Emésztőszervi betegségek (PEC/PEMS) járványtani és virológiai vizsgálata pulykaállományokban Rusvai Miklós, Demeter Zoltán, Coman Alina, Palade Alina
Emésztőszervi betegségek (enteric diseases, ED) pulykaállományokban PEC (Poult enteritis complex) hasmenés, levertség, alomevés, immunszuppresszió és megemelkedett mortalitás nagy gazdasági károk PEMS (Poult enteritis and mortality syndrome) hasonló klinikai tünetek és kórbonctani elváltozások magas (akár 100%) morbiditás és mortalitás
A PEC/PEMS kórképben esetleg szerepet játszó kórokozók Pulyka astrovírus Pulyka astrovírus 1 (TAstV-1) Pulyka astrovírus 2 (TAstV-2) Avian nephritis vírus (ANV)? Pulyka coronavírus (TCV) Avian reovírus (ARV) Avian rotavírus (AvRV) Vérzéses bélgyulladás vírus (HEV) Pulyka parvovírus (TuPV) Enteropathogén E. coli törzsek
Pulyka astrovírus (TAstV) Astroviridae csillag alakú, nem burkos, 28-30 nm egyszálú, pozitív RNs Avian nephritis vírus (ANV) vesekárosodás napos csirkékben ragályos eltérő pathogenitás pulykaállományokban is kimutatták
TCV, ARV, AvRV, HEV Pulyka coronavírus (TCV) Coronaviridae kerekded vagy pleomorf, burkos, 120 nm ss RNs Avian reovírus (ARV) Reoviridae ikozahaedrális, 60-70 nm ds RNs Avian rotavírus (AvRV) a reovírusokhoz hasonló morfológia a kapszidban küllőszerű rendeződés ( rota ) Vérzéses bélgyulladás vírusa (HEV) Adenoviridae ikozahaedrális, 70-90 nm ds DNs
Pulyka parvovírus (TuPV) parvovírus-szerű részecskék 10 napos hasmenéses csirkék bélhomogenizátumában (Kisary et al., 1984) naposcsirkék kísérleti fertőzése tisztított vírussal klinikai tünetekben megnyilvánuló RSS (Kisary et al., 1985) vírusazonosítás molekuláris biológiai módszerekkel: Parvoviridae (Kisary et al., 1985) újabban: az USA számos államában előfordul csirke- és pulyka-állományokban (Zsák et al., 2009) teljes genomszekvencia (Day and Zsák, 2010) Előfordul magyarországi csirke és pulykaállományok ban is (Palade et al., 2011)
TuPV Day and Zsák, 2010
PEC/PEMS: tünetek Szétnövés, tollasodási zavar, fejlődésben való visszamaradás (4-5 hetes pulykapipék)
PEC/PEMS: tünetek Hasmenéstől összetapadt tollak a cloaca körül
PEC/PEMS: kórbonctani elváltozások Kitágult vérerek, emésztetlen, nyálkás tartalommal telt vékonybelek, enteritis
PEC/PEMS: kórbonctani elváltozások Vékonybélgyulladás, gázos tartalommal telt vakbelek (dysbacteriosis jele)
Kórszövettan A bélbolyhok megrövidülése és összeolvadása, a mucosa enyhe denudatioja, enteritis
Kórszövettan A bélbolyhok megrövidülése és összeolvadása, a mucosa súlyosfokú denudatioja, enteritis
Kórszövettan Gyulladásos sejtes beszűrődés: histiocyták, lymphocyták és granulocyták
Kórszövettan Gyulladásos sejtes beszűrődés: histiocyták, lymphocyták és néhány granulocyta
Kórszövettan A Lieberkühn crypták kitágulása
Kórszövettan Kitágult Lieberkühn crypták, ellaposodott epithelium, desquamalódott sejtek
Kórszövettan A bursa Fabricii enyhe lymphoid depletioja
Gócos, multifocalis pancreatitis pancreas, H&E Regeneratio jelei a vékonybélben jejunum, H&E
Pulykaállományok 18 állomány 2008 kék 31 állomány 2009 narancssárga 6-43 napos állatok, klinikai PEC/PEMS, megemelkedett mortalitás
