Oldalszám: 7/1 Nyomtatva: 2006.05.12 IRATSZ.: AM1379-4 ALUMÍNIUM LEMEZRE FELHORDOTT HATÓANYAG LEGIONELLA PNEUMOPHILA ELLENÉBEN KIFEJTETT MIKRÓBAELLENES HATÁSÁNAK ASTM E 2180/01 SZERINTI ÉRTÉKELÉSE Tanulmányprogram sz.: AM1379 Szerződéssz.: M06/0879.1MI Megrendelő: ALP s.r.l. Via Vezze, 62/68 24050 CALCINATE (BG) Vizsgált anyag: ALPactive ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- Tanulmány vezetője:... Kelt:... (Dr. M. Cavalleri) ---------------------------------------------------------------------------------------------- Ezen jelentés részleges reprodukciója csak a laboratórium írásos jóváhagyásával megengedett. BIOLAB Spa - VIA B. BUOZZI, 2-20090 VIMODRONE (MI) Tel: 02/250715.1 Fax: 02/2504333 - E-mail:.milano@.it
Oldalszám: 7/2 Nyomtatva: 2006.05.12 VIZSGÁLT ANYAG A vizsgálat tárgyát egy ezüstalapú mikróbaellenes anyagot tartalmazó polimerrel bevont alumíniumlemez képezi. Elnevezése: Minőségi-mennyiségi összetétele: Stabilitása: ALPactive meghatározása folyik a Biolab SpA-nál feltételezések szerint meghaladja a 10 évet ELEMZÉSNEK ALÁVETETT MINTADARAB Az elemzésnek alávetett mintadarabok ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt, a vizsgált anyagot reprezentáló fémlemezekből állnak. Ezen belül is, az A jelű mintadarab ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt fém tesztdarabokból, míg a B jelű mintadarab olyan, ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt fém tesztdarabokból áll, amelyeket - 1000 takarítási művelet szimulálására - kefés súrolásnak, valamint - a mostoha környezeti körülmények szimulálására 72 órán keresztül 150 C-os hőmérsékletnek tettünk ki. Tételszám: 88804/10 Előállítás ideje: 2005.12.21. Átvételi sz.: R01915.06 Átvétel ideje: 2006.04.11. Mintadarab azonosító sz.: 06.9131 BIOLAB Spa - VIA B. BUOZZI, 2-20090 VIMODRONE (MI) Tel: 02/250715.1 Fax: 02/2504333 - E-mail:.milano@.it
Oldalszám: 7/3 KÍSÉRLETI KÖRÜLMÉNYEK Tesztelési módszer Teszt mikroorganizmus Tesztdarabok A mikroorganizmusnak a vizsgált anyaggal való érintkezésének időtartama thőmérséklet és relatív páratartalom ASTM E2180 Legionella pneumophila ATCC33152* Ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt fémlemezek (2.5x2.5 cm) Nem kezelt (ezüstalapú mikróbaellenes szer nélküli) fémlemezek (2.5x2.5 cm) 24±1 óra 37±1 C; 75±5% RH Fertőző anyag koncentrációja Fertőző anyag térfogata 1-5x10 6 /ml 1 ml *ezt a mikroorganizmust a módszer kifejezetten nem írja elő, azért került mégis bele a tanulmányba, mert jellemző fertőzőanyaga azoknak a légkondicionáló és szellőző berendezéseknek, amelyekben a vizsgálat tárgyát képező anyag felhasználásra kerül. ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK MŰSZEREK: - általános laboratóriumi műszerek, ezen belül: - szárítószekrény (MEMMERT) - gőzös autokláv (FEDEGARI) - termosztát (MEMMERT) - ph-mérő (BECKMANN) - vortex rázó-keverő (VELP) - ultrahangos mosó (BRANSONIC) REAGENSEK: BCYE: (OXOID) - CYE Agar base 12.5g - steril víz 450 ml - BCYE alfa growth supplement 1 flakon 50 ml steril vízben NaCl tartalmú (0.85%) fiziológiás oldat BIOLAB Spa - VIA B. BUOZZI, 2-20090 VIMODRONE (MI) Tel: 02/250715.1 Fax: 02/2504333 - E-mail:.milano@.it
Oldalszám: 7/4 A baktériumtörzset BCYE tartalmú táptalajon 24-48 órán át tenyésztettük, majd fiziológiás vízben körülbelül 10 8 CFU/ml koncentrációra felhígítottuk. Ezután 1 ml oldatot 1:100 arányban egy 0,3%-os koncentrációjú agar-agar-ból, illetve 0,85%-osNaCl-ból álló, félig kocsonyás, 45 ±2 C-on kiegyensúlyozott folyadékban felhígítottunk. Ily módon egy 1-5x10 6 CFU/ml-es baktériumoldathoz jutottunk. Ezen oldatból fecskendővel 1 ml-t közvetlenül az A és B jelű, illetve a kontroll tesztdarabokra oltottunk, olymódon, hogy az oltvány a vizsgálati felületen egyenletesen terüljön el, egyfajta ál biofilm-réteget képezve rajta. A tesztdarabokat 24±1 órán át, 37±1 C hőmérsékleten és 75±5%-os relatív páratartalom mellett hagytuk érintkezni a baktériumoldattal. A visszanyerés - amelyre 0 órás, valamint 24 órás érintkezést követően került sor olymódon történt, hogy a tesztdarabokat steril csipesszel megfogva 100 ml fiziológiás oldatba merítettük, majd 1 percre ultrahangnak tettük ki őket. A fiziológiás oldat semlegesítő hatását egy előzetes vizsgálat során leellenőriztük. Ezt követően vételeztünk 1 ml-t a visszanyerésre használt