BACTEC Standard Anaerobic/F Culture Vials Emésztett szója-kazein tápleves Magyar HASZNÁLATI JAVASLAT A BACTEC Standard Anaerobic/F (pre-redukált, dúsított szója-kazein tápleves CO 2 -vel) típusú tenyésztõpalackok anaerob vérkultúrákhoz használandók. Elsõsorban az anaerob mikroorganizmusok vérbõl való kvalitatív kitenyésztésére és kimutatására használandó a BACTEC fluoreszcens sorozatához tartozó készülékekkel. ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT A egy vagy több palackot inokulálni kell a vizsgálandó mintával, majd a palackokat inkubálás és idõszakos leolvasás céljából a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékbe kell helyezni. Minden palack kémiai érzékelõt tartalmaz, amely kimutatja a mikroorganizmusok szaporodása következtében termelt CO 2 -szintnövekedést. A készülék 10 percenként ellenõrzi az érzékelõ fluoreszcenciájának növekedését, amely egyenes arányban van a jelenlévõ CO 2 mennyiségével. A pozitív leolvasási eredmény azt jelenti, hogy a palackban feltételezhetõen élõ mikroorganizmusok vannak. A kimutatás csak azokra a mikroorganizmusokra vonatkozik, melyek egy meghatározott típusú táptalajban képesek szaporodni. AZ ELJÁRÁS MÛKÖDÉSI ELVE Ha a BACTEC palack tesztinokulátumában mikroorganizmusok találhatók, akkor CO 2 képzõdik, miközben a mikroorganizmusok metabolizálják a palackban található szubsztrátokat. A palack érzékelõ fluoreszcenciájában bekövetkezõ növekedést, amit a nagyobb mennyiségû CO 2 okoz, a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék mérni képes. A CO 2 növekedés sebességének és mértékének elemzése lehetõvé teszi, hogy a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék meghatározza, hogy a palack pozitív-e, azaz a tesztminta tartalmaz-e élõ mikroorganizmusokat. REAGENSEK A BACTEC Standard Anaerobic/F tenyésztõ palackok az eljárás kezdete elõtt a következõ aktív hatóanyagokat tartalmazzák: Összetevõk listája Tisztított víz 40 ml Emésztett szója-kazein tápleves 3,0% m/v Élesztõkivonat 0,4% m/v Emésztett állati szövet 0,01% m/v Dextróz 0,25% m/v Hemin 0,0005% m/v Menadion 0,00005% m/v Tiolok 0,10% m/v Nátrium-bikarbonát 0,04% m/v Nátrium polianetol-szulfonát (SPS) 0,025% m/v Valamennyi BACTEC tápközeg hozzáadott CO 2 -ot tartalmaz. Az anaerob tápközegek pre-redukáltak, valamint CO 2 -ot és N 2 -t tartalmaznak. Az összetétel változtatható a specifikus teljesítményelvárások kielégítése céljából. PP085JAA 2008/01 Figyelmeztetés In vitro diagnosztizáláshoz A termék száraz természetes gumit tartalmaz. A klinikai mintákban patogén mikroorganizmusok, pl. Hepatitis és HIV-vírusok lehetnek jelen. Minden vérrel vagy más testnedvvel fertõzött tételt a Standard Precautions 1-4 elõírásai szerint kell kezelni. Használat elõtt, minden ampullát meg kell vizsgálni, hogy nem található-e rajta befertõzõdésre (zavarosság, a gumikupak kidudorodása, illetve beszívódása), illetve szivárgásra utaló nyom. A befertõzõdés jeleit mutató palackokat NE HASZNÁLJA. A fertõzött palackokban túlnyomás uralkodhat. Ha befertõzõdött palackot használ a közvetlen vérvételhez, a gáz vagy a befertõzõdött tápközeg visszafolyhat a beteg vénájába. A palackok fertõzöttsége nem mindig nyilvánvaló. Közvetlen vérvétel során kísérje végig figyelemmel a folyamatot annak érdekében, hogy semmilyen anyag ne folyhasson vissza a beteg szervezetébe. A turbiditást, fertõzöttséget, vagy elszínezõdést (sötétebb szín) mutató ampullákat ne használja fel. Bizonyos esetekben elõfordulhat, hogy az üveg nyaka megreped, vagy a kupak lepattintása, illetve munka közben letörik. Ezenkívül ritkán elõfordulhat, hogy a palackok nem lettek kellõen lezárva. Mindkét esetben a palackok tartalma kifröccsenhet, illetve szivároghat, különösen akkor, ha a palackokat felfordítják. Ha a palackokat már inokulálta, a kicsepegett és kiszivárgott anyaggal bánjon óvatosan, mivel azok fertõzõ organizmusokat vagy anyagokat tartalmazhatnak. Kidobás elõtt minden inokulált palackot autoklávozással sterilizáljon. Továbboltáshoz vagy festéshez, stb.