T-2 TOXIN ÉS DEOXINIVALENOL EGYÜTTES HATÁSA A LIPIDPEROXIDÁCIÓRA ÉS A GLUTATION-REDOX RENDSZERRE, VALAMINT ANNAK SZABÁLYOZÁSÁRA BROJLERCSIRKÉBEN

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "T-2 TOXIN ÉS DEOXINIVALENOL EGYÜTTES HATÁSA A LIPIDPEROXIDÁCIÓRA ÉS A GLUTATION-REDOX RENDSZERRE, VALAMINT ANNAK SZABÁLYOZÁSÁRA BROJLERCSIRKÉBEN"

Kinga Fülöp
5 évvel ezelőtt
Látták:

1 T-2 TOXIN ÉS DEOXINIVALENOL EGYÜTTES HATÁSA A LIPIDPEROXIDÁCIÓRA ÉS A GLUTATION-REDOX RENDSZERRE, VALAMINT ANNAK SZABÁLYOZÁSÁRA BROJLERCSIRKÉBEN Mézes Miklós a,b, Pelyhe Csilla b, Kövesi Benjámin a, Zándoki Erika b, Balogh Krisztián a,b aszent István Egyetem, Takarmányozástani Tanszék, Gödöllő, bmta-ke-szie Mikotoxinok az élelmiszerláncban kutatócsoport, Kaposvár-Gödöllő

2 DEOXINIVALENOL VAGY T-2 TOXIN ÁLTAL INDUKÁLTA OXIDATÍV STRESSZ BAROMFIBAN DEOXINIVALENOL Nagydózisú (10 mg kg -1 takarmány) szubkrónikus terhelés (Awad et al., 2012; Frankic et al., 2006). T-2 TOXIN Nagydózisú (8 mg kg -1 takarmány) szubkrónikus terhelés (Surai, 2002) Közepes dózisú (1,53 mg kg -1 takarmány) szubkrónikus terhelés (Weber et al., 2010) Extrém nagy dózisú (14,4 mg kg -1 takarmány) rövidtávú terhelés (Bócsai et al., 2015) Nagy dózisú (3,4 mg kg -1 takarmány) krónikus terhelés (Balogh et al., 2015) Extrém nagy dózisú (13,5 mg kg -1 takarmány) krónikus terhelés (Rezar et al., 2007)

3 AZ OXIDATÍV STRESSZ HIERARCHIKUS MODELLJE Gloire, G. et al. (2006): Biochem. Pharmacol. 72,

4 Keap1 Nrf2 ANTIOXIDÁNS VÁLASZELEM SZABÁLYOZÁSI ÚTVONAL Suzuki, M. et al. (2016): Curr. Opin. Toxicol. 1, Fiziológiás állapot Oxidatív stressz Proteoszomális lebomlás Antioxidáns gének

5 A GLUTATION REDOX RENDSZER Espinosa-Diez C. et al. (2015): Redox Biol. 6: GS: glutation-szintetáz; GPx: glutation-peroxidáz; GR: glutation-reduktáz

6 VIZSGÁLAT CÉLJA Annak megállapítása, hogy eltérő dózisú rövidtávú DON + T-2 toxin egyidejű terhelés hatására: Kialakul-e oxidatív stressz baromfi májában? Milyen irányban és mértékben változik az antioxidáns védelemben kiemelt fontosságú foszfolipid glutation-peroxidáz (GPx4) enzimet kódoló gén expressziója? Milyen irányban és mértékben változik a GPx4 aktivitása és annak ko-szubsztrátja, a redukált glutation (GSH) mennyisége?

7 KÍSÉRLETI PROTOKOLL Kísérleti állat: Brojlercsirke (Cobb 540) 21 napos életkor (4 csoport/2 ismétlés/ 12 madár) Takarmányok mikotoxin tartalma: Kontroll: <0,01 mg T-2 toxin + 0,25 mg DON kg -1 Low dose keverék: 0,23 mg T-2 toxin + 4,96 mg DON kg -1 [EU javaslati érték] Medium dose keverék: 1,21 mg T-2 toxin + 12,38 mg DON kg -1 [EU x 5] High dose keverék: 2,42 mg T-2 toxin + 24,86 mg DON kg -1 [EU x 10] A kontroll és a kísérleti takarmányok aflatoxin B1, ochratoxin A, zearalenon és fumonisin B1 mikotoxinokat a detektálhatósági határértéknél kisebb mennyiségben tartalmaztak.

