cobas HCV In vitro diagnosztikai célra Mennyiségi nukleinsavteszt cobas 4800 rendszeren való használatra 120 Tests P/N:

Mennyiségi nukleinsavteszt cobas 4800 rendszeren való használatra In vitro diagnosztikai célra cobas HCV 120 Tests P/N: 06979602190 cobas HBV/HCV/HIV-1 Control Kit 10 Sets P/N: 06979572190 cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 cobas 4800 System Wash Buffer Kit 240 Tests 960 Tests 240 Tests 960 Tests P/N: 06979513190 P/N: 06979521190 P/N: 05235863190 P/N: 05235871190 cobas 4800 System Specimen Diluent 2 240 Tests P/N: 06979556190 cobas 4800 System Lysis Kit 2 240 Tests 960 Tests P/N 06979530190 P/N 06979548190

TARTALOMJEGYZÉK A felhasználás célja A teszt összegzése és ismertetése Háttér... 4 A HCV-teszt elméleti alapjai... 5 A vizsgálat háttere... 5 Az eljárás alapelvei... 5 Anyagok és reagensek Reagensek... 6 A reagensek tárolási és kezelési feltételei... 11 További szükséges anyagok... 11 Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek... 12 Óvintézkedések és kezelési követelmények Figyelmeztetések és óvintézkedések... 12 Helyes laboratóriumi gyakorlat... 13 Reagensek kezelése... 13 Szennyezdés... 13 Felhasználhatóság... 14 Hulladékkezelés... 14 Kiömlés és tisztítás... 14 Minták levétele, szállítása és tárolása... 15 Használati utasítás Mintavétel... 15 Minták szállítása, tárolása és stabilitása... 15 A teszt futtatása... 16 Eredmények Mintafeldolgozási térfogat... 16 Futtatási mennyiség... 17 Munkafolyamat... 17 Minségellenrzés és az eredmények érvényessége... 19 Kontrolljelzk... 19 Az eredmények értelmezése... 20 Az eljárással kapcsolatos korlátozások... 21 A nem klinikai teljesítmény értékelése A fontosabb teljesítményjellemzk... 22 WHO Nemzetközi standard... 22 Doc. Rev. 2.0 2

Lineáris tartomány... 24 Pontosság laboratóriumon belül... 27 Genotípus szerinti ellenrzés... 28 Specificitás... 29 Módszerkorreláció... 32 Mátrixekvivalencia EDTA-s plazma kontra szérum... 33 Teljes rendszerhiba... 33 Keresztszennyezdés... 33 További információk A teszt legfontosabb tulajdonságai... 34 Szimbólumok... 35 Gyártó és forgalmazók... 36 Védjegyek és szabadalmak... 36 Szerzi jog... 36 Hivatkozások... 37 Dokumentumverzió... 39 Doc. Rev. 2.0 3

A felhasználás célja A cobas HCV egy in vitro nukleinsav-amplifikációs teszt a hepatitis C vírus (HCV) kimutatására és mennyiségi meghatározására HCV-vel fertzött személyek RNS-ének, humán EDTA-s plazmájában vagy szérumában. A HCV 1 6-os genotípusát tartalmazó mintákat validálták a teszttel való kimutatásra és mennyiségi meghatározásra. A teszt a következ populációkban használható a HCV-fertzés diagnózisának támogatására: HCV-antitestre igazoltan pozitív, májbetegséggel diagnosztizált betegek, a gyanú szerint aktív HCV-fertzésben szenved és HCV-antitestre igazoltan pozitív betegek és HCV-fertzésveszélynek kitett egyének HCV-antitestekkel. A HCV RNS kimutatása jelzi a vírusreplikációt, és ekképpen igazolja az aktív fertzést. A vizsgálat célja, hogy segítséget nyújtson antivirális kezelésben résztvev, HCV-fertzésben szenved betegek kezelésében. A vizsgálat a HCV RNS szintjét méri kiinduláskor, majd kezelés közben, és a HCVkezelésre adott tartós és nem tartós virológiai válasz valószínségének megítélésére használható. Az eredményeket az összes vonatkozó klinikai és laboratóriumi eredménnyel együtt kell értelmezni. A teszt összegzése és ismertetése Háttér Tudomásunk szerint a HCV a poszttranszfúziós hepatitis esetek 90-95%-áért elssorban felels kórokozó. 1 4 A HCV egyszálú, pozitív RNS-t tartalmazó vírus, amelynek genomja mintegy 3000 aminosavat kódoló megközelíten 9500 nukleotidot tartalmaz. Mint vérrel terjed vírus, a HCV vérrel és vérkészítményekkel átvihet. A vér HCV-szrvizsgálatainak széleskör bevezetése jelentsen csökkentette a transzfúzióval kapcsolatos hepatitis kockázatát. A HCV-fertzés gyakorisága az intravénás kábítószer-használattal kapcsolatosan a legnagyobb, kisebb mértékben pedig egyéb brön keresztüli kitettséggel kapcsolatosan. 4 A HCV RNS mennyiségi meghatározása a kiindulási vírusmennyiségek mérése és a kezelés monitorozása során megfelel módszernek bizonyult a peginterferon és ribavirin kombinációjával (pegifn/rbv) történ terápiára adott antivirális válasz hatékonyságának demonstrálására. 5 9 A HCV-fertzés kezelésére vonatkozó irányelvek 10,11 szerint a HCV RNS mennyiségi vizsgálata ajánlott az antivirális kezelés megkezdése eltt, adott idszakonként a kezelés során (válaszvezérelt kezelés) és 12 héttel a kezelés befejezését követen (vagy késbb). A kezelés célja, hogy ne legyen érzékeny teszttel kimutatható HCV RNS a kezelés befejezése után 12 héttel. Ez jelzi, hogy tartós virológiai választ (sustained virologic response SVR) sikerült elérni. 10 A víruskinetika kezelés során történ meghatározását az újonnan engedélyezett, közvetlen hatású antivirális szerekkel (direct-acting antiviral agents DAAs), telaprevir és boceprevir proteázinhibitorokkal végzett kezeléskor a kezelés idtartamának fokozottabb mérték személyre szabásához alkalmazták. 12 15 Doc. Rev. 2.0 4

A HCV-teszt elméleti alapjai A HCV-antitestek jelenléte arra utal, hogy az adott személy HCV-fertzött. Mindamellett magából a HCVantitestre pozitív állapotból nem lehet következtetni a fertzés akut, krónikus vagy lezajlott állapotára. A szérumban vagy plazmában kimutatott HCV RNS folyamatban lév vírusszaporodásra utal, így felhasználható a tartós HCV-fertzéssel érintett betegek kiszrésére. Mivel egyfell egyre több nagy hatékonyságú HCV-specifikus DAA áll rendelkezésre, többek között második generációs proteázinhibitorok, polimerázinhibitorok és NS5A-inhibitorok, másfell dinamikus és széleskör gyógyszeres HCV-kezeléseket fedeznek fel, a víruskoncentráció monitorozása marad a f laboratóriumi vizsgálat annak megersítésére, hogy tartós virológiai választ sikerült elérni DAA-alapú kezelésekkel. 16-21 Összefoglalva tehát a cobas HCV egy mennyiségi teszt a HCV RNS kimutatására, a fennálló fertzés diagnosztizálására és a víruskinetika meghatározására mind a klinikai vizsgálatokat végz, mind a HCVbetegek rutin orvosi ellátását támogató laboratóriumokban. A vizsgálat háttere A cobas HCV a cobas 4800 rendszeren végzett mennyiségi nukleinsavteszt. A cobas HCV lehetvé teszi a HCV RNS kimutatását és mennyiségi meghatározását fertzött betegek EDTA-s plazmájában vagy szérumában. A rendszer ketts jelölés próbákkal végzi a kimutatást és mennyiségi meghatározást, de nem különbözteti meg a HCV 1 6-os genotípusait. A teszt a víruskoncentrációt egy HCV ellen ( Armored technológiával) nem felvértezett RNS mennyiségi standardhoz (RNA QS) képest méri, amelyet az egyes mintákhoz kell adni a minta-elkészítés során. Az RNA QS egyben bels kontrollként is mködik a teljes minta-elkészítés és PCR-amplifikálás monitorozására. Ezen felül a teszt három küls kontrollt használ: egy magas titer pozitívot, egy alacsony titer pozitívot és egy negatívot. Az eljárás alapelvei A cobas HCV teljesen automatizált minta-elkészítésen (nukleinsav-extrahálás és -tisztítás) alapul, amelyet PCR-amplifikálás és -kimutatás követ. A cobas 4800 rendszer a cobas x 480 készülékbl és a cobas z 480 analizátorból áll. Az automatizált adatkezelést a cobas 4800 szoftver végzi, amely az összes teszthez a következ eredmények egyikét rendeli: target not detected (nem kimutatható target), < LLoQ (alsó mennyiségi meghatározási határ), > ULoQ (fels mennyiségi meghatározási határ) vagy HCV RNA detected (HCV RNS kimutatható), egy érték a LLoQ ULoQ lineáris tartományban. Az eredményeket át lehet tekinteni közvetlenül a rendszer képernyjén, de exportálhatók vagy jelentésként nyomtathatók is. A rendszer a betegek mintáiból származó nukleinsavakat, küls kontrollokat és hozzáadott Armored RNA QS molekulákat egyszerre extrahálja. Összegezve, a mintába proteináz és lízisreagens kerül, és ennek hatására a vírus nukleinsavai felszabadulnak. A felszabadult nukleinsavak a hozzáadott mágneses üvegpartikulumok szilikonfelületéhez kötnek. A kötetlen anyagokat és szennyezdéseket, például a denaturált fehérjéket, sejttörmeléket és lehetséges PCR-inhibitorokat az ezt követ mosópufferes lépések eltávolítják, és egy eluáló puffer magasabb hmérsékleten eluálja a tisztított nukleinsavakat a mágneses üvegpartikulumokról. A teszt a betegtl vett mintában a célnukleinsavak szelektív amplifikálását a célvírusra specifikus forward és reverz primerekkel éri el, amelyeket a HCV nagy fokban konzervált régióiból választ. Az RNA QS szelektív amplifikálását a teszt szekvenciaspecifikus forward és reverz primerekkel éri el, amelyeket úgy választ, hogy ne legyenek homológok a HCV genomjával. A teszt mind a reverz transzkripcióhoz, mind a PCRamplifikáláshoz hstabil DNS-polimerázt használ. A Master Mix munkareagensek dezoxitimidin-trifoszfát (dttp) helyett dezoxiuridin-trifoszfátot (dutp) tartalmaznak, amely beépül az újonnan szintetizált DNS-be (amplikon). 22 24 A PCR els denaturálási lépése eltt a Master Mix reagensekben lév AmpErase az elz PCR-futtatásokból származó minden szennyez amplikont PCR-templátként inaktivál. Az AmpErase Doc. Rev. 2.0 5

katalizátorként szerepel az uracil DNS-bl eltávolításában, de nem hat az RNS-re vagy a természetes DNS-re, amelyek nem tartalmaznak uracilt. A PCR ezt követ ciklusaiban kialakuló amplikon nem inaktiválódik, mert az AmpErase a PCR annealing és denaturálási fázisában inaktív. A cobas HCV Master Mix a HCV-targetszekvenciákra specifikus ketts jelölés próbákat tartalmaz, valamint egy próbát az RNA QS-hez. A próbákat fluoreszcens targetspecifikus jelzfestékek jelölik, ami lehetvé teszi a HCV-target és az RNA QS egyszerre történ kimutatását két különböz kimutatási csatornán. 25,26 Amikor az érintetlen próba fluoreszcens jelei nem kötdnek a targetszekvenciához, azokat egy blokkolófesték elnyomja. A PCR-amplifikálás minden egyes lépése során a próbák a specifikus, egyszálú DNS-templáthoz hibridizálnak. Ennek eredményeként a próbát a DNS-polimeráz 5' 3'-nukleázaktivitása hasítja, így a jelzfesték és a blokkolófesték elválik, és fluoreszcens jel keletkezik. Minden PCR-ciklus során megn a hasított próbák mennyisége, és így növekszik a jelzfestékbl származó összesített jel is. A PCR-termékek valós idej kimutatása és megkülönböztetése a felszabadult, vírustargeteket és RNA QS-t reprezentáló jelzfestékek fluoreszcencenciájának mérésével megy végbe. Anyagok és reagensek Reagensek Minden felbontatlan reagenst és kontrollt A reagensek tárolási és kezelési feltételei táblázat ajánlásai szerint tároljon. Készlet Összetevk és reagensek Készletenkénti mennyiség Biztonsági jelzés és figyelmeztetés a MMX R1 (cobas Master Mix reagens 1) Mangán-acetát, kálium-hidroxid, < 0,1% nátrium-azid 10 1,75 ml N/A HCV MMX R2 (cobas HCV Master Mix reagens 2) N/A cobas HCV 120 teszt (P/N: 06979602190) Tricin puffer, kálium-acetát, 18% dimetilszulfoxid, glicerin, < 0,1% Tween 20, EDTA, < 0,12% datp, dctp, dgtp, dutp, < 0,01% HCV-primerek, < 0,01% Quantitation Standard (mennyiségi standard) forward és reverz primer, < 0,01% fluoreszcensen jelölt, a HCV-re és a mennyiségi standardra specifikus oligonukleotid-próbák, < 0,01% oligonukleotid aptamer, < 0,01% Z05D DNSpolimeráz (mikrobiális), < 0,01% AmpErase (uracil-n-glikoziláz) enzim (mikrobiális), < 0,1% nátrium-azid 10 0,5 ml Doc. Rev. 2.0 6

Készlet Összetevk és reagensek Készletenkénti mennyiség Biztonsági jelzés és figyelmeztetés a RNA QS N/A (cobas RNA mennyiségi standard) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, < 0,001% nem HCV-hez kapcsolódó Armored RNSkonstrukció primer és próbaspecifikus szekvenciarégiókkal (nem fertz RNS MS2 bakteriofágban), < 0,1% nátrium-azid 10 1,75 ml HBV/HCV/HIV-1 L(+)C (cobas HBV/HCV/HIV-1 alacsony pozitív kontroll) cobas HBV/HCV/HIV-1 Control Kit 10 készlet (P/N: 06979572190) < 0,001% szintetikus (Armored) HIV-1 M csoport RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (plazmid) HBV DNS Lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (Armored) HCV RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, normál humán plazma, engedélyezett vizsgálatok alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; a HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS nem mutatható ki PCR-eljárásokkal. 0,1% ProClin 300 tartósítószer HBV/HCV/HIV-1 H(+)C (cobas HBV/HCV/HIV-1 magas pozitív kontroll) < 0,001% szintetikus (Armored) HIV-1 M csoport RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (plazmid) HBV DNS Lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, < 0,001% szintetikus (Armored) HCV RNS MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva, normál humán plazma, engedélyezett vizsgálatok alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; a HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS nem mutatható ki PCR-eljárásokkal. 0,1% ProClin 300 tartósítószer 10 0,75 ml 10 0,75 ml Figyelem H317 Allergiás brreakciót válthat ki. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/gzök/ permet belélegzését. P272 Szennyezett munkaruhát tilos kivinni a munkahely területérl. P280 Védkeszty használata kötelez. P333 + P313 Brirritáció vagy kiütések megjelenése esetén: orvosi ellátást kell kérni. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat eltt ki kell mosni. P501 A tartalom/edény elhelyezése hulladékként: jóváhagyott hulladékkezelési üzemben. 55965-84-9 keverék: 5-klór-2-metil- 4-izotiazolin-3-on [EC 247-500-7] és 2-metil-2H-izotiazol-3-on [EC 220-239-6] (3:1) ( ) C (cobas negatív kontroll 2) Normál humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HIV 1/2, HCV-, HBsAg-, valamint HBc-antitestre; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-eljárásokkal nem mutatható ki < 0,1% ProClin 300 tartósítószer 10 0,75 ml Doc. Rev. 2.0 7

Készlet Összetevk és reagensek Készletenkénti mennyiség Biztonsági jelzés és figyelmeztetés a cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 240 teszt (P/N: 06979513190) cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 960 teszt (P/N: 06979521190) cobas 4800 System Wash Buffer Kit 240 teszt (P/N: 05235863190) cobas 4800 System Wash Buffer Kit 960 teszt (P/N: 05235871190) cobas 4800 System Specimen Diluent 2 240 teszt (P/N: 06979556190) MGP 2 (cobas 4800 MGP reagens 2) Mágneses üvegpartikulumok, trisz puffer, 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid EB 2 (cobas 4800 eluáló puffer 2) Trisz puffer, 0,2% metil-4-hidroxi-benzoát MGP 2 (cobas 4800 MGP reagens 2) Mágneses üvegpartikulumok, trisz puffer, 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid EB 2 (cobas 4800 eluáló puffer 2) Trisz puffer, 0,2% metil-4-hidroxi-benzoát WB Nátrium-citrát-dihidrát, 0,05% N-metilizotiazolon-HCl WB Nátrium-citrát-dihidrát, 0,05% N-metilizotiazolon-HCl SD 2 Trisz puffer, 0,1% metil-4-hidroxibenzoát, < 0,1% nátrium-azid 10 8 ml 10 17 ml 10 16 ml 10 17 ml 10 55 ml 10 200 ml 10 8 ml N/A N/A N/A N/A N/A Doc. Rev. 2.0 8

Készlet Összetevk és reagensek Készletenkénti mennyiség Biztonsági jelzés és figyelmeztetés a Veszély P 2 (cobas 4800 proteáz 2) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, kalcium-klorid, kalcium-acetát, 8% (m/v) proteináz 10 1,0 ml H302+H332 Lenyelve vagy belélegezve ártalmas. H315 Brirritáló hatású. H318 Súlyos szemkárosodást okoz. H334 Belélegezve allergiás és asztmás tüneteket, és nehéz légzést okozhat. H412 Ártalmas a vízi élvilágra, hosszan tartó károsodást okoz. cobas 4800 System Lysis Kit 2 240 teszt (P/N: 06979530190) EUH032 Savval érintkezve nagyon mérgez gázok képzdnek. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/gzök/ permet belélegzését. P280 Védkeszty/szemvéd/arcvéd használata kötelez. P284 Légzésvédelem használata kötelez. LYS 2 (cobas 4800 lízispuffer 2) 43% (m/v) guanidin-tiocianát, 5% (m/v) polidokanol, 2% (m/v) ditiotreitol, nátrium-citrát-dihidrát 10 27 ml P305 + P351 + P338 + P310: SZEMBE KERÜLÉS ESETÉN: Több percig tartó óvatos öblítés vízzel. Adott esetben a kontaktlencsék eltávolítása, ha könnyen megoldható. Az öblítés folytatása. Azonnal forduljon TOXIKO- LÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P342 + P311 Légzési problémák esetén: Forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat eltt ki kell mosni. Doc. Rev. 2.0 9

