BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Culture Vials Magyar HASZNÁLATI JAVASLAT A BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F (pre-redukált, dúsított szója-kazein tápleves CO 2 -vel) típusú tenyésztõpalackok anaerob vérkultúrákhoz használandók. Elsõsorban az anaerob mikroorganizmusok vérbõl való kvalitatív kitenyésztésére és kimutatására használandó a BACTEC fluoreszcens sorozatához tartozó készülékekkel. ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT A vizsgálandó mintával egy vagy több palackot inokulálni kell, majd a palackokat inkubálás és idõszakos leolvasás céljából a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékbe kell helyezni. Minden palack kémiai érzékelõt tartalmaz, amely kimutatja a mikroorganizmusok szaporodása következtében termelt CO 2 szintnövekedést. A készülék 10 percenként ellenõrzi az érzékelõ fluoreszcenciájának növekedését, amely egyenes arányban van a jelenlévõ CO 2 mennyiségével. A pozitív leolvasási eredmény azt jelenti, hogy a palackban feltételezhetõen élõ mikroorganizmusok vannak. A kimutatás csak azokra a mikroorganizmusokra vonatkozik, melyek egy meghatározott típusú táptalajban képesek szaporodni. AZ ELJÁRÁS MÛKÖDÉSI ELVE Ha a BACTEC palack tesztinokulátumában mikroorganizmusok találhatók, akkor CO 2 képzõdik, miközben a mikroorganizmusok metabolizálják a palackban található szubsztrátokat. A nagyobb CO 2 -koncentráció következtében a palack érzékelõ fluoreszcenciájában bekövetkezõ növekedést a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék mérni képes. A BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék a CO 2 növekedés mennyiségének és sebességének elemzése alapján határozza meg, hogy pozitív-e a csõ, azaz a tesztminta tartalmaz-e élõ mikroorganizmusokat. REAGENSEK A BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F tenyésztõpalackok az eljárás kezdete elõtt a következõ aktív hatóanyagokat tartalmazzák: Összetevõk listája Tisztított víz... 40 ml Emésztett szója-kazein tápleves... 2,75% m/v Élesztõkivonat... 0,2% m/v Emésztett állati szövet... 0,05% m/v Dextróz... 0,2% m/v Hemin... 0,0005% m/v Menadion... 0,00005% m/v Nátrium-citrát... 0,02% m/v Tiolok... 0,1% m/v Nátrium-piruvát... 0,1% m/v Szaponin... 0,26% m/v Habzásgátló anyag... 0,01% m/v Nátrium polianetol-szulfonát (SPS)... 0,035% m/v Valamennyi BACTEC tápközeg hozzáadott CO 2 -ot tartalmaz. Az anaerob tápközegek pre-redukáltak, valamint CO 2 -ot és N 2 -t tartalmaznak. Az összetétel változtatható a specifikus teljesítményelvárások kielégítése céljából. Figyelmeztetés In vitro diagnosztizáláshoz. A termék száraz természetes gumit tartalmaz. A klinikai mintákban patogén mikroorganizmusok, pl. Hepatitis és HIV vírusok lehetnek jelen. Minden vérrel, illetve más testnedvvel szennyezett anyagot a Standard Precautions 1-4 elõírásai szerint, illetve az intézet irányelvei szerint kell kezelni. Használat elõtt minden palackot meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta sérülésre, befertõzõdésre vagy károsodásra utaló nyom. A nyilvánvalóan károsodott, illetve befertõzõdött palackokat melyek szivárognak, homályosak, tartalmuk elszínezõdött (sötétebb), a gumikupak beszívódott vagy kidudorodik ne használja fel. A fertõzött palackokban túlnyomás uralkodhat. Ha befertõzõdött palackot használ közvetlen vérvételhez, a befertõzõdött tápközeg visszafolyhat a beteg vénájába. A palackok fertõzöttsége nem mindig nyilvánvaló. Közvetlen vérvétel során kísérje figyelemmel végig a folyamatot annak érdekében, hogy semmilyen anyag ne folyhasson vissza a beteg szervezetébe. Bizonyos esetekben elõfordulhat, hogy az üveg nyaka megreped, vagy a kupak lepattintása, illetve munka közben letörik. Ezenkívül, ritkán elõfordulhat, hogy a palack nem lett kellõen lezárva. A palackok tartalma mindkét esetben kifröccsenhet, illetve szivároghat. Ha a palackokat már inokulálta, a kicsepegett és kiszivárgott anyaggal bánjon óvatosan, mivel azok fertõzõ organizmusokat vagy anyagokat tartalmazhatnak. Kidobás elõtt minden inokulált palackot autoklávozással sterilizáljon. Továbboltáshoz vagy festéshez, stb.