Intézeti Beszámoló Dr. Kovács Árpád Ferenc 2015.12.03
135 millió újszülött 10 millió újszülött
Preeclampsia kialakulása kezdetét veszi Preeclampsia tüneteinek megjelenése Preeclampsia okozta koraszülés Hatékony szűrőmódszer Magas rizikó kezelés és szoros monitorozás Alacsony rizikó várandósság követése Egészséges újszülött és édesanya
Trophoblast a várandósság karmestere Deciduális stroma sejtek Immunsejtek Táplálkozás Epigenetikai mechanizmusok Trophoblast invázió Oxidatív stressz Hormonális tényező Imprintált gének Transzporterek Citoarchitektúra Méhlepény növekedése, fejlődése és működése Genetikai tényezők Habituális vetélés Preeclampsia IUGR Koraszülés Környezeti tényezők 4
Extracelluláris vezikulák (EV) Keringő extracelluláris vezikulák Spirális artéria remodelling
Pállinger Éva, Fekete Nóri, Kőhidai László, Láng Orsolya EV által közvetített D-vitamin hatás Pap Erna, Tibák Alexandra(TDK) EV immuntoleranciában játszott szerepe Pállinger Éva, Fekete Nóri
Hipotézis: Az egészséges és szövődményes terhesek plazmájában keringő MV célsejtjei eltérőek MV PBMC Vizsgálati csoportok: Egészséges Krónikus hipertóniás Gesztációs hipertóniás Preeclampsiás 3. trimeszteres várandós
T helper T citotoxikus B-sejt
7 EV lymphocyta kötődés 6 5 4 3 2 1 0 6/6 4/6 6/6 3/6 6/6 3/6 6/6 6/6 Egészséges Krónikus hipertónia Gesztációs hipertónia Preeclampsia T-sejt B-sejt Th-hez intenzívebb kötődés
Hipotézis: várandósok plazmájában keringő EV-k befolyásolják a lymphocyta proliferációt ConA MV PBMC Vizsgálati csoportok: Egészséges 1. trimeszteres Egészséges 2. trimeszteres Egészséges 3. trimeszteres Preeclampsiás 3. trimeszteres
100.00% 90.00% 80.00% 70.00% 60.00% 50.00% 40.00% 30.00% G2/M fázis S fázis G0/G1 fázis Sub G1 fázis 20.00% 10.00% 0.00% ENT ly+ ConA ENT ly + K1 MV + ConA ENT ly + K2 MV + ConA ENT ly + K3 MV + ConA ENT ly + P MV + ConA
Hipotézis: várandósok plazmájában keringő EV-k célsejtjeihez való kötődése függhet a hormonális milliőtől Vizsgálati csoportok: Egészséges 1. trimeszteres Egészséges 2. trimeszteres Egészséges 3. trimeszteres Preeclampsiás 3. trimeszteres Módszer: Plazmából izolált MV inkubálása immunfenotipizált lymphocytákkal*, majd FACS módszerrel kötődésvizsgálat Egészséges nem terhes nő; egészséges terhes nő, egészséges férfi, preeclampsiás nő
Hipotézis: várandósok keringő EV-k befolyásolják a monociták motilitását és adhézióját Thp1 sejt Letapadt Thp1 sejt MV Vizsgálati csoportok: Egészséges 3. trimeszteres Preeclampsiás 3. trimeszteres
Integrin α-2 Thp1 Integrin β-1 Thp1 Integrin β-7 Thp1
Thp1 sejtek CD44+ (24h) Integrin α2+ (24h) Integrin β1+ (24h) 1 5 0 2 5 3 2 0 2 0 3 0 0 1 0 0 1 5 2 8 0 5 0 1 0 2 6 0 2 4 0 5 2 2 0 0 0 2 0 0 K 3 M V k e z e lt P M V k e z e lt T h p 1 K 3 M V k e z e lt P M V k e z e lt T h p 1 K 3 M V k e z e lt P M V k e z e lt T h p 1 CD103, CD62L, Integrinβ7 expressziója nem változott az MV kezelésekre
Thp1 sejtek CD44+ (72h) Integrin α2+ (72h) Integrin β1+ (72h) 1 5 0 4 0 3 0 0 3 0 1 0 0 2 0 0 2 0 5 0 1 0 1 0 0 0 K 3 M V k e z e lt P M V k e z e lt T h p 1 0 K 3 M V k e z e lt P M V k e z e lt T h p 1 0 K 3 M V k e z e lt P M V k e z e lt T h p 1 CD103, CD62L, Integrinβ7 expressziója nem változott az MV kezelésekre
Sejtciklus vizsgálat - egészséges 3. trimeszteres várandós MV Thp1 K3-1 K3-2 K3-3
Holomikroszkópos vizsgálat Motility (megtett út hossza) Migration (végpontok közötti távolság)