8 MINTAVÉTELEK ÉS MÉRT PARAMÉTEREK MINTAVÉTELEK: Mikotoxinnal szennyezett takarmány etetésének megkezdése előtt abszolút kontroll (n=6) Mikotoxinnal szennyzett takarmány etetésének megkezdését követő 1., 2., 3. és 7. napon (n=6 /kísérleti csoport) MÉRT PARAMÉTEREK: Takarmányfelvétel (naponta és csoportonként) Konjugált diének (CD) és konjugált triének (CT) mennyisége [AOAC, 1984] Tiobarbitursav-reaktív anyagok (TBARS) mennyisége [Mihara et al., 1980] Redukált glutation (GSH) koncentráció [Sedlak és Lindsay, 1968] Glutation peroxidáz (GPx4) aktivitás [Lawrence és Burk, 1978]

9 MINTAVÉTELEK ÉS MÉRT PARAMÉTEREK GÉNEXPRESSZIÓ MÉRÉSE KVANTITATÍV PCR REAKCIÓVAL (MGB-NFQ Taqman próba) Primerek GAPDH (endogén kontroll gén) gene GenBank accession no. primer szekvencia (5-3 ) GAPDH K01458 forward: TGACCTGCCGTCTGGAGAAA reverse: TGTGTATCCTAGGATGCCCTTCAG GPX4 AF forward: AGTGCCATCAAGTGGAACTTCAC reverse: TTCAAGGCAGGCCGTCAT Relatív génexpresszió számítás komparatív Ct módszerrel [StepOne /StepOnePlus Software v2.2; Applied Biosystems]

10 EREDMÉNYEK A kísérlet időtartama (72 óra) alatt elhullás nem volt. A kórboncolás során makroszkópos elváltozások nem voltak kimutathatók. A takarmányfelvétel nem változott szignifikáns mértékben a vizsgált időszak alatt. Konjugált diének, konjugált triének, valamint a TBARS mennyisége nem változott szignifikáns mértékben a vizsgált időszak alatt.

11 REDUKÁLT GLUTATION TARTALOM VÁLTOZÁSA A MÁJHOMOGENIZÁTUM G SZUPERNATANS FRAKCIÓBAN **= P 0,01; ***=P 0,001

12 FOSZFOLIPID HIDROPEROXID GLUTATION-PEROXIDÁZ AKTIVITÁS VÁLTOZÁSA A MÁJ G SZUPERNATANS FRAKCIÓBAN ***=P 0,001

13 GPX4 GÉN RELATÍV EXPRESSZIÓJÁNAK VÁLTOZÁSA A MÁJBAN * = P 0,05; **= P 0,01; ***=P 0,001

14 KÖVETKEZTETÉSEK A trichotecénvázas mikotoxinok individuális takarmány visszautasítást kiváltó hatása nem jelentkezett feltehetően amiatt, hogy míg a T-2-toxin hatása a szerotoninerg rendszeren keresztül érvényesül, addig DON hatását a noradrenerg rendszeren keresztül fejti és ezek hatása kioltja egymást. A lipid peroxidációs folyamatok markerei (CD,CT, TBARS) nem változtak szignifikáns mértékben, amelynek oka feltehetően a glutation redox rendszer gyors és hatékony aktivációja volt. Ezt bizonyítja a GSH mennyiségének és a GPx4 aktivitásának, valamint a GPX4 gén expressziójának növekedése. Ennek hátterében a Keap1-Nrf2-Antioxidáns válaszelem útvonal mérsékelt oxidatív stresszre bekövetkező fokozott aktivációja áll, amelynek vizsgálata jelenleg még folyamatban van.

15 KÖSZÖNÖM MEGTISZTELŐ FIGYELMÜKET További információ: Pelyhe Cs., Kövesi B., Zándoki E., Kovács B., Erdélyi M., Kulcsár Sz., Mézes M., Balogh K. (2018): Multi-trichothecene mycotoxin exposure activates glutathioneredox system in broiler chicken. Toxicon 153:

Hasonló dokumentumok

SZENT ISTVÁN EGYETEM TRICHOTECÉNVÁZAS MIKOTOXINOK HATÁSA A GLUTATION REDOX RENDSZER SZABÁLYOZÁSÁRA. Doktori értekezés tézisei. Pelyhe Csilla.

SZENT ISTVÁN EGYETEM TRICHOTECÉNVÁZAS MIKOTOXINOK HATÁSA A GLUTATION REDOX RENDSZER SZABÁLYOZÁSÁRA Doktori értekezés tézisei Pelyhe Csilla Gödöllő 2017 A doktori iskola megnevezése: tudományága: vezetője: