AZ ELJÁRÁS ELVE ÉS MAGYARÁZATA

Átírás

1 PA HASZNÁLATI UTASÍTÁSOK HASZNÁLATRA KÉSZ TÁPTALAJOK PA Változat: April 2013 Glucose Agar Gentamicin and Penicillin and Streptomycin HASZNÁLATI JAVASLAT A Salt Agar (Sabouraud só agar) tápközeg klinikai mintából származó gombák (élesztőgombák, penészgombák és dermatofiták) izolálására és tenyésztésére szolgál. A BD Sabouraud (Sabouraud agar lal), a BD Sabouraud Gentamicin and (Sabouraud agar Gentamicinnel és lal), és a Penicillin and Streptomycin (Sabouraud agar penicillinnel és streptomycinnel) klinikai mintából származó gombák szelektív izolálására szolgáló tápközeg. AZ ELJÁRÁS ELVE ÉS MAGYARÁZATA Mikrobiológiai módszer. A Sabouraud Glucose Agar egy általánosan alkalmazható táptalaj, melyet eredetileg dermatofiták tenyésztésére fejlesztettek ki. 1,2 Ma már minden gomba izolálására és tenyésztésére alkalmazzák. 3-5 A Sabouraud Glucose Agar pepton tartalma biztosítja a nitrogén-tartalmú növekedési faktorokat. A glükóz szolgáltatja a mikroorganizmusok növekedéséhez szükséges energiát. A magas glükóz-tartalom kedvezőbb az (ozmotikusan stabilabb) gombáknak, míg a legtöbb baktérium nem tolerálja magas cukor koncentrációt. Ezenkívül az alacsony ph optimális a gombák számára, de számos baktérium számára viszont kedvezőtlen. 3 A Sabouraud Glucose Agar csak kis mértékben szelektív a baktériumokra nézve. A, Gentamicin and, és Penicillin and Streptomycin a Sabouraud Glucose Agar táptalajon alapuló szelektív táptalajok. A táptalajokat a baktériumok gátlására szelektív hatóanyagokkal egészítették ki. A klóramfenikol egy széles spektrumú antibiotikum, mely számos gram-negatív és gram-pozitív baktériumot gátol, de ugyanakkor egynémely patogén gomba növekedését is gátolhatja. 4 Az olyan antibiotikumok, mint a penicillin, a gentamicin és a streptomycin, illetve ezek kombinációja, hatékonynak bizonyult baktériumok ellen, miközben a gombák növekedését nem gátolták. 2-5 Ezeket a táptalajokat baktériumokkal feltehetően fertőzött klinikai minták vagy anyagok vizsgálatára használják. A Sabouraud Glucose Agar egyike az USP és EP által leírt mikrobiális hatérérték tesztek (Microbial Limit Test) során felhasznált táptalajoknak. 6,12 REAGENSEK Receptúra: lásd 1. táblázat FIGYELMEZTETÉS. Használata szakértelmet igényel. Ne használja a lemezeket, ha azon mikrobiális szennyeződés, kiszáradás és betöredezés, illetve a károsodás bármilyen más jelét észleli. A steril munkával, a biológiai veszélyekkel és a használt termékek hulladékként való kezelésével kapcsolatban olvassa el az ÁLTALÁNOS HASZNÁLATI ÚTMUTATÓT. TÁROLÁS ÉS ELTARTHATÓSÁG Átvétel után felhasználásig, a lemezeket sötét helyen, 2-8 C-on az eredeti lezárt tasakban tárolja. Kerülni kell a lemezek megfagyását, illetve túlmelegedését. A lemezeket a lejárati időn belül kell inokulálni (lásd: csomagolás címkéje) és az előírt inkubációs időt be kell tartani.

2 A felbontott 10-es csomagolás lemezeit, tiszta helyen, 2-8 C-on tárolva, egy héten belül fel kell használni. Table 1: Reagensek 1 liter szűrt vízre vonatkoztatva* Termék neve Glucose Agar PA Penicillin and Streptomycin Gentamicin and Agar with Összetevők Pankreatikusan 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g emésztett kazein Peptikusan 5,0 g 5,0 5,0 g 5,0 g emésztett állati szövetek Glükóz 40,0 g 40,0 g 40,0 g 40,0 g Agar 15,0 g 15,0 g 15,0 g 15,0 g Penicillin G IU - - Streptomycin - 0,06 g - - Gentamicin - - 0,04 g - Klóramfenikol - - 0,4 g 0,4 g ph ph 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 *Úgy beállítva és/vagy összekeverve, hogy megfeleljen a működési követelményeknek. FELHASZNÁLÓI MINŐSÉGI ELLENŐRZÉS Inokulálja a reprezentatív mintát a következő törzsekkel (a részletekért, lásd: ÁLTALÁNOS HASZNÁLATI ÚTMUTATÓT). Az inkubáláshoz lásd a lábjegyzetet. Termék neve Glucose Agar Penicillin and Gentamicin and Teszt törzsek Streptomycin **Candida albicans ATCC **Saccharomyces cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 ** Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus aureus Nincs gátlás Teljes gátlás ATCC *Escherichia coli Nincs gátlás ATCC Teljes gátlás Nem inokulált Világos borostyánszínű Inkubáció: *48 h C / **</= 5 days, C aerob körülmények közt ELJÁRÁS Szállított anyagok Glucose Agar,, Gentamicin and, vagy Penicillin and Streptomycin, mind 90 mm-es Stacker Petricsészékben. Mikrobiológiailag ellenőrzött.

3 Nem szállított anyagok Kiegészítő tápleves a tenyésztéshez, reagensek és szükséges laboratóriumi eszközök. Minták típusa Az itt leírt termékek gombák izolálására szolgálnak és (egyedül vagy kombinációban) klinikai minták esetében alkalmazhatók (lásd még TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK ÉS AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI). A táptalajokat ipari mikrobiológiában és higiéniai ellenőrzésekhez is használják. A teszt kivitelezése A mintát a laboratóriumba való beérkezés után a lehető leghamarabb szélessze. A szélesztett lemez elsősorban a vegyes flórájú mintákból való elsődleges tiszta tenyészetek izolálására szolgál. Amennyiben a tenyésztést közvetlenül a mintavételi pálcáról indítja, forgassa meg a pálcát a táptalaj kis felületén, majd onnét, szélesztéssel inokulálja a lemezt. Amennyiben a minta bőr kaparék, haj, szőr vagy köröm darab, úgy tegye azt a táptalaj közepére. A nagyobb darabkákat, amennyiben az lehetséges, steril csipeszekkel a táptalaj felszínéhez kell nyomni, úgy, hogy azok érintkezzenek a táptalajjal. A dermatofiták kimutatásához használjon még BD Dermatophyte Agar-t vagy BD Mycosel Agar-t. Amennyiben, Gentamicin and, vagy Penicillin and Streptomycin táptalajokat használ, a vizsgálatokba vonjon be egy lemez Sabouraud Glucose Agar-t is. A mintában jelenlévő más patogén baktériumok kimutatására egy nem szelektív táptalajt, pl. Columbia 5% Sheep Blood is inokulálni kell. Élesztők (pl. Candida fajok) klinikai mintákból való kimutatásához a lemezeket 48 órán keresztül, C-on inkubálja. Filamentumos gombák, a dermatofitákat is beleértve, feltételezhető jelenlétének kimutatásához inkubálja a lemezeket akár egy hétig is, C-on. A dermatofitáknak némely esetekben három hétnél is hosszabb idő szükséges a fejlődéshez. Higiéniás ellenőrzéshez, inkubálja a lemezeket akár 7 napig, C-on. 3 napnál hosszabb inkubáció esetében gondoskodjon a megfelelő nedvességről. A kiszáradás elkerülése végett a Petri-csészéket öntapadós ragasztószalaggal le kell zárni. Az inkubációs feltételek további részleteiért, tanulmányozza át a hivatkozásokat. 5,7-10. Eredmények A megfelelő inkubáció után a lemezeken a szélestén területén különálló telepek, míg a forgatásos szélesztésnél összefolyó telepek figyelhetők meg. Vizsgálja meg a jellegzetes színű és morfológiájú gombatelepeket. Az eredményeket tanácsos biokémiai tesztekkel, mikroszkopikus és szerológiai eljárásokkal is megerősíteni. Mivel számos patogén gomba ismeretes, megjelenési formájukat itt nem részletezzük. További információért tanulmányozza az idevonatkozó hivatkozásokat. 2,3,5-9 TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK ÉS AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Az itt leírt táptalajok standard táptalajok a gombáknak minden típusú klinikai és nem klinikai mintából való kimutatására és tenyésztésére. A gombák széles hőmérsékleti igénye miatt előfordulhat, hogy ugyannak a táptalajnak több lemezét is inokulálni és azokat különböző hőmérsékleten inkubálni kell. Tanulmányozza át az 5, 7-10 Eljárás menete fejezetet és az idevonatkozó hivatkozásokat. Mivel a Glucose Agar csak gyengén szelektív, a táptalajon, főleg hosszabb inkubációs idő után, baktériumok is fejlődhetnek. Amennyiben feltételezhető, hogy a vizsgálandó minták, anyagok, vagy területek baktériummal fertőződtek, úgy a minta kitenyésztéséhez egy erősebben szelektáló táptalajt, pl., Gentamicin and, vagy BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin, kell használni. A Nocardia és az Actinomyces fajok filamentumos baktériumok (nem gombák!), így azok nem fejlődnek ki minden, bakteriális gátlóanyagokat tartalmazó Sabouraud táptalajon. PA

4 IRODALOMJEGYZÉK 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. KISZERELÉSEK Glucose Agar Cat. No Használatra kész táptalajok, 20-as csomag Cat. No Használatra kész táptalajok, 120-as csomag Cat. No Használatra kész táptalajok, 20-as csomag Gentamicin and Cat. No Használatra kész táptalajok, 20-as csomag Cat. No Használatra kész táptalajok, 120-as csomag Penicillin and Streptomycin Cat. No Használatra kész táptalajok, 20-as csomag TOVÁBBI INFORMÁCIÓK További információkért forduljon a BD helyi képviselőjéhez. PA

5 Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA