A LightCycler 2.0 készülékhez való használatra (1415001 és nagyobb sorozatszámok)

LightCycler SeptiFast meca Test MG EZEKKEL HASZNÁLHATÓ: A LightCycler 2.0 készülékhez való használatra (1415001 és nagyobb sorozatszámok) FELHASZNÁLÁS CÉLJA A LightCycler SeptiFast meca Test MG egy in vitro nukleinsav-amplifikációs vizsgálat a meca DNS kimutatására és azonosítására humán K-EDTA-s vérben LightCycler 2.0 készülék segítségével. Methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus törzsek kimutatásához nyújt segítséget. A vizsgálat a klinikai megjelenéssel, elfogadott mikrobiológiai vizsgálatokkal és/vagy egyéb laboratóriumi markerekkel együtt olyan betegek gondozásában nyújthat segítséget, akiknél MRSA véráram-fertőzés gyanúja merült fel. A vizsgálat a LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálattal Staphylococcus aureus-pozitívnak bizonyult betegek esetén használandó. A VIZSGÁLAT ÖSSZEGZÉSE ÉS MAGYARÁZATA A Staphylococcus aureus egyike a leggyakrabban izolált kórokozóknak véráram-fertőzésekben (1). A methicillin-rezisztens nozokomiális törzsek gyakorisága számos régióban folyamatosan növekszik (2), és új közösségben szerzett törzsek megjelenése (3) egy újonnan felbukkanó veszély. A methicillin-rezisztencia a methicillin-érzékeny Staphylococcus aureus (MSSA) bakteriémiával összehasonlítva szignifikánsan magasabb halálozással jár együtt (4,5). A methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) esetén ismert, hogy igen nagy mértékben hozzájárul az inadekvát empirikus terápiához, pl. intenzív osztályokon (6,7), és jelentős többletköltséget okoz (8). A korai antibiotikumválasztás során a döntéshozás javítása kritikus fontosságú (9). A LightCycler SeptiFast meca Test MG egy további eszköz, amely segíti a döntéshozást az antibiotikumválasztás során. A LightCycler SeptiFast meca Test MG elősegítheti a korai diagnózist és a megfelelő antibiotikumterápiát. Ez a nukleinsav alapú módszer a nagyfokú methicillin-rezisztenciáért felelős meca gént mutatja ki. AZ ELJÁRÁS ALAPELVEI A vizsgálat a meca DNS kimutatására szolgál olyan betegek esetén, akik a LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálattal Staphylococcus aureus-pozitívnak bizonyultak. A minta-előkészítés a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasításában van ismertetve. A LightCycler SeptiFast meca Test MG vizsgálathoz a LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálat eluátumának egy részlete használandó. A LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálat munkafolyamata magába foglalja a minta-előkészítést a mechanikai feltárással és DNS tisztítással együtt. Ezt követően a target DNS valós idejű PCR-amplifikálása következik 3 párhuzamos reakcióban (Gram-pozitív baktériumok, Gram-negatív baktériumok és gombák), majd a specifikus H próbákkal történő kimutatás. A species és kontroll azonosítását a szoftver automatikusan elvégzi. A részletes információkat illetően kérjük, tanulmányozza a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasítását (P/N: 04 469 046 001). A targetszekvencia kiválasztása In vitro diagnosztikai célra. LightCycler SeptiFast meca Kit MG 2 x 15 Tests REF : 04 488 814 001 LightCycler SeptiFast Kit MG 54 Tests REF : 04 469 046 001 SeptiFast Lys Kit MG 100 Tests REF : 04 404 432 001 SeptiFast Prep Kit MG 10 Tests REF : 04 404 459 001 SeptiFast Software Set REF : 04 705 220 001 Egy a meca génen elhelyezkedő 314 bp szekvencia (10) került kiválasztásra, mint az amplifikálás, kimutatás és azonosítás targetrégiója. A meca gén terméke a PBP2a (vagy PBP2') fehérje, egy járulékos penicillinkötő fehérje, amelyet az alábbi emberi és nem emberi methicillinrezisztens Staphylococcus törzsekben találtak meg: S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. cohnii or S. sciuri. A meca gén felelős a meca expresszáló törzsek nagyfokú methicillin-rezisztenciájáért. A különböző Staphylococcus fajokból származó meca gének igen jól konzerváltak. Ezért a különböző fajokból származó meca gének nem különböztethetőek meg szekvencia alapján. Valós idejű PCR-amplifikáció és kimutatás Amplifikáció A PCR-amplifikálás előtt az amplikonszennyezés kockázatát AmpErase (uracil-n-glikoziláz) enzim használatával csökkentik. Az enzim felismeri és katalizálja az olyan DNS-szálak megsemmisítését, amelyek dezoxiuridint tartalmaznak, a dezoxitimidint tartalmazókét viszont nem. A mintákat LightCycler kapillárisokban (100 µl) MG lévő hot-start Taq polimerázt tartalmazó amplifikáló elegyhez adják, ahol a PCRamplifikálás megtörténik. A target és a reagenskontroll (RC) specifikus primerek segítségével amplifikálódik. 1

A PCR termékek valós idejű kimutatása H próbák segítségével Az amplikon két specifikus H próba segítségével fluoreszcens technikával mutatható ki. Ezek a fluoreszcens festékkel jelölt H próbák az amplifikált fragmens belső szekvenciájához hibridizálnak az amplifikálási ciklus annealing fázisában. A kibocsájtott fluoreszcenciát a LightCycler 2.0 készülék a négy különböző detektáló csatorna egyikén méri. Az amplifikálás befejeztével az olvadási görbe elemzése történik. Az olvadási hőmérséklet T M függ a hosszúságtól, a szekvenciától, valamint a próba és a target DNS közti homológia mértékétől. A meca és a kontrollok automatikus azonosítása A minták és kontrollok olvadási hőmérsékleteinek (T M ) elemzését a mellékelt azonosító szoftver (SeptiFast Identification Software) végzi el, és egy eredménylap kerül kinyomtatásra. REAGENSEK LightCycler SeptiFast meca Kit MG P/N: 04 488 814 001 2 x 15 teszt [1a] RM 1a (reakciókeverék 1a) 2 x 58 µl 5,5 U/µl FastStart Taq polimeráz [1a] RM 1b (reakciókeverék 1b) trisz-hcl puffer < 1% Brij < 0,1% magnéziumoldat < 0,001% dntp 2 x 164 µl [2] DM (kimutatási keverék) < 0,001% primer, próbák trisz-hcl puffer < 1% Brij [3] RC (reagenskontroll) < 0,001% DNS kontroll templát trisz-hcl puffer < 0,001% hordozó RNS [4] IC (belső kontroll) < 0,001% DNS folyamat kontroll < 0,001% hordozó RNS trisz-hcl puffer [5] DE (dekontamináló enzim) < 0,1% AmpErase (uracil-n-glikoziláz) enzim trisz-hcl puffer [6] BU (puffer) < 0,5% magnéziumoldat [7] DI (hígítószer) Víz, PCR-tisztaságú 2 x 193 µl 2 x 275 µl 2 x 39 µl 2 x 20 µl 2 x 1000 µl 2 x 1000 µl FIGYELMEZTETÉSEK ÉS ÓVINTÉZKEDÉSEK Általános figyelmeztetések és óvintézkedések In vitro diagnosztikai célra. Csak humán K-EDTA-s vérmintákhoz. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t, ezért tilos a használata. Amennyiben a vizsgálatot olyan beteg esetében alkalmazzák, aki heparin adásban részesül (pl. terápiásan vagy hemodialízis során), akkor a mintát a heparin adását megelőzően kell levenni. Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a laboratórium területén. Viseljen púdermentes, egyszer használatos védőkesztyűt, védőruhát és szemvédőt a minták és a készlet reagensei kezelése közben. A minták és a tesztreagensek kezelését követően gondosan mosson kezet. Ne öntse össze a különböző gyártási tételekből származó reagenseket. Ne keverje a különböző készletekből származó reagenseket. A fel nem használt reagensek, hulladék és minták kezelésének összhangban kell lennie a megfelelő országos, szövetségi, állami és helyi szabályozásokkal. Ne használja a készletet a lejárati idő után. Az anyagok biztonsági adatlapjai (MSDS) igény esetén hozzáférhetők a Roche helyi képviselőjétől. A mintákat fertőzőként kell kezelni a Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (11) és a CLSI Document M29-A (12) előírásoknak megfelelő biztonságos laboratóriumi eljárásokat alkalmazva. Minden munkafelületet és kesztyűt alaposan tisztítson meg és fertőtlenítsen DNS-dekontamináló reagenssel (pl. LTK-008 ). Győződjön meg arról, hogy a kesztyűk ellenállóak a DNSdekontamináló reagenssel szemben. Viseljen szemvédőt, védőruhát és egyszer használatos védőkesztyűt bármely reagens kezelése közben. Ezen reagensek bőrrel, szemmel és nyálkahártyákkal való érintkezése kerülendő. Ha mégis előfordul érintkezés, azonnal mossa le nagy mennyiségű vízzel. Ellenkező esetben égő érzés keletkezhet. Ezen reagensek kiömlése esetén szárazra törlés előtt vízzel hígítsa. A laboratóriumi munkafolyamatnak egyirányú módon kell zajlania, kezdve a preamplifikálási területtől a posztamplifikálási (amplifikálási/kimutatási) területig haladva. A preamplifikálási műveletek a reagens-előkészítés és a minta-előkészítés. Valamennyi preamplifikálási művelethez tartozó felszerelést és eszközt jelölni kell, és tilos használni más művelethez vagy más munkaterületre átvinni. Valamennyi munkaterületen kesztyűt kell viselni, és a terület elhagyása előtt le kell venni. A reagens és kontroll kezeléséhez használt felszerelést és eszközöket tilos használni minta-előkészítési műveletekhez, amplifikált DNS vagy más target DNS-forrás pipettázásához vagy feldolgozásához. A posztamplifikálási műveletekhez tartozó felszerelést és eszközöket mindenkor a posztamplifikálási munkaterületen kell tartani. A master mixben jelen lévő AmpErase enzim csökkenti az amplikonszennyezés kockázatát. Ugyanakkor a pozitív kontrollokból és pozitív klinikai mintákból származó szennyeződés csak helyes laboratóriumi gyakorlattal és ezen Használati utasításban meghatározott eljárások gondos betartásával kerülhető el. 2

Specifikus figyelmeztetések és óvintézkedések a LightCycler SeptiFast meca Test MG használatához Baktériumokból származó DNS van jelen a környezetben. Az ilyen, környezeti DNS kimutatásából származó álpozitív eredmények (DNSszennyezés) elkerülése érdekében szükséges DNS-szennyezéstől mentes munkafolyamat biztosítása. Különösen a kezelő személy lehet DNSszennyezés forrása, mivel az emberi bőrt és felső légutakat olyan mikroorganizmusok népesítik be, amelyekben jelen lehet a LightCycler SeptiFast meca Test MG target génje [pl. methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus vagy methicillin-rezisztens koaguláz negatív Staphylococcusok]. Az alábbi szabályok ajánlások a DNS-szennyezés elkerülésére. LightCycler SeptiFast meca Kit MG reagensek és egyszer használatos eszközök A LightCycler SeptiFast meca Test Kit MG reagensek és egyszer használatos eszközök MG minőségűek. Az MG termékeket bakteriális és gombákból származó nukleinsavak nagyon érzékeny kimutatására tervezték. Szabadalmazott gyártási eljárásokat fejlesztettek ki annak érdekében, hogy kizárják az ilyen jellegű vizsgálatokat zavaró DNS-szennyezést. Kerülje a reagensfiolák szükségtelen kinyitását és lezárását. Ruházat és kesztyű Viseljen púdermentes kesztyűt a teljes munkafolyamat alatt. Ne hagyjon fedetlen bőrfelületet, viselje a kesztyűt a labor köpeny ujjára húzva. Szennyeződés esetén azonnal cseréljen kesztyűt, vagy kezelje DNS-dekontamináló reagenssel (pl. LTK-008 ; a kesztyűnek ellenállónak kell lennie a DNS-dekontamináló reagenssel szemben). Felvételkor ne érjen a kesztyűk tenyér részéhez és az ujjakhoz. A PCR-munkaállomás gondozása A PCR-munkaállomás munkafelületeinek tisztítását DNS-dekontamináló reagenssel végezze el minden egyes PCR-üzembeállítást követően. MEGJEGYZÉS: Győződjön meg arról, hogy a felszerelés ellenálló a DNS-dekontamináló reagenssel szemben. Rendszeres időközönként takarítsa le a PCR-munkaállomás valamennyi felületét (oldalfalak, alsó tálca alatti terek, padlótálca). Ha több felhasználó használja a PCR-munkaállomást, biztosítsa annak DNS-mentességét. Kapcsolja be az UV-fényt legalább 30 percre a munka előtt. Kapcsolja ki az UV-fényt amíg dolgozik. MEGJEGYZÉS: A PCR-munkaállomás UV-lámpájának cseréjét a gyártó utasításai szerint végezze. Munkaeszközök és fogyóeszközök kezelése A LightCycler SeptiFast meca Test MG vizsgálathoz használt specifikus fogyóeszközöket és munkaeszközöket hagyja a PCRmunkaállomáson, ha lehetséges. A munka megkezdése előtt sugározzon be minden darabot UV-fénnyel legalább 30 percig. Csak DNS-mentes