Gyorsteszt ß-laktám meghatározására tejben HASZNÁLATI ÚTMUTATÓ I. Bevezetés A Betaexpress egy olyan gyorsteszt, amely lehetővé teszi ß-laktám molekulák jelenlétének kimutatását tejben. II. A vizsgálat menetének összefoglalása Adjon 200 µl tejmintát egy reagenst tartalmazó küvettába és keverje, amíg a minta színe rózsaszín lesz (homogén minta); Inkubálja 90 másodpercig 45 C-on; Helyezzen egy tesztcsíkot minden küvettába; Folytassa az inkubációt 90 másodpercig 45 C-on; Olvassa le a színintenzitásokat. III. Reakció mechanizmus A Betaexpress egy versenyképes teszt, mely receptorokat használ a tejben jelenlévőlévő ß-laktám molekulák felismerésére. A teszthez két összetevő szükséges. Az első összetevő a küvetta, mely előre meghatározott mennyiségű receptort tartalmaz arany részecskékhez kapcsolva. A második összetevő a tesztcsík, mely membránokból készült és két speciális elfogó vonalat tartalmaz. Érvényes vizsgálathoz a második inkubációs szakaszt követően a felső piros ellenőrző (control) vonalnak láthatóvá kell válnia (lásd A ábra). A ß-laktám teszt vonal az ellenőrző vonal alatt helyezkedik el. Amikor a küvettában lévő reagens elkeveredik a tejmintában, az első 90 másodperces 45 C-os inkubációs szakasz alatt, a receptorok megkötik a benne lévő ß-laktám molekulákat. Ezután, mikor a tesztcsíkot behelyezik a mintába a folyadék elkezd függőlegesen felfutni azon, áthaladva a két elfogó zónán. Ha a mintában nincs ß-laktám, az első tesztvonal elszíneződik. Ellenkező esetben, ha a minta ß-laktám molekulákat tartalmaz az első tesztvonal nem fog elszíneződni. Az első tesztvonal fogja fel a mintában megmaradt Oldal 1 / 5
aktív receptorokat, a második vonal meghatározott mennyiséget köt meg az első vonalon áthaladt reagens többletből. A második vonal ellenőrző (control) vonalként szolgál és annál intenzívebb lesz a színe, minél több ß-laktám van a tejmintában. IV. A kit tartalma A Betaexpress kitek tartalmaznak minden szükséges eszközt 96 teszt elvégzéséhez. 12 darab műanyag edény mindegyikben 8 darab reagens küvetta és 8 darab tesztcsík; 1 darab automata pipetta, fix 200 µl; «Pozitív standard» tejpor, melyet feloldva Penicillin G pozitív nyerstejet kapunk. A könnyű felismerhetőség elősegítése érdekében a Pozitív standard színe halványpiros; «Negatív standard» tejpor, melyet feloldva negatív standard nyerstejet kapunk. A könnyű felismerhetőség elősegítése érdekében a Negatív standard színe halványzöld; 1 darab használati utasítás. V. Szükséges anyagok 1 darab Heatsensor inkubátor (45 C inkubáció, bővebben az alkalmazott Heatsensor használati útmutatójában). 1 darab Readsensor olvasó (opcionális, bővebben a Readsensor használati útmutatójában). VI. Általános megjegyzések 1. Ha a műszeres leolvasást választották az eredmények meghatározásához, akkor a Readsensor olvasónak bekapcsolva kell lennie a vizsgálat előtt (lásd Readsensor használati útmutató); 2. A tejátvételen a kitet száraz helyen, alacsony hőmérsékleten 2 és 8 C között tárolják. Mielőtt kinyitná, hagyja a műanyag edényeket felmelegedni szobahőmérsékletre. Óvja a tesztcsíkokat nedvességtől és fénytől; 3. A standard üvegcsékben lévő tejport 1 ml (5 x 200 µl) tiszta vízzel kell feloldani. Keverje el megfelelően, ne maradjanak feloldatlan részecskék. Az így feloldott üvegcsék fagyasztva -20 C-on tárolhatók. Ne fagyassza le/olvassza fel egynél többször; 4. Ne használja a Betaexpress tesztet alvadt tejhez; 5. A teszt elvégzéséhez az optimális hőmérséklet 45 C ± 3 C. Használja a Heatsensor inkubátort (vagy vízfürdőt). Más típusú inkubátorok nem alkalmazhatók a Betaexpress vizsgálathoz. (A megfelelő hőmérséklet és időzítés beállításáról bővebben a Heatsensor használati utasításban olvashat); Oldal 2 / 5
