (2R) fekete h2 b

30 Állatmodellek Immunhiányos egerek név genetikai háttér defektus beige C57BL/6 NK-sejt hiány Motheaten C57BL/6J B2-sejt hiány Nude outbred tímusz hiány scid CB.17 T-és B-sejt hiány xid CBA/N a humorális immunválasz zavara KO (knock out ) / génkiütött állat és Tg / transzgenikus állat

31 Autoimmun törzsek és modellek név NOD (Non-obese diabetic) lpr (lymphoproliferative) -Fas gld (generalized lymphadenopathy) -FasL NZB (New Zeland Black) BXSB (C57BL/10, satin beige) EAE (experimental autoimmun encephalitis) CIA (collagen induced arthritis) betegség modell IDDM (insulin dependent diabetes mellitus) SLE (systemic lupus erythematosus) SLE (systemic lupus erythematosus) SLE (systemic lupus erythematosus) indukált indukált Egér modellek különböző fertőzések és különböző tumorok tanulmányozásához

32 Mennyi sejt várható egy egérből? CBA, BALB/C T B DBA/2 T B B6, B10 T B Frissen szeparált sejtek Lép x x napig in vitro aktivált/antigén specifikus (poliklonális x5-10) Lép B x x10 6 Lép T x x10 6 Nyirokcsomó x ,5 2 x 10 6 Nyirokcsomó B 1-5 x ,3 0,5 x 10 6 Nyirokcsomó T 2-5 x ,1-1 x 10 6 Peritóneum 1-2 x 10 6 Timusz x 10 6 Csontvelő 5-20 x 10 6

33 Sejtfunkciók vizsgálata sejtek B-limfociták T-limfociták makrofágok dendritikus sejtek funkciók proliferáció ellenanyag termelés proliferáció citokin termelés citotoxicitás citokin termelés fagocita képesség kemotaxis citokin termelés fagocita képesség antigén prezentáló képesség

Hasonló dokumentumok

Immunológia II GY. 1. Bevezetés febr. 16. Bajtay Zsuzsa

Immunológia II GY. 1. Bevezetés febr. 16. Bajtay Zsuzsa Immunológia II GY 1. Bevezetés 2018. febr. 16. Bajtay Zsuzsa Tankönyv: Immunológiai módszerek szerkesztette: Erdei Anna (Medicina, 2006) Laboratóriumi gyakorlatok MSc MIM: - halim1mb17lm Haladó immunológiai