-hez való pozitív tenyészapalackok: Mintavétel elõtt ki kell engedni a mikrobiális metabolizmus során gyakran képzõdõ gázt. Amennyiben lehetséges, a mintavételt biológiai biztonsági elszívó fülke alatt, megfelelõ védõöltözékben (beleértve a kesztyût és maszkot) kell elvégezni. A továbboltásról további információk az Eljárás címû szakaszban találhatók. Hogy a tenyésztõ palackok inokulálása alatt minimálisra csökkentse a szivárgás lehetõségét, használjon tartósan rögzített tûjû fecskendõket, illetve Luer-Lok hegyeket. Tárolási útmutató A BACTEC ampullák kézhezvételkor használatra készek, további feloldás, illetve hígítás már nem szükséges. Tárolja 2 25 C hõmérsékleten, száraz, közvetlen napfénytõl védett helyen. PP108JAA 2008/01 MINTÁK GYÛJTÉSE A befertõzõdés elkerülése végett a mintavételhez használjon aszeptikus technikákat. A minta ajánlott térfogata 8 10 ml. A BACTEC palackokat tanácsos közvetlenül a betegágynál inokulálni a mintával. A mintavételhez leggyakrabban egy Luer-Lok heggyel ellátott 10 vagy 20 ml-es fecskendõt használnak. A mintavételhez optimális esetben Vacutainer Needle Holder-t és Vacutainer Blood Collection Set-et, Vacutainer Safety-Lok Blood Collection Set-et vagy más pillangótû készletet kell használni. Ha tût és vérvételi csõrendszert (közvetlen vérvétel) használ, a mintavétel kezdete után fokozott figyelemmel kísérje végig a vér folyásának irányát. A palackban lévõ vákuum általában meghaladja a 10 ml-t, ezért a felhasználónak a palack címkéjén lévõ 5 ml-es jelek segítségével ellenõriznie kell a levett minta mennyiségét. Ha a kívánt 8 10 ml-t sikerült levenni, a további áramlást a csõ elszorításával és a vérvételi készlet BACTEC palackból való kihúzásával kell megállítani. 3 ml-es térfogatú minták is felhasználhatók, ilyenkor azonban a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében. Az inokulált BACTEC palackot a lehetõ legrövidebb idõn belül a laboratóriumba kell juttatni.
ELJÁRÁS Távolítsa el a BACTEC palack tetejérõl a levehetõ kupakot, majd vizsgálja meg az üveget különös trekintettel a repedésekre, a befertõzõdésre, a túlzott zavarosságra, a mûanyag kupak beszívódására, illetve kidudorodására. Ha bármilyen hibát észlel, NE HASZNÁLJA FEL a palackot. Inokulálás elõtt törölje le a gumikupakot alkohollal (jódtartalmú fertõtlenítõ szer használata NEM javallott). Aszeptikus módon fecskendezzen vagy engedjen közvetlenül a palackba, palackonként 8 10 ml mintát. Amennyiben 3 4 ml-nyi mintát használ, a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében (lásd Az eljárás korlátai). Az inokulált anaerob palackokat inkubálás és monitorozás céljából a lehetõ legrövidebb idõn belül be kell tenni a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékébe. Ha a palackot nem helyezi idõben a készülékbe, és a palackban jól láthatóan elindult a szaporodás, akkor a palackot ne tesztelje BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékben, hanem oltsa tovább, készítsen Gram-festést, és tekintse a palackot feltehetõen pozitívnak. A készülékben elhelyezett palackokat a készülék automatikusan, a teszt protokoll idõtartama alatt 10 percenként teszteli. A pozitív palackokat a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék felismeri, és pozitívnak minõsíti (lásd a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatóját). Az üvegen belül található érzékelõ nem mutat szemmel látható különbséget a pozitív vagy negatív palackokban, ennek ellenére a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék ki tudja mutatni a fluoreszcenciában bekövetkezett változásokat. Miután a vér a BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Medium tápközegbe került, azonnal lizál. A vér kezdetben barnává, vagy nagyon sötétté válik. Amennyiben a tesztperiódus végére egy BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F palack kupakja kidudorodik, tenyéssze tovább, készítsen Gram-festést, és tekintse feltehetõen pozitívnak. A pozitív palackokat tovább kell oltani, és Gram-festett kenetet kell készíteni. Az esetek többségében a mikroorganizmusok láthatóvá válnak, és