Szent István Egyetem Állatorvos-tudományi Doktori Iskola



Hasonló dokumentumok
A 2008/8. SZÁM TARTALMA

Szent István Egyetem Állatorvos-tudományi Doktori Iskola

ADENOVÍRUSOK OKOZTA BETEGSÉGEK BAROMFIÁLLOMÁNYOKBAN

A Kaposvári Állategészségügyi Intézet baromfibetegségek megelőzésében játszott szerepe

Thuma Ákos, Ivanics Éva, Kaszanyitzky Éva Ph.D, Dán Ádám Ph.D, Glávits Róbert C.Sc. MgSzH-ÁDI

Emésztőszervi betegségek (PEC/PEMS) járványtani és virológiai vizsgálata pulykaállományokban

M. A. H. FOOD CONTROLL Kft. Mikrobiológiai vizsgáló Laboratóriuma Állategészségügyi Diagnosztikai Részleg BROILER PROGRAM

Az intézetek szerepe a baromfibetegségek megelőzésében Debrecen

Szent István Egyetem Állatorvos-tudományi Doktori Iskola

Riemerella anatipestifer okozta

A perifériás neuropátia (PNP) morfológiai jellemzése

Élő metapneumovírus vakcina fejlesztése tojóállományok részére: ártalmatlansági és hatékonysági vizsgálatok. Hajdúszoboszló, június 2-3.

Pulyka légzőszervi betegségek

VIZSGÁLATOK IDEGEN KÓROKOZÓKRA HUMÁN ÉLŐVÍRUS-VAKCINÁKBAN

1. 4. tételek. 1., A kórbonctan tárgya, feladata, vizsgáló módszerei

A baromfi egyes anyagforgalmi betegségei és mérgezései

Kutatási terület: Haszonállatok egészségvédelme, állománydiagnosztika

S. aureus fertőzés napos pulykában. Nemes Csaba PhD, Dr. Gyuris Éva, Thuma Ákos Phd, Dr. Markos Béla

A PNP kóroktanának molekuláris vizsgálata Dán Ádám és Rónai Zsuzsanna

Zárójelentés OTKA A téma címe: Az antioxidáns rendszer ontogenezisének vizsgálata emlős állatfajokban A kutatás időtartama:

Histomoniasis (Blackhead)

Állítsuk meg a bárányok kokcidiózist! Bogdán Éva haszonállat termékmenedzser Bayer Hungária Kft.

Aujeszky-betegség. 30/2009. (III. 27.) FVM rendelet

Reumás láz és sztreptokokkusz-fertőzés utáni reaktív artritisz

Tapasztalataink és a diagnosztika nehézségei a hazai avian influenzajárvány során

Szent István Egyetem Állatorvos-tudományi Doktori Iskola

Derzsy betegség. Kacsapestis. Kacsapestis. Vízi szárnyasok fontosabb kórképeinek áttekintése korosztályok szerint. Elıfordulás 1-4 hetes ludak

Posztvakcinációs rotavírus surveillance Magyarországon,

Ha nem akarsz mellé-nyúl-ni, használj Nobivac Myxo-RHD-t! MSDay-MOM park, dr. Schweickhardt Eszter

FIGYELEM!!! Az alábbi dokumentum csak tájékoztató jellegű, minden esetben olvassa el a termék dobozában található tájékoztatót!

I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS

A malacok fontosabb felnevelési betegségei

Szent István Egyetem Állatorvos-tudományi Doktori Iskola

Az Egészségügyi Minisztérium módszertani levele Immunhisztokémiai és immuncitokémiai módszerek alkalmazása a patológiában

A baromfiágazatot fenyegető legfontosabb állategészségügyi kérdések

BOTULIZMUS ELLENI VÉDŐOLTÁS HATÉKONYSÁGÁNAK VIZSGÁLATA LOVAK FŰBETEGSÉGÉNEK MEGELŐZÉSÉBEN. Kutasi Orsolya DVM, PhD, dipeceim

Emésztőszervi kórképek szopós malacokban. Dr. Biksi Imre SZIE ÁOTK Nagyállatklinika

Kérdések és válaszok az influenzáról

Légzőszervi betegségek számokban

Pécsi Tudományegyetem Természettudományi Kar Földrajzi Intézet Földtudományok Doktori Iskola

TÓTH KÁLMÁN: SZEMLÉLETVÁLTOZÁS A CSÍPÖÍZÜLETI ARTRÓZIS MEGELŐZÉSÉBEN ÉS KEZELÉSÉBEN

A 2011/8. SZÁM TARTALMA

VACCINUM COCCIDIOSIDIS VIVUM AD PULLUM. Csirke kokcidiózis vakcina (élő)

A 2014/6. SZÁM TARTALMA. Joó Kinga, Nyerges-Bohák Zsófia, Szenci Ottó, Kutasi Orsolya:

Biológiai biztonság: Veszély: - közvetlen - közvetett

Dr. Saxné Dr. Andor Ágnes Márta. Immateriális javak a számviteli gyakorlatban

A burgonyabogár (Leptinotarsa decemlineata) elleni biológiai növényvédelmi készítmény kidolgozása