Készlet Összetevk és reagensek Tesztenként i mennyiség Biztonsági jelzés és figyelmeztetésa cobas 4800 System Lysis Kit 2 960 teszt (P/N: 06979548190) a P 2 (cobas 4800 proteáz 2) Trisz puffer, < 0,05% EDTA, kalcium-klorid, kalcium-acetát, 8% (m/v) proteináz LYS 2 (cobas 4800 lízispuffer 2) 43% (m/v) guanidin-tiocianát, 5% (m/v) polidokanol, 2% (m/v) ditiotreitol, nátrium-citrát-dihidrát A termék biztonsági címkéi megfelelnek az EU GHS elírásainak. 10 1,0 ml 10 84 ml Veszély H302+H332 Lenyelve vagy belélegezve ártalmas. H315 Brirritáló hatású. H318 Súlyos szemkárosodást okoz. H334 Belélegezve allergiás és asztmás tüneteket, és nehéz légzést okozhat. H412 Ártalmas a vízi élvilágra, hosszan tartó károsodást okoz. EUH032 Savval érintkezve nagyon mérgez gázok képzdnek. P261 Kerülje a por/füst/gáz/köd/gzök/ permet belélegzését. P280 Védkeszty/szemvéd/arcvéd használata kötelez. P284 Légzésvédelem használata kötelez. P305 + P351 + P338 + P310: SZEMBE KERÜLÉS ESETÉN: Több percig tartó óvatos öblítés vízzel. Adott esetben a kontaktlencsék eltávolítása, ha könnyen megoldható. Az öblítés folytatása. Azonnal forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P342 + P311 Légzési problémák esetén: Forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. P362 + P364 A szennyezett ruhát le kell vetni és az újbóli használat eltt ki kell mosni. Doc. Rev. 2.0 10

A reagensek tárolási és kezelési feltételei Reagens Tárolási hmérséklet Tárolási id cobas HCV 2 8 C A jelölt lejárati dátumig stabil cobas HBV/HCV/HIV-1 Control Kit 2 8 C A jelölt lejárati dátumig stabil cobas 4800 System Sample Preparation Kit 2 2 8 C A jelölt lejárati dátumig stabil cobas 4800 System Wash Buffer Kit 15 25 C A jelölt lejárati dátumig stabil cobas 4800 System Specimen Diluent 2 2 8 C A jelölt lejárati dátumig stabil cobas 4800 System Lysis Kit 2 2 8 C A jelölt lejárati dátumig stabil Ne fagyassza le a reagenseket. További szükséges anyagok Anyagok cobas 4800 rendszer kivonási (mély lyukú) lemeze, 2,0 ml 06884008001 cobas 4800 rendszer AD (kislyukú) lemeze, 0,3 ml 05232724001 Zárófólia-felhelyez 04900383001 CORE hegyek, 1000 µl, 96-os állványban 04639642001 200 ml-es reagenstároló 05232759001 50 ml-es reagenstároló 05232732001 24-pozíciós hordozó 04639502001 32-pozíciós hordozó 04639529001 Szilárdhulladék-zacskó Hamilton STAR manyag csúsztató 04639669001 Egyszer használatos kesztyk, púdermentes Vortex kever (egycsöves) Centrifuga, kilendül fejes rotorral, minimum 1500 RCF P/N 05530873001 (kicsi) vagy 04691989001 (nagy) Bármely púdermentes egyszer használatos keszty elfogadható. Bármely vortexkever elfogadható. Bármely megfelel centrifuga elfogadható. A külön beszerezhet anyagokkal kapcsolatos további információkért forduljon a Roche helyi képviseljéhez. Doc. Rev. 2.0 11

Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek Szükséges, de nem biztosított eszközök és szoftverek cobas 4800 rendszer cobas x 480 készülék cobas z 480 analizátor Vezérlegység cobas 4800 System Application Software (Core) 2.1.0-ás vagy újabb verzió cobas 4800 System cobas HCV AP 1.0.0-ás vagy újabb verzió A készülékeken használható elsdleges és másodlagos mintacsövekkel kapcsolatos további információkat a cobas 4800 rendszer kézikönyve 2.1-es vagy újabb szoftver, cobas HCV a cobas 4800 rendszerrel való használattal (innentl röviden: cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez ) cím kiadványban találja. Megjegyzés: A készülékekkel használható mintaállványok, hegyállványok, reagensállványok és lemezhordozók részletes megrendellistájáért forduljon a Roche helyi képviseljéhez. Óvintézkedések és kezelési követelmények Figyelmeztetések és óvintézkedések Mint minden teszteljárásnál, a helyes laboratóriumi gyakorlat alapvet a teszt megfelel kivitelezéséhez. A vizsgálat nagy analitikai érzékenysége miatt ügyeljen arra, hogy a reagensek, minták és amplifikálási keverékek szennyezdéstl mentesek maradjanak. Csak in vitro diagnosztikai célra. A cobas HCV tesztet nem értékelték ki HCV szrtesztként vérben vagy vérkészítményekben. Minden betegtl származó mintát fertzként, megfelel biztonságos laboratóriumi eljárásokat alkalmazva kell kezelni. Ilyeneket ír le például a Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories és a CLSI Document M29-A4. 27,28 Ezt a vizsgálatot csak a fertz anyagok kezelésében és a cobas HCV és cobas 4800 rendszer használatában jártas személy végezheti. Minden humán eredet anyagot potenciálisan fertznek kell tekinteni, és az általános óvintézkedések szerint kezelni. A cobas HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlet emberi vérbl származó plazmát tartalmaz. A forrásanyagot engedélyezett antitest-vizsgálattal tesztelték, és nem bizonyult reaktívnak HCV-, HIV-1/2, HBsAg- és HBc-antitest jelenlétére. A PCR-eljárásokkal történ tesztelés során HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS vagy HBV DNS nem volt kimutatható. Egyetlen ismert vizsgálati módszer sem nyújthat teljes garanciát arra, hogy a humán vérkészítményekben nincs jelen fertz anyag. Ügyeljen rá, hogy a mágneses üvegpartikulumok ne kerüljenek mágneses mezk közelébe. Ne fagyassza a teljes vért és az elsdleges csövekben tárolt mintákat. Az optimális vizsgálati feltételek biztosítása érdekében csak a szállított vagy a megadott szükséges fogyóeszközöket alkalmazza. A biztonsági adatlapok (SDS) igény esetén hozzáférhetek a Roche helyi irodájában. Doc. Rev. 2.0 12

cobas HCV A vizsgálat helyes kivitelezésének biztosítása végett szigorúan tartsa be a megadott eljárásokat és irányelveket. A megadott eljárásoktól és irányelvektl való bármilyen eltérés befolyásolhatja a vizsgálat teljesítményét. Álpozitív eredmények fordulhatnak el, ha a minták átvitelét a mintakezelés és -feldolgozás során nem kontrollálják megfelelen. A cobas x 480 készülék, illetve cobas z 480 analizátor fertzési kockázatának csökkentésére vonatkozó további figyelmeztetéseket, óvintézkedéseket és eljárásokat a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban találja. Ha felmerül a szennyezdés gyanúja, végezzen tisztítást és heti karbantartást a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez és a cobas 4800 rendszer kézikönyve szerint. Megjegyzés: A konkrét utasításokat a Minták levétele, szállítása és tárolása cím részben találja. Helyes laboratóriumi gyakorlat Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a laboratórium területén. Alaposan mosson kezet a minták és a készlet reagenseinek kezelése és kesztylevétel után. Viseljen szemvédt, védruhát és egyszer használatos védkesztyt minden reagens kezelése közben. Ezen anyagok brrel, szemmel és nyálkahártyával való érintkezése kerülend. Ha mégis érintkezésbe kerülnek, azonnal öblítse le b vízzel. Ellenkez esetben égés jelentkezhet. A reagenseket kiömlés esetén szárazra törlés eltt hígítsa vízzel. Gondosan tisztítson meg, és desztillált vagy ioncserélt vízbl frissen készített 0,5%-os nátriumhipoklorit oldattal (1:10 arányban hígított háztartási fehérítszer) ferttlenítsen minden laboratóriumi munkafelületet. Ezután törölje át 70%-os etanollal a felületet. Reagensek kezelése A minták és kontrollok átvitelének elkerülése érdekében minden reagenst, kontrollt és mintát a helyes laboratóriumi gyakorlat szerint kezeljen. Felhasználás eltt szemrevételezzen minden reagensüveget és csövet, hogy nem tapasztal-e szivárgásra utaló jeleket. Szivárgás esetén azt az anyagot ne használja fel a vizsgálathoz. A cobas 4800 lízispuffer 2 guanidin-tiocianátot tartalmaz, ami potenciálisan veszélyes vegyület. Kerülje a reagensek brrel, szemmel vagy nyálkahártyával való érintkezését. Ha mégis elfordul érintkezés, azonnal mossa le b vízzel, mert ellenkez esetben égés történhet. A cobas HCV, cobas 4800 minta-elkészít készlet 2 és a cobas 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldata tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaz. Kerülje a reagensek brrel, szemmel vagy nyálkahártyával való érintkezését. Ha mégis elfordul érintkezés, azonnal mossa le b vízzel, mert ellenkez esetben égés történhet. Ha a reagensek kiömlenek, szárazra törlés eltt hígítsa ket vízzel. Ügyeljen rá, hogy a guanidin-tiocianát tartalmú cobas 4800 lízispuffer 2 ne lépjen érintkezésbe nátrium-hipoklorit-oldattal (fehérít). Az ilyen keverékbl ersen mérgez gáz fejldhet. Szennyezdés Viseljen kesztyt, és a minták, valamint a cobas HCV-reagensek kezelése között váltson kesztyt. A minták és kontrollok kezelése során ügyeljen a kesztyk szennyezésének elkerülésére. A minták és a készlet reagenseinek kezelése közben viseljen kesztyt, köpenyt és szemvédt. Kerülje a reagensek mikrobiális és ribonukleáz-szennyezését. Álpozitív eredmények fordulhatnak el, ha a mintakezelés során nem ügyel a minták átvitelének elkerülésére. Doc. Rev. 2.0 13