-hez való pozitív tenyészapalackok: Mintavétel elõtt ki kell engedni a mikrobiális metabolizmus során gyakran képzõdõ gázt. Amennyiben lehetséges, a mintavételt biológiai biztonsági elszívó fülke alatt, megfelelõ védõöltözékben (beleértve a kesztyût és maszkot) kell elvégezni. A továbboltásról további információk az Eljárás címû szakaszban találhatók. Hogy a tenyésztõ palackok inokulálása alatt minimálisra csökkentse a szivárgás lehetõségét, használjon tartósan rögzített tûjû fecskendõket, illetve Luer-Lok hegyeket. Tárolási feltételek A BACTEC palackok kézhezvételkor használatra készek, további feloldás, illetve hígítás már nem szükséges. Tárolja a palackokat hûvös (2 25 C), száraz, közvetlen napfénytõl védett helyen.
MINTÁK GYÛJTÉSE A befertõzõdés elkerülése végett a mintavételhez használjon aszeptikus technikákat. A minta ajánlott térfogata 5 7 ml. A BACTEC palackokat tanácsos közvetlenül a betegágynál inokulálni a mintával. A mintavételhez leggyakrabban egy Luer-Lok heggyel ellátott 10 vagy 20 ml-es fecskendõt használnak. A mintavételhez optimális esetben Vacutainer Needle Holder-t és Vacutainer Blood Collection Setet, Vacutainer Safety-Lok Blood Collection Set-et vagy más pillangótû készletet kell használni. Ha tût és vérvételi csõrendszert (közvetlen vérvétel) használ, a mintavétel kezdete után fokozott figyelemmel kísérje végig a vér folyásának irányát. A palackban lévõ vákuum általában meghaladja a 7 ml-t, ezért a felhasználónak a palack címkéjén lévõ 5 ml-es jelek segítségével ellenõriznie kell a levett minta mennyiségét. Ha a kívánt 5 7 ml-t sikerült levenni, a további áramlást a csõ elszorításával és a vérvételi készlet BACTEC palackból való kihúzásával kell megállítani. 3 ml-es térfogatú minták is felhasználhatók, ilyenkor azonban a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében. Az inokulált BACTEC palackot a lehetõ legrövidebb idõn belül a laboratóriumba kell juttatni. ELJÁRÁS Távolítsa el a BACTEC palack tetejérõl a levehetõ kupakot, majd vizsgálja meg az üveget különös trekintettel a repedésekre, a befertõzõdésre, a túlzott zavarosságra, a mûanyag kupak beszívódására, illetve kidudorodására. Ha bármilyen hibát észlel, NE HASZNÁLJA FEL a palackot. Inokulálás elõtt törölje le a gumikupakot alkohollal (jódtartalmú fertõtlenítõ szer használata NEM javallott). Aszeptikus módon fecskendezzen vagy engedjen közvetlenül a palackba, palackonként 5 7 ml mintát. Amennyiben 3 4 ml-nyi mintát használ, a kimutatás nem olyan sikeres, mint nagyobb térfogatú minták esetében (lásd Az eljárás korlátai). Az inokulált anaerob palackokat inkubálás és monitorozás céljából a lehetõ legrövidebb idõn belül be kell tenni a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékébe. Ha az inokulált palackot nem helyezi idõben a készülékbe és az ampullában jól láthatóan elindult a szaporodás, akkor a palackot ne tesztelje BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékben, hanem oltsa tovább, készítsen Gram-festést, és tekintse a palackot feltehetõen pozitívnak. A készülékben elhelyezett palackokat a készülék automatikusan, a