Panelvizsgálatok. HASMENÉS panel 1. ALAP csomag (1-2 galambhulla esetén) KOMPLEX csomag (2-3 galambhulla esetén) 1 Bélsár transzport táptalajon 1

Salmonella vizsgálatok és salmonella helyzet. Dr.Lebhardt Károly M.A.H.Food-Controll Kft

A 2008/11. SZÁM TARTALMA

MELLÉKLETEK. a következőhöz: Javaslat AZ EURÓPAI PARLAMENT ÉS A TANÁCS RENDELETE

Kihívások és lehetőségek a tudományterületek határán

JÁRVÁNY, JÁRVÁNYVESZÉLY

ZÁRÓJELENTÉS. A munkaterv megvalósítása. A munkát három fő területre tagoltuk, a kutatás céljainak megfelelően:

A SZARVASMARHA LÉGZŐSZERVI BETEGSÉG-KOMPLEXE

A BRDC KÓROKTANA ÉS TÜNETTANA AETIOLOGY AND CLINICAL SIGNS OF BRDC

A rotavírus a gyomor és a belek fertőzését előidéző vírus, amely súlyos gyomor-bélhurutot okozhat.

Egyetemi Doktori (Ph.D.) Értekezés Tézisei A PANCREAS-M TÉTEK BIZTONSÁGÁNAK FOKOZÁSÁRA IRÁNYULÓ TÖREKVÉSEK. M TÉT-TECHNIKAI ELEMZÉSEK

J/55. B E S Z Á M O L Ó

A Legionella jelenlétének kimutatása

Különböző Capsicum annuum var. grossum paprikafajták endofita baktériumainak izolálása, jellemzése és molekuláris biológiai vizsgálata

Az alsó légutak krónikus megbetegedései

Újabb adatok a baromfi mycoplasmosisairól

MIKROKOZMOSZ: MIKROBIOLÓGIAI GYAKORLATOK KIDOLGOZÁSA ÉS INTEGRÁLÁSA A KÖZÉPISKOLAI BIOLÓGIATANÍTÁS MÓDSZERTANÁBA

14/2016. (I. 25.) XI.ÖK határozat melléklete. Újbudai Egészségügyi Koncepció Budapest Főváros XI. Kerület Újbuda Önkormányzata

Járványos hasmenéses megbetegedések az USA sertésállományában

Zúzógyomor-gyulladás (fekély) súlyos formájának megfigyelése és kóroktani vizsgálata brojler csirkékben

Mit is csinál pontosan a patológus?

Melléklet. Tudományos következtetések és az Európai Gyógyszerügynökség által kiadott elutasítás indoklása

A szarvasmarhák vírusos hasmenése ( BVDV) Nemzetközi mentesítési tapasztalatok

A vakcinázás hatékonyságát alapvetően befolyásoló tényezők. Dr. Albert Mihály

Az eddig figyelmen kívül hagyott környezetszennyezések

Az Országos Epidemiológiai Központ. BMPT Főosztályának Bakteriológiai, Parazitológiai, Mikológiai és Tipizáló Továbbképzése

142/2004. (IX. 30.) FVM-GKM együttes rendelet. a mezőgazdaság és az ipar területén folytatott géntechnológiai tevékenység egyes szabályairól

A Szerzői Jogi Szakértő Testület szakvéleményei

Légzőszervi betegségek nagyüzemi telepeken

2005. évi XCV. törvény. az emberi alkalmazásra kerülı gyógyszerekrıl és egyéb, a gyógyszerpiacot szabályozó törvények módosításáról

Tájékoztató az influenza figyelőszolgálat adatairól Magyarország hét. Terjed az influenza

Fehér kapszula, felső részén fekete OGT 918, alsó részén fekete 100 jelzéssel.

Intenzíven terjed az influenza

Bírálat Petrik Péter "Spektroellipszometria a mikroelektronikai rétegminősítésben" című MTA doktori értekezéséről.

Sertésdizentéria: védekezzünk ellene! Megéri!

Nemzeti Akkreditáló Testület. MÓDOSÍTOTT RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAT /2014 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAH /2018 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

Macsinka Klára. Doktori értekezés (tervezet) Témavezető: Dr. habil. Koren Csaba CSc egyetemi tanár

BALMAZÚJVÁROS VÁROS POLGÁRMESTERE MEGHÍVÓ

Chlamydiaceae család Obligát intracelluláris baktérium. Replikációs ciklus: Antigenitás. Humán patogén chlamydiák

Az Országos Epidemiológiai Központ tájékoztatója az influenza figyelőszolgálat adatairól Magyarország hét. Terjed az influenza

A közigazgatási ügyintézés társadalmi megítélése a magyarországi vállalkozások körében

SAJTÓANYAG FELMÉRÉS KÉSZÜLT A MAGYAROK UTAZÁSI SZOKÁSAIRÓL

Szent István Egyetem Állatorvos-tudományi Doktori Iskola. Háziállatokból izolált Histophilus somni törzsek összehasonlító vizsgálata

ÖSSZEFOGLALÓ JELENTÉS

TÁRSADALMI MEGÚJULÁS OPERATÍV PROGRAM. 6. prioritás. Akcióterv szeptember 3.

Az Országos Epidemiológiai Központ Tájékoztatója az influenza surveillance adatairól Magyarország hét

Emberi Erőforrások Minisztériuma Központi Ügyfélszolgálati Iroda. Tájékoztató

A magas patogenitású madárinfluenza elleni védekezés szabályai

A MOLÁRIS-INCIZÁLIS HIPOMINERALIZÁCIÓ (MIH) MEGJELENÉSE RÉGIÓNK GYERMEKPOPULÁCIÓJÁBAN

Iskolai veszélyeztetettség és pályaszocializáció*

RÉSZLETEZŐ OKIRAT (3) a NAH / nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

Beszámoló a családsegítő szolgálat 2014 évi munkájáról

Átírás:

Szent István Egyetem Állatorvos-tudományi Doktori Iskola Egyes enterális baromfibetegségek (ludak spirochaetosisa, pulykapipék PEC/PEMS kórképei) kórtani, oktani, járványtani és kísérleti vizsgálata PhD értekezés tézisei Dr. Nemes Csaba 2010

Témavezet és témabizottsági tagok:.. Dr. Glávits Róbert, kandidátus MGSZH ÁDI Budapest témavezet Dr. Tekes Lajos, kandidátus MGSZH ÁDI Budapest témabizottság tagja Dr. Kaszanyitzky Éva, PhD MGSZH ÁDI Budapest témabizottság tagja Dr. Nemes Csaba 2

BEVEZETÉS ÉS CÉLKIT ZÉSEK A baromfiipar teljesítménye évr l-évre n. A tenyészt munka megteremti ennek genetikai feltételeit. A fajtákban rejl potenciális genetikai lehet ségek kiaknázása nem lehetséges az optimális tartási, takarmányozási, állategészségügyi feltételek biztosítása nélkül, amelyeknek része a megel zés, illetve a betegségek jelentkezésekor a gyors diagnózis felállítása és ennek ismeretében a hatékony védekezési stratégia kidolgozása. A diagnosztikai munkában komoly nehézséget jelent, hogy az intenzív állattartás körülményei között egyre n a komplex kóroktanú megbetegedések jelent sége. Ezeknél gyakran a pontos oktani diagnózis felállítása is problémát okoz. A házimadarak számos enterális megbetegedése tartozik ebbe a csoportba. Ide sorolható kórformák a kispulykák bélgyulladással járó kórképcsoportja (PEC), a kispulykák bélgyulladással és jelent s elhullással járó szindrómája (PEMS), illetve a madarak intestinalis spirochaetosisai (AIS). A PEC/PEMS el nevelt, f leg 1-4 hetes életkorú pulykák klinikailag hasmenéssel, kiszáradással, fejl dében való visszamaradással, esetenként jelent s elhullással járó kórképei. Komplex kóroktanú megbetegedések, amelyek kórfejl dése is hasonló. Els lépésben enteropatogén vírusok károsítják a bélnyálkahártyát, amelynek felszívódási zavar a következménye. A sérült bélnyálkahártyán baktériumok, vírusok gombák telepednek meg. Az immunrendszer legalább átmeneti m ködészavara lehet vé teszi, hogy a megtelepedett baktériumok a véráramba törjenek. A jelent sebb elhullások másodlagos bakteriális szöv dmények következtében alakulnak ki. Az elhullott állatokban megfigyelhet kórtani (kórbonctani, kórszövettani) elváltozások általában hasonlóak és jellegtelenek. Intenzív kutatások folynak azoknak az enterális vírusoknak az azonosítására, amelyek meghatározó szerepet játszhatnak a bélnyálkahártya kezdeti károsításában. Több felmérésben hasmenéses kispulykák bélsarából leggyakrabban astrovírusokat és rotavírusokat mutattak ki. A pulyka coronavírusoknak meghatározó szerepet tulajdonítottak a PEMS kialakításában. A fenti vírusok esetén kísérleti adatok is bizonyítják, hogy képesek kispulykákban enterális tüneteket el idézni. A madarak enteralis vírusaival kapcsolatos ismeretek, f ként a diagnosztikai módszerek fejl désének (elektronmikroszkóp (EM), immun elektronmikroszkóp (IEM), polimeráz láncreakció (PCR)) köszönhet en jelent sen gyarapodtak, így a lehetséges kórokozók köre még korántsem tekinthet lezártnak. A madarak intestinalis spirochaetosisa alatt a madarak vak- és/vagy vastagbelének patogén Brachyspira fajokkal való kolonizációját és ennek következtében f ként enterális tünetekkel járó megbetegedését értjük. A klinikai tünetek megjelenését a fert zést okozó Brachyspira törzs mellett genetikai, tartási és takarmányozási tényez k is befolyásolják, 3

amelyek kihatnak arra, hogy a megteleped brachyspirák milyen mikrobiális társkörnyezetbe kerülnek. Ezzel magyarázható, hogy az AIS során megfigyelt klinikai és patológiai elváltozások jelent sen eltérhetnek a különböz állományokban. A diagnózis felállításához szükséges a kórokozó kitenyésztése és biokémiai tulajdonságainak vizsgálata. A tenyésztés nehézségei és a biokémiai tulajdonságok bizonytalanságai miatt er feszítések történnek a brachyspirák modern molekuláris biológiai módszerekkel (PCR, ISH) való azonosítására is. A kispulykák hasmenéssel, fej désben való visszamaradással esetenként jelent s elhullással járó PEMS/PEC kórformáinak el fordulásáról csak kevés konkrét hazai tapasztalat volt. Ugyanez igaz a madarak ún. intestinalis spirochaetosisával kapcsolatban is. A betegség hazai el fordulását jelezte, hogy részben ludak fibrines-elhalásos vakbél- és vastagbél-gyulladással járó megbetegedéseib l (libák ún. sajtos vakbélgyulladása), részben pulykák enyhébb vastagbél-elváltozásaiból hazai kutatók már korábban is kimutattak spirochaetákat, ezek pontos azonosítására azonban akkor nem került sor. Kutatásom célja a kispulykák PEMS/PEC kórformáinak, valamint feln tt ludak intestinalis spirochaetosisának tanulmányozása volt. Ennek során a diagnosztikai intézetekben rutinszer en végzett (kórbonctani, kórszövettani, bakteriológiai, parazitológiai) vizsgálatok mellett molekuláris diagnosztikai módszereket használva kaptunk adatokat a béltartalomban el forduló egyes baktériumokról, vírusokról, egysejt, vagy többsejt parazitákról és az általuk el idézett elváltozásokról. Ezeket immunhisztokémiai vizsgálatokkal és a vizsgált állományokról beszerzett járványtani adatokkal kiegészítve lehetett következtetéseket levonni az egyes kimutatott ágensek kórtani szerepér l. Kispulykák esetén adatokat gy jtöttünk a PEMS/PEC kórformák hazai el fordulásáról. Ehhez az intézeti rutindiagnosztikai vizsgálatokat, az enterális vírusfert zésre gyanút kelt kórel zménnyel érkezett, és/vagy a boncolás során arra gyanússá váló el nevelt pulykaállományokból származó madarak esetén, molekuláris diagnosztikai módszerekkel kiegészítve kíséreltük meg a pulyka coronavírusok (TCoV), a pulyka astrovírusok (TAstV-1, TAstV-2) és a madár rotavírusok (ARoV) kimutatását. A víruskimutatás eredményeit összevetve a kórbonctani, kórszövettani vizsgálatok leleteivel vizsgáltuk, hogy az egyes vírusok illetve azok kombinációi kialakítanak-e a hagyományos diagnosztika módszereivel egyértelm en azonosítható elváltozásokat. Saját eredményeinket kiegészítve a kezel állatorvosoktól beszerzett adatokkal, kísérletet tettünk a vizsgált kórképek okozta veszteségek jellemzésére és a fert zött állományokra vonatkozóan bizonyos járványtani következtetések levonására. Fibrines-elhalásos vakbél- és vastagbél-gyulladásban elhullott ludakból célzott vizsgálatokat végeztünk brachyspirák kimutatására. 4

Tanulmányoztuk az elváltozott vastagbélszakaszokból kitenyésztett brachyspirák biokémiai jellemz it, antibiotikum-érzékenységét. A kutatás célja ezen kívül a betegség járványtani sajátosságainak tanulmányozása, illetve kísérleti állatfert zéssel a fenti elváltozásokból leggyakrabban kitenyésztett B. alvinipulli patogenitására az általa el idézett betegség kórfejl désére irányuló ismeretek szerzése volt. 5