egyszer használatos dolgokat használjon (pl. MG minőség, kérjük, tanulmányozza a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasítását.) Csak egyszer használja azokat. A kapillárisok lezárásához használjon kupakozó eszközt (a kezelési utasításokat illetően tanulmányozza a LightCycler 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvét). Kapilláris törése esetén kérjük, tanulmányozza a LightCycler 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvét ( Karbantartás fejezet). Óvintézkedések pipettázáskor Csak a lamináris áramlású levegőszűrő alatt nyissa ki a reagensfiolákat, pipettahegyes dobozokat és kapillárisdobozokat. A lamináris áramláson kívül ne használja ugyanazokat a pipettahegyeket és kapillárisokat. Ne érjen nyitott fiola pereméhez vagy csavarmenetéhez. Pipettázáskor a fiolát a pereme alatt érintse. Ne érjen nyitott kapilláris pereméhez. Rendezze a műveletek során használt valamennyi eszközt logikai sorrendbe a lamináris áramlás alatt. Ha kifröccsenés fordul elő, fejezze be az aktuális munkalépést, és utána azonnal takarítsa le munkaterületet DNS-dekontamináló reagenssel (pl. LTK-008 ) TÁROLÁSI ÉS KEZELÉSI KÖVETELMÉNYEK -15 C és -25 C között tárolandó. Fénytől védve tartandó. A master mix (készítését illetően lásd a Reagens előkészítése szakaszt) 2 8 C-on legfeljebb 72 óra hosszat tárolható. A nyitott fiolák a felnyitásuktól számított legfeljebb 6 hónapig tárolhatók. A lejárati idő után ne használja fel azokat. A nyitott fiolák fagyasztása és felolvasztása a felnyitásukat követően legfeljebb 4 alkalommal végezhető el. A lejárati idő után ne használja fel azokat. A KÉSZLET TARTALMA SeptiFast Lys Kit MG P/N: 04 404 432 001 100 teszt SeptiFast Prep Kit MG P/N: 04 404 459 001 10 teszt LightCycler SeptiFast Kit MG P/N: 04 469 046 001 54 teszt SeptiFast Software Set 1.0 vagy újabb P/N: 04 705 220 001 (egy alkalommal mellékelve) LightCycler SeptiFast meca Kit MG P/N: 04 488 814 001 2 x 15 teszt SZÜKSÉGES, DE NEM BIZTOSÍTOTT ANYAGOK Tanulmányozza a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasítását. 3

A MINTA LEVÉTELE, TRANSZPORTJA ÉS TÁROLÁSA MEGJEGYZÉS: Valamennyi mintát és kontrollt fertőzések átvitelére alkalmasként kell kezelni. A minta levétele A minta levétele a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasításában van ismertetve. A minta transzportja és tárolása A minta transzportja és tárolása a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasításában van ismertetve. Az eluátum tárolása Az eluátum 15 25 C-on legfeljebb 4 óra hosszat, 2 8 C-on 3 napig, illetve -15 C és 25 C között 3 napig tárolható. HASZNÁLATI UTASÍTÁS A reagens-előkészítés megkezdése előtt Színkompenzáció A LightCycler Multicolor Compensation Set (P/N: 04 484 355 001) használata előfeltétel. A részleteket illetően kérjük, tanulmányozza a LightCycler Multicolor Compensation Set mellékelt használati utasítását. A SeptiFast Identification Software (SIS) és SeptiFast meca makró telepítése A SeptiFast Identification Software (SIS) és a SeptiFast meca makró (fájl név: SeptiFast meca_1.0_04488814001 vagy újabb verzió) a vizsgálat futtatása előtt telepítendő. A részleteket illetően kérjük, tanulmányozza a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasítását. Kontroll-előkészítés A pozitív kontroll anyagokat más gyártóktól is meg lehet vásárolni. A LightCycler SeptiFast meca Test MG és a LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálatokhoz pozitív kontroll anyagként az ATCC 33592 anyag, egy methicillin-rezisztens S. aureus használható. Az előkészítés a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasításában van ismertetve. A pozitív kontrollt bármely mintához hasonlóan a teljes munkafolyamaton keresztül fel kell dolgozni. Reagens-előkészítés LightCycler SeptiFast meca Kit MG segítségével 1. Gondosan takarítsa ki és dekontaminálja a lamináris áramlású fülkét és a PCR-munkaállomást (pl. LTK-008 segítségével). 2. Kapcsolja be a PCR-munkaállomás UV-fényét és a lamináris áramlású fülke levegőáramát legalább 30 percre. 3. Kapcsolja ki az UV-fényt amíg dolgozik. 4. Olvassza fel a LightCycler SeptiFast meca Kit MG komponenseit szobahőmérsékleten, fénytől védve mintegy 20 percig. Röviden vortexelje, és gyorsan impulzuscentrifugázza le azokat. 5. A vizsgálandó minták teljes számától függően, továbbá még két reakciót a negatív kontroll és a reagenskontroll számára figyelembe véve helyezze a LightCycler kapillárisokat előhűtött centrifuga toldalékokba. 6. Készítse el a master mixet a Volume oszlopban lévő értékek és a tervezett reakciók számának plusz egy további reakció (az elegendő pipettázási térfogat biztosítására) szorzásával (mintaeluátumok, negatívkontroll-eluátum és reagenskontroll-eluátum). 100 µl-es standard reakciómennyiség esetén az alábbiak szerint járjon el. Lépés Művelet 1 Master mix készítése: Egy 2 8 C-os 1,5 ml-es reakciócsőbe mérje be a következőket az alábbi sorrendben: Összetevő Térfogat (µl) DI 13,5 BU 12 DM 10 IC 2 RM 1b 8,5 DE 1 RM 1a 3 Össztérfogat 50 2 óvatosan keverje össze pipettázással. Vortexelni tilos! Pipettázzon 50 µl master mixet minden előhűtött LightCycler kapillárisba. 3 Mérjen 50 µl-t mindegyik mintaeluátumból egy külön kapillárisba, zárja le a kapillárist a kupakozó segítségével. Mérjen 50 µl negatív kontroll (NC) eluátumot egy kapillárisba. A NC nem a LightCycler SeptiFast meca Kit MG része, és a LightCycler SeptiFast Test MG-ben lévő NC feldolgozásával készül. Az egyes minta előkészítési és PCR-tételekből származó mintákat ugyanazon tételben készült NC kontrollal együtt kell vizsgálni. Különböző tételekből származó mintákat ne kombináljon ugyanabban a futtatásban. Zárja le a kapillárist a kupakozó segítségével. Mérjen be 50 µl reagenskontrollt (RC) egy kapillárisba. Zárja le a kapillárist a kupakozó segítségével. 4 Vigye át valamennyi kapillárist a LightCycler mintatárcsába a SeptiFast meca makró mintabetöltési listája szerint (RC, NC, minta 1, minta 2...). 5 Centrifugázza le a LightCycler mintatárcsát az LC mintatárcsa-centrifuga 2.0 segítségével (ellenőrizze a folyadékszintet a kapillárisokban). 6 Helyezze a LightCycler mintatárcsát a LightCycler 2.0 készülékbe. LightCycler 2.0 készülék betöltése és működtetése MEGJEGYZÉS: A LightCycler 2.0 készülék működtetése egy, a DNS-tisztítástól és a munkaoldatok elhelyezésétől elkülönített helyiségben javasolt. 1. Indítsa el a SeptiFast meca makrót (fájl név: SeptiFast meca_1.0_04488814001; vagy újabb verzió). Kérjük, tanulmányozza a LightCycler 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvében a Roche-makró végrehajtása fejezetet. MEGJEGYZÉS: Ne használja az <assay lot number> mezőt. Ha szeretné a vizsgálat tételszámát hozzáadni a futtatáshoz, szúrja be ezt az adatot a mintaszerkesztő megfelelő mezőjébe. 4

MEGJEGYZÉS: Ha a felhasználó kijelentkezett, ne folytassa a futtatást. Kezdjen el egy új futtatást egy új névvel. 2. Olyan néven mentse a futtatást, amely lehetővé teszi az egyértelmű azonosítást (pl. felhasználó neve és dátum). 3. Csökkentse a mintákat az alapértelmezett betöltési listából, ha 5-nél kevesebb mintára van szükség. Ha véletlenül túl sok kapillárist törölt, ne adja hozzá azokat, hanem kezdje az eljárást az elejétől. 4. Írja a betegspecifikus adatokat <zárójelbe> (pl. meca <Név-01>). 5. Ha egyszer valamennyi mintaspecifikus információt megadta, folytassa a készletvarázslóval, és indítsa el a LightCycler 2.0 készülék futtatását. 6. A futtatás befejezése után ellenőrizze a folyadék szintet a kapillárisokban (egy adott kapillárisra nézve az eredmények érvénytelenek, ha a térfogat a kapillárisban változik. MEGJEGYZÉS: Ne módosítsa a minta elnevezések előtagjait. Ne törölje a zárójeleket. Minden mintának egy vizsgálatspecifikus előtagot (meca) kell tartalmaznia, hogy a SIS képes legyen azonosítani. Ne módosítsa a reagenskontroll és a negatív kontroll nevét. Csúcsészlelés és automatikus csúcsazonosítás Az analízismodulok általános magyarázata A manuális T M -hívás kézi vezérlést igényel két automatikusan alkalmazott T M -hívás modulban. Az abszolút mennyiségi meghatározás modul, amelyik ugyancsak automatikusan alkalmazott, nem igényel semmilyen kézi vezérlést. Mindegyik analízismód T M sávja a SeptiFast meca makróban van megszabva. Az olvadási csúcs ablakban a kiválasztott grafikonok valamennyi görbéje megjelenik. Lehetőség van a T M sávok kijelölésére, illetve a kijelölés törlésére. Mindegyik analízismód alapvonala a SeptiFast meca makróban van meghatározva. Ne módosítsa az alapvonalakat, és ne törölje a kijelölésüket. Ha véletlenül módosította, írja be a helyes értéket a 2. táblázat alapján: Alapvonal értékek. Ha egynél több kapilláris van aktiválva, akkor az ellenőrző ablakban az első kapilláris beállításai vannak feltüntetve. A sávok közti váltás valamennyi aktivált kapillárist érinti. MEGJEGYZÉS: Ne módosítsa a következő beállításokat: <Channel>, <Color Compensation>, <Program>, <Method>, <Show Shoulders>, <Peak Area> és <Peak Width>. A csúcsok, mint az alapvonal feletti maximumok vannak definiálva. Az inflexiós pontok nem csúcsok. A csúszkákat az érvényes T M tartományokon belülre kell beállítani (lásd: 1. táblázat). 1. táblázat: Érvényes csúcsok T M tartományai CH 640 CH 705 Alacsony T M ( C) Magas T M ( C) Alacsony T M ( C) Magas T M ( C) meca 62,00 69,00 51,50 58,50 Az alapvonal értékek az alábbi táblázat szerint vannak meghatározva, és tilos azokat módosítani. (Ha véletlenül mégis módosítaná, írja vissza a lista szerinti eredeti értéket, különben a futtatás jelzőt kap.) 2. táblázat: Alapvonal értékek CH 640 CH 705 meca 0,021 0,022 A T M sávok beállítása 1. A futtatás befejezése után a vizsgálati varázsló <Analyses have been created> ablakot jelenít meg. 2. Tegye alulra az ablakot (ne nyomja meg a <Finish> gombot). 3. Ügyeljen arra, hogy a T M és alapvonal értékek láthatóak legyenek. 4. Kattintson az analízismodulra (pl. T M hívás meca 640). 5. Áttekintés nyeréséhez aktiválja a vizsgálat valamennyi pozícióját. 6. Kattintson csak a meca #RC# pozícióra. 7. Állítsa be a T M sávot az alapvonal feletti csúcs maximumra, koncentráljon csak az érvényes T M tartományra. Ha nincs csúcs az alapvonal felett, a T M sávot törölni kell (megszüntetni az aktiválást a megfelelő kis négyzetben). Egy adott kapilláris T M - hívásának végére csak csúcsmaximumok maradhatnak T M sávokkal. 8. Áttekintés nyeréséhez aktiválja a következő pozíciót (pl. meca #NC#) a meca #RC#-vel együtt. (Az automata skálázás a legmagasabb csúcsra fog beállni). 9. Aktiválja csak a kiválasztott pozíciót (pl. meca #NC#). (Az automata skálázás a negatív kontroll háttércsúcsaira fog beállni. Az alapvonal adott esetben többé már nem látható.) 10. Folytassa a minták csúcsdetektálását az 5-7. lépésekben leírtaknak megfelelően. 11. Az első kimutatási csatorna (T M -hívás meca 640) analízisének befejezését követően folytassa a T M -hívás meca 705 analízissel a 4-10. lépésekben leírtaknak megfelelően. A T M -hívás befejezése 1. Váltsa a vizsgálati varázslót a monitor közepére, és nyomja meg a <Finish> gombot. 2. A LightCycler eredménylapot a program automatikusan létrehozza és kinyomtatja. 3. A futtatást a program automatikusan elmenti. 4. Exportálja a *.ixo fájlt a <C:\Export to SIS> mappába. 5. Ellenőrizze az eredménylapon az esetleges jelzőket, és hogy a <run state: complete> üzenet megjelent-e. 6. Jelző előfordulása vagy a futtatás állapotára vonatkozó más üzenet megjelenése esetén a futtatás érvénytelen, és valamennyi mintát újra kell vizsgálni. Automatikus csúcsazonosítás a SeptiFast Identification Software (SIS) segítségével 1. Kattintson duplán a SIS ikonra az asztalon, nyomja meg a <Start> gombot. 2. Válassza ki a futtatást a <C:\Export to SIS> mappából, és töltse be a *.ixo fájlt. 3. Válassza ki a Yes vagy No választ attól függően, hogy a LightCycler eredménylap tartalmazza-e a <User Developed or Modified Test Method> jelzőt. 4. A *.ixo fájlt a program automatikusan feldolgozza, és az adatokat egy eredménylapon megjeleníti. 5. Nyomtassa ki a SIS eredménylapot. 5