az orvossal az elõzetes eredményeket közölni lehet. BACTEC palackban lévõ folyadékból szelektív táptalajra továbboltott kultúrák hozhatók létre, illetve elõzetes, közvetlen gyógyszerérzékenységi teszt is végezhetõ. Továbbtenyésztés: Továbboltás elõtt helyezze a palackot álló helyzetbe, és takarja le a a palack kupakját egy alkoholos törlõvel. A palackban uralkodó túlnyomás megszüntetésére szúrjon egy megfelelõ szurõvel (vagy vattacsomóval) ellátott steril tut az alkoholos törlõn át a palack kupakjába. A tut a nyomás csökkentése után, a továbboltáshoz való minta kivétele elõtt el kell távolítani. A tû beszúrását és kihúzását egyenes irányú mozdulatokkal kell elvégezni, és kerülni kell a tekerõ mozdulatokat. A maximális izolátum hozamhoz, a negatív tenyészeteket ellenõrizze festéssel és/vagy továbboltással, mielõtt a mintákat negatívnak értékelné, és kidobná. MINÕSÉGELLENÕRZÉS A minõség-ellenõrzési vizsgálatokat a vonatkozó helyi, állami és/vagy szövetségi jogszabályoknak és akkreditációs követelményeknek, illetve a laboratórium standard minõség-ellenõrzési eljárásainak megfelelõen kell elvégezni. A megfelelõ minõség-ellenõrzési gyakorlat kialakításánál tanácsos figyelembe venni a megfelelõ CLSI (korábban NCCLS) irányelveket és a CLIA elõírásokat. A lejárati idõ után NE HASZNÁLJA FEL a tenyésztõ palckokat. NE HASZNÁLJA FEL azokat a palackokat, melyeken sérülés bármilyen nyoma látszik. Az ilyen palackokat a megfelelõ módon dobja ki. A Quality Control Certificate (Minõségellenõrzési tanúsítvány) minden tápközeg dobozban megtalálható. A Minõségellenõrzési tanúsítvány felsorolja a teszt mikroorganizmusokat, beleértve az CLSI Standard, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media fejezetében leírt ATCC tenyészeteket is. 5 Az érzékelés idõtartama ezen táptalaj esetén a Minõségellenõrzési tanúsítványban felsorolt valamennyi mikroorganizmus esetében 72 óra: Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis* ATCC 25285 Bacteroides vulgatus ATCC 8482 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Escherichia coli ATCC 25922 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Clostridium histolyticum ATCC 19401 *CLSI törzs A BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékek minõség-ellenõrzésérõl a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatójában olvashat további információkat. AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Befertõzõdés Ügyeljen arra, hogy a mintavétel alatt és az inokulálás során a BACTEC palackok ne fertõzõdjenek be. A bertõzõdött minták ugyan pozitív eredményt adnak, mégsem számítanak releváns klinikai eredménynek. A meghatározást a felhasználónak kell elvégeznie olyan tényezõk alapján, mint a kimutatott mikroorganizmus típusa, ugyanannak a mikroorganizmusnak a gyakorisága több tenyészetben, a beteg kórelõélete, stb. SPS-érzékeny mikroorganizmusok kimutatása vérmintákból Mivel a vér semlegesíteni képes az SPS sel szemben érzékeny mikroorganizmusokkal (pl. P. anaerobius-sal) szembeni SPS toxicitását az optimális vérmennyiség (5 10 ml) elõsegíti ezen mikroorganizmusok kimutatását. Bizonyos érzékeny mikroorganizmusok, pl. egyes Haemophilus fajok, növekedési faktorokat (pl. NAD vagy V-faktor) igényelnek, melyeket a vérminta biztosít. Amennyiben a vérminta mennyisége 3,0 ml vagy annál kevesebb, ezen mikroorganizmusok kimutatásához a megfelõ szuplementet kell hozzáadni a tápközeghez. Tápanyagkiegészítésként BACTEC FOS Fastidious Organism Supplement használható. Nem élõ organizmusok A tenyésztõ tápközegekbõl készített Gram-festett kenetek kis számú, nem élõ mikroorganizmust tartalmazhatnak, melyek a tápközeg összetevõibõl, a festékbõl, az immerziós olajból, az üveg tárgylemezekrõl, illetve az inokuláláshoz használt mintából származhatnak. Ezenkívül, a betegtõl származó mintában lehetnek olyan mikroorganizmusok, melyek nem szaporodnak a tenyésztéshez vagy továbbtenyésztéshez használt tápközegben. Az ilyen mintákat szükség esetén a megfelelõ speciális tápközegben kell továbbtenyészteni. 