ANYAG ÉS MÓDSZER Kispulykák enterális kórképei A kutatás során feldolgozott minták nagyobb részben az MGSZH ÁDI kaposvári kórbonctani osztályára, kisebb részben az MGSZH ÁDI budapesti baromfibetegségek laboratóriumába rutindiagnosztikai vizsgálatra érkezett anyagból származtak. A kispulykák enterális kórképeinek tanulmányázásához olyan madarakat választottunk, amelyeknél a kórel zményi adatok és/vagy a boncolási lelet felvetették a vírusos bélgyulladás gyanúját. Olyan mintáink is voltak, ahol célzottan kérték, bizonyos enterális vírusok kimutatását. A pulyka coronavírusok el fordulására irányuló vizsgálatokat utónevelt (> 6 hét), hasmenés klinikai tüneteit mutató állományokból származó állatokra is kiterjesztettük. Elvégeztük az állatok részletes boncolását. Ennek során gy jtöttük a további feldolgozásra szánt mintákat, amelyeket a feldolgozás céljának megfelel en tároltunk. A kórszövettani vizsgálatra szánt szervdarabokat (vékonybél, bursa Fabricii, thymus és esetenként máj, lép, tüd, vese, hasnyálmirigy, agyvel ) 4%-os pufferolt formaldehid oldatban fixáltuk. A mintákból részben fagyasztásos technikát alkalmazva, részben paraffinba való beágyazást követ en készítettünk metszeteket, amelyeket rutinszer en haematoxillin-eozinnal festettünk. A szívvérb l, májakból, illetve csontvel kb l közönséges-, véres- és Drigalski-agaron aerob körülmények között elvégzett bakteriológiai vizsgálatot az állatok egy részénél a vékonybéltartalomból elvégzett anaerob tenyésztéssel, valamint az állatoktól nyert egyesített bélsárminták parazitológiai vizsgálatával egészítettük ki. A pulyka coronavírusok, a pulyka astrovírusok és a madár rotavírusok el fordulását reverz transzkripciót követ polimeráz láncreakcióval vizsgáltuk, amelyhez a vékonybelek középs szakaszából származó, beküldésenként ötösével csoportosított mintákból kivont nukleinsavat használtunk. A szervminták homogenizálását követ en az RNS kivonását egy az irodalomban leírt silica szuszpenziós módszerrel végeztük Az amplifikálást részben irodalmi primerek, részben az intézeti hálózatban fejlesztett primerek felhasználásával hajtottuk végre. A primerek specificitását a PCR termékek szekvenálásával ellen riztük. A kapott szekvenciákat BLASTN (National Center for Biotechnology Information, http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi) homológiakeres programmal azonosítottuk. Mivel kezdetben pozitív minták a legtöbb esetben nem álltak rendelkezésünkre, általános baromfi 6

coronavírus, ill. rotavírus rendszereket használtunk, majd az els pozitív pulyka minták ellen rzését szintén a PCR termékek szekvenciasorrendjének meghatározásával végeztük (ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer, Biomi Kft. Gödöll ). Mivel minden esetben megfelel nukleotidsorrendet kaptunk, a kés bbiekben ezeket a mintákat, illetve az ezekb l a mintákból készült vírustenyészeteket használtuk pozitív kontrollként. Ludak intestinalis spirochaetosisa A kutatás során feldolgozott minták nagyobb részben az MGSZH ÁDI kaposvári kórbonctani osztályára, kisebb részben az MGSZH ÁDI budapesti baromfibetegségek laboratóriumába rutindiagnosztikai vizsgálatra érkezett anyagból származtak. A ludak intestinalis spirochaetosisát el ször két, els tojástermelési ciklusát befejez állományban észleltük. Ezt követ en a jellegzetes kórbonctani elváltozásokat mutató állatokból célzottan kíséreltük meg Brachyspira-fajok kimutatását. A kórbonctani, kórszövettani (vakbél, vastagbél, vese, máj) és bakteriológiai vizsgálatokat a fent leírt módon végeztük. A lúdszervekb l készített szövettani metszetek egy részénél Giemsa és Warthin-Starry festést is alkalmaztunk. A brachyspirák vastagbélben való helyez dését immunhisztokémiai módszerrel is tanulmányoztuk. A vizsgálatokat kereskedelmi forgalomban kapható nyúl immunszérummal végeztük, amelynek használhatóságát egy B. alvinipulli tenyészetb l tárgylemezre készített preparátumon teszteltük, amelyhez a jelölt ellenanyag képes volt köt dni. Az antigén ellenanyag kapcsolódás kimutatása torma-peroxidáz enzimmel jelölt polimert tartalmazó teszt felhasználásával történt. Kromogénként 3-amino-9-etilkarbazol oldatot használtunk, a kontrasztfestést Mayer-féle haematoxilinnel végeztük. A szívvérb l májból elvégzett rutinbakteriológia vizsgálat mellett a brachyspirák elváltozott vastagbélszakaszokból való szelektív kitenyésztésére éleszt kivonattal, antibiotikumokkal és 5% juhvérrel kiegészített triptont és szójakivonatot tartalmazó agart használtunk. A talajokat anaerob körülmények között 42 0 C-on 4-6 napig inkubáltuk. A növekedést mutató lemezekr l, a felkenés széli részér l 5% juhvért tartalmazó Columbia agar felületére szélesztettünk, majd a tenyészeteket a fenti módon inkubáltuk. A biokémiai vizsgálatokat a továbboltott tenyészettekkel végeztük el. A Brachyspira törzsek biokémiai sajátságai közül a hippuráthidrolízist, az α- galaktozidáz-, α-glukozidáz- és β-glukozidáz-termelést Rosco diagnosztikai tabletták (Rosco, Dánia) segítségével határoztuk meg a gyártó utasításainak megfelel en. Az indol reakciót indolreagenssel átitatott sz r papíron vizsgáltuk. 7