oldatból, BCYE-táptalajra ültettük és 37±1 C-on 48±1 órán át tenyésztettük. A CFU/ml számának kiszámítása háromszor egymás utáni, fiziológiás oldatban való 1:10 arányú hígítás, illetve 1 ml-nek táptalajra való hintése útján történt. BIBLIOGRÁFIA 1 ASTM E 2180/01 (jelen módszer) 2 ASTM E 1054: Practice for evaluation of inactivators of antimicrobial agents used in disinfectant, sanitizer, antiseptic, or preserved products 3 ASTM G 21/96: Practice for determining resistance od synthetic polymeric materials to fungi. EREDMÉNYEK KISZÁMÍTÁSA ÉS KIFEJEZÉSE Az eredmények a kezelt anyagnak a kontroll (kezeletlen) anyaghoz viszonyított bakteriális fertőzöttségének százalékosan csökkenésén keresztül kerültek kifejezésre, az ASTM E 2180/01 módszer által előírtaknak megfelelően: kiszámítottuk a két kezelt (A és B jelű) tesztdarab illetve a kontroll tesztdarab tekintetében elvégzett három ismétlés során visszanyert mikroorganizmusok számának mértani közepét; majd kiszámítottuk a kontroll tesztdarab mértani átlagának antilogaritmusa, illetve a kezelt tesztdarab mértani átlagának antilogaritmusa közötti százalékos különbséget. Mértani átlag = (LogR1 + LogR2 + LogR3)/3 R1 = a vizsgált anyagnak, vagy a kontrollnak való expozíciót és tenyésztést követően visszanyert mikroorganizmusok száma (1. ismétlés) R2 = a vizsgált anyagnak, vagy a kontrollnak való expozíciót és tenyésztést követően visszanyert mikroorganizmusok száma (2. ismétlés) R3 = a vizsgált anyagnak, vagy a kontrollnak való expozíciót és tenyésztést követően visszanyert mikroorganizmusok száma (3. ismétlés) BIOLAB Spa - VIA B. BUOZZI, 2-20090 VIMODRONE (MI) Tel: 02/250715.1 Fax: 02/2504333 - E-mail:.milano@.it
Oldalszám: 7/5 Csökkenés %-ban = (a-b)x100/a a = a kezelt mintadarab antilogaritmusa (mértani közepe) b = a kontroll antilogaritmusa (mértani közepe) A vizsgálatot akkor tekintettük érvényesnek, amikor a kezdeti számolás egyenlő vagy nagyobb számot adott, mint 10 6 CFU/ml. EREDMÉNYEK A kezdeti oldat koncentrációjának értéke 1.0x10 6 volt. Teljesültek tehát a vizsgálat elfogadhatóságának előfeltételei. Az alábbi táblázat mutatja a vizsgált anyagnak vagy a kontrollnak való expozíció, majd tenyésztés háromszori ismétlése során visszanyert mikroorganizmusok számának mértani átlagát (ez a szám tehát figyelembe veszi úgy a számítás tárgyát képező táptalaj hígításának tényezőjét, mint azon, 1:100 arányú hígítást, amelyet az 1 ml kezdeti oldattal beoltott fém tesztdarabnak 100 ml visszanyerési hígítóba való bemerítése okozott). L. pneumophila (visszanyerés 24 órát követően) B (ALPactive + kefés súrolás A (ALPactive) + 150 -os expozíció 72 órán át) <2 2.67 4.62 A vizsgált anyagnak 24 órán át való expozíciót követően az A jelű tesztdarab azonos kísérleti körülmények között a kontrollhoz képest 99,76%-ot meghaladó fertőzés csökkenést mutat. A vizsgált anyagnak 24 órán át való expozíciót követően a B jelű tesztdarab azonos kísérleti körülmények között a kontrollhoz képest 98,878%-ot kitevő fertőzés csökkenést mutat. Megjegyzés: Az A és B jelű tesztdaraboknál a kontrollhoz képest még ha csak minimális mértékben is, de - már 0 óránál is tapasztalható volt csökkenés a CFU/ml tekintetében (lsd. Függelék). BIOLAB Spa - VIA B. BUOZZI, 2-20090 VIMODRONE (MI) Tel: 02/250715.1 Fax: 02/2504333 - E-mail:.milano@.it
Oldalszám: 7/6 ALUMÍNIUM LEMEZRE FELHORDOTT HATÓANYAG LEGIONELLA PNEUMOPHILA ELLENÉBEN KIFEJTETT MIKRÓBAELLENES HATÁSÁNAK ASTM E 2180/01 SZERINTI ÉRTÉKELÉSE FÜGGELÉK BIOLAB Spa - VIA B. BUOZZI, 2-20090 VIMODRONE (MI) Tel: 02/250715.1 Facx: 02/2504333 - E-mail:.milano@.it
Oldalszám: 7/7 TÁBLÁZATOK Az alábbi táblázatok a teszt-mikroorganizmusnak a vizsgált anyagnak való 0 órányi illetve 24±1 órányi expozícióját követően visszanyert Legionella pneumophila CFU/ml adatait tartalmazzák, a számítás tárgyát képező táptalaj hígítási tényezőjének figyelembe vételével. L. pneumophila (visszanyerés 0 órát követően) Anyag A (ALPactive) B (ALPactive + kefés súrolás + 150 -os expozíció 72 órán át) CFU/ml 2300 5200 10000 L. pneumophila (visszanyerés 24 órát követően) Anyag A (ALPactive) B (ALPactive + kefés súrolás + 150 -os expozíció 72 órán át) 1. ismétlés <1 1 300 2. ismétlés <1 8 960 3. ismétlés <1 13 250 BIOLAB Spa - VIA B. BUOZZI, 2-20090 VIMODRONE (MI) Tel: 02/250715.1 Fax: 02/2504333 - E-mail:.milano@.it