Szőlőmag extraktum hatása makrofág immunsejtek által indukált gyulladásos folyamatokra Radnai Balázs, Antus Csenge, Sümegi Balázs Pécsi Tudományegytem Általános Orvostudományi Kar Biokémiai és Orvosi Kémiai Intézet
Metabolit-profil adatbázis (minta) mg/l Ga Ty Cfa Ct Rut Pcy Ca Qu pcm Fa tr Cabernet F 45.3 46.5 42.1 62.1 9.5 83.2 14.6 3.7 9.2 2.5 0.8 Cabernet S 57.8 89.1 53.5 81.8 13.1 43.7 23.1 5.6 6.6 3.4 2.8 Cabernet S/F 70.9 54.9 54.8 69.0 17.2 51.8 20.0 2.4 9.2 0.9 1.2 Cuveé 60.3 72.3 53.3 73.8 20.2 25.4 27.1 3.5 10.5 1.3 1.9 Kadarka 57.9 56.0 62.8 77.0 12.1 3.0 5.9 8.7 0.0 3.3 0.9 Kékfrankos 46.0 82.9 87.0 71.5 13.6 44.2 37.0 11.3 9.5 0.0 2.8 Merlot 65.9 81.2 51.6 89.1 16.9 47.5 18.5 11.2 10.2 3.0 3.9 Oportó 29.7 63.5 52.4 98.6 19.4 56.7 37.4 9.8 3.7 8.1 1.2 Pinot noir 45.2 116 55.5 103 9.7 33.9 28.9 7.5 8.9 8.3 3.2 Portugieser 43.0 67.2 50.2 77.2 14.7 51.7 25.7 5.8 0.4 7.1 1.4 Royal Cuvee 79.2 82.9 54.6 75.9 13.6 67.5 23.3 5.8 5.8 0.0 1.9 Rubin Cuvee 53.5 89.3 66.1 79.8 13.3 61.0 30.8 12.2 4.3 11.5 3.1 Shiraz 50.0 84.3 40.4 68.2 15.5 65.6 24.4 13.4 8.3 0.0 1.1 Zweigelt 58.3 86.7 77.5 73.4 6.8 60.2 30.6 6.0 8.0 7.9 2.7 Total (n=67) 56.1 77.6 57.3 79.4 14.2 50.1 24.6 7.4 7.5 3.8 2.3 Ga: Gallic acid; Ty: Tyrosol; Cfa: Caftaric acid; Ct: Catechin; Rut: Rutin; Pcy: Procyanidin B2; Ca: Caffeic acid; Qu: Quercetin; pcm: p-coumaric acid; Fa: Ferulic acid; tr: trans-resveratrol
300-350 g hím CFY Sprague-Dawley patkányok 2 x 80 mg/kg izoproterenol (ISO) s.c. 24 h szünettel 2002 Polgár Merlot vákum desztillált (alkohol < 1%), CaCO 3 -abszorbeált (1 g/l), 5 x higítva vízzel (AFRW) p.o. ad libitim 8 hétig Testtömeg mérés Kamratömeg mérés Szívinfarktus model Szív fixálása, festése pikroszíriusz vörössel, átlagos (100 sejt) cardiomyocita átmérő megállapítása Immunhisztokémiai jelölés III-as típusú kollagén ellen Szív homogenizálása, immunoblotting foszfo-akt Thr638/641 és foszfo-pkcα/β II ellen Ser473
Ventricles/body weight (mg/g) heart weight (g) AFRW hatása a gravimetrikus paraméterekre 1,6 1,4 1,2 3 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 control ISO ISO+AFRW 2,5 2 1,5 1 0,5 0 Control ISO ISO+AFRW
Diameters of myocyte (µm) AFRW hatása a cardiomyocita méretre Control ISO 25 20 15 10 5 ISO + AFRW 0 Control ISO ISO+AFRW
deposition of collagen type III AFRW hatása a kollagén lerakódásra Control ISO ISO + AFRW 43 38 33 28 23 18 13 8 3-2 Control ISO ISO+AFRW
Quercetin szerepe a rák megelőzésében és a rákterápiában
Viability (%) Quercetin hatása humán U-251 glioblastoma sejtek 48 órás túlélésére 120 100 80 60 40 20 0 Control 1 10 25 50 100 μm
Quercetin hatása a kolónia formálásra Control 1 μm 10 μm 25 μm 50 μm 100 μm
Cell number Quercetin és sugárterápia együttes hatása a kolónia formálásra Control 4Gy Qct Qct + 4Gy Qct+4Gy+TMZ 400 300 200 100 0
A gyulladás Makrofágok és monociták találkoznak a szervezetbe bejutó baktériumokkal és kölcsönhatásba lépnek a baktériumok felszínén lévő lipopoliszahariddal (LPS), amely a sejtfelszíni receptor aktiválásával gyulladásos válaszreakciót indít el Ezen válaszreakciók következtében megnő a makrofágok és monociták termelte: - Reaktív oxigén speciesz (ROS) - NO-szintáz szint (nitrogén-monoxid termelés) - Citokinek és egyéb gyulladást előidéző anyagok szintézise
Célkitűzés, anyagok és eszközök Célkitűzés: Munkánkban egy Villányból származó szőlőmag őrlemény gyulladásgátló (antiinflammatórikus) hatását vizsgáltuk LPS indukálta RAW264,7 makrofág sejteken. Kísérleteinkben az aktivált immunsejtek legfontosabb gyulladásos mediátorait RNS, ROS és TNFα mértük. Kísérleti csoportok: CTRL: kontroll, kezeletlen sejtek ALK: alkohol, etanol kezelt sejtek LPS: lipopoliszacchariddal kezelt sejtek (100ng/ml) LPS+SZŐ: LPS-sel és szőlőmag őrleménnyel kezelt sejtek. Anyagok: A szőlőmag őrleményt 0,5 g-ot, 1ml tömény etanolban rázattuk szobahőmérsékleten 24 órán át. Az így nyert alkoholos extraktumot 10, 5, 1 μl / 1 ml médium koncentrációban alkalmaztuk. A lipopoliszacharid molekulát (Escherichia coli 0127:B8) a Sigma-Aldrich-től rendeltük. A RAW264,7 sejteket az ATTC-től vettük.
Szőlőmag őrlemény hatása az LPS indukálta RNS termelődésre 0,4 0,35 Nitrit termelődés Alk - + - + OD 550 0,3 0,25 0,2 0,15 CTRL LPS 0,1 0,05 0 CTRL LPS LPS+ SZŐ(10) LPS+ SZŐ(5) LPS+ SZŐ(1) CTRL LPS LPS+SZŐ(10) LPS+SZŐ(5) LPS+SZŐ(1)
fluorescent intensity (au) Szőlőmag őrlemény hatása az LPS indukálta ROS termelődésre 2400 2200 2000 1800 1600 1400 1200 1000 CTRL LPS LPS+ SZŐ(10) LPS+ SZŐ(5) LPS+ SZŐ(1) CTRL LPS LPS+SZŐ(10) LPS+SZŐ(5) LPS+SZŐ(1)
Szőlőmag őrlemény hatása az LPS indukálta TNFα termelődésre 3 2,5 2 OD 550 1,5 1 0,5 0 CTRL LPS LPS+SZŐ(10) LPS+SZŐ(5) LPS+SZŐ(1) CTRL LPS LPS+ SZŐ(10) LPS+ SZŐ(5) LPS+ SZŐ(1)
Konklúzió Összefoglalva eredményeinket kijelenthetjük, hogy a szőlőmag őrlemény, valószínűleg magas polifenol és más növényi antioxidáns tartalma miatt, hatékonyan csökkentette az aktivált makrofágokban beinduló gyulladásos folyamatokat. Pécs, 2012.05.22.