A Brachyspira törzsek tiamulin-, lincomycin- és amoxycillin-érzékenységét agarhígításos, míg a tetracyclin- és erythromycin-érzékenységet E-teszt (AB BIODISK, Svédország) módszerrel határoztuk meg. A Brachyspira alvinipulli patogenitásának, illetve az általa el idézett betegség kórfejl désének tanulmányázásához kísérleti állatfert zést végeztünk. A kísérlethez 30 naposlibából véletlenszer en három tízes csoportot alakítottunk ki (A, B, C csoportok). Az A jelzés csoport állatait Brachyspira alvinipulli, a B jelzés csoport állatait Brachyspira hyodysenteriae 5 X 10 8 CFU/ml dózisnak megfelel tenyészetével szájon keresztül fert ztük. A C jelzés csoport állatai szolgáltak kontrollként. Az állatok testsúlyát hetente mértük. A fert zést követ els és második hét végén minden csoportból 3-3, a harmadik és ötödik hét végén minden csoportból 2-2 állatot elvéreztettünk, majd boncoltuk, és szövettani, valamint immunhisztokémiai vizsgálatok céljára mintát vettünk, amelyeket 4%-os pufferolt formaldehid oldatban fixáltunk. A brachyspirák visszaizolálását a csíp bél, vakbél és vastagbél nyálkahártyájáról, illetve a 14. napon kiirtott állatok veséjéb l kíséreltük meg a korábban leírt eljárás szerint. 8

EREDMÉNYEK KÖVETKEZTETÉSEK Kispulykák enterális kórképei A 2005 és 2007 között 214 el nevelt, többségében 1-3 hetes életkorú pulykaállományból származó madarat dolgoztunk fel. A molekuláris diagnosztikai eredmények alapján az állományok 57%-a bizonyult a vizsgált vírusok legalább egyikével fert zöttnek. A fert zöttnek talált állományok 29%-ban kombinált vírusfert zést találtunk. Leggyakrabban az önálló ARoV és az önálló TAstV-1 fert zés fordult el és kombinált fert zések esetén is e két vírus kombinációja volt a leggyakoribb. Az pulyka astro- és madár rotavírusok életkor szerinti megjelenési mintázatát tekintve az önálló TAstV-2 fert zés már egyhetesnél fiatalabb (5 napos) madarakban megjelent és kéthetes koron túl, egyetlen állomány kivételével, nem tudtuk megállapítani. Ez olyan állományokra is igaz volt, ahol a TAstV-2 más vírussal kombinálódva fordult el. Önálló TAstV-1 fert zöttséget leggyakrabban 3 hetes kor körüli állományokban találtunk. Kombinált fert zések esetén e vírusok kimutatása is fiatalabb, kéthetes életkorra tolódott. Az önálló ARoV fert zöttség megjelenését a fentiekhez hasonló tendencia nem jellemezte, a vírus a legkülönfélébb életkorú el nevelt állományokban kimutatható volt. Az állományok oldaláról vizsgálva, az enterális vírusfert zöttség már egyhetes kor alatt megjelent. Ezt f leg a TAstV-2 önállóan, vagy ARoV-val kombinációban okozta. 8 és 14 napos kor között megn tt a csak ARoV-val fert zöttnek talált állományok száma. 14 és 28 napos kor között az ARoV, a TAstV-1, illetve e két vírus kombinációja volt kimutatható a leggyakrabban a fert zöttnek talált állományokból, azzal a megfigyeléssel, hogy 3 hetes életkor közelében uralkodóvá vált az önálló TAstV-1 fert zöttség. 4 hetes kor után ismét dominálóvá vált az önálló ARoV fert zöttség. A vizsgált id szakban, TCoV fert zöttséget 6 el nevelt állományban mutattunk ki. Tekintve, hogy a TCoV iránt a pulyka minden életkorban fogékony a vírus kimutatását jellegzetes klinikai tüneteket (hasmenés, fejl désben való visszamaradás) mutató utónevelés alatt álló állományokból származó pulykákból is megkíséreltük. A 2005 és 2007 között vizsgált 44 utónevelt állományt reprezentáló minta 36%-át találtuk TCoV pozitívnak. A TCoV fert zött állományokban a kórlefolyás jelent sen különbözött attól függ en, hogy a vírus kéthetes, vagy annál fiatalabb, illetve négyhetes vagy annál id sebb állományban került-e el ször kimutatásra. El bbi, járványtani jellemz i alapján az irodalomban TCoV pozitív PEMS-ként leírt kórképnek, míg az utóbbi a pulykák coronavírus okozta bélgyulladása néven leírt megbetegedésnek felelt meg. 9

