Azellenanyagminteszköz, diagnosztikum,gyógyszer VizlerCsaba2010
Azellenanyag kötésesetében helyesebblenneaviditásrólbeszélni, deinkábbaffinitásthasználunk
AzismétlődőimmunizálásokegyretöbbspecifikusIgG ellenanyagoteredményeznek.
AzIgGellenyagokaffinitásaazaffinitás érésnekköszönhetőennő.
Jó,haazantigén nagymolekula komplexszerkezetű ismétlődőepitopokattartalmaz/multimer oldhatatlan nagyonkülönbözikasajátstruktúráktól nincstúlnagydózisbanjelen highdosetolerance
Egyantigénimmunogenitásafüggabevitelútjától: csökkenő immunogenitás szubkután(s.c.) intramuszkuláris(i.m.) intraperitoneális(i.p.) intravénás(i.v.) orális(p.o.)
Aszervezetbejuttatottpotenciálisantigéneknemmindíg képesekönmagukbanimmunválasztkiváltani. Azimmunizálásnálalkalmazottadjuvánsok lassítjákazantigénfelszabadulását DANGERszignáltprodukálnak legújabbgenerációjukegyenesenazantigén prezentálósejtek citoszoljábajuttathatjaazantigént,ígyindukálctlaktivitást
KomplettFreundadjuváns ásványolaj vízemulzió+elöltmycobacteriumtuberculosis InkomplettFreundadjuváns ásványolaj vízemulzió Alumínium hidroxid+elöltbordatellapertussis Alumínium hidroxid ISCOM lipid emulzió,amiazantigéntacitoszolbajuttatja
Azellenanyagokforrása Egér olcsó,egyszerű,monoklonálisellenanyaggáfejleszthető Patkány haegérbennemmenne Nyúl hatöbbpoliklonálisellenanyagravanszükség Birka kecske szamár Tyúk Emberallél specifikusellenanyagok:mhc,abo,rh
Monoklonálisellenyagok HaegyaffinitásérésenátmentBsejtethalhatatlannáteszünk, korlátlanmennyiségbentermelhetünkegyadottspecificitású ellenanyagmolekulát.
Monoklonálisellenanyaggyártás: Immunizáltegér(vagymásemlős)Bsejtek + SP/2myeloma,HGPRT,halhatatlan Purinnukleotidokszintézisútjai: aminopterinnel(anti folát)gátolhatódenovoszintézis hypoxanthinbólkiinduló,hgprt függősalvageszintézis
Myelomasejtvonal HPGRT mutáns, HATmédiumbanelpusztul egyébként halhatatlan AktiváltBsejt ellenanyagottermel anyagcseréjenormális sejtkultúrábanelpusztul Fúzióshibrid HPGRT+,HATmédiumbanéletképes halhatatlan Klónozás,akívántklónokszelekciója
RészletMilsteinnekrológjából: MargaretThatcher,asPrimeMinister,criticisedMilstein andthemrc'sfailuretoapplyforapatent.
PHAGEDISPLAYtechnikávalBsejtgénbankbólátrendezett immunglobulinkönnyű ésnehézláncgéneketfoghatunkki.
PHAGEDISPLAYtechnikávalBsejtgénbankbólátrendezett immunglobulinkönnyű ésnehézláncgéneketfoghatunkki.
Iparilagalkalmazhatóepitop ellenanyagpárok: Flag tagdykddddk. Számosnagyaffinitású,ellenanyagkaphatóhozzá,köztükCa++függők. His tag(polyhistidine tag),legalább6hisztidin Ellenanyagok kaphatók ellene, Co++ vagy Ni++ kelátot képez
Agglutináción precipitációnalapulómódszerek
Avércsoportantigéneketagglutinációvalmutatjákki
Coombsteszt: Azanti Rhellenanyagokozta agglutinációtmásodik(anti humán) ellenanyaggalfokozzák. Hasonlóteszttelmutatjákkiaz autoimmunhemolitikusanémiát
Azimmunprecipitációantigénekkimutatására, mennyiségimeghatározásáraéstisztításáraalkalmas. Túlsúlybanaz ellenyag (oldat) Ekvivalencia (precipitátum) Túlsúlybanaz antigén (oldat)
Mie szórás,nagyobbrészecskeméretnélvörösbőlkékbeváltakolloidarnyszuszpenzió
Aterhességigyorstesztekegyrészekolloidaranyalapú
Fehérjéktisztításaellenanyagalapúaffinitás kromatográfiával. tükörképe azellenyagokaffinitás tisztitása,ittazantigént kötjükszilárdhordozóhozésazellenanyagottisztítjukvele.
