Mikrobaaktivitás/szaporodás mérése automata mérőműszerekkel

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Mikrobaaktivitás/szaporodás mérése automata mérőműszerekkel"

Erika Dudás
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 Mikrobaaktivitás/szaporodás mérése automata mérőműszerekkel Automatikus turbidimetria Impedimetria/konduktometria

4 Mikroorganizmusok szaporodási görbéi Bioscreen készülékkel mérve

5 Kalibrációs görbe ~ sejt/ml tartományban lineáris kapcsolat az OD és a sejtszám között

6 TTD Detekciós idő:ttd

8 Automata fotométer MULTISKAN ASCENT Élesztőgomba növekedése különböző glükóz és N-forrás tartalom mellett OD595 1,800 1,600 1,400 1,200 1,000 0,800 0,600 0,400 0,200 0, Idő [óra] 0.5y ; 1.5g 0.92y ; 1.5g 0.5y ; 2.92g 0.08y ; 1.5g 0.5y ; 0.08g 0.8y ; 2.5g 0.2y ; 2.5g 0.2y ; 0.5g 0.8y ; 0.5g

9 IMPEDIMETRIA Stewart (1898, Edinburgh): The changesproduced by thegrowth ofbacteriain themolecularconcentration and electrical conductivityofculturemedia. (Journal ofexperimental Medicine)

10 Az impedimetria elve Glucose Beoltás tápközeg Glucose elektródok Anyagcsere - szaporodás Vezetőképesség nő

11 Impedimetriásszaporodási görbe TTD

13 Az elektromos jel függ az adatgyűjtés gyakoriságától, hőmérséklettől, konduktív és kapacitatív komponense van. A hőmérséklet szabályozás/kontroll kritikus! (1 C hőmérséklet emelkedés hatására 0.9% kapacitancia és 1.8% konduktancia növekedés)

14 Detekciós idő (TTD): Az azidőtartam, ami alatt a mikrobaszaporodás által okozott változás egy (bizonyos) küszöbértéket elér. kb sejt/ml baktériumoknál kb sejt/ml élesztőgombáknál Fordítottan arányos a minta eredeti mikrobaszámával. A TTD függ: A kezdeti mikrobaszámtól, A vizsgált mikroorganizmus szaporodási kinetikájától, A tápközeg tulajdonságaitól

15 Bactometer Malthus Instrument

16 M-value: relative medium impedance BacTracsystem Sy-Lab, Austria E-value: relative electrode impedance

17 RABIT mérőműszer (Rapid Automated Bacterial Impedance Technique) Don Whitley Ltd, U.K.

18 RABIT modul RABIT mérőcella tápleves elektródok

19 Impedimetriás műszerek jellemzői (Bolton & Gibson, 1994)

20 E. coli, 37 C D.W. tápleves

21 Salmonella Pseudomonas (Don Whitley Broth, 30 C) Baktériumok impedimetrás görbéi

22 Kalibráció: Egyenes arányosság a minta sejtszáma (log CFU/ml) és a TTD között adott tápközegben és tenyésztési körülmények között

23 Indirekt konduktometria tápközeg CO 2 + 2OH - =>CO H 2 O CO 2 - abszorbens elektródok (Owens et al., 1989.)

24 Saccharomyces cerevisiae indirekt vizsgálata

25 Az indirekt konduktometriaelőnyei: Hagyományos tápközegek is használhatók. A mérő elektródok nem érintkeznek a tápközeggel =>nagy sótartalmú tápközegek is használhatók. A csekély konduktancia-változást előidéző mikroorganizmusok is kimutathatók. A direkt módszerrel elektród interferenciát okozó minták is vizsgálhatók.

26 Alkalmazási területek Kórokozók szelektív kimutatása élelmiszerekből Salmonella 25 g élelmiszer => 225 ml elődúsító leves => 37 C óra => 100 µl beoltása szelektív dúsító levesbe (RV) => inkubálás indirekt RABIT csőben 42 C 36 óra => => pozitív konduktometriás válasz => megerősítés => negatív konduktometriás válasz=> Salmonella nem kimutatható (Maddenet al., 1996)

27 Listeriamonocytogenes (Szigeti &Farkas, 2000) L. monocytogenes and Lactococcus lactis mixed culture, BiMedia 403, 30 C

28 Detection of Listeria monocytogenes with impedimetric method 24h 24h 48-72h 46h 72-96h 70h h >96-120h.

29 Indikátor/romlást okozó mikroorganizmusok kimutatása Koliformok E. coli indirekt módszer, szelektív tápközeg beoltása: COL-ECO Test Broth (DWS) Fluorocult Brilliantgreen Broth (MERCK) Fluorocult LaurylsulphateBroth (MERCK) => pozitív válasz: koliformkimutatható UV-fénybenfluoreszkálás => E. coli kimutatható

30 Spórás baktériumok Clostridiumpasteurianum kimutatása körtevelőből

31 Mezofil aerobösszcsíraszám (Mohácsi-Farkas et al., 1999/a)

32 Természetes antimikrobás anyagok vizsgálata (Mohácsi-Farkas et al., 1999/b)

33 Koliform Enterobacteriaceae Salmonella Listeria Összmikroba aktivitás Élesztő- és penészgomba Mikrobaaktivitás mérés MALTHUS készülékkel Élelmiszerek Salmonella Campylobacter Pseudomonas spp. Listeria Salmonella Salmonella Tejsavbaktérium Összmikroba aktivitás Összmikroba aktivitás Koliform Pseudomonas Challangetest Hús és hústermékek Környezeti minták Takarmány Kozmetikumok

34 ELŐNYÖK -HÁTRÁNYOK A mikrobiológiai problémák gyorsabban kimutathatók, mint a hagyományos tenyésztési eljárással A vizsgálat előtt rövid mintaelőkészítés szükséges Az eredmények könyen leolvashatók és értékelhetők Számítógéppel vezérelt redszer Az eredmények/adatok a prediktív mikrobiológiában felhasználhatók Az impedimetrianem szupergyors módszer Az impedimetria és a hagyományos telepszámlálás alapelve eltérő => szoros összefüggés csak bizonyos, kontrollált körülmények között áll fenn

35 Munkaidő/ Klasszikus Malthus meghatározás Mintaelőkészítés Hígítás Leoltás Számlálás perc/l ,5 perc/ perc/l perc/ Munkaidőmegtakarítás: 59% Anyagfelhaszn./ meghat. Előkészítés alapszuszpenzió hígítás anyag/l 90 ml 36 ml Klasszikus anyag/ ml 1800 ml anyag/l 90 ml - Malthus anyag/ ml --- Anyagmegtakarítás: 39 % Leoltás táptalaj Petri csésze pipetta 150 ml 10 db 5 db 7500 ml 500 db 250 db 4 ml - 1 db 200 ml db Anyagmegtakarítás: 97 %

Hasonló dokumentumok

RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAH /2018 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAH /2018 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAH-1-1765/2018 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz 1) Az akkreditált szervezet neve és címe: SEQOMICS Biotechnológiai Kft. Élelmiszerbiztonsági laboratórium 6782 Mórahalom,