EREDMÉNYEK Az eredmények értékelése A SeptiFast Identification Software (SIS) JELZŐKET és MEGJEGYZÉSEKET hozhat létre a SPECIMEN ablakban úgymint RUN FLAGS, ASSAY FLAGS és FLAGS (lásd alább). A kezelő személynek meg kell néznie, hogy a kinyomtatott jelentés(ek)en van-e a SPECIMEN ablakban FLAGS vagy COMMENTS. 1. ábra: Specimen ablak Specimen Assay Data Result Flags Comment SeptiFast meca sample 1 meca <CH..., TM..., PH..., CP...> <meca> SeptiFast meca sample 2 meca További információkhoz juthat a RUN FLAGs és az ASSAY FLAGs COMMENT mezőiben. Valamennyi jelző a 3. táblázatban van felsorolva. Minta eredményei A <meca> név a RESULT mezőben azt jelzi, hogy a minta pozitívnak bizonyult meca-ra. Megjegyzés: Kérjük, ellenőrizze a LightCycler SeptiFast Test MG megjegyzés mezőjét, ha a <for meca resistance testing: Peak for CoNS from SML detected> 1 jelző megjelenik. További információért kérjük, tanulmányozza az Eljárással kapcsolatos korlátozások szakaszt. A releváns csúcsok nyers adatai a DATA mezőben jelennek meg, beleértve a csatorna (CH), olvadáspont (T M ), csúcsmagasság (PH) és metszéspont (CP 2 ) adatokat. Az szimbólum a RESULT mezőben azt jelzi, hogy meca-ra nézve a definiált kritériumokon belül nincs kimutatott analit. 1 SML: SeptiFast Master List, a részleteket illetően kérjük, tanulmányozza a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasítását 2 CP a 640-es csatorna esetén jelenik meg Futtatás validálása A futtatás validálását a SeptiFast Identification Software végzi el. Az érvénytelen eredmények automatikusan A jelzőkhöz tartozó megjegyzések és a vonatkozó értelmezés az alábbiakban van felsorolva. 3. táblázat: Futtatás validáláshoz tartozó jelzők Comments 3 Értelmezés ASSAY FLAG NC: IC not detected A negatív kontrollban nincs kimutatott meca és IC. ASSAY FLAG NC: < CH, TM, PH, CP >,< meca > A negatív kontrollban meca van kimutatva. ASSAY FLAG RC: No amplicon: <meca> Hibás RC. SPECIMEN FLAG IC not detected A mintában nincs kimutatott meca és IC. jelöléssel ellátva jelennek meg. 3 A rendszerhibák a Hibaelhárítás szakaszban vannak felsorolva MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS Minden egyes vizsgálati futtatásnak tartalmaznia kell egy NC és egy RC kontrollt. Az NC és RC kontrollokat meghatározott pozíciókba kell elhelyezni, ahogy az a Reagens előkészítése szakaszban le van írva. Pozitív kontrollként egy házon belüli pozitív anyag futtatása javasolt a teljes munkafolyamaton keresztül, ahogy az a Kontroll előkészítése szakaszban le van írva. A SIS meghatározza az IC, NC és RC eredményeket. Amennyiben a kontrollok nem felelnek meg az adott specifikációknak, valamennyi mintaeredmény jelzőt kap. Ellenőrizze a kinyomtatott eredménylapon a SPECIMEN ablakban a jelzőket és megjegyzéseket, hogy meggyőződjön arról, hogy a futtatás érvényes. Negatív kontroll (NC) Az NC negatív kell legyen, ugyanakkor annak belső kontrollja pozitív. Amennyiben az NC nem felel meg ezen feltételeknek, valamennyi mintaeredmény jelzőt kap. A teljes futtatást meg kell ismételni. Reagenskontroll (RC) Az RC pozitív kell legyen a meca amplikonra. Amennyiben az RC nem felel meg ezen feltételnek, valamennyi mintaeredmény jelzőt kap. A teljes futtatást meg kell ismételni. Pozitív kontroll (PC) A pozitív kontroll pozitív kell legyen. Ha a PC nem felel meg ennek a feltételnek, a futtatás érvénytelen. A SIS nem tüntet fel jelzőt. A teljes futtatást meg kell ismételni. Belső kontroll (IC) A belső kontroll pozitív kell legyen valamennyi negatív mintában, így a negatív kontrollban is. Amennyiben az IC nem felel meg ezen feltételnek, a minta eredménye jelzőt kap. Érvénytelen kontrollok esetén, ismételje meg a teljes folyamatot (minta és kontroll előkészítése, amplifikálás és kimutatás mind a 3 vizsgálat esetén, úgymint a LightCycler SeptiFast Test MG és az ezt követő rezisztenciavizsgálat, a LightCycler SeptiFast meca Test MG esetén). Ha a kontrollok következetesen érvénytelenek, vegye fel a kapcsolatot a Roche helyi szervizével. 6

HIBAELHÁRÍTÁS 4. táblázat: A RUN FLAGS COMMENTS mezőjében, illetve a SIS nyomtatott lapon megjelenő rendszerhibák. Rendszerüzenet (a SIS nyomtatott lap jelző részében látható) Lehetséges ok Javító intézkedés User Developed or Modified Test Method CCC File Name: Multiple CCC used! Color Compensation has expired on DD-Month-YY A futtatás érvénytelen; a lehetséges okok a LightCycler 2.0 készülék felhasználói kézikönyvében vannak ismertetve. Lehetséges, hogy a makró alapértelmezett beállításait (pl. alapvonalak, futtatási protokoll stb.) módosították. Két vagy több színkompenzáció-fájl aktív egy vagy több analízismodulban. A színkompenzáció-objektum hat hónaposnál régebbi. Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler szoftverben, és ellenőrizze az alapvonalértékeket a 2. táblázat szerint. Mentse és exportálja újra a fájlt. Válassza ki a megfelelő színkompenzációt és számolja újra. Hozzon létre egy új színkompenzáció-objektumot. Invalid Macro Nem megfelelő makró lett alkalmazva Keresse meg a megfelelő makrót a LightCycler szoftverben és/vagy a SeptiFast Software Setben. Invalid Baseline Lehetséges, hogy az alapvonalértékeket véletlenül módosították Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler szoftverben, és ellenőrizze az alapvonal értékeket a 2. táblázat szerint. Mentse és exportálja újra a fájlt. Invalid Control Tube Egy vagy több tévesen elnevezett kontroll Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler szoftverben, és ellenőrizze a kontroll elnevezések megfelelő begépelését a mintaszerkesztőben. Módosítson az alapértelmezett nevekre, mentse és exportálja újra a fájlt. Missing Sample Tube Invalid LightCycler SW Version No Manual T M Calling Egy vagy több tévesen elnevezett mintakapilláris vagy hiányzó mintakapillárisok Nem megfelelő LightCycler szoftververziót alkalmaztak az eljáráshoz Nem volt manuális T M -hívás elvégezve (nincs minta és nincs analízis modulban). A makró befejezte analízis nélkül Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler szoftverben, és ellenőrizze a minta elnevezések megfelelő begépelését a mintaszerkesztőben. Módosítson az alapértelmezett nevekre, mentse és exportálja újra a fájlt. Nyissa meg a LightCycler szoftvert és ellenőrizze, hogy megfelelő-e a verziószám. Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler szoftverben, és végezzen manuális T M -hívást. Mentse és exportálja újra a fájlt. + additional run flags 5-nél több futtatási jelző került észlelésre Kísérelje meg az egyes ismertetett jelzők megoldását, végezze el újra a SIS analízist. Invalid CCC File Name Két vagy több színkompenzáció-fájl aktív egy vagy több analízismodulban. Válassza ki a megfelelő színkompenzáció-fájlt, és számolja újra. Amennyiben egy vagy több minta hiányzik a SIS eredménylapon, ellenőrizze, hogy nincs-e egy vagy több minta kapilláris tévesen elnevezve, vagy nincsenek-e hiányzó kapillárisok. A javításhoz nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler szoftverben, és ellenőrizze a minta elnevezések megfelelő begépelését a mintaszerkesztőben. Módosítson az alapértelmezett nevekre, mentse és exportálja újra a fájlt. ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS KORLÁTOZÁSOK Amennyiben a LightCycler SeptiFast Test MG S. aureus-t mutat ki, és a mintaablak megjegyzés mezőjében a <for meca resistance testing: Peak for CoNS from SML detected> jelenik meg, akkor S. aureus és CoNS keveréke került kimutatásra. Lehetséges, hogy a meca kimutatásáért egy meca-t hordozó CoNS törzs felelős, nem pedig MRSA. Bár a meca-t hordozó CoNS-t nem mutatja ki a LightCycler SeptiFast Test MG, a meca kimutatásáért lehetséges, hogy a CoNS kimutatási határ alatti jelenléte felelős, és nem pedig MRSA. A megadott kimutatási határ alatt (kérjük, tanulmányozza az Analitikai érzékenység szakaszt) álnegatív eredmények előfordulhatnak, mivel a LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálat S. aureus DNS kimutatásának érzékenysége nagyobb lehet, mint a LightCycler SeptiFast meca Kit MG vizsgálat meca DNS kimutatásának érzékenysége. A LightCycler SeptiFast meca Kit MG vizsgálat a meca gént mutatja ki, és nem teszi lehetővé a bizonyító erejű fenotípusos azonosítást. A vizsgálatot csak K-EDTA alvadásgátlóval gyűjtött humán vér használatára validálták. Más típusú minták vizsgálata téves, álnegatív vagy álpozitív eredménnyel járhat. A terméket csak a LightCycler SeptiFast meca Kit MG vizsgálat munkafolyamatára speciálisan kiképzett személy használhatja. A LightCycler SeptiFast meca Kit MG vizsgálat 1 000 30 000 WBC/µl tartalmú vérmintán végezhető el. 7

KLINIKAI ÉRTÉKELÉS Klinikai vizsgálati feltételek és módszerek Négy európai vizsgálóhelyet magába foglaló multicentrikus klinikai vizsgálat történt. A vizsgálat célja a LightCycler SeptiFast meca Kit MG teljesítményének értékelése volt. A vizsgálatban a PCR útján nyert rezisztencia eredményeket hasonlították össze a tenyésztéses rezisztencia eredményekkel. Erre a célra LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálattal Staphylococcus aureus-pozitívnak bizonyult betegekből származó mintákat vizsgáltak azután meca gén jelenlétére LightCycler SeptiFast meca Kit MG segítségével. Ugyanazon betegekből származó S. aureus izolátumokat vizsgáltak methicillin rezisztencia irányába tenyésztéses módszerekkel. 279 betegből származó 778 minta vett részt a vizsgálatban, függetlenül a betegek esetleges antibiotikum kezelésétől. A beteg beválasztást illető további részletekre vonatkozóan kérjük, tanulmányozza a LightCycler SeptiFast Test MG mellékelt használati utasítását. A klinikai vizsgálat során 28 S. aureus-pozitív mintát azonosítottak különböző módszerekkel. Ezen módszerek szerint a mintákat a 2. ábrának megfelelő csoportokba sorolták. S. aureus haemokultúrából izolálva 0 11 4 13 A B C D S. aureus LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálattal azonosítva 2. ábra: S. aureus kimutatás haemokultúra, valamint LightCycler SeptiFast Test MG segítségével. Azokat a mintákat, amelyekből S. aureus-t mutattak ki, különböző csoportokba sorolták azért, hogy összehasonlítsák a LightCycler SeptiFast meca Kit MG eredményét a tenyésztéses rezisztencia meghatározással. A bal oldali kör a haemokultúrából izolált S. aureus-t reprezentálja. A jobb oldali kör a LightCycler SeptiFast Test MG vizsgálattal S. aureuspozitívnak bizonyult mintákat reprezentálja. A) S. aureus csak haemokulturából kimutatva. B) S. aureus LightCycler SeptiFast Test MG és haemokultúra segítségével kimutatva. C) S. aureus LightCycler SeptiFast Test MG segítségével kimutatva, és megerősítő vizsgálattal alátámasztva. Megerősítő vizsgálatra az eredeti haemokultúrától különböző forrásból származó S. aureus izolátum állt rendelkezésre. D) S. aureus csak LightCycler SeptiFast Test MG segítségével kimutatva. Valamennyi mintát, amelyből S. aureus-t azonosítottak, methicillin-rezisztencia irányába vizsgáltak vagy tenyésztéses módszerekkel, vagy a LightCycler SeptiFast meca Kit MG segítségével. Rezisztenciaeredmények csak haemokultúrából izolált S. aureus esetén (A csoport) Az A csoport (2. ábra) 0 mintát tartalmaz, amelyeknél a S. aureus csak haemokultúrából volt izolálva. Ezen csoport esetén nem álltak rendelkezésre PCR-eredmények. A rezisztenciaeredmények összehasonlítása: haemokultúra és PCR (B csoport) A B csoport (2. ábra) 11 mintát tartalmaz, amelyeknél a S. aureus-t haemokultúrából és a LightCycler SeptiFast Test MG segítségével egyaránt azonosították. Egybehangzóan pozitív rezisztencia eredmények a két módszer esetén 5 mintánál születtek. 