Primerek Targeted virus Targeted gene Primer name and sequence (5-3 ) Size (bp) Annealing ChPV / TuPV NS1 PVF1: TTCTAATAACGATATCACTCAAGTTTC PVR1: TTTGCGCTTGCGGTGAAGTCTGGCTCG 561 55 ANV GP1 ANV-ORF1-f: AGATACGCTTGCTCGTCTTG ANV-ORF1-r: CCTCTAACCGGCGATATTCT 608 53 TAstVs ORF-1b TAPG-L1:TGG TGG TGY TTY CTC AAR A TAPG-R1:GYC KGT CAT CMC CRT ARC A 601 55 TAstV-2 capsid ORF 2 MKCAP8F:TCA TCA TCC TCT CAC ACT GG MKCAP19R:AGC AGC AGT AGG TGG CAG TG 802 53 TCV nucleocapsid TCV-NF:GGT AGC GGT GTT CCT GA TCV-NR:CCC TCC TTA CCT TTA GT 598 53 HEV CP1 HEV-CP1-F: GGTTCGTGAACATTGGAGAC HEV-CP1-R: CAGGCACAACAGGTGTAACT 155 48 ARV S4 S4-F13:GTG CGT GTT GGA GTT TCC CG S4-R1133:TAC GCC ATC CTA GCT GGA 1120 53 AvRV NSP4 NSP4-F30:GTG CGG AAA GAT GGA GAA C NSP4-R660:GTT GGG GTA CCA GGG ATT AA 630 55
PCR és RT-PCR eredmények
Year Farm/House TuPV ARV AvRV TastV-2 HEV TCV ANV TAstVs B-369/4 + - - - - + - - B-284 + - - - - - - - B-486/2 - - + - - - - + B-369/9 + - - - - - - + B-23/1 + - - - - + - - B-281 + - - - - - - - B-122 - - - - - - - + B-496 - - + - - - - + 2008 B-589/4 + - + - - - - + B-589/1 + - + - - - - + B-547 + - - - - + - + B-470/2 - - - - - - - + B-288 + - + - - - - + B-584 + - - - - - - + B-369/1 - - + - - + - - B-501 + + - - - - + + B-23/8 - - - + - - - + B-23/3 + - - - - - - +
Year 2009 Farm/House TuPV ARV AvRV TastV-2 B-291/11 - - - - - - - + B-87 - - + - - - - + B-280 + - - - - - - + B-232 + - - - - - - + B-160 - - - - - - + + B-164/3 - - - - - + - - B-307/2 + - - - - - - - B-307/8 - - - - - - - + B-649 - + + + - - - + B-557 - - - + - - - + B-297 - - - + - - - + B-893 - - - + - - - + B-125 + - + - - - - + B-169/7 + - + + - + - + B-184 - + - + - - - + B-27 - - - + - - - + B-70 + - - - - - - + B-31/2 + - + - - - - + B-315 - + - + - - - + B-465/9 + - - - - - - + B-164/1 + - - - - - - + B-346 + - + - - - - + B-320/4 - - - - - - - + B-164/4 - + - - - + - - B-31/5 + - - - - - - + B121 - + - + - - - + B-648/1 - - - - - - - + B-307/6 - - + - - - - + B-546 - + - + - - - + B-671 - - + + - - - + B-648/2 - - - + - - - + HEV TCV ANV TAstVs
Cleavage enzimes site emésztés recognition ChPV 561bp 415bp 146bp enzimes emésztés TuPV like 561bp 323bp 146bp 92bp enzimes emésztés TuPV 561bp 323bp 238bp
RFLP-analízis enzimes emésztés ChPV 561bp 415bp 146bp enzimes emésztés TuPV like 561bp emésztetlen 323bp 146bp 92bp enzimes emésztés TuPV 561bp 323bp 238bp
PCR és RT-PCR összesítés TAstVs: 41/49 (83,67%) 13/49 TAstV-2 (26,53%) TuPV: 25/49 (51,02%) AvRV: 14/49 (28,57%) ARV: 7/49 (14,28%) TCV: 7/49 (14,28%) ANV: 2/49 (4,08%) HEV: 0
Statisztikai elemzés szignifikánsan negatív értékek atastv-2 és TuPV előfordulása között (p: 0.02) pozitív, majdnem szignificáns korreláció a TAstV-2 és ARV előfordulása között (p: 0.057) P-értékek TuPV ARV AvRV TAstV-2 TCV ANV TAstVs TuPV NA 1 1 0.02 1 1 1 ARV NA NA 1 0.057 1 1 1 AvRV NA NA NA 1 1 1 1 TAstV-2 NA NA NA NA 1 1 1 TCV NA NA NA NA NA 1 0 ANV NA NA NA NA NA NA 1 TAstVs NA NA NA NA NA NA NA
Következtetések a bélbolyhok megrövidülése, enyhe denudatioja és összeolvadása enterocyta desquamatio 2 esetben E. coli Legmagasabb előfordulási arány: astrovírusok ANV pulykaállományokban Újabban felismert kórokozó TuPV: gyakori (51,02%) a pulykaállományokban a csirke- és pulykaparvovírus egyaránt előfordul létezik egy átmeneti (pulykaparvovírus-szerű) genotípus negatív korreláció: TAstV-2 and TuPV pozitív korreláció : TAstV-2 and ARV
Thank you for your attention!