6. A második inkubációt követően 10 percen belül olvassa le az eredményt. Ne próbálja meg leolvasni az eredményt 10 percet követően; 7. Száradás közben a csíkok színintenzitása élesebb lesz; 8. Pozitív eredmény esetén, a kapott eredményt meg kell erősíteni; 9. Használja el az összes tesztet egy műanyag tároló edényből, mielőtt újat nyitna. VII. Tejpor feloldása Egy megfelelő edényben keverjen össze 10 g tejport 90 ml langyos (40 C) desztillált vízzel. Keverje erőteljesen a megfelelő oldódás érdekében. VIII. Használati utasítás Az alább leírt eljárás egy egyedülálló, vagy egy csoport minta egyszerű vizsgálatát írja le. Próbálja a vizsgálatokat sorozatban végezni, kerülje a késlekedést a reagens és a tejminta összekeverése, valamint tesztcsík behelyezése és eltávolítása során. Győződjön meg arról, hogy az inkubációs idő és hőmérséklet megegyezik minden minta esetén. Egyszerre ne vizsgáljon nyolcnál több mintát, valamint háromnál több minta esetén, használjon multi-pipettát. Nyolcnál több minta esetén, javasoljuk a minták maximum nyolcas szériákra osztását. 1. Válasszon egy tiszta és száraz helyet a vizsgálathoz. Mossa és szárítsa meg a kezét mielőtt elkezdi a vizsgálatot; 2. Csatlakoztassa a Heatsensor inkubátort (bővebben a Heatsensor használati utasításban) és várjon, míg a hőmérséklet stabilizálódik 45 C-on; - Körülbelül 10 percet vesz igénybe mire a hőmérséklet stabilizálódik 45 C-on. (Heatsensor DOU esetén ez az idő jóval rövidebb) 3. Mielőtt kinyitná a reagenst, vegye ki a kitet a hűtőből és hagyja felmelegedni szobahőmérsékletre. Ezalatt gondosan olvassa el a használati utasítást; - Két fő összetevőből áll a teszt: a tesztcsík és a küvetta a fagyasztva szárított reagenssel. Mindkettő a fehér műanyag edényben található. 4. Határozza meg a vizsgálandó minták számát és lássa el mindet azonosító számmal; - A tejmintának folyékonynak és homogénnek kell lennie, nem lehetnek benne sem csomók, sem szétvált fázisok. Az ideális tejminta hőmérséklet 4 és 20 C között van. 5. Nyisson ki egy műanyag edényt és vegyen ki annyi küvettát, ahány mintát szeretne vizsgálni (tartalmazza a pozitív és negatív standardokat); - Egy műanyag edény kinyitásához először távolítsa el a biztonsági gyűrűt annak lefelé nyomásával, majd vegye le a fedelet; - A tesztcsík és a reagens kivetelét követően zárja be megfelelően a műanyag edényt; Oldal 3 / 5