6 minta volt negatív mindkét módszer esetén. Megerősítő vizsgálat (C csoport) A C csoport (2. ábra) 4 mintát tartalmaz, amelyeknél a S. aureus-t a LightCycler SeptiFast Test MG segítségével egyaránt azonosították, és ahol a S. aureus-t az eredeti haemokultúrától különböző forrásból izolálták. Ez olyan mintákat foglalt magában, amelyek pl. egy második, eltérő időpontban levett haemokultúrából, testfolyadékokból, illetve szövetekből származtak, esetleg drénből, sebzésből, biopsziából stb. Egybehangzóan pozitív rezisztenciaeredmények a PCR és a tenyésztéses vizsgálat esetén 2 mintánál születtek. 1 minta esetén a rezisztenciagén csak a LightCycler SeptiFast meca Kit MG használatával volt kimutatható. Egy minta negatív volt mindkét módszerrel vizsgálva. Rezisztencia eredmények csak PCR-vizsgálattal kimutatott S. aureus esetén (D csoport) A D csoport (2. ábra) 13 mintát tartalmaz, amelyeknél a S. aureus-t csak a LightCycler SeptiFast Test MG segítségével azonosították. Ezen csoport esetén nem álltak rendelkezésre tenyésztéses eredmények. 0 minta esetében a rezisztencia gént a LightCycler SeptiFast meca Kit MG segítségével mutatták ki. 8

NEM KLINIKAI ÉRTÉKELÉS Analitikai érzékenység A legkisebb érzékenység 30 CFU/ml K-EDTA-s vér. Az alább ismertetett vizsgálat bemutatja, hogy az MRSA kimutatási határát S. aureus esetén a LightCycler SeptiFast Test MG, meca esetén pedig a LightCycler SeptiFast meca Kit MG segítségével határozták meg. Ismert MRSA koncentrációból (ATCC 33592) készített hígítási sorral fertőztek egészséges donorokból származó teljes vért, és ezeket dolgozták fel a megfelelő vizsgálatokhoz mellékelt használati utasításban leírtak szerint. Valamennyi koncentrációt nyolc ismétlésben két tételt használva analizáltak. Az 5. táblázat a mindkét tételből származó kombinált adatokat mutatja. A kimutatási határ S. aureus esetén 4,3 CFU/ml (95%) CI=[2,8 13,1], és meca esetén 7,5 CFU/ml (95%) CI=[4,9 16,6]. 5. táblázat: Kimutatási határ MRSA koncentráció [CFU/ml] meca pozitívok száma S. aureus-pozitívok száma 100 16/16 16/16 50 16/16 16/16 25 16/16 16/16 12,5 16/16 16/16 6,75 15/16 16/16 3,4 12/16 15/16 1,7 3/16 8/16 0,85 4/16 8/16 0 0/16 0/16 Analitikai specificitás Inkluzivitás Az inkluzivitást 167 MRSA törzs genom DNS segítségével vizsgálták. A vizsgált törzsek közt egy referencia törzs (ATCC 33592) volt, továbbá 166 klinikai izolátum Európából és az USA-ból. Az izolátumok pulzusmező gélelektroforézissel karakterizált (PFGE) SCCmec I V típust tartalmaztak. Az SCCmec a Staphylococcal Chromosomal Cassette rövidítése, amely egy a meca gént tartalmazó mobilis genetikai elem. További 588 klinikai MRSA izolátumot vizsgáltak, amelyeknek nem történt egyéb molekuláris karakterizálása. 580 izolátumból meca-t mutattak ki, a fennmaradó 8 izolátumot borderline oxacillin-rezisztens S. aureus-ként (BORSA) vagy módosult S. aureus-ként (MODSA) 4 sorolták be, ezek MIC értéke 8 µg oxacillin per ml alatt volt. Exkluzivitás Az alábbiakban szereplő leggyakoribb véráram fertőzéseket okozó kórokozók (13) genom DNS-ét, ezekkel közeli rokonságban álló törzseket, valamint a S. aureus szal filogenetikailag közeli rokonságban álló törzseket vizsgáltak. Valamennyi vizsgált faj meca negatívnak bizonyult. Actinobacillus actinomycetemcomitans Cryptococcus neoformans Pantoea agglomerans Acinetobacter baumannii Enterobacter aerogenes Peptostreptococcus magnus Aeromonas hydrophila Enterobacter cloacae Porphyromonas gingivalis Aspergillus fumigatus Enterobacter taylore Prevotella denticola Bacillus cereus Enterococcus faecalis Propionibacterium acnes Bacteroides fragilis Enterococcus faecium Proteus mirabilis Bartonella henselae Escherichia coli Proteus vulgaris Bordetella pertussis Gemella haemolysans Pseudomonas aeruginosa Borrelia burgdorferi Histoplasma capsulatum Salmonella enterica Burkholderia cepacia Klebsiella oxytoca Serratia marcescens Campylobacter jejuni Klebsiella pneumoniae Shigella sonnei Candida albicans Legionella pneumophila Staphylococcus aureus Candida glabrata Listeria monocytogenes Staphylococcus epidermidis Candida krusei Moraxella (Branhamella) catarrhalis Staphylococcus haemolyticus Candida parapsilosis Morganella morganii Stenotrophomonas maltophilia Candida tropicalis Mycobacterium fortuitum Streptococcus agalactiae Cardiobacterium hominis Mycobacterium tuberculosis Streptococcus mitis Citrobacter freundii Mycobacterium xenopi Streptococcus pneumoniae Clostridium perfringens Mycoplasma pneumoniae Streptococcus pyogenes Corynebacterium jeikeium Neisseria meningitidis Yersinia enterocolitica 4 A BORSA-ra megnövekedett mértékű β-laktamáz-termelésen alapuló alacsony szintű rezisztencia jellemző, a MODSA-ra alacsony kötődési affinitású PBP-struktúra vagy PBP-túltermelés jellemző (ritka). Egyik csoport sem hordozza a meca gént. 9

Zavarást okozó anyagok Az alábbi anyagok nem zavarják a meca DNS kimutatását ebben a vizsgálatban. 6. táblázat: Zavarást okozó anyagok Szám Márkanév Hatóanyag Gyártó 1x C max 3x C max Egység 1 Piperacillin Piperacillin Hexal 4,0 12,0 mg/ml 2 Fortum Ceftazidim GlaxoSmithKline 0,50 1,5 mg/ml 3 Zienam Imipenem/Cilastatin MSD Sharp & Dohme 0,27* 0,80* mg/ml 4 Tazobac Piperacillin/Tazobactam Wyeth Pharma 0,75 2,3 mg/ml 5 Ciprobay Ciprofloxacin Bayer 33,3 100,0 µg/ml 6 Vancomycin Vancomycin Lilly 83,0 250,0 µg/ml 7 Refobacin Gentamicin Merck 80 240 µg/ml 8 Zyvoxid Linezolid Pfizer 0,10 0,30 mg/ml 9 Sobelin Clindamycin Pfizer 0,30 0,90 mg/ml 10 InfectoClont Metronidazol Infectopharm 83,3 250,0 µg/ml 11 Diflucan Flukonazol Pfizer 0,13 0,39 mg/ml 12 Cancidas Caspofungin MSD Sharp & Dohme 8,3 25,0 µg/ml 13 Amphotericin B Amphotericin B Bristol-Myers Squibb 20 60 µg/ml 14 Novalgin Metamizol Aventis Pharma 0,83 2,5 mg/ml 15 Dexahexal Dexametazon Hexal 1,3 4,0 µg/ml 16 ARA-cell Cytarabin cell pharm 63,3 190,0 µg/ml 17 Arterenol Norepinephrin (noradrenalin) Aventis