Kutya-herpeszvírus okozta elhullások retrospektív vizsgálata 136. 355 360. 2014/6 Szeredi Levente 1*, Dán Ádám 1, Bacsadi Árpád 2, Kecskeméti Sándor 2 L. Szeredi Á. Dán Á. Bacsadi S. Kecskeméti: Retrospective examination of pups died due to canine herpesvirus infection 1] NÉBIH Állategészségügyi Diagnosztikai Igazgatóság. H-1143 Budapest, Tábornok u. 2. *E mail: szeredil@nebih. gov.hu 2] NÉBIH Állategészségügyi Diagnosztikai Igazgatóság. Debrecen Összefoglalás. A szerzõk 2005 és 2013 között kórbonctani, kórszövettani és virológiai vizsgálatokkal 14 helyrõl származó, összesen 16 kölyökkutyában állapítottak meg kutya-herpeszvírus okozta elhullást. 12 kölyök 2 hétnél fiatalabb korban, három kölyök 4 hetes kora körül, míg egy állat 10 hetesen pusztult el hirtelen, vagy néhány órán át tartó betegséget követõen. Már a makroszkópos vizsgálattal, valamennyi esetben fölmerült a kutya herpeszvírus okozta fertõzés gyanúja, amit a megfigyelt kórszövettani elváltozások tovább erõsítettek. Magzárványokat egyik esetben sem találtak. A kórszövettani vizsgálattal csaknem valamennyi esetben vérzéseket és elhalásos gócokat figyeltek meg a májban, a lépben, a tüdõben és az agyvelõben. A többi szervben hasonló elváltozásokat csupán az esetek 22 50%-ában találtak. Summary. The authors diagnosed canine herpesvirus infection in 16 puppies originating from 14 locations with gross pathological, histological and virological examinations between 2005 and 2013. Twelve puppies were younger than 2 weeks old, three were 4 weeks old and one was 10 weeks old, when they died suddenly or after a few hours presenting clinical sings. The macroscopic lesions were already suggestive for canine herpesvirus infection, which was further supported by the detection of characteristic microscopic changes in all cases. Inclusion bodies were not observed in any cases. Haemorrhages and focal necroses were found almost in 100% of the cases in the liver, spleen, lungs, and brain. Similar lesions were evident only in 22% to 55% of the cases in the other organs. Kutya-herpeszvírussal az állatok a méhben, a szülõcsatornában, a külvilágon pedig alomtársaiktól és az anyjuktól fertõzõdhetnek Az α-herpeszvírusok közé tartozó kutya-herpeszvírus világszerte elõfordul. Jelenlegi ismereteink szerint a vírus csak a kutyaféléket betegíti meg. A fertõzés átvészelése élethosszig tartó, latens fertõzöttséget okoz, amely immunszuppresszív hatásra, szállítás, átcsoportosítás, zsúfoltság okozta stressz következtében vagy vemhesség során aktiválódhat. A fertõzött állat a kórokozót különbözõ testváladékaival üríti a környezetébe. A vírus a külvilágon rövid idõn belül inaktiválódik, ezért a fertõzés tovaterjedése elsõsorban közvetlen érintkezéssel valósul meg. A kiskutyák a méhben, a szülõcsatornában, a külvilágon pedig fertõzött alomtársaiktól és az anyaállattól egyaránt fertõzõdhetnek. A méhen belüli fertõzés eredménye a magzat felszívódása, vetélés vagy gyenge kölykök születése lehet. A méhen belül fertõzõdött állatok többsége az ellést követõ 9. napon belül generalizált fertõzés következtében elpusztul. A kölykök másik, kisebbik része nem, vagy csak enyhe tünetek kíséretében betegszik meg, és a vírust nagy mennyiségben, akár 2 3 hétig is ürítik (3). A megszületett kölykök fogékonysága az életkorral fokozatosan csökken. Az egy hétnél fiatalabb állatok kísérletes fertõzése során súlyos megbetegedést tapasztaltak, míg a 2 hétnél idõsebb korban fertõzött kölyköknek már volt bizonyos fokú ellenálló képességük, és egyáltalán nem, vagy csak enyhe tüneteket mutatva betegedtek meg. A betegség az újszülött kiskutyákban többnyire 3 4 napos kortól jelentkezik. Levertekké válnak, nem szopnak, és szinte állandóan vinnyognak. A látható nyálkahártyában pontszerû vérzések, a has alján, a lágyéktájékon, a péra és a tasak bõrén pedig apró hólyagok, kipirult bõrterületek jelenhetnek meg. Ritkán savós orrfolyás, hasmenés és kényszermozgások is megfigyelhetõk. A kölykök a tünetek megjelenését követõen általában 3 napon belül elpusztulnak. Az újszülöttek boncolása során a testüregekben szalmasárga vagy véres savó Kutya-herpeszvírus okozta elhullások 355 122