Önálló vírusfert zés esetén az elhullott állatokban talált kórbonctani elváltozások hasonlóak voltak (eléhezés, kiszáradás, vékonybélhurut, vizes-habos vakbéltartalom), függetlenül attól, hogy kés bb melyik vírus került kimutatásra. Szövettani vizsgálattal szintén valamennyi vírusfert zés esetén megfigyelhet volt a bélnyálkahártya elváltozásai mellett az immunszervek, f leg a bursa Fabricii enyhébbsúlyosabb fokú sorvadása. A fenti szervekben a legsúlyosabb szöveti elváltozásokat a PEMS-es állatokból származó minták esetén figyeltük meg. Az enterális vírusok kimutatásának id pontjában az elhullások is megemelkedtek. A mortalitás végs mértékét a vírusfert zésen kívül egyéb tényez k is befolyásolták. A fert zöttnek talált madarakban ugyanis gyakran egyidej leg bakteriális társfert zés (leggyakrabban E. coli vérfert zés) is megállapítható volt. Ez a legsúlyosabb következményekkel a PEMS-es állományokban járt, de a többi esetben is hozzájárulhatott a veszteségek fokozódásához. A vírusfert zött állatok, fejl dése megtört és testtömegük alatta maradt az adott életkorra a technológia alapján elvárt testtömegnek. Ludak intestinalis spirochaetosisa A ludak intestinalis spirochaetosisát els megállapítását követ en, 2005 és 2007 között 22 állományban diagnosztizáltuk. A betegség leggyakrabban els éves tojóludakban, a tojástermelési ciklus végén, a vedlés megindulásakor jelentkezett. Az elhullott állatokban kórbonctani vizsgálattal súlyos, fibrines-elhalásos vakbél- és vastagbél-gyulladás (typhlocolitis) fordult el, amelyhez vesefibrózis társult. Az elváltozott vastagbéltartalmakból az esetek többségében biokémiailag egységesen viselked, fenotípusos sajátságai alapján Brachyspira alvinipullinak bizonyuló baktériumokat lehetett kitenyészteni. Az izolált Brachyspira törzsekkel naposliba fert zési kísérletet végeztünk. A fert zéshez használt törzsek kolonizálták a vastagbelet (f ként a vakbelet) és öthetes korig (a kísérlet lezárásáig) kimutathatóak és visszaizolálhatóak voltak. Megtelepedésüket mérsékelt klinikai tünetek, kórbonctani és kórszövettani elváltozások kísérték. 10

ÚJ TUDOMÁNYOS EREDMÉNYEK Els ként gy jtöttem adatokat jellegzetes klinikai tüneteket mutató pulykaállományokban bizonyos enterális vírusok (TCoV, TAstV-1, TAstV-2, ARoV) hazai elterjedtségér l. Hazánkban els ként számoltam be el nevelt pulykaállományokban a TCoV pozitív PEMS kórkép megjelenésér l, és leírtam a TCoV fert zés el fordulását, klinikai tüneteket mutató utónevelt pulykaállományokban. A vizsgált állományokban az ARoV és a TAstV-1 széleskör el fordulását találtam, gyakran kombinációban. Ez a vírusfert zés nem járt olyan súlyos következményekkel, mint a hasonló életkorban kimutatott TCoV fert zés. Az alkalmazott molekuláris diagnosztikai módszer (RT-PCR) rutinszer en alkalmasnak bizonyult a különféle vírusfert zések oktani kórjelzésére. A nemzetközi irodalomban is els ként számoltam be a ludak intestinalis spirochaetosisáról. Munkatársaimmal megállapítottam, hogy a hazai lúdállományokban talált kórbonctani elváltozásokból leggyakrabban a Brachyspira alvinipulli tenyészthet ki. Vizsgálatokat végeztünk a kórkép hazai elterjedtségére vonatkozóan. Kísérleti állatfert zéssel bizonyítottuk, hogy a B. alvinipulli képes a naposlibák vastagbelét kolonizálni (legalább a kísérlet öthetes id tartamára) és megtelepedését mérsékelt klinikai tünetek valamint kórtani leváltozások kísérik. 11

A JELÖLT TUDOMÁNYOS PUBLIKÁCIÓI 1.1. A kutatási témában megjelent szakcikkek NEMES CS., GLÁVITS, R., DOBOS-KOVÁCS, M., IVANICS, ÉVA, KASZANYITZKY, ÉVA, BEREGSZÁSZI, ANIKÓ, SZEREDI, L., DENCS, L.: Typhlocolitis associated with spirochaetes in goose flocks. Avian Path., 2006. 35. 4-11. NEMES CS., GLÁVITS R., DOBOS-KOVÁCS M., IVANICS ÉVA, KASZANYITZKY ÉVA, BEREGSZÁSZI ANIKÓ, SZEREDI L., DENCS L.: Spirochaetafert zéssel összefügg vastagbélgyulladás lúdállományokban. Másodközlés. Magyar Állatorv. Lapja, 2006. 128. 343-350. IVANICS ÉVA, DOBOS-KOVÁCS, M., GLÁVITS, R., KASZANYITZKY, ÉVA, NEMES, CS., SZEREDI, L., BEREGSZÁSZI ANIKÓ, DENCS, L.: Experimental study on the role of Brachyspira alvinipulli in intestinal spirochaetosis of geese. Acta Vet. Hun., 2007. 55. 315-326. NEMES CS., SZALAY D., URSU KRISZTINA, PALYA V., GLÁVITS R.: Pulykák coronavírus okozta bélgyulladásának vizsgálata Magyarországon. 1. rész. Irodalmi áttekintés. Magyar Állatorv. Lapja, 2008. 130. 80-87. NEMES CS., SZALAY D., URSU KRISZTINA, PALYA V., GLÁVITS R.: Pulykák coronavírus okozta bélgyulladásának vizsgálata Magyarországon. 2. rész. Saját megfigyelések. Magyar. Állatorv. Lapja, 2008. 130. 148-156. NEMES CS., IVANICS ÉVA, SZALAY D., URSU KRISZTINA, SIMONYAI ERIKA, GLÁVITS R.: Kispulykák astrovírus és rotavírus okozta bélgyulladásának hazai vizsgálata. Irodalmi áttekintés és saját megfigyelések. Magyar Állatorv. Lapja, 2008. 130. 464-474. GLÁVITS R., IVANICS ÉVA, NEMES CS., DÁN Á., KASZANYITZKY ÉVA, SAMU PÉTERNÉ, THUMA Á., SIMON ANNA, ALADICS S., BERTA P., DOBOS-KOVÁCS M.: Vizsgálatok és megfigyelések a liba, kacsa és a házityúk intestinális spirochaetosisaról (brachyspirosisáról) a sertésdysentériával összehasonlítva. Magyar Állatorv. Lapja, 2008. 130. 663-671. 1.2. A kutatási témában tartott el adások NEMES CS., GLÁVITS R., DOBOS-KOVÁCS M, IVANICS ÉVA, KASZANYITZKY ÉVA, BEREGSZÁSZI ANIKÓ, SZEREDI L., DENCS L.: Brachyspira alvinipulli okozta vesekárosodással járó 12