teszt protokoll idõtartama alatt 10 percenként teszteli. A pozitív palackokat a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék meghatározza, és pozitívnak minõsíti (Lásd a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatóját). Az üvegen belül található érzékelõ nem mutat szemmel látható különbséget a pozitív vagy negatív palackokban, ennek ellenére a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék ki tudja mutatni a fluoreszcenciában bekövetkezett változásokat. Amennyiben a tesztperiódus végére egy negatív palack szemmel láthatóan pozitívvá válik (azaz a vér megbarnul, a gumikupak kidudorodik, a vér nagyon sötét és/vagy hemolizált), oltsa tovább, készítsen gram-festést és tekintse feltehetõen pozitívnak. A pozitív palackokat tovább kell oltani, és gram-festett kenetet kell készíteni. Az esetek többségében a mikroorganizmusok láthatóvá válnak, és az orvossal az elõzetes eredményeket közölni lehet. BACTEC palackban lévõ folyadékból szelektív táptalajra továbboltott kultúrák hozhatók létre, illetve elõzetes gyógyszer-érzékenységi teszt is végezhetõ. Továbboltás: Továbboltás elõtt helyezze a palackot álló helyzetbe, és takarja le a palack kupakját egy alkoholos törlõvel. A palackban uralkodó túlnyomás megszüntetésére szúrjon egy megfelelõ szûrõvel (vagy vattacsomóval) ellátott steril tût az alkoholos törlõn át a palack kupakjába. A tût a nyomás csökkentése után, a továbboltáshoz való minta kivétele elõtt el kell távolítani. A tû beszúrását és kihúzását egyenes irányú mozdulatokkal kell elvégezni, és kerülni kell a tekerõ mozdulatokat. A maximális izolátum hozamhoz, a negatív tenyészeteket ellenõrizze festéssel és/vagy továbboltással, mielõtt a mintákat negatívnak értékelné, és kidobná. MINÕSÉGELLENÕRZÉS A minõség-ellenõrzési vizsgálatokat a vonatkozó helyi, állami és/vagy szövetségi jogszabályoknak és akkreditációs követelményeknek, illetve a laboratórium standard minõség-ellenõrzési eljárásainak megfelelõen kell elvégezni. A megfelelõ minõség-ellenõrzési gyakorlat kialakításánál tanácsos figyelembe venni a megfelelõ CLSI (korábban NCCLS) irányelveket és a CLIA elõírásokat. A lejárati idõ után NE HASZNÁLJA FEL a tenyészpalackokat. NE HASZNÁLJA FEL azokat a palackokat, melyeken sérülés bármilyen nyoma látszik. Az ilyen palackokat a megfelelõ módon dobja ki. A Quality Control Certificate (Minõségellenõrzési tanúsítvány) minden tápközeg dobozban megtalálható. A Minõségellenõrzési tanúsítvány felsorolja a teszt mikroorganizmusokat, beleértve az CLSI standard, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media 5 fejezetében leírt ATCC tenyészeteket is. Az érzékelés idõtartama a következõ mikroorganizmusok esetében 72 óra: Clostridium histolyticum Streptococcus pneumoniae ATCC 19401 ATCC 6305 Clostridium perfringens Escherichia coli ATCC 13124 ATCC 25922 Bacteroides fragilis* Staphylococcus aureus ATCC 25285 ATCC 25923 Bacteroides vulgatus ATCC 8482 *CLSI törzs A BACTEC fluoreszcens sorozatú készülékek minõség-ellenõrzésérõl a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatójában olvashat további információkat. 2