6 Általános szempontok Az izolátumok optimális kimutatásához 8 10 ml vér szükséges. Ennél kisebb vagy nagyobb térfogat kedvezõtlenül befolyásolhatja a kimutatást és/vagy az érzékelés idõtartamát. A vér tartalmazhat antimikrobiotikumokat vagy egyéb olyan gátló anyagokat, melyek lelassítják, vagy megakadályozzák a mikroorganizmusok szaporodását. Amennyiben a mintában olyan mikroorganizmusok vannak jelen, amelyek nem termelnek elég CO 2 -ot ahhoz, hogy a rendszer kimutassa, illetve a szignifikáns szaporodás még a készülékbe helyezés elõtt megtörtént, fals negatív leolvasást kaphatunk eredményként. Magas fehérvérsejt-szám esetében fals pozitív eredmény születhet. VÁRT EREDMÉNYEK ATCC és vad mikroorganizmus-törzsek használatával tenyésztéses vizsgálatokat végeztek tenyésztõpalackonként 10 50 CFU tartalmú inokulumokkal. A következõkben a BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Medium tápközegben öt (5) napos idõszak alatt pozitívnak talált mikroorganizmusok listája látható. Bacteroides asaccharolyticus Clostridium perfringens Peptostreptococcus anaerobius Staphylococcus epidermidis Bacteroides fragilis Enterobacter cloacae Peptostreptococcus asaccharolyticus Streptococcus pneumoniae Bacteroides ovatus Enterococcus faecalis Peptostreptococcus magnus Streptococcus fajok (A csoport) Bacteroides thetaiotaomicron Escherichia coli Peptostreptococcus prevotil Veillonella parvula Clostridium histolyticum Fusobacterium nucleatum Propionibacterium acnes Clostridium novyi Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus TELJESÍTMÉNY JELLEMZÕK Egy külsõ, 2 klinikai helyszínt bevonó vizsgálatban, melyben összehasonlították a BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F vérkultúra tápközeget és a BACTEC Standard Anaerobic/F vérkultúra tápközeget, összesen 2 092 párosított mintát teszteltek. A BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F vérkultúra tápköteg fals pozitív aránya 0,1% os volt. A fals negatív eredmények aránya 0,4%-os volt. 2
Összesen 207 mikroorganizmust mutattak ki. A kimutatott izolátumokat tápközegek szerint csoportosítva az 1. táblázat tartalmazza. Ezek közül 122 (58,9%) bizonyult klinikailag szignifikánsnak. A klinikailag szignifikáns izolátum közül 79-et (64,8%) mindkét tápközegben kimutattak, 36-ot (29,5%) csak a BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F vérkultúra tápközeggel mutattak ki, míg 7-et (5,7%) csak a BACTEC Standard Anaerobic/F vérkultúra tápközeggel mutattak ki. A detektálási idõ a BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F vérkultúra tápközeggel átlagosan 13 óra volt, míg a BACTEC Standard Anaerobic/F vérkultúra tápközeggel az átlag detektálási idõ 18,4 óra volt. 1. táblázat: Klinikai tanulmány izolátumainak kimutatása Tápközeg fajtája Mikrooganizmus CSAK Lytic/10 Anaerobic/F-ben kimutatva CSAK Standard Anaerobic/F-ben kimutatva MINDKETTÕBEN kimutatva Anaerobok 7 1 4 Gram negatívak 20 5 28 Gram pozitívak 8 1 47 Élesztõ 1 0 0 A BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F tápközeggel kimutatott mikroorganizmusok listája: Acinetobacter baumanii Fusobacterium fajok Staphylococcus koag. negatív Bacteroides caccae Klebsiella pneumoniae Streptococcus alpha (nem D vagy pneumoniae) Bacteroides fragilis Peptostreptococcus micros Streptococcus enterococcus Candida glabrata Prevotella fajok Streptococcus B csoport Clostridium hastiforme Proteus mirabilis Streptococcus C csoport Clostridium fajok Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Enterobacter cloacae Salmonella B csoport Streptococcus fajok Enterococcus faecalis Serratia marcescens Escherichia coli Staphylococcus aureus KISZERELÉSEK Kat. sz. Leírás 442265 BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Culture Vials, 50 palackos kiszerelés IRODALOMJEGYZÉK 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-80. 3. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.). 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3
4
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 USA 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, FOS, Vacutainer, Safety-Lok and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2008 BD.