Egy hétnél fiatalabb állatokat súlyosan megbetegít a fertõzés, de a fogékonyság az életkor elõrehaladtával csökken 2005 és 2013 között a NÉBIH ÁDI laboratóriumaiban 14 helyrõl származó 16 egyedben állapították meg a fertõzést felhalmozódását, a parenchymás szervekben, elsõsorban a májban, a vesékben és a tüdõben vérzéseket, valamint elhalásos gócokat lehet találni. A hörgõ körüli nyirokcsomók és a lép megnagyobbodott, továbbá a bél savóshártyája alatt számos pontszerû vérzés látható. Kórszövettani vizsgálattal a parenchymás szervekben elhalások és vérzések figyelhetõk meg. Ritkán elhalásokkal kísért, nem gennyes agyburok- és agyvelõgyulladás is kialakul (4). Magzárványok alkalmanként a vesében és az orrnyálkahártya hámsejtjeiben, ritkábban a parenchymás szervekben elõforduló elhalások szomszédságában találhatók. A fertõzést túlélõ kölykökben vesedysplasia kialakulásáról is beszámoltak (3). A 3 hétnél idõsebb kölykökben a fertõzés többnyire tünetmentes, vagy csak enyhe légúti megbetegedésben nyilvánul meg. A felnõtt kutyákban a fertõzés általában csak a bemeneti kapuban és a regionális nyirokcsomókban okoz elváltozásokat. A péra és a tasak bõrén, továbbá a hüvely és a pénisz nyálkahártyáján kipirult bõrterületek, valamint apró hólyagok jelenhetnek meg, emellett ritkán szaruhártya- és kötõhártya-gyulladás is kialakulhat (3). Továbbá a 3 hétnél idõsebb kölykökben és felnõtt kutyákban ritkán, elhullást okozó generalizált fertõzésrõl is beszámoltak, amikor az újszülötteknél már elõbb leírt elváltozásokat figyeltek meg (2, 3). A szerzõk tudomása szerint a hazai szakirodalomban eddig még nem közöltek részletes leírást kutyák herpeszvírus okozta betegségének elõfordulásáról. Az egyetlen hazai esetleírás egy kongresszuson ismertették, ahol a szerzõk a kutyaherpeszvírus okozta fertõzés kapcsán egy alom teljes pusztulásáról számoltak be (1). A közlemény célja, hogy rövid irodalmi áttekintést adjon a betegségrõl, és beszámoljon a budapesti, valamint a debreceni intézetben az elmúlt években diagnosztizált kutya-herpeszvírus okozta elhullásokról, ill. a vizsgálatok során nyert tapasztalatokról. Anyag és módszer Kórbonctani, kórszövettani, bakteriológiai és virológiai vizsgálat 2005 és 2013 között a NÉBIH ÁDI budapesti és debreceni laboratóriumában kórbonctani, kórszövettani és virológiai vizsgálattal 14 helyrõl származó, összesen 16 kölyökkutyában állapítottunk meg kutya herpeszvírus okozta elhullást. Az egyes években a következõ esetszámokat találtuk: 2008-ban 4 eset, 2005- ben, 2007-ben és 2013-ban 3 3 eset, 2010-ben 2 eset, végül 2011-ben 1 eset. A kórelõzményi adatok szerint 12 kölyök 2 hétnél fiatalabb korban, három 4 hetes kora körül, míg egy állat 10 hetes korában pusztult el hirtelen, vagy néhány órás betegséget követõen. 8 angol bulldogot, 5 francia bulldogot, 2 keveréket és egy ismeretlen fajtájú kölyköt vizsgáltunk. Két-két kölyök alomtestvér volt. A rutin kórbonctani, kórszövettani és bakteriológiai vizsgálatot követõen a vírus kimutatása céljából polimeráz-láncreakció (PCR) (1 9 esetek) vagy direkt immunfluoreszcenciás (IF) vizsgálatot végeztünk (10 16 esetek). A PCR-vizsgálat során a májból elõször kivontuk a vírus-dns-t, majd egy korábban ismertetett módon elvégeztük a PCR-reakciót (5). Az IF-vizsgálat során a tüdõbõl, a májból, a lépbõl és a vesébõl készített fagyasztott metszeteket fixálást követõen a kutya herpeszvírussal szemben, kutyában termelt, FITC-vel jelölt, poliklonális szérummal (VMRD Inc., Pullman, USA) inkubáltuk egy óráig, szobahõmérsékleten. A mosást követõen a metszetet glicerollal fedtük, és immunfluoreszcens mikroszkóppal 100 200 -os nagyítással vizsgáltuk. 122 356 Magyar Állatorvosok Lapja 2014. június Eredmények Kórbonctani, kórszövettani, bakteriológiai és virológiai vizsgálat A makroszkópos vizsgálattal a kültakaró és a látható nyálkahártyák nem mutattak elváltozást. A tetemek felnyitásakor a mell- és a hasüregben nagy mennyiségû, vörhenyes folyadékot találtunk (1. ábra). A gyomor egy esetben volt alvadt tejjel feszülésig kitöltve, míg a többi esetben csak kevés nyálkát találtunk benne.