Avg. Migration (µm) Avg. Motility (µm) Keringő EV funkcionális vizsgálata 150 140 130 120 110 THP-1 culture - Holomicroscopy 1100 1000 900 800 THP-1 culture - Holomicroscopy 100 700 90 600 80 500 70 60 50 40 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 Time (unit = 20 sec) Ctr Healthy Preecl 400 300 200 100 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 Time (unit = 20 sec) Ctr Healthy Preecl
Tömegspektrofotometriás analízis 3x Egészséges 3. trimeszteres várandós MV 164 protein 3x Preeclampsiás 3. trimeszteres várandós MV 197 protein 70 protein 78 protein 22 protein 29 protein
1 0 0 8 0 6 0 E g é s z é g e s 3. trim e s z te re s v á ra n d ó s M V P re e c la m p s iá s 3. trim e s z te re s v á ra n d ó s M V 4 0 2 0 0 C o m p le m e n t C 3 S e r u m A lb u m in A p o lip o p r o te in B 1 0 0 F ib r in o g e n b e ta c h a in M y o s in -9 F ila m in -A A lfa 2 m a c r o g lo b u lin S e r o tr a n s fe r r in C o m p le m e n t C 4 b T a lin -1 F ib r in o g e n a lp h a c h a in In te g r in 2 b F ib r in o g e n g a m m a c h a in Ig m u c h a in C r e g io n K e r a tin ty p e 2 c y to s k e le ta l 1 Ig g a m m a 1 c h a in C K e r a tin ty p e 1 c y to s k e le ta l 9 K e r a tin ty p e 1 c y to s k e le ta l 1 0 A p o lip o p r o te in E H a p to g lo b in A lp h a 1 a n titr y p s in C e r u lo p la s m in A c tin, c y to p la s m a tic 1 Ig m u h e a v y c h a in d is e a s e p r o te in Ig a lp h a 1 c h a in C F ib r o n e c tin P r e g n a n c y z o n e p r o te in C o m p le m e n t fa c to r H
Sejtmozgásban szerepet játszó fehérjék Preeclampsiás várandós MV Egészséges várandós MV
Egészséges várandós MV Preeclampsiás várandós MV Apoptózis Integrin beta 3 Integrin alfa 2b PLT glikoprotein 1b V koagulációs factor Biológiai adhézió Közös: Vitronectin Fibrinogén alfa lánc Fibrinogén beta lánc Fibrinogén gamma lánc Fibronectin Ceruloplasmin CD5 antigen like Komplement B factor Komplement H factor
Csak az egészséges várandós MV Csak a Preeclampsiás várandós MV Integrin jelátviteli útvonal Integrin beta 3 Aktin 1 Integrin alfa 2b Talin 1 RAP1B Alfa actinin 1 Filamin A Vinculin Közös Fibronectin Vitronectin
EV által közvetített D-vitamin hatás Hipotézis: D vitamin kezelt BeWo sejtekből származó MV befolyásolja a célsejtek D vitamin által regulált génexpressziót MV D vitamin Thp1 sejt BeWo MV qpcr CAMP VDR CD44 TGF-beta IL-10 CYP27B1
EV által közvetített D-vitamin hatás Cathelicidin Veleszületett immunválasz Adaptív immunválasz Chantal Mathieu Vitamin D and the immune system: getting it right IBMS BoneKEy. 2011 April;8(4):178-186
Relatív mrns expresszió Relatív mrns expresszió Relatív mrns expresszió Relatív mrns expresszió EV által közvetített D-vitamin hatás O n e -w a y A N O V A V D R O n e -w a y A N O V A C A M P 0.0 2 5 0.3 0.0 2 0 0.2 0.0 1 5 0.0 1 0 0.1 0.0 0 5 0.0 D v i t B e W o M V + T h p 1 E ti l a l k o h o l B e W o M v + T h p 1 D v i t T h p 1 E ti l a l k o h o l T h p 1 0.0 0 0 D v i t B e W o M V + T h p 1 E ti l a l k o h o l B e W o M v + T h p 1 D v i t T h p 1 E ti l a l k o h o l T h p 1 0.2 0 O n e -w a y A N O V A C D 4 4 1.5 O n e -w a y A N O V A T G F -b é ta 0.1 5 1.0 0.1 0 0.5 0.0 5 0.0 0 D v i t B e W o M V + T h p 1 E ti l a l k o h o l B e W o M v + T h p 1 D v i t T h p 1 E ti l a l k o h o l T h p 1 0.0 D v i t B e W o M V + T h p 1 E ti l a l k o h o l B e W o M v + T h p 1 D v i t T h p 1 E ti l a l k o h o l T h p 1
END, hopefully not dead end.
Köszönöm szépen a figyelmet!