Antibiotikum rezisztencia vizsgálatok: sikerek és s kudarcok Dr. Lányi L Éva PTE OEC Laboratóriumi riumi Medicina Intézet MEDIPOLISZ Dél-DunD Dunántúli Regionális Egyetemi Tudásk sközpont, PécsP
MIC interpretáci ció fejlıdése (CLSI) 1. 1970-80:valamennyi organizmushoz egyetlen táblázat 2. 1980-90:bizonyos 90:bizonyos organizusokhoz saját, külön k breakpoint-ok ok (Haemophilus, Neisseria) 3. 2000:különb nbözı breakpoint az infekció helye szerint 4. 1998:Organizmus csoportonként nt különbk nbözı táblázatok 5. Jövı: J : Ugyanaz a MIC, ugyanaz az organizmus, ugyanaz az infekciós s hely a rezisztencia mechanizmustól l függf ggıen értelmezendı
Validált lