CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK. Dr. Virág László

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK. Dr. Virág László"

Teréz Orosz
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK Dr. Virág László

2 Intracelluláris mikroelektród technika Voltage clamp technika Patch clamp technika

3 Intracelluláris mikroelektród technika

7 Ag/AgCl 3 M KCl R e ~ MOhm µm

8 erısítı számítógép ingerlı A/D d e r P Detektált jel szervfürdı 0mV d: ingerlı elektróda e: mikroelektróda r: referens elektróda P: preparátum 50 mv 100 ms

9 0 mv APA 50% 100 ms 20 mv V max 90% RP APD 50 elıinkubáció APD 90 anyag kimosás 60 perc perc 60 perc

10 Két mikroelektródás voltage clamp teszt potenciál parancsjel (voltage command) holding potenciál makroszkópikus nátrium-áram

11 A voltage clamp áramkör felépítése

12 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete

13 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete (1) Szívjunk be egy kis membrán darabot a mikropipetta hegyének belsejébe (átmérı ~ 1 µm) Sejt

14 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete (2) Gigaohm-seal R > 1 GOhm Sejt

15 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete (3) Kapcsoljuk a kívánt potenciálra az elektróda belsejét és tartsuk konstans értéken a voltage clamp módszert használva. Sejt

16 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete zárt nyitott (3) Kapcsoljuk a kívánt potenciálra az elektróda belsejét és tartsuk konstans értéken a voltage clamp módszert használva. + + Sejt

17 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete zárt nyitott zárt (3) Kapcsoljuk a kívánt potenciálra az elektróda belsejét és tartsuk konstans értéken a voltage clamp módszert használva. Sejt

18 Nátrium csatornák tulajdonságai parancsjel (voltage command) 10 msec

19 Nátrium csatornák tulajdonságai 1. A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak

20 Nátrium csatornák tulajdonságai 1. A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2. A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. makroszkópikus nátrium áram

21 Nátrium csatornák tulajdonságai 1. A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2. A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. 3. A csatornanyitások idıtartama és latenciája nagyon változó és elıfordul, hogy a csatorna ki se nyílik makroszkópikus nátrium áram

22 Nátrium csatornák tulajdonságai 1. A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2. A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. 3. A csatornanyitások idıtartama és latenciája nagyon változó és elıfordul, hogy a csatorna ki se nyílik 4. A csatornák nyitási valószínősége hasonló a makroszkópikus áramhoz 300 felvétel szummája makroszkópikus nátrium áram

23 Nátrium csatornák tulajdonságai 1. A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2. A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. 3. A csatornanyitások idıtartama és latenciája nagyon változó és elıfordul, hogy a csatorna ki se nyílik 4. A csatornák nyitási valószínősége hasonló a makroszkópikus áramhoz 5. A csatornák inaktivációja miatt a másodszori nyitás nagyon ritka 300 felvétel szummája makroszkópikus nátrium áram

24 1. A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak. 2. A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus áramhoz viszonyítva. 3. A csatornanyitások idıtartama és latenciája nagyon változó és elıfordul, hogy a csatorna ki se nyílik 4. A csatornák nyitási valószínősége hasonló a makroszkópikus áramhoz 5. A csatornák többször is kinyílhatnak, ha nincs inaktiváció Slowly inactivating K current channel (Ram & Dagan, 1987)

25 Patch clamp technika konfigurációi On- Cell Cell-Attached

26 Patch clamp technika konfigurációi On- Cell Insideout patch

27 Patch clamp technika konfigurációi On- Cell Whole Cell

28 Patch clamp technika konfigurációi Whole Cell

29 Patch clamp technika konfigurációi Whole Cell outsideout patch

31 Whole cell konfiguráció R s R c C m

33 Run-down jelenség ATP-függı kálium áram

34 Run-down jelenség L típusú kalcium áram

35 Patch clamp technika konfigurációi Whole Cell Whole Cell, perforated patch - amphotericin-b - nystatin

36 Run-down jelenség L típusú kalcium áram

37 Sejtizoláció - Ca 2+ - mentes perfúzió - emésztés (kollagenáz...) - mechanikai agitáció

38 L típusú kalcium áram 400 ms 0 mv -40 mv 100 ms 200 pa

39 L típusú kalcium áram -40 mv -35 mv I Ca amplítúdó (pa) Potenciál (mv)

40 L típusú kalcium áram -40 mv -30 mv I Ca amplítúdó (pa) Potenciál (mv)

41 L típusú kalcium áram -40 mv -25 mv I Ca amplítúdó (pa) Potenciál (mv)

42 L típusú kalcium áram -40 mv -20 mv I Ca amplítúdó (pa) Potenciál (mv)

43 L típusú kalcium áram -40 mv -15 mv I Ca amplítúdó (pa) Potenciál (mv)

44 L típusú kalcium áram -40 mv -10 mv I Ca amplítúdó (pa) Potenciál (mv)

45 L típusú kalcium áram -40 mv 55 mv I Ca amplítúdó (pa) 0 Áram-feszültség (I-V) karakterisztika Potenciál (mv) elıinkubáció anyag kimosás 5-10 perc 3-5 perc perc

Hasonló dokumentumok

CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK. Dr. Virág László

CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK Dr. Virág László Intracelluláris mikroelektród technika Voltage clamp technika Patch clamp technika Membrane potentials and excitation of impaled single