vastagbélgyulladás (enterális spirochaetosis) lúdállományokban. MTA Akadémiai beszámoló. 2005. NEMES CS., GLÁVITS R., DOBOS-KOVÁCS M, IVANICS ÉVA, KASZANYITZKY ÉVA, BEREGSZÁSZI ANIKÓ, SZEREDI L., DENCS L.: Brachyspira alvinipulli okozta vesekárosodással járó vastagbélgyulladás (enteralis spirochaetosis) lúdállományokban. 13. Derzsy Napok. Galyatet, 2005. IVANICS ÉVA, DOBOS-KOVÁCS M., GLÁVITS R., KASZANYITZKY ÉVA, NEMES CS., SZEREDI L., BEREGSZÁSZI ANIKÓ, DENCS L.: Libák intestinalis spirochaetosisából izolált Brachyspira alvinipulli vizsgálata. MTA Akadémiai beszámoló 2006. NEMES CS., IVANICS ÉVA, SZALAY D., URSU KRISZTINA, GLÁVITS R., PALYA V., ZARKA P.: Pulykák vírusos bélgyulladásai, az un. poult enteritis mortality syndrome (PEMS) kórkép hazai vizsgálata. MTA Akadémiai beszámoló 2007. NEMES CS., SZALAY D., URSU KRISZTINA, PALYA V., GLÁVITS R.: Pulykák coronavírus okozta bélgyulladása. MTA Akadémiai beszámoló 2007. NEMES CS., IVANICS ÉVA, SZALAY D., URSU KRISZTINA, GLÁVITS R., PALYA V., ZARKA P.: Pulykák vírusos bélgyulladásai, az un. poult enteritis motality syndrome (PEMS) kórkép hazai vizsgálata. 15. Derzsy Napok, Balatonfüred, 2007. június 7.-8. GLÁVITS R., IVANICS ÉVA, NEMES CS., DÁN Á., KASZANYITZKY ÉVA, BEREGSZÁSZI ANIKÓ, SIMON ANNA, ALADICS, S.: A liba, a kacsa és a házityúk spirochaetosisának (brachyspirosisának) összevetése a sertésdysenteriával. 16. Derzsy Napok, Zalakaros, 2008. június 5.-6. 13

Köszönetnyilvánítás Dr Glávits Róbertnek témavezet mnek, aki végig támogatott, biztatott és aktívan segített a felmerül szakmai problémák megoldásában. Dr. Tekes Lajosnak igazgatómnak, aki a nehéz körülmények között is biztosította az anyagi és technikai feltételeket a vizsgálatokhoz. Ursu Krisztinának, Dr. Dán Ádámnak és Dr. Kiss Istvánnak, akik bevezettek a molekuláris diagnosztika rejtelmeibe. Dr. Ivanics Évának, Dr. Kaszanyitzky Évának és Dr. Szalay Dénesnek, akikkel való termékeny beszélgetések sokat segítettek az anyag formálásában. Dr. Csépl Attilának, közvetlen f nökömnek, aki megszerettette velem az intézeti diagnosztikát és igyekezett hozzászoktatni a pontos, precíz munkavégzéshez. A kaposvári intézet kórbonctani osztálya valamennyi dolgozójának, akik mindennapi munkájukkal támogatták, hogy a leírt eredmények megszülethessenek. Végül, de nem utolsó sorban azoknak a gyakorló kollegáknak, akik biztosították a vizsgálati anyagot és adataikkal lehet vé tették az eredmények szélesebb kör interpretálását. 14