EREDMÉNYEK A pozitív mintát a BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék meghatározza, és jelzi, hogy a palackban feltételezhetõen élõ mikroorganizmusok vannak. AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Befertõzõdés Ügyelni kell, hogy a mintavétel alatt és az inokulálás során a BACTEC põalackokba kerülõ minták ne fertõzõdjenek be. A bertõzõdött minták ugyan pozitív eredményt adnak, mégsem számítanak releváns klinikai mintáknak. Az ilyen meghatározást a felhasználónak kell elvégeznie olyan tényezõk alapján, mint a kimutatott mikroorganizmus típusa, ugyanannak a mikroorganizmusnak a gyakorisága több tenyészetben, a beteg kórelõélete, stb. SPS-érzékeny mikroorganizmusok kimutatása vérmintákból Mivel a vér semlegesíteni képes az SPS SPS-érzékeny mikroorganizmusokkal (pl. egyes Neisseria fajokkal) szembeni toxicitását, az optimális vérmennyiség (5 7 ml) elõsegíti ezen mikroorganizmusok kimutatását. Bizonyos érzékeny mikroorganizmusok, pl. egyes Haemophilus fajok különleges növekedési faktorokat (pl. NAD vagy V-faktor) igényelnek, melyeket a vérminta biztosít. Amennyiben a vérminta mennyisége 3,0 ml vagy annál kevesebb, ezen mikroorganizmusok kimutatásához a megfelõ szuplementet kell hozzáadni a tápközeghez. Tápanyagkiegészítésként BACTEC FOS Fastidious Organism Supplement használható. Nem élõ organizmusok A tenyésztõ tápközegekbõl készített gram-festett kenetek kis számú, nem élõ mikroorganizmust tartalmazhatnak, melyek a tápközeg összetevõibõl, a festékbõl, az immerziós olajból, az üveg tárgylemezekrõl, illetve az inokuláláshoz használt mintából származhatnak. Ezenkívül, a betegtõl származó mintában lehetnek olyan mikroorganizmusok, melyek nem szaporodnak a tenyésztéshez vagy továbboltáshoz használt tápközegben. Az ilyen mintákat szükség esetén a megfelelõ speciális tápközegben kell továbboltani. 6 A Streptococcus pneumoniae kimutatása Aerob tápközegben az S. pneumoniae általában szemmel láthatóan és a gép által is pozitív, de bizonyos esetekben a Gram-festés, valamint a rutinszerû továbboltás során sem találhatók mikroorganizmusok. Amennyiben egy anaerob palackot is inokuláltak, ez a mikroorganizmus gyakran kimutatható az anaerob palack aerob továbboltásával, mivel errõl a mikroorganizmusról többször leírták már, hogy anaerob körülmények között is jól szaporodik. 7 Általános szempontok Az izolátumok optimális kimutatásához 5 7 ml vér szükséges. Ennél kisebb vagy nagyobb térfogat kedvezõtlenül befolyásolhatja a kimutatást és/vagy az érzékelés idõtartamát. A vér tartalmazhat antimikrobiotikumokat vagy egyéb olyan gátló anyagokat, melyek lelassítják, vagy megakadályozzák a mikroorganizmusok szaporodását. Amennyiben a mintában olyan mikroorganizmusok vannak jelen, amelyek nem termelnek elég CO 2 -ot ahhoz, hogy a rendszer kimutassa, illetve a szignifikáns szaporodás még a készülékbe helyezés elõtt megtörtént, fals negatív leolvasást kaphatunk eredményként. Magas fehérvérsejt-szám esetében fals pozitív eredmény születhet. A táptalajokban levõ biológiai anyagok és a mikroorganizmusok variabilitásának természete miatt a felhasználónak tudatában kell lennie annak, hogy az egyes mikroorganizmusokkal való tesztelés potenciálisan variábilis eredményeket adhat. VÁRT ÉRTÉKEK ÉS SPECIFIKUS TELJESÍTMÉNY JELLEMZÕK Lásd a megfelelõ BACTEC fluoreszcens sorozatú készülék használati útmutatóját. KISZERELÉS Kat. sz. Leírás 442191 BACTEC Standard Anaerobic/F Culture Vials, 50 palackos kiszerelés Irodalomjegyzék 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-80. 3. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.). 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Howden, R.J., J. Clin. Path. 1976, 29:50-53. 3
4
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 U.S.A. 800-638-8663 BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a registered trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Vacutainer, Safety-Lok and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2008 BD.