Pharma 4,8 14,4 µg/ml 18 Aquo-Trinitrosan Nitroglicerin Merck 1,3 4,0 µg/ml 19 Heparin-Natrium-5000- ratiopharm Heparin ratiopharm 0,83 2,5 I.U./ml *A minta jelentős hígulása miatt nem volt lehetséges a Zienam infúziós oldat C MAX (0,67) értékének használata. PONTOSSÁG A LightCycler SeptiFast meca Kit MG pontosságának értékelését közepes (10E3 CFU/ml) és alacsony (10E2 CFU/ml) koncentrációjú MRSA oldattal fertőzött K-EDTA-s teljes vér segítségével végezték. A minták 7 ismétlését, 3 készülék segítségével, 2 vizsgáló személy 3 napon keresztül vizsgálta. Az olvadási csúcsokat analizálták. A vizsgálaton belüli pontosságot illetően valamennyi csúcs értéke +/- 2,5 C volt. A vizsgálatok közötti pontosságot illetően pedig a SeptiFast Identification Software valamennyi csúcsot pozitívnak találta. VÁSÁRLÓI INFORMÁCIÓ Ezen termék megvásárlása lehetőséget biztosít a vásárlónak humán in vitro diagnosztika keretében nukleinsav-szekvenciák amplifikációjára és kimutatására. A termék megvásárlásával e specifikus használati jogon kívül semmilyen más jogosítványra, szabadalmi jogra vagy más engedélyre nem tesz szert. 10

HIVATKOZÁSOK 1. Pfaller, M.A., et al. Survey of blood stream infections attributable to gram-positive cocci: frequency of occurrence and antimicrobial susceptibility of isolates collected in 1997 in the United States, Canada, and Latin America from the SENTRY Antimicrobial Surveillance Program. SENTRY Participants Group. Diagn Microbiol Infect Dis 1999; 33:283-97. 2. Diekema, D.J., et al. Survey of infections due to Staphylococcus species: frequency of occurrence and antimicrobial susceptibility of isolates collected in the United States, Canada, Latin America, Europe, and the Western Pacific region for the SENTRY Antimicrobial Surveillance Program, 1997-1999, Clin Infect Dis 32 (2001) (suppl 2), S114-S132. 3. Zetola, N., et al. Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus: an emerging threat. The Lancet Infectious Diseases, Volume 5, Issue 5, 275-286. 4. Cosgrove, S.E., et al. Comparison of mortality associated with methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus bacteremia: a meta-analysis. Clin Infect Dis. 2003 Jan 1;36(1):53-9. Epub 2002 Dec 13. 5. Whitby, M., et al. Risk of death from methicillin-resistant Staphylococcus aureus bacteraemia: a meta-analysis. Med J Aust. 2001 Sep 3;175(5):264-7. 6. Kolleff, M.H., et al. Inadequate antimicrobial treatment of infections, Chest (1999); 115: 462-74. 7. Harbarth, S., et al. Inappropriate Initial Antimicrobial Therapy and Its Effect on Survival in a Clinical Trial of Immunomodulating Therapy for Severe Sepsis, Am J Med. (2003); 115: 529-35. 8. Lodise, T.P., et al. Outcomes Analysis of delayed antibiotic treatment for hospital-acquired Staphylococcus aureus bacteremia. Clin Infect Dis (2003); 36: 14-23. 9. Paterson, D.L., et al. Empirical antibiotic choice for the seriously ill patient: are minimization of selection of resistant organisms and maximization of individual outcome mutually exclusive? Clin Infect Dis. (2003);36(8):1006-12. 10. Ryffel, C., et al. Sequence comparison of meca genes isolated from methicillin-resistant Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis. Gene. 1990 Sep 28;94(1):137-8. 11. Richmond, J.Y. and McKinney, R.W. eds. 1999. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 93-8395. 12. Clinical Laboratory Standards Institute. Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue. Approved Guideline. CLSI Document M29-A Villanova, PA:CLSI, 1997. 13. Cockerill FR 3rd, et al, Analysis of 281,797 consecutive blood cultures performed over an eight-year period: trends in microorganisms isolated and the value of anaerobic culture of blood, Clin Infect Dis. 1997; 24 (3): 403-18. 11

Gyártva Németországban: Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ 08876 USA Distributed by Roche Diagnostics Indianapolis, IN 46256 USA (For Technical Assistance call the Roche Response Center toll-free: 1-800 526 1247) Roche Diagnostics H7V 4A2 Laval, Quebec (For Technical Assistance call: Pour toute assistance technique, appeler le: 1-877 273 3433) Roche Diagnostics (Schweiz) AG CH-6343 Rotkreuz Roche Diagnostics F-38240 Meylan Roche Diagnostics GmbH D-68298 Mannheim, Germany Distributore in Italia: Roche Diagnostics SpA Piazza Durante 11 I-20131 Milano Roche Diagnostics S.L. E-08006 Barcelona Distribuidor em Portugal: Roche Farmacêutica Química, Lda P-2700 Amadora C Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Németország, +49 621 7590 A ROCHE, a LIGHTCYCLER, az MGRADE, a FASTSTART, a SEPTIFAST, a HYBPROBE és az AMPERASE a Roche védjegye. A ROCHE RESPONSE CENTER a Roche szolgáltatási védjegye. Az Amphotericin B a Bristol-Myers Squibb Company bejegyzett védjegye. Az Aquo-Trinitrosan a Merck & Co., Inc. bejegyzett védjegye. Az ARA-cell a cell pharma GmbH bejegyzett védjegye. Az Arterenol az Aventis Pharma Ltd. bejegyzett védjegye. A Cancidas az MSD Sharp & Dohme GmbH bejegyzett védjegye. A Ciprobay a Bayer AG bejegyzett védjegye. A Dexahexal a Hexal AG bejegyzett védjegye. A Diflucan a Pfizer Inc. bejegyzett védjegye. A Fortum a GlaxoSmithKline bejegyzett védjegye. A Heparin-Natrium-5000-ratiopharm a ratiopharm International bejegyzett védjegye. Az InfectoClont az Infectopharm GmbH bejegyzett védjegye. Az LTK-008 a biodelta, ZTB GmbH bejegyzett védjegye. A Novalgin az Aventis Pharma Ltd. bejegyzett védjegye. A Piperacillin a Hexal AG bejegyzett védjegye. A Refobacin a Merck & Co., Inc. bejegyzett védjegye. A Sobelin a Pfizer Inc. bejegyzett védjegye. A Tazobac a Wyeth Pharmaceuticals AG bejegyzett védjegye. A Vancomycin a Lilly Pharma Holding GmbH bejegyzett védjegye. A Zienam az MSD Sharp & Dohme GmbH bejegyzett védjegye. A Zyvoxid a Pfizer Inc. bejegyzett védjegye. 2005, Roche Molecular Systems, Inc. Minden jog fenntartva. 11/2005 (04623932001-01ENGL) 04822650001-01 12