Fehérjékazonosítása futószalagon Ismeretlenmolekulatisztítása Ellenanyagelőállítása Immunprecipitációvaltisztítottantigén Részlegesemésztés Tömegspektrográfia(pl.MALDI TOF) Néhányaminosavaspeptidszekvenciák Akeresettfehérjemeghatározásaadatbázisokalapján
Sejtszeparálásellenanyaggalbevontmágnesezhetőgyöngyökkel. Pl.őssejt transzplantátumok tisztítására használják. Dynabead MACSbead
Jelölt ellenanyagokfelhasználásaantigénekkimutatására Fluoreszcensfestékek: Fluoreszceinizotiocianát(FITC) Fikoeritrin(PE) Allofikocianin(APC) Enzimek: Tormaperoxidáz(HRP) Alkalikusfoszfatáz(AP) oldhatóésoldhatalanszínesszubsztrátok, lumineszkálószubsztrátok Elektronmikroszkóposkontrasztanyagok Aranykomplexek
Immunhisztokémiaszínesreakciótermékkimutatásával. CD8+Tsejtekokoztaautoimmundiabéteszbenszenvedőegér Langerhansszigete anti CD8 HRP diabétesz kontroll anti inzulin HRP
Direktjelölés Indirektjelölés biotin avidinrendszerrel Indirektjelölés másodikellenanyaggal
Immunfluoreszcencia gerjesztő fény fluoreszcencia
Áramlásicitofluorimetria,FACS(FluorescenceActivatedCellSorter) SideScatter (struktúráltsággalarányos) Fluoreszcencia Argonlézer ForwardScatter (mérettelarányos) Szortírozás(opcionális)
Példa: Adendritikussejtek magasszintenfejeznek kimhc IIéskostimuláló molekulákat(b7.2)
Enzyme LinkedImmunoSorbentAssay(ELISA) szendvics ELISA blokkolófehérje
beadarray amintáhozadottgyöngyök felületéntucatnyi ELISA reakciótvégzünkegyidejűleg, kiértékelésfacs szal
Radio immunoassay RIA Alapjaavizsgált antigénkompetíciója ismertkoncentrációjú radioaktívantigénnel.
Westernblot Fehérje gélelektroforézis Transzfer nitrocellulóz membránra Előhívás (többnyire HRPalapú,mafőleg lumineszcens)
AmonoklonálisellenyagokkaldefiniáltmolekulákCDkódot (ClusterofDifferentiation)kapnak. Amonoklonálisellenyagoklétfontosságúakadaganatok diagnosztikájában. Nemcsakdiagnosztikaieszközként,hanemgyógyszerként ishasználhatóak. ATsejtesimmunválaszgátlására(immunszuppresszíóra) használhatóazokt3anti CD3monoklonálisellenyag.
Szabadalmazhatóminden 1.új, 2.feltalálóitevékenységenalapuló, 3.iparilagalkalmazhatóműszakimegoldás. Aszabadalomjogosultjánakkizárólagosjogavanarra, hogyatalálmányt 1.hasznosítsa,vagy 2.ahasznosításramásnakengedélyt(licenciát)adjon. Aszabadalmioltalomidőtartamaabejelentésnapjátólhúszév. Ajogosulatlanhasznosításpolgáriperbentámadhatómeg.
Drugdevelopmentpipeline Targetidentification Hitgeneration Leadgeneration Preclinicalstudies(animalmodels,e.t.c.) PhaseI(safety,20 80healthyvolunteers) PhaseII(efficacy,100 300patients) PhaseIII(1000 3000patients)
GLP(GoodLaboratoryPractice)ésGMP(GoodManufacturingPractice) Minőségbiztosításirendszerek Traceability:theabilitytoreconstructthedevelopmenthistoryofadrug. Accountability:whohascontributedwhattothedevelopment,andwhen. Használjuk,denemsokszornemtudjukanevét: SOP=standard(orstanding)operatingprocedure
CD20 CD20 CD20 CD25 TNF EGFR GPIIb/IIIa HER 2 RSV CD33 CD52 IgE CD11a VEGF CD25 TNF