- Mindig használja el az összes tesztet és küvettát az adott műanyag edényből, mielőtt ujjat bontana ki; - Figyelem, ha nem használja el mind a 8 küvettát a műanyag edényből, ne tépje le a már elhasznált kűvettákat lezáró kupakokat. Ne próbálja a küvettákat szétszedni különálló darabokra, hanem a használat után azonnal tegye vissza a műanyag edénybe anélkül, hogy megsértené velük a tesztcsíkokat, majd zárja le, és győződjön meg, hogy megfelelően lezárt a kupak. 6. Helyezze a küvettát(kat) a 45 C-os inkubátorba; 7. Tegyen új hegyet a mikropipettába és pipettázon 200 µl tejet minden küvettába; 8. Figyelem: amint a reagens és a tej érintkezik egymással a reakció elkezdődik. Keverje össze gyorsan és AZONNAL nyomja meg a START(RUN) gombot. Az első 90 másodperces szakasz elindul; - Az első inkubációs szakasz alatt a receptorok felderítik, hogy van-e ß-laktám a tejben. A reakció teljes lejátszódásához 90 másodpercre van szükség. 9. Eközben nyissa ki ugyanazt a műanyag edényt és vegyen ki annyi tesztcsíkot, ahány vizsgálatot végez, majd zárja be az edényt. Fektesse a tesztcsíkokat egy száraz lapra és írja rájuk a minta azonosítókat. 10. Az első 90 másodperc leteltét, azaz a hangjelzést követően, nyomja meg a START (STOP)* gombot a hangjelzés leállításához, és helyezze a tesztcsíkokat az inkubátorban lévő megfelelő küvettába; - Győződjön meg arról, hogy a megfelelő küvettába helyezte a tesztcsíkot, a mintaazonosítók megegyezzenek; 11. Indítsa el a második 90 másodperces inkubációs szakasz visszaszámlálóját a START(STOP)* gomb megnyomásával. 12. A második 90 másodperc leteltét, azaz a hangjelzést követően, nyomja meg a START (STOP)* gombot újra a hangjelzés leállításához, majd vegye ki a tesztcsíkokat a küvettákból és fektesse egy fehér papírlapra; 13. Ha nem végez több Betaexpress vizsgálatot aznap, tegyen vissza mindent a dobozba és tárolja 2 8 C között. *(Bővebben az alkalmazott Heatsensor használati utasításban Heatsensor DOU esetén a 9-12 pontokat a berendezés automatikusan elvégzi). IX. Vizuális kiértékelés (lásd A ábra) A vizuális kiértékelést a következőképpen végezze: 14. Először ellenőrizze, hogy a felső control vonal megjelent-e. Ha nem jelent meg akkor a vizsgálat érvénytelen és ne kezdje el (folytassa) az eredmény kiértékelését; 15. Ha a felső control vonal látható, értékelje ki a tesztet a következők szerint: 16. Hasonlítsa össze a teszt vonal és a control vonal színeinek intenzitását. Oldal 4 / 5
o Ha a teszt vonal színe sötétebb a control vonal színénél, az eredmény NEGATÍV, mely azt jelenti, hogy a tejminta nem tartalmaz ß-laktám molekulákat; o Ha a teszt vonal színe megegyező, vagy világosabb, mint a control vonal színe, az eredmény POZITÍV, mely azt jelenti, hogy a tejminta MRL szinten, vagy a felett tartalmaz ß-laktám molekulákat. 17. Ha nem tudja eldönteni, hogy a vizsgálat eredménye POZITÍV-e, végezzen egy második kiértékelést 15 percen belül; 18. Írja rá a vizsgálat eredményt minden egyes tesztcsíkra; 19. A tesztcsík megőrizhető, ha szükséges. A mintaszivacska eltávolításával szárítsa ki a tesztcsíkot mielőtt eltárolná. Megjegyzés: a tesztvonalak színe a száradás során intenzívebbé (sötétebbé) válik. A ábra: Vizuális kiértékelés Readsensor használata esetén a tesztcsíkot a vizsgálatot követően 10 percen belül le kell olvasni. Bővebben a Readsensor használati útmutatójában. A teszt megrendelhető: Bentley Magyarország Kft. 8000 Székesfehérvár, Seregélyesi út 131. Tel.: +36 22 414 100 Fax: +36 22 414 101 Mobil: +36 30 954 4990 E-mail: akozak@bentleyinstruments.com; hungary@bentleyinstruments.com web: www.bentleyhungary.hu Oldal 5 / 5