Felhasználhatóság Ne használja a készleteket a lejárati id után. Ne öntse össze a reagenseket. Ne használjon egyszer használatos anyagokat a lejárati id után. Az egyszer használatos anyagokat csak egyszer szabad felhasználni. Ne használja újra azokat. Valamennyi felszerelést a gyártó utasításai szerint megfelelen karban kell tartani. Hulladékkezelés A cobas HCV, cobas 4800 minta-elkészít készlet 2 és a cobas 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldata nátrium-azidot tartalmaz (lásd: Figyelmeztetések és óvintézkedések ). A nátrium-azid az ólom- és rézcsövekkel reakcióba lépve ersen robbanékony fém-azidokat képezhet. Amikor nátriumazid tartalmú oldatot önt ki a laboratóriumi mosogatóba, az azidlerakódás megakadályozása céljából nagy mennyiség hideg vízzel öblítse le a lefolyót. A fel nem használt reagensek és hulladék kezelésének összhangban kell lennie a megfelel országos, szövetségi, állami és helyi szabályozásokkal. Megjegyzés: A folyékony hulladék megfelel hulladékkezelésének leírását a megfelel cobas 4800 rendszer felhasználói kézikönyvében találja. Kiömlés és tisztítás A cobas 4800 lízispuffer 2 guanidin-tiocianátot tartalmaz. Ha guanidin-tiocianátot tartalmazó folyadék ömlik ki, megfelel laboratóriumi tisztítószerrel és vízzel tisztítsa fel. Ha potenciálisan fertz anyagot tartalmazó folyadék ömlik ki, ELSZÖR laboratóriumi tisztítószerrel és vízzel, majd 0,5%-os nátriumhipoklorit oldattal tisztítsa meg az érintett területet. Ha a cobas x 480 készülékre folyadék ömlik, a készüléket a megfelel cobas 4800 rendszer kézikönyvének utasításai alapján tisztítsa meg. Ne használjon nátrium-hipoklorit oldatot (fehérítszert) a cobas x 480 készülék vagy a cobas z 480 analizátor tisztításához. A cobas x 480 készüléket vagy a cobas z 480 analizátort a megfelel cobas 4800 rendszer kézikönyvének utasításai szerint tisztítsa meg. Doc. Rev. 2.0 14

Minták levétele, szállítása és tárolása Megjegyzés: Valamennyi mintát fertz ágensek átvitelére alkalmasként kell kezelni. Mintavétel Az összes mintát az elírt hmérséklettartományban tárolja. A minták stabilitását a magasabb hmérséklet befolyásolja. Ha a másodlagos csövekben fagyasztott mintákat használ, tartsa ket szobahmérsékleten (15 30 C), amíg teljesen ki nem olvadnak, majd rövid ideg keverje (pl. 3 5 másodpercig vortexelje) és utána centrifugálja, hogy a minta teljes térfogata a cs aljára kerüljön. A vért SST szérumvételez csövekbe, molekulárdiagnosztikai tesztmódszerekhez való BD Vacutainer PPT plazma-elkészít csövekbe vagy EDTA véralvadásgátlót tartalmazó steril csövekbe vegye le. Megjegyzés: A felhasználó a szérum vagy plazma elkészítése során mindig kövesse a csövek gyártójának utasításait. Minták szállítása, tárolása és stabilitása A SST szérumvételez csövekbe, molekulárdiagnosztikai tesztmódszerekhez való BD Vacutainer PPT plazma-elkészít csövekbe vagy EDTA véralvadásgátlót tartalmazó steril csövekbe vett teljes vért 24 órán belül 2 C és 25 C között lehet tárolni és/vagy szállítani a plazma- vagy szérumelkészítés és az azt követ vizsgálat eltt. A plazma- vagy szérummintákat a másodlagos csövekben legfeljebb 24 órán át 2 C és 25 C között, legfeljebb 72 órán át 2 C és 8 C között vagy legfeljebb 6 héten át 18 C hmérsékleten lehet tárolni. Az elválasztott plazma- vagy szérumminták a másodlagos csövekben 18 C hmérsékleten történ tárolás esetén legfeljebb három fagyasztás olvasztás ciklusban maradnak stabilak fagyasztva. Ha a mintákat szállítani kell, a minták és kórokozó anyagok szállítására vonatkozó országos és/vagy nemzetközi elírásoknak megfelelen kell csomagolni és címkézni. Doc. Rev. 2.0 15

Használati utasítás A teszt futtatása Mintafeldolgozási térfogat A cobas HCV alapértelmezett mintafeldolgozási térfogata 400 µl. Kis térfogatú minták esetén választható a 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat. Csak ebben az esetben a cobas 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldatát további reagensként a rendszerbe kell tölteni. A felhasználót a szoftver varázslója erre felszólítja, ha a munkasorrend létrehozásakor a Diluted serum or plasma (oldott szérum vagy plazma) lehetséget választotta. 1. ábra: A cobas HCV munkafolyamat 1 A rendszer indítása 2 A készülék karbantartásának elvégzése 3 A tárolt minták és reagensek elvétele 4 A futtatás indítása 5 A paraméterkártyák olvasása 6 A minták betöltése 7 LIS esetén: a munkasorrend jóváhagyása LIS nélkül: a munkasorrend létrehozása 8 A fogyóeszközök (mély lyukú lemez, mikrolemez, hegyállványok) betöltése 9 A reagensek betöltése 10 A minta-elkészítési futtatás indítása 11 A mikrolemez eltávolítása és lezárása 12 A mikrolemez analizátorba helyezése 13 A minták, használt reagensek és mély lyukú lemez eltávolítása 14 Az eredmények áttekintése 15 LIS esetén: az eredmények LIS-be küldése 16 Az eszközök és anyagok kivétele az analizátorból Megjegyzés: A részletes használati utasításokat a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban találja. Doc. Rev. 2.0 16

Futtatási mennyiség A generikus minta-elkészítési reagensek (cobas 4800 rendszer minta-elkészít készlet 2, cobas 4800 rendszer líziskészlet 2 és cobas 4800 rendszer mosófolyadék-készlet) kétféle méret készletben érhetk el. Mindkett 10 futtatásra alkalmas, egyszerre legfeljebb 24, illetve 96 mintával, amibe beletartoznak a futtatandó kontrollok és minták. A cobas HCV egyféle méret készletben érhet el, és legfeljebb 120 (10 12) minta tesztelésére alkalmas (beleértve a kontrollokat és mintákat is). A cobas HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlet egyféle méret készletben érhet el, és támogatja az összes lehetséges futtatási konfigurációt. Minden mintacsoporthoz egy HBV/HCV/HIV-1 alacsony pozitív kontrollt, egy HBV/HCV/HIV-1 magas pozitív kontrollt és egy negatív kontrollt kell használni. Egy tesztfuttatásban legfeljebb 93 minta és 3 kontroll megengedett. A teszteljárást részletes ismertetését a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez tartalmazza. A(z) 1. ábra összefoglalja az eljárást. Megjegyzés: A reagensek optimális felhasználása érdekében a generikus minta-elkészítési reagenseket összesen 1 21 mintát tartalmazó futtatáshoz lehet használni (10 24-es tesztkészlet-méret) vagy összesen 1 93 mintához (10 96-os tesztkészlet-méret). A cobas 4800 rendszer mosófolyadék-készlet, a cobas 4800 rendszer minta-elkészít készlet 2 és a cobas 4800 rendszer líziskészlet 2 különböz méretei azonban nem kombinálhatók. Ha például a futtatás kezdetén a 96-tesztes mosópuffer reagensüvegét olvassa be, a többi minta-elkészítési reagenskészletbl is 96 teszthez való reagenseket használjon. Munkafolyamat A cobas HCV teszt kivitelezése a cobas 4800 szoftver teljes munkafolyamatának használatával történik. Ez minta-elkészítési lépésbl áll a cobas x 480 készüléken, amit amplifikálási/kimutatási lépés követ a cobas z 480 analizátoron. A futtatás lehet csak HCV vagy vegyes mintacsoport olyan tesztekkel, amelyek ugyanazt az automatizált mintaextrahálási eljárást és PCR-profilt igénylik az amplifikáláshoz és kimutatáshoz. A szoftver tesztkiválasztó lépésében megjelennek azok a tesztek, amelyek alkalmasak a cobas HCV teszttel együtt történ futtatásra. A részleteket a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban találja. 1. Végezze el a rendszer indítását és karbantartását a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCVhez cím kiadvány A készülék karbantartása cím részében leírtak szerint. 2. Készítse ki az összes szükséges reagenst és fogyóeszközt. A HCV MMX R2 és MMX R1 kivételével a cobas x 480 készülékbe történ betöltés eltt minden reagensnek szoba-hmérsékletnek kell lennie. A HCV MMX R2 és MMX R1 reagenst a 2 8 C-os tárolásból közvetlenül is kiveheti, mert a folyamatban való felhasználásuk eltt a cobas x 480 készülékben töltött id alatt felveszik a szobahmérsékletet. Megjegyzés: Minden reagens és reagenstároló vonalkóddal van ellátva, és egyszeri használatra tervezve. A cobas 4800 szoftver nyomon követi a reagensek és reagenstárolók felhasználását, és nem fogadja el a korábban már használt reagenseket és reagenstárolókat. 3. Indítson új futtatást, és válassza a HCV munkafolyamat-típust. Háromféleképpen hozhat létre munkasorrendet: A mintaszerkeszt használatával, mieltt a mintaállványt a cobas x 480 készülékbe helyezi ( Editor gomb a fmenü jobb oldalán). A munkasorrendeket szükség szerint mentheti, szerkesztheti és újratöltheti. Doc. Rev. 2.0 17

A szoftvervarázsló új futtatáshoz történ használatával. Ebben az esetben a mintákat akkor tölti be a cobas x 480 készülékbe, amikor a varázsló erre felszólítja. A rendszer automatikusan beolvassa a minták vonalkódjait, és minden mintához meg kell határozni a kért eredményeket. Az intézmény LIS-rendszerének használatával. A további részleteket a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban találja. A kért eredmények kiválasztásakor jelölje be a HCV lehetséget. 4. Töltse be a mintákat, és határozzon meg vagy válasszon egy munkasorrendet, illetve használja a LIS-t. A minimális mintatérfogat a cs típusától és méretétl függ. A további részleteket a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban találja. 5. Kövesse a szoftvervarázsló utasításait, és töltse be a fogyóeszközöket. Ne töltsön be vagy távolítson el külön hegyeket részben használt hegyállványra vagy hegyállványról, mivel a szoftver nyomon követi a fennmaradó hegyek számát. Ha nincs elég hegy az adott futtatáshoz, a szoftver figyelmezteti a felhasználót. 6. Töltse be a minta-elkészítési reagenseket a vonalkóddal ellátott reagenstárolókba. A reagenstárolók két méretben állnak rendelkezésre: 200 ml és 50 ml. Kövesse a szoftvervarázslót a reagenstárolók megfelel méretének kiválasztásához. A reagenstároló vonalkódja a hordozó jobb oldala felé kell, hogy nézzen. Beolvas-beolvas-beönt-behelyez módszerrel töltse be a minta-elkészítési reagenseket: Olvassa be a reagensüveg vonalkódját. Olvassa be a reagenstároló vonalkódját. Öntse be a reagenst a tárolóba. Helyezze be a feltöltött reagenstárolót a reagenshordozó megfelel pozíciójába. Megjegyzés: A cobas 4800 rendszer bels órával méri a reagensek készülékben töltött idejét. A LYS 2 vagy WB reagens beolvasásától számítva 1 óra áll rendelkezésre a betöltési eljárás elvégzésére és a Start gomb megnyomására. A Workplace lapon visszaszámláló jelenik meg. A rendszer a bels idkorlát letelte után nem engedi a futtatás indítását. Megjegyzés: Az MGP pontos átvitelének érdekében közvetlenül a reagenstárolóba mérés eltt vortexelje vagy alaposan rázza fel az MGP-reagenscsövet. 7. Töltse be az amplifikálási/kimutatási reagenscsöveket (HCV MMX R2, MMX R1 és RNA QS), a kontrollcsöveket [HBV/HCV/HIV-1 L(+)C, HBV/HCV/HIV-1 H(+)C és ( ) C] és a generikus reagenscsöveket (P2 és SD2, szükség szerint) közvetlenül a reagenshordozóba. A futtatás felesleges megszakítása és a szennyezdés megelzése érdekében pöccintse meg a reagenscsöveket, hogy ne képzdjenek buborékok vagy folyadékfilmek, és a pozitív kontrollok kezelése után váltson kesztyt. 8. A sikeres minta-elkészítési futtatás után mködképes lesz a Sample Preparation results (mintaelkészítés eredményei) és az Unload (eltávolítás) gomb. Ha kívánja, a Sample Preparation results gomb kiválasztásával áttekintheti az eredményeket, majd válassza ki az Unload gombot a lemezhordozók eltávolításához. Az eredmények áttekintése nélkül is eltávolíthatja a lemezhordozót, ha kiválasztja az Unload gombot. További információkat a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban talál. 9. Kislyukú lemez lezárása és a lemez cobas z 480 analizátorba vitele, valamint az amplifikálási és kimutatási futtatás indítása során kövesse a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadvány utasításait. Doc. Rev. 2.0 18

Megjegyzés: A cobas 4800 rendszer bels órával méri az elkészített minták aktivált Master Mix reagenshez adása óta eltelt idt. Az amplifikálást és kimutatást minél hamarabb, de nem késbb mint 40 perccel a cobas x 480 készülék futásának befejezése után meg kell kezdeni. A Workplace lapon visszaszámláló jelenik meg. A rendszer a visszaszámláló lejárta után megszakítja a futtatást. 10. Miután egy amplifikálási és detektálási futás befejezdött, távolítsa el a kislyukú lemezt a cobas z 480 analizátorból. 11. Az eredmények áttekintése és elfogadása során kövesse a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadvány utasításait. Eredmények A cobas 4800 rendszer automatikusan meghatározza a minták és kontrollok HCV RNS koncentrációját. A HCV RNS koncentráció mértékegysége a milliliterenkénti nemzetközi egység (IU/ml). Minségellenrzés és az eredmények érvényessége Minden feldolgozott mintacsoportba tartozik egy negatív kontroll ( ) C és két pozitív kontroll, egy alacsony pozitív kontroll HBV/HCV/HIV-1 L(+)C és egy magas pozitív kontroll HBV/HCV/HIV-1 H(+)C. A cobas 4800 szoftverben és/vagy jelentésben ellenrizze, hogy a csoport érvényes-e. A cobas 4800 automatikusan érvényteleníti az eredményeket a negatív és pozitív kontrollok helytelen jelzi alapján. Kontrolljelzk 1. táblázat: A negatív és pozitív kontrollok kontrolljelzi Negatív kontroll Jelz azonosítója Eredmény Magyarázat ( ) C R4803, R4804 (A kontrollcsoport sikertelen) Invalid Érvénytelen eredmény, vagy a negatív kontroll számított titereredménye nem negatív. Pozitív kontroll Jelz azonosítója Eredmény Magyarázat HBV/HCV/HIV-1 L(+)C R4803, R4804 (A kontrollcsoport sikertelen) Invalid Érvénytelen eredmény vagy az alacsony pozitív kontroll számított titer eredménye nem esik a megadott tartományba. HBV/HCV/HIV-1 H(+)C R4803, R4804 (A kontrollcsoport sikertelen) Invalid Érvénytelen eredmény vagy a magas pozitív kontroll számított titer eredménye nem esik a megadott tartományba. Ha a mintacsoport érvénytelen, ismételje meg az egész csoport (mind a minták, mind a kontrollok) tesztelését. Doc. Rev. 2.0 19

Az eredmények értelmezése Megjegyzés: Minden vizsgálat és mintacsoport érvényességét a cobas 4800 szoftver határozza meg. Megjegyzés: Egy érvényes csoport érvényes és érvénytelen mintaeredményeket is tartalmazhat. A szoftver az érvényes csoporthoz a minták eredményeit a 2. táblázat szerint értelmezi. 2. táblázat: Az egyes céleredmények értelmezése cobas HCV Target Not Detected < Titer Min Titer > Titer Max a a Nincs kimutatott HCV RNS. Eredményjelentés és -értékelés Az eredmény a jelentésben HCV not detected (nincs kimutatható HCV). A számított titer a vizsgálat alsó mennyiségi meghatározási határa (LLoQ) alatt van. Az eredmény a jelentésben HCV detected, less than (Titer Min) (a kimutatott HCV titere nem éri el a minimális értéket). Titer min = 1,50E+01 IU/ml (400 µl) Titer min = 2,50E+01 IU/ml (200 µl) A számított titer a teszt lineáris tartományába esik: legalább Titer Min, és legfeljebb Titer Max. Az eredmény a jelentésben: (Titer) of HCV detected (adott titer HCV mutatható ki). A számított titer a vizsgálat fels mennyiségi meghatározási határa (ULoQ) fölött van. Az eredmény a jelentésben HCV detected, greater than (Titer Max) (a kimutatott HCV titere meghaladja a maximális értéket). Titer max = 1,00E+08 IU/ml (400 µl és 200 µl) A minta eredménye > Titer Max olyan kimutatott HCV-pozitív titert jelent, ami meghaladja a fels mennyiségi meghatározási határt (ULoQ). Ha mennyiségi eredményekre van szükség, az eredeti mintát hígítsa HCV-negatív EDTA-s plazmával vagy szérummal az eredeti minta típusa szerint, és ismételje meg a tesztet. Szorozza meg a mért eredményt a hígítási faktorral. Doc. Rev. 2.0 20

Az eljárással kapcsolatos korlátozások 1. Acobas HCV tesztet csak a cobas HBV/HCV/HIV-1 kontrollkészlettel, cobas 4800 rendszer mintaelkészít készlet 2, cobas 4800 rendszer líziskészlet 2, cobas 4800 rendszer mosófolyadék-készlet és cobas 4800 rendszer mintaoldószer 2 oldatokkal együtt használva vizsgálták. 2. A megbízható eredmény a megfelel mintalevételen, szállításon, tároláson és feldolgozáson múlik. Kövesse a jelen használati útmutatóban és a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban leírt eljárásokat. 3. A tesztet csak EDTA-s plazmával vagy szérummal való használatra validálták. Más típusú minták tesztelése pontatlan eredménnyel járhat. 4. A HCV RNS mennyiségi meghatározása a mintában jelenlév víruspartikulumoktól függ, ezért befolyásolhatják a mintavételi módszerek, betegfaktorok (azaz kor, tünetek megléte) és/vagy a fertzés stádiuma. 5. Ritkán bár, de elfordulhat, hogy a cobas HCV primerei és/vagy próbái által lefedett virális genom nagy fokban konzervált régióiban lév mutációk következtében a vírusmennyiség kevesebbnek adódik, vagy a vírus kimutatása sikertelen lesz. 6. A vizsgálat prediktív értéke a betegség elfordulási arányától függ az adott populációban. 7. Az AmpErase enzim hozzáadása a cobas HCV Master Mixhez lehetvé teszi a targetnukleinsav szelektív amplifikálását, ugyanakkor a reagensek és amplifikálási keverékek szennyezdésének elkerüléséhez a helyes laboratóriumi gyakorlat és ezen használati utasításban meghatározott eljárások gondos betartása szükséges. 8. A terméket csak a PCR-technikák alkalmazására és a cobas 4800 rendszer használatára kiképzett dolgozók használhatják. 9. Csak a cobas x 480 készüléket és a cobas z 480 analizátort validálták a termékkel való használatra. A termékkel nem használható más minta-elkészít készülék vagy PCR rendszer. 10. A technológiák különbözsége miatt javasolt, hogy az egyik technológiáról a másikra való áttéréskor a felhasználók végezzenek korrelációs laboratóriumi vizsgálatokat, hogy a technológiák közötti különbség minsíthet legyen. A felhasználóknak a helyi specifikus irányelveket/eljárásokat kell követniük. 11. A keresztszennyezdés álpozitív eredményeket okozhat. A cobas HCV tesztnél a minták közötti keresztszennyezdés arányát egy nem klinikai vizsgálatban 0,0%-osnak találták. Nem figyeltek meg futtatások közötti keresztszennyezdést. 12. A cobas HCV tesztnek nem célja a HCV vérben vagy vértermékekben való szrése. Doc. Rev. 2.0 21

A nem klinikai teljesítmény értékelése A fontosabb teljesítményjellemzk Kimutatási határ (LoD) WHO Nemzetközi standard A cobas HCV kimutatási határát a NIBSC-tl származó WHO HCV RNS nemzetközi standard szerinti (WHO International Standard for HCV RNA for Nucleic Acid Amplification Technology Assays 4. WHO nemzetközi standard) 1a genotípus sorozathígításának elemzésével állapították meg, amelyet HCV-negatív EDTA-s plazmában vagy szérumban vizsgáltak 400 µl-es és 200 µl-es mintafeldolgozási térfogattal. Hat koncentrációszintbl és egy negatív kontrollból álló paneleket teszteltek a cobas HCV reagensek három gyártási tételével, több futtatásban, napon, kezelvel és készüléken. A 3. táblázat 6. táblázat a két mintafeldolgozási térfogat EDTA-s plazma- és szérumeredményeit tartalmazzák. A vizsgálat eredménye szerint a cobas HCV a HCV RNS-t 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál 9,2 IU/ml koncentrációban mutatta ki EDTA-s plazmában és 7,6 IU/ml koncentrációban szérumban, 95%-os PROBIT találati aránnyal. 200 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a koncentráció 15,2 IU/ml volt EDTA-s plazmában és 15,3 IU/ml szérumban, 95% PROBIT találati aránnyal. 3. táblázat: Kimutatási határ EDTA-s plazmában (400 µl) Bemen titerkoncentráció (HCV RNS IU/ml) Érvényes ismétlések száma Pozitívok száma Találati arány 42,0 125 125 100,0% 21,0 124 124 100,0% 15,0 125 123 98,4% 9,0 124 117 94,4% 5,0 126 103 81,8% 3,0 125 80 64,0% 0,0 36 0 0,0% LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett 9,2 IU/ml 95% konfidenciaintervallum: 7,8 11,5 IU/ml Doc. Rev. 2.0 22

4. táblázat: Kimutatási határ szérumban (400 µl) Bemen titerkoncentráció (HCV RNS IU/ml) Érvényes ismétlések száma Pozitívok száma Találati arány 42,0 125 125 100,0% 21,0 126 126 100,0% 15,0 126 126 100,0% 9,0 126 120 95,2% 5,0 126 110 87,3% 3,0 126 86 68,3% 0,0 36 0 0,0% LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett 7,6 IU/ml 95% konfidenciaintervallum: 6,5-9,5 IU/ml 5. táblázat: Kimutatási határ EDTA-s plazmában (200 µl) Bemen titerkoncentráció (HCV RNS IU/ml) Érvényes ismétlések száma Pozitívok száma Találati arány 60,0 126 126 100,0% 45,0 125 125 100,0% 25,0 125 125 100,0% 18,0 124 119 96,0% 10,0 126 106 84,1% 5,0 124 69 55,7% 0,0 36 0 0,0% LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett 15,2 IU/ml 95% konfidenciaintervallum: 13,1-18,5 IU/ml Doc. Rev. 2.0 23

6. táblázat: Kimutatási határ szérumban (200 µl) Bemen titerkoncentráció (HCV RNS IU/ml) Érvényes ismétlések száma Pozitívok száma Találati arány 60,0 126 126 100,0% 45,0 126 126 100,0% 25,0 126 123 97,6% 18,0 126 125 99,2% 10,0 126 106 84,1% 5,0 125 73 58,4% 0,0 36 0 0,0% LoD PROBIT szerinti 95% találati arány mellett 15,3 IU/ml 95% konfidenciaintervallum: 13,1-18,7 IU/ml Lineáris tartomány A cobas HCV teszt linearitását 13 paneltagból álló hígítási sorozat elemzésével végezték, ahol a predomináns HCV-genotípus (GT 1a) lefedte a teszt lineáris tartományát. A magas titer paneltagokat magas titer Armored RNS-törzsbl (arrns) készítették, az alacsony titer paneltagokat pedig klinikai mintából (CS). A linearitási panelt úgy tervezték, hogy körülbelül 2 log 10 titerátfedés legyen a két anyagforrás között. 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a cobas HCV lineáris az EDTA-val kezelt plazma és szérum esetén a 15,0 IU/ml 1,0E+08 IU/ml tartományban, és a maximális eltérés a jobban illeszked nemlineáris regressziótól kisebb, mint ± 0,08 log 10. A teszt pontossága a lineáris tartományban ± 0,20 log 10 értéken belül volt EDTA-s plazma esetén, és ± 0,23 log 10 értéken belül szérum vizsgálatakor. 200 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál a cobas HCV lineáris az EDTA-val kezelt plazma és szérum esetén a 25 IU/ml 1,0E+08 IU/ml tartományban, és a maximális eltérés a jobban illeszked nemlineáris regressziótól kisebb, mint ± 0,09 log 10. A teszt pontossága a lineáris tartományban ± 0,20 log 10 értéken belül volt EDTA-s plazma esetén, és ± 0,25 log 10 értéken belül szérum vizsgálatakor. A reprezentatív eredményeket itt találja: 2. ábra 5. ábra. Doc. Rev. 2.0 24

2. ábra: Linearitás EDTA-s plazmában (400 µl) Megfigyelt logaritmikus titer [koncentrációegység] Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Négyzetes modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa Megadott logaritmikus titer [koncentrációegység] 3. ábra: Linearitás szérumban (400 µl) Megfigyelt logaritmikus titer [koncentrációegység] Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Négyzetes modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa Megadott logaritmikus titer [koncentrációegység] Doc. Rev. 2.0 25

4. ábra: Linearitás EDTA-s plazmában (200 µl) Megfigyelt logaritmikus titer [koncentrációegység] Megfigyelt logaritmikus titer [koncentrációegység] Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Köbös modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa 5. ábra: Linearitás szérumban (200 µl) Megadott logaritmikus titer [koncentrációegység] Megfigyelések Az adott tartományban Regressziós egyenes Köbös modell Az eltérés fels határa Az eltérés alsó határa Megadott logaritmikus titer [koncentrációegység] Doc. Rev. 2.0 26

Pontosság laboratóriumon belül A cobas HCV pontosságát klinikai HCV (1a genotípusú) minták (CS) és Armored RNS HCV (arrns) hígítási sorainak elemzésével határozták meg HCV-negatív EDTA-s plazmában és szérumban. Öt hígítási szintet vizsgáltak szintenként, mátrixonként és mintafeldolgozási térfogatonként 72 ismétléssel a cobas HCV reagensek három gyártási tételével, két készüléken és három kezelvel, 12 napon keresztül. Minden mintát végigvittek a teljes cobas HCV eljáráson a cobas 4800 rendszeren. Ezért az itt közölt pontosság a vizsgálati eljárás valamennyi aspektusát reprezentálja. Az eredményeket itt találja: 7. táblázat 10. táblázat. A cobas HCV nagy pontosságot mutatott a reagensek három gyártási tételén, amelyeket az 1,0E+02 IU/ml 1,0E+08 IU/ml koncentrációtartományban vizsgáltak mind 200 µl-es, mind 400 µl-es mintafeldolgozási térfogattal. 7. táblázat: A cobas HCV laboratóriumi pontosságán belül (EDTA-s plazmaminták 400 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* Névleges koncentráció (IU/ml) Megadott koncentráció (IU/ml) Forrásanyag EDTA-s plazma 1. tétel 2. tétel 3. tétel Minden gyártási tétel SD SD SD Poolozott SD 1,0E+08 8,5E+07 arrns 0,05 0,06 0,05 0,06 1,0E+07 8,5E+06 arrns 0,06 0,06 0,06 0,06 4,0E+05 3,4E+05 arrns 0,06 0,05 0,06 0,06 1,0E+04 9,9E+03 CS 0,10 0,10 0,10 0,10 1,0E+03 9,9E+02 CS 0,09 0,08 0,07 0,08 * A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log 10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre. 8. táblázat: A cobas HCV laboratóriumon belüli pontossága (szérumminták 400 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* Névleges koncentráció (IU/ml) Megadott koncentráció (IU/ml) Forrásanyag Szérum 1. tétel 2. tétel 3. tétel Minden gyártási tétel SD SD SD Poolozott SD 1,0E+08 6,5E+07 arrns 0,07 0,12 0,14 0,12 1,0E+07 6,5E+06 arrns 0,07 0,07 0,09 0,08 4,0E+05 2,6E+05 arrns 0,07 0,06 0,07 0,07 1,0E+04 7,9E+03 CS 0,07 0,05 0,08 0,07 1,0E+03 7,9E+02 CS 0,07 0,05 0,06 0,06 * A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log 10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre. Doc. Rev. 2.0 27

9. táblázat: A cobas HCV laboratóriumon belüli pontossága (EDTA-s plazma 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* Névleges koncentráció (IU/ml) Megadott koncentráció (IU/ml) Forrásanyag EDTA-s plazma 1. tétel 2. tétel 3. tétel Minden gyártási tétel SD SD SD Poolozott SD 1,0E+08 8,5E+07 arrns 0,07 0,09 0,06 0,07 1,0E+07 8,5E+06 arrns 0,05 0,05 0,05 0,05 4,0E+05 3,4E+05 arrns 0,04 0,05 0,07 0,05 1,0E+04 9,9E+03 CS 0,06 0,06 0,07 0,06 1,0E+03 9,9E+02 CS 0,06 0,07 0,05 0,06 * A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log 10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre. 10. táblázat: A cobas HCV laboratóriumon belüli pontossága (szérum 200 µl-es mintafeldolgozási térfogat)* Névleges koncentráció (IU/ml) Megadott koncentráció (IU/ml) Forrásanyag Szérum 1. tétel 2. tétel 3. tétel Minden gyártási tétel SD SD SD Poolozott SD 1,0E+08 6,5E+07 arrns 0,05 0,06 0,06 0,06 1,0E+07 6,5E+06 arrns 0,07 0,07 0,05 0,06 4,0E+05 2,6E+05 arrns 0,08 0,05 0,07 0,07 1,0E+04 7,9E+03 CS 0,04 0,04 0,04 0,04 1,0E+03 7,9E+02 CS 0,04 0,06 0,05 0,05 * A titeradatokat logaritmikusan normál eloszlásúnak tekintették, és log 10 transzformáció után elemezték. A szórás (standard deviation SD) oszlopok a logaritmikusan transzformált titerek összesítését tartalmazzák mind a három reagenstételre. Genotípus szerinti ellenrzés A cobas HCV teljesítményét a HCV genotípusokon a következkkel értékelték ki: A kimutatási határ ellenrzése 1b 6-os genotípusok esetén A linearitás ellenrzése 1b 6-os genotípusok esetén A titermeghatározást a cobas HCV teszttel végezték. A kimutatási határ ellenrzése 1b 6-os genotípusok esetén Hat különböz genotípusú (1b, 2, 3, 4, 5, 6) HCV RNS klinikai mintát hígítottak EDTA-s plazmában és szérumban a predomináns genotípus (HCV GT 1a) EDTA-s plazma kimutatási határ szerinti koncentrációjára a 95%-os találati arányú kimutatásihatár-elemzés szerint (15,0 IU/ml). A találati arány elemzését minden genotípusra és mintamátrixra 42 ismétléssel végezték. Az eredmények alátámasztják, hogy a cobas HCV teszt HCV-t mutatott ki az 1b, 2, 3, 4, 5 és 6 HCV-genotípusoknál 15 IU/ml koncentráció esetén, és a fels egyoldali 95%-os konfidenciaintervallum nagyobb volt a várt 95%-os találati aránynál. Doc. Rev. 2.0 28

11. táblázat: A HCV 1b 6-os genotípusok kimutatási határának ellenrzése 400 µl EDTA-s plazmában Genotípus Találati arány Fels egyoldali 95%-os konfidenciaintervallum GT 1b 95,2% 99,1% GT 2 100,0% 100,0% GT 3 100,0% 100,0% GT 4 100,0% 100,0% GT 5 100,0% 100,0% GT 6 97,6% 99,9% 12. táblázat: A HCV 1b 6-os genotípusok kimutatási határának ellenrzése 400 µl szérumban Genotípus Találati arány Fels egyoldali 95%-os konfidenciaintervallum GT 1b 100,0% 100,0% GT 2 100,0% 100,0% GT 3 100,0% 100,0% GT 4 100,0% 100,0% GT 5 100,0% 100,0% GT 6 100,0% 100,0% A linearitási tartomány ellenrzése 1b 6-os genotípusok esetén A cobas HCV genotípusok linearitási vizsgálatában használt hígítási sorozat kilenc paneltagból áll, amelyek lefedik a célzott lineáris tartományt. A magas titer paneltagokat magas titer arrns-törzsbl készítették, az alacsony titer paneltagokat pedig magas titer klinikai mintából (CS). A linearitási panelt úgy tervezték, hogy legalább 2 log 10 titerátfedés legyen a két anyagforrás között. A cobas HCV lineáris tartománya az alsó mennyiségi meghatározási határtól (LLoQ, 15,0 IU/ml 400 µl-es mintafeldolgozási térfogatnál) a fels mennyiségi meghatározási határig (ULoQ, 1,0E+08 IU/ml) tartott, és legalább két orvosi döntési pontot tartalmazott. Szintenként tizenkét ismétlést teszteltek EDTA-s plazmában. A cobas HCV lineáris tartományát mind a hat genotípusra (1b, 2, 3, 4, 5, és 6) ellenrizték. A lineáris regresszió és a jobban illeszked nemlineáris regresszió közötti maximális eltérés legfeljebb 0,14 log 10 volt. Specificitás A cobas HCV specificitását különböz donoroktól származó HCV-negatív EDTA-s plazma- és szérumminták elemzésével határozták meg. 612 különböz EDTA-s plazmát és 613 különböz szérummintát teszteltek (összesen 1225 eredmény született) a cobas HCV reagensek három gyártási tételével. Az EDTA-s plazmában 609, a szérumban 613 minta teszteredménye lett negatív HCV RNS-re. A tesztpanelben a cobas HCV specificitása 99,5% volt a plazmában (95%-os konfidenciahatár: 98,7%) és 100,0% a szérumban (95%-os konfidenciahatár: 99,5%). Doc. Rev. 2.0 29

Analitikai specificitás A cobas HCV analitikai specificitását egy kórokozópanel (13. táblázat) hígításával vizsgálták HCV RNSpozitív és HCV RNS-negatív EDTA-s plazmával. A kórokozókat negatív EDTA-s plazmához adták, és HCV RNS-sel, illetve nélküle tesztelték. Minden HCV-target nélküli kórokozómintára negatív eredményt kaptak a cobas HCV teszttel, és minden HCV-targetet tartalmazó mintára pozitív lett az eredmény. Ezen felül a potenciálisan keresztreagáló organizmusokat tartalmazó pozitív HCV-minták mindegyikének az átlagos log 10 titer értéke ± 0,09 log 10 eltérésen belül volt az adott pozitívre oltott minta átlagos log 10 titeréhez képest. 13. táblázat: Keresztreaktivitásra vizsgált kórokozók Vírusok Baktériumok Sarjadzógomba Adenovírus 5-ös típus 1-es és 2-es típusú herpes Propionibacterium acnes Candida albicans simplex vírus Cytomegalovírus Humán papillomavírus Staphylococcus aureus 1-es, 2-es, 3-as, 4-es típusú dengue vírus Influenzavírus A Epstein-Barr vírus Murray Valley encephalitis vírus FSME vírus (HYPR törzs) St. Louis encephalitis vírus Hepatitis A vírus Varicella-zoster vírus Hepatitis B vírus West Nile vírus Humán immundeficiencia vírus 1 Sárgalázvírus 1-es és 2-es típusú humán T-sejtes Zika vírus lymphotrop vírus 6-os típusú humán herpeszvírus Analitikai specificitás zavaró anyagok Magas triglicerid (27,9 29,0 g/l), konjugált bilirubin (0,18 0,22 g/l), nem konjugált bilirubin (0,19 0.2 g/l), albumin (57,8 60,6 g/l), hemoglobin (1,8 2,3 g/l) és humán DNS (2 mg/l) tartalmú mintákat teszteltek HCV RNS jelenlétében, illetve hiányában. A vizsgált anyagok nem mutattak zavaró hatást a cobas HCV teszt teljesítményével. Ezen felül a szisztémás lupus erythematosus (SLE) és rheumatoid arthritis (RA) autoimmun betegségek markerei, illetve az antinukleáris antitest (ANA) jelenlétét is vizsgálták. A 14. táblázatban felsorolt gyógyszervegyületeket is vizsgálták a Cmax háromszorosánál, HCV RNS jelenlétében, illetve hiányában. A vizsgálat minden potenciálisan zavaró anyagról kimutatta, hogy nincs hatással a teszt teljesítményére. A cobas HCV teszttel minden HCV-target nélküli mintára negatív eredményt kaptak, és minden HCV-targetet tartalmazó mintára pozitív lett az eredmény. Ezen felül a potenciálisan zavaró anyagokat tartalmazó pozitív HCV-minták mindegyikének az átlagos log 10 titer értéke ± 0,04 log 10 eltérésen belül volt az adott pozitívre oltott minta átlagos log 10 titeréhez képest. Doc. Rev. 2.0 30

14. táblázat: A cobas HCV teszt HCV RNS mennyiségi meghatározását esetlegesen zavaró gyógyszervegyületek vizsgálata Gyógyszerosztály Gyógyszer generikus neve Immunmodulátorok Peginterferon -2a Ribavirin HIV entry inhibitor Peginterferon -2b Maraviroc HIV-integráz inhibitorok Elvitegravir/kobicisztát Raltegravir Non-nukleozid HIV reverz transzkriptáz inhibitorok Efavirenz Etravirin Nevirapin Rilpivirin HIV-proteáz inhibitorok Atazanavir Nelfinavir HCV-proteáz inhibitorok Reverz transzkriptáz vagy DNSpolimeráz inhibitorok Opportunista fertzések kezelésére szolgáló vegyületek Darunavir Fosamprenavir Lopinavir Boceprevir Simeprevir Abacavir Aciclovir Adefovir dipivoxil Cidofovir Emtricitabin Entecavir Foscarnet Azitromicin Klaritromicin Etambutol Flukonazol Isoniazid Ritonavir Saquinavir Tipranavir Telaprevir Ganciclovir Lamivudin Sofosbuvir Telbivudin Tenofovir Valganciclovir Zidovudin Pyrazinamid Rifabutin Rifampicin Sulfamethoxazol Trimethoprim Doc. Rev. 2.0 31

Módszerkorreláció A cobas HCV teljesítményének értékelése a COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV mennyiségi teszt 2.0-ás változatával összevetve A cobas HCV tesztet és a COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV mennyiségi teszt 2.0-ás változatát (TaqMan HCV teszt, v2.0) HCV-fertzött betegek szérum- és EDTA-s plazmamintáinak összehasonlításával végezték. Összesen 176, valamennyi HCV-genotípust reprezentáló EDTA-s plazma- és szérummintát vizsgáltak párhuzamos elemzéssel. Az eredmény érvényes volt és mindkét vizsgálat mennyiségi meghatározási tartományán belül esett. Elvégezték a Deming-regressziós analízist. A két teszttel vizsgált minták átlagos titereltérése 0,0 log 10 volt (95% konfidenciaintervallum: 0,01; 0,01). A Deming-regressziós analízis eredményeit a 6.ábra tartalmazza. Az ábrákon a * jel az egyéni meghatározást jelenti. A szín a genotípust jelöli. 6. ábra: A cobas HCV teszt és a TaqMan HCV teszt 2.0-ás verziójának regressziós analízise EDTA-s plazma- és szérummintákban Átlagos log10 titer cobas 4800 HCV teszt y = 1,02x 0,08 R 2 = 0,99 Genotípus 1 2 3 4 5 6 Egyenesek Deming-regresszió egyenese Átlagos log10 titer (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV teszt, 2.0 verzió) Doc. Rev. 2.0 32

Mátrixekvivalencia EDTA-s plazma kontra szérum 114 EDTA-s plazma- és szérumminta-párt elemeztek mátrixekvivalencia szempontjából. A párok közül 59 volt HCV-pozitív minta. A HCV-pozitív minták a lineáris tartomány 1 5-ös genotípusait fedték le. Az EDTA-s plazma- és szérumminta-párok átlagos titereltérése 0,04 log 10 volt (95% konfidenciaintervallum: 0,00; 0,08) (7. ábra). 7. ábra: A mátrixekvivalencia teljesítménye az EDTA-s plazma és szérum között Genotípus Log10 titer cobas 4800 HCV teszt, szérum y = 0,98x + 0,11 R 2 = 0,99 1 2 3 4 5 Egyenesek Deming-regresszió egyenese Log10 titer cobas 4800 HCV teszt, hozzátartozó plazma Teljes rendszerhiba A cobas HCV teljes rendszerhiba-arányát HCV-targettel oltott EDTA-s plazma 100 ismétlésével határozták meg. Ezeket a mintákat körülbelül 3 LLoQ (45,0 IU/ml) célkoncentrációnál vizsgálták. A vizsgálat eredményei szerint az összes ismétlés érvényes és HCV-pozitív volt, vagyis a teljes rendszerhiba aránya 0,0% volt. A kétoldalú 95%-os pontos konfidenciaintervallum 0,0% volt az alsó határra, és 3,6% a fels határra [0,0%: 3,6%]. Keresztszennyezdés A cobas HCV keresztszennyezdési arányát HCV-negatív EDTA-s plazmaminták 230 ismétlésével és egy magas titer (1,8E+08 IU/ml) HCV-minta 235 ismétlésével határozták meg. Összesen öt futtatást végeztek pozitív és negatív mintákkal, sakktáblaszer konfigurációban. A negatív minták 230 ismétlése közül 229 volt érvényes és adott negatív eredményt, vagyis a keresztszennyezdési arány 0,0% volt egyoldali, 1,3%-os 95%-os konfidenciaintervallummal. Doc. Rev. 2.0 33

További információk A teszt legfontosabb tulajdonságai Minta típusa EDTA-s plazma, szérum Minimálisan szükséges mintamennyiség Mintafeldolgozási térfogat 400 µl vagy 200 µl További információkat a cobas 4800 rendszer kézikönyve cobas HCV-hez cím kiadványban talál. Analitikai érzékenység Lineáris tartomány 9,2 IU/ml (400 µl) 15,3 IU/ml (200 µl) 400 µl: 15,0 IU/ml 1,0E+08 IU/ml 200 µl: 25,0 IU/ml 1,0E+08 IU/ml Specificitás 99,5% (egyoldalú 95%-os konfidenciaintervallum: 98,7%) Kimutatott genotípusok 1 6-os HCV-genotípusok Doc. Rev. 2.0 34

Szimbólumok A következ szimbólumok használatosak a Roche PCR diagnosztikai termékek jelölésére. 15. táblázat: A Roche PCR diagnosztikai termékek címkéjén használt szimbólumok Segédszoftver In vitro diagnosztikai felhasználásra Meghatalmazott képvisel az Európai Közösségben Megadott tartomány alsó határa Vonalkód adatlap Gyártó Lotszám Sötétben tárolandó Biológiai veszély Tartalma <n> vizsgálathoz elegend Katalógusszám Tárolási hmérséklet Olvassa el a használati útmutatót Vizsgálatdefiníciós fájl A csomag tartalma Megadott tartomány fels határa Forgalmazó Lejárat dátuma Csak IVD teljesítmény értékelésre Globális kereskedelmi cikkszám Ez a termék eleget tesz az in vitro diagnosztikai orvostechnikai eszközökrl szóló 98/79 EK irányelv elírásainak. Felhasználói technikai segítségnyújtás az Egyesült Államokban 1-800-526-1247 Doc. Rev. 2.0 35

Gyártó és forgalmazók 16. táblázat: Gyártó és forgalmazók Készült az Amerikai Egyesült Államokban Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, Germany www.roche.com Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 201, Boulevard Armand-Frappier 6343 Rotkreuz, Switzerland H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Roche Diagnostics GmbH Pour toute assistance technique, Sandhofer Strasse 116 appeler le: 1-877-273-3433) 68305 Mannheim, Germany Roche Diagnostics Roche Diagnostics, SL 2, Avenue du Vercors Avda. Generalitat, 171-173 38240 Meylan, France E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Roche Diagnostica Brasil Ltda. Viale G. B. Stucchi 110 Av. Engenheiro Billings, 1729 20052 Monza, Milano, Italy Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal Védjegyek és szabadalmak Lásd: http://www.roche-diagnostics.us/patents Szerzi jog 2016 Roche Molecular Systems, Inc. Doc. Rev. 2.0 36