1 2 2. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya vékonybélcsatornája Számos pontszerû vérzés a bél savóshártyája alatt Figure 2. Small intestine of a puppy died due to canine herpesvirus infection Petechial haemorrhages on the serosal surface of the intestinal tract 3 1. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya mell- és hasüreg Vörhenyes folyadék a mellüregben, lépmegnagyobbodás és vérzések a vesében Figure 1. Thoracic and peritoneal cavities of a puppy died due to canine herpesvirus infection Red fluid in the thoracic cavity, enlarged spleen and haemorrhages on the kidney are visible 4 3. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya veséi Friss vérzések a vesékben Figure 3. Kidney of a puppy died due to canine herpesvirus infection Multifocal acute haemorrhages on the kidneys 4. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya mája Friss vérzések centrális elhalással Figure 4. Liver of a puppy died due to canine herpesvirus infection Multifocal acute haemorrhages with central necrosis A máj, a vese, de különösen a lép megnagyobbodott volt, és a bél savóshártyái alatt számos esetben pontszerû vérzéseket találtunk (1. és 2. ábra). A máj és a tüdõ állományában, továbbá a vese kéregállományában, nagy számban 1 2 mm átmérõjû, friss keletû vérzéseket figyeltünk meg (3. ábra). Ezek egy részének a közepén szürkésfehér elhalásos területek is elõfordultak (4. ábra). A kórszövettani vizsgálattal a legszembetûnõbb elváltozás a friss keletû, körülírt vérzések, ill. a vérzéses elhalásos gócok elõfordulása volt. Ezeket a különféle szervekben eltérõ gyakorisággal, de valamennyi esetben megfigyeltük (Táblázat). A máj, a lép, a tüdõ és az agyvelõ tekintetében ezek az elváltozások a vizsgált esetek csaknem Kutya-herpeszvírus okozta elhullások 357 122
5 6 5. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya májáról készült kórszövettani felvétel Friss keletû, gócos, vérzéses elhalás Figure 5. Canine liver Acute focal haemorrhagic necrosis 6. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya tüdeje Friss keletû, gócos elhalás az alveolusokban és egy bronchiolusban, valamint enyhe fokú, lympho-histiocytás, interstitiális pneumonia Figure 6. Canine lung Focal acute necrosis in the alveoli and in a bronchiole and mild lympho-histiocytic interstitial pneumonia Táblázat. Jellegzetes kórszövettani elváltozások elõfordulása az egyes szervekben a kutya-herpeszvírus-fertõzés következtében elhullott kölyökkutyákban Table. The occurrence of characteristic histological lesions in the different organs in puppies died due to canine herpesvirus infection Jelzés Életkor, fajta Tüdõ Máj Vese Bél Szív Agyvelõ Lép Nyirokcsomó 1. 10 napos, angol bulldog + + n. v. n. v. n. v. 2. 10 napos, angol bulldog + + + n. v. n. v. n. v. 3. 10 napos, francia bulldog + + + + n. v. + n. v. 4. 1 hetes, angol bulldog + + + n. v. n. v. n. v. + + 5. 1 hetes, ismeretlen fajta + + n. v. + + n. v. n. v. n. v. 6. 4,5 hetes, angol bulldog + + + + + + n. v. 7. 4,5 hetes, angol bulldog + + + + + + n. v. 8. 9 napos, angol bulldog + n. v. n. v. n. v. n. v. 9. 10 napos, francia bulldog + + + + + + 10. 4 hetes, francia bulldog + + n. v. n. v. n. v. n. v. 11. 1 hetes, angol bulldog + + n. v. n. v. n. v. n. v. n. v. 12. 2 hetes, francia bulldog + + n. v. n. v. n. v. n. v. 13. 10 hetes, francia bulldog + + n. v. n. v. n. v. n. v. n. v. n. v. 14. 1 hetes, keverék + + n. v. n. v. n. v. n. v. n. v. n. v. 15. 10 napos, keverék + + n. v. n. v. n. v. 16. 2 hetes, angol bulldog + + n. v. n. v. n. v. n. v. n. v. n. v. Jelmagyarázat: n. v. = nem vizsgált, + = gócos elhalás, ill. gócos vérzéses elhalás, vagy az agyvelõben gyulladás elõfordulása, = az elõbbiek hiánya 1. és 2. jelzésû kölykök alomtársak, 6. és 7. jelzésû kölykök alomtársak 122 358 Magyar Állatorvosok Lapja 2014. június mindegyikében elõfordultak (5. és 6. ábrák). Az agyvelõben, az elõbbieken túl, lympho-histiocytás agyvelõgyulladást és gliás gócok elõfordulását is megfigyeltük (7. ábra). Gócos vérzéseket, ill. elhalásokat a többi szerv tekintetében a vizsgált esetek csupán 22 50% ában figyeltünk meg (Táblázat, 8. és 9. ábrák). Magzárványokat egyik esetben sem találtunk. A szervekbõl bakteriológiai vizsgálattal kórtani jelentõségû kórokozót egyik esetben sem tenyésztettünk ki. A megrendelõ kérésére egy esetben elvégeztük a húsevõk parvovírusának, egy
7 8 7. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya agyveleje Lympho-histiocytás vasculitis és egy glias góc Figure 7. Canine brain Lympho-histiocytic vasculitis and focal gliacell-proliferation 8. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya veséje Friss keletû, gócos, vérzéses elhalás a kéregállományban H. E., 100 Figure 8. Canine kidney Acute focal haemorrhagic necrosis in the cortex 9 10 9. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya vékonybele Friss keletû, gócos, vérzéses elhalás egy bélboholyban Figure 9. Canine small intestine Acute focal haemorrhagic necrosis in a villus 10. ábra. Kutya-herpeszvírus fertõzés következtében elhullott kölyökkutya tüdeje Egy bronchiolus levált hámsejtjeiben élénkzöld szín jelzi a kutya-herpeszvírus elõfordulását IF, 200 Figure 10. Canine lung tissue Bright green colour indicates the presence of canine herpesvirus in detached bronchiolar epithelial cells másikban az adeno- és coronavírusnak, végül egy harmadikban az adenovírusnak, a húsevõk parvovírusának valamint a szopornyicavírusnak kimutatására irányuló immunhisztokémiai vizsgálatokat is, amelyek minden esetben negatívok voltak. Az IF- (10. ábra) vagy a PCR-vizsgálatok kal a kutya-herpeszvírust mind a 16 esetben kimutattuk. Megvitatás Az általunk vizsgált valamennyi esetben, már a makroszkópos vizsgálat során fölmerült a kutya-herpeszvírus okozta fertõzés gyanúja, amit az észlelt kórszövettani elváltozások tovább erõsítettek. Bár a különféle szervekben mások alkalmanként magzárványok elõfordulásáról számoltak be, mi ezeket egyik esetben sem találtuk meg. Ettõl eltekintve a megfigyelt kórbonctani és kórszövettani elváltozások megegyeztek az irodalomban korábban közöltekkel (3,4). A fertõzés gyanúját a Kutya-herpeszvírus okozta elhullások 359 122
Az alkalmazott virológiai módszerek (IF, PCR) valamennyi esetben alátámasztották a boncolás, ill. a kórszövettani kép alapján felmerült gyanút Mivel a kutyaherpesz vírus optimális szaporodási hõmérséklete 33 oc, a 2 hétnél fiatalabb és/vagy hidegben tartott kölykök nagyobb veszélyben vannak A védekezés legfontosabb eleme a szuka vakcinázása a fedeztetést követõ 10. napon, majd 6 hét múlva ismételten virológiai vizsgálattal valamennyi esetben egyértelmûen igazoltuk. Az általunk alkalmazott mindkét módszer (IF, PCR) alkalmasnak bizonyult a kutya-herpeszvírus kimutatására generalizált fertõzés következtében elhullott kölykökben. A szerzõk véleménye szerint a kórokozó ezekben az esetekben olyan nagy mennyiségben fordul elõ a szöveti elváltozásokban és azok környékén, hogy az a PCR-nél kevésbé érzékeny IF- módszerrel is biztosan kimutatható. Az irodalmi adatok szerint a kórokozó detektálása még kutyaszöveten történõ vírusizolálással, az elhullott állat formalinban fixált és paraffinba ágyazott szerveibõl készült metszeten