SZABVÁNYMŰVELETI ELŐÍRÁS. Jóváhagyta: Érvénybelépé s időpontja: Dátum. Nyilvántartott példány: Munkapéldány: A példány sorszáma:

Átírás

1 SEMMELWEIS EGYETEM Orvosi Biokémiai Intézet 1094 Budapest, Tű zoltó u című gyakorlat előkészítése Készítette: A dokumentáció kódja: SE-OBI-OKT- MU-12 Dr. Törőcsik Beáta tudományos munkatárs Dátum Változat száma: 01 Jóváhagyta: Érvénybelépé s időpontja: Dr. Kolev Kraszimir tanulmányi felelős Dátum Oldalak száma: 6 MIR szempontból ellenőrizte: Mellékletek száma: 0 Dr. Kolev Kraszimir minőségirányítási megbízott Dátum Nyilvántartott példány: Munkapéldány: A példány sorszáma: Ezen Szabványműveleti előírás a Semmelweis Egyetem szellemi tulajdona. Továbbadása, sokszorosítása írásos engedélyhez kötött. A Munkautasításban szereplő információt csak a minőség- és környezetirányítási rendszer működtetéséhez lehet felhasználni.

2 MÓDOSÍTÁSOK JEGYZÉKE Módosította Dátum/Aláírás Módosítot t oldalszám Jóváhagyta Dátum/Aláírás Ellenőrizte Dátum/Aláírás Kibocsátás időpontja Oldal:2/6

3 TARTALOMJEGYZÉK A CÉLJA... 4 A ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE... 4 ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA... 4 A LEÍRÁSA... 4 Oldal:3/6

4 A CÉLJA Összefoglalja a rutinszerűen alkalmazott technológiai eljárás részleteit. A ÉRVÉNYESÉGI TERÜLETE Orvosi Biokémiai Intézet oktatási előkészítő laboratóriuma. ILLETÉKESÉG ÉS FELELŐSSÉG MEGHATÁROZÁSA A dokumentum kidolgozásáért felelős: Tanulmányi felelős A dokumentum alkalmazásáért felelős: Vezető laborasszisztens A dokumentumban foglaltak végrehajtásáért felelős: Beosztott laborasszisztensek. A dokumentumban szabályozott tevékenység rendszer felülvizsgálat alkalmával történő felülvizsgálatáért felelős: A Minőségirányítási megbízott A LEÍRÁSA Szükséges oldatok: 1. M 9 minimál medium: NH4Cl 5g NaCl 25g K2HPO4 30g KH2PO4 15g 87% glicerin 32ml Desztvízzel 5000ml-re kiegészítve, sterilizálva Oldal:4/6

5 ml 1 m% MgSO4, sterilizálva ml 10% Tripkazin, sterilizálva 2 ml 1 m% MgSO4-t, 4 ml 10% Tripkazin-t belemérünk 200 ml M 9 minimál mediumba, így készül el a végleges M 9 médium L 0.02 M K-foszfát puffer ml 0.5 mg/ml IPTG ml 1.5 mg/ml OPNG ml 0.5mg/ml Chloramphenicol MÉREG ml 2.5mg/ml Rifampicin MÉREG 9. 2L 0.5 M Na2Co ml Toluol A nem pathogen, ártalmatlan szerotipusú (gyalog) Escherichia coli baktériumot a SE Mikrobiológia intézete oltja le számunkra, ferde agarba. Ebből áthozatal után egy kacsnyi baktérium azonnal leoltásra kerül 100 ml M 9 médiumba, 37C-on történő 16 órás rázó inkubálás után 550 nm-en desztvízzel szemben extinkcióját lemérjük, majd M 9 médiummal 0.05-ös extinkcióra hígítjuk. A rázó inkubálást 0.2 extinkcióig folytatjuk (exponencális/log fazisban lévő baktériumokkal dolgozunk). A maradék baktérium 4C fokon a hűtőben tárolódik, és minden gyakorlat előtt friss leoltásra kerül sor. Bekészített anyagok termenként: 4 üveg desztviz 4 üveg 0.02 M K-foszfát puffer 4 üveg 0.5 M Na2CO3 4 üveg Toluol 2 pohár pipettahegy µl 2 pohár pipettahegy µl Escherichia coli bacterium 50 ml (100 ml-es Erlenmeyer lombikban) Oldal:5/6

6 Fotométerek (420 nm) (mellé 4 db szűkített poliakril küvetta, pohár, papirvatta, spriccflaska) Vízfürdő 37 C 80 db rövid kémcső 4 db kémcsőállvány 2 db jégtartó, benne -IPTG 2x3 ml -OPTG 2x3 ml - Chloramphenicol 1x1.2 ml - Rifampicin 1x2 ml Kosárba: 4 db µl pipetta 4 db µl pipetta 4 db stopper 1 db filctoll Oldal:6/6