az in situ hibridizációval, ill. elektronmikroszkópos vizsgálattal is lehetséges (3, 5). Indirekt kórjelzésre a kutyák szerológiai vizsgálata használható. Felmérõ vizsgálatokban a vírussal szembeni áthangolódást a kutyák 30 100%-ában mutatták ki. A magasabb értéket tenyészetekben találták, ami azonban nem járt együtt a betegség gyakoribb elõfordulásával. A vírusellenes ellenanyagok szintjének mérése sajnos egyedi szinten sem segíti a betegség diagnosztizálását, mivel annak nagysága nem mutat összefüggést a fertõzött szukákban esetlegesen jelentkezõ szaporodásbiológiai zavarokkal. Ezek miatt a szerológiai vizsgálatok a betegség diagnosztizálásában csak alárendelt szerepet játszanak (3). A 16 esetbõl 13-ban (81%) fajtatiszta angol, ill. francia bulldog kölyköket érintett a megbetegedés. A kis mintaszám miatt azonban ebbõl messzemenõ következtetéseket nem lehet levonni. Az esetek döntõ többségében az elhullások 2 hetes, vagy annál fiatalabb korban következtek be. Ezt a fokozott fogékonyságot egyrészt a fiatal állatok fejletlen immunrendszerével, másrészt a tökéletlen testhõmérséklet-szabályozásukkal magyarázzák. A hidegben tartott kölykök testhõmérséklete könnyen az optimális 39 ºC alá csökken. A csökkent testhõmérséklet a kutya-herpeszvírus szervezeten belüli elszaporodásának kedvez, mivel a kórokozó optimális szaporodási hõmérséklete viszonylag alacsony (33 ºC). Négy fajtatiszta kölyök esetében a betegség szokatlanul idõs, 4, ill. 10 hetes korban jelentkezett. A korábbi irodalmi adatokkal együtt ez is felhívja a figyelmet arra, hogy a vírus okozta megbetegedésre nemcsak a szopós, hanem idõsebb kutyák esetében is gondolni kell (2, 3). A betegség tüneteit mutató kölykök gyógykezelésére nem ismert hatékony módszer. Kísérletekkel bizonyították, hogy ha az újszülött kutyáknak 37 ºC körüli külsõ hõmérsékletet biztosítanak, akkor a fertõzés okozta elhullások és a klinikai tünetek súlyossága mérsékelhetõ. Ehhez hasonlóan csökkenti a tünetek súlyosságát bizonyos vírusellenes gyógyszerek (acyclovir, vidarabine) adása is. Vírustól mentes tenyészeteket a fertõzés széles körû elõfordulása miatt nem lehet kialakítani. A betegség elleni védekezés leghatékonyabb módja a szukák vakcinázása. Erre a célra egy alegységvakcina van forgalomban, amelyet a szuka kutyának a fedeztetést követõ 10. napon majd 6 hét múlva kell ismételten beadni. A vakcina használatát a betegség viszonylag ritka elõfordulása miatt csak azokban a tenyészetekben javasolják, ahol a tünetek rendszeresen jelentkeznek (3). A gyakorlati megfigyelések alapján azoknál a szuka kutyáknál, amelyek újszülöttjei a fertõzés következtében elpusztultak, a következõ vemhességnél a megbetegedés nagy valószínûséggel már nem lép fel, és egészséges kölyköket fognak felnevelni (3). IRODALOM 1. BENDA, T. GLÁVITS, R. HORNYÁK, Á. DENCSÕ, L.: Kölyökkutyák herpeszvírus okozta elhullása. Akadémiai beszámolók, 2004 2. GADSDEN, B. J. MAES, R. K. et al.: Fatal Canid herpesvirus 1 infection in an adult dog. J. Vet. Diagn. Invest., 2012. 24. 604 607. 3. GREEN, C. E.: Canine herpesvirus infection. In: Infectious diseases of the dog and cat. (Ed.) GREEN, C. E., 4 th ed., Elsevier St Louis, Missouri, USA. 2012, 431 446. 4. PERCY, D., H. OLANDER, H. J. CARMICHAEL, L. E.: Encephalitis in the newborn pup due to a canine herpesvirus. Pathol. Vet., 1968. 5. 135 45. 5. SCHULZE, C. BAUMGÄRTNER, W.: Nested polymerase chain reaction and in situ hybridisation for diagnosis of canine herpesvirus infection in puppies. Vet. Pathol., 1998. 35. 209 217. Közlésre érk.: 2014. ápr. 8. 122 360 Magyar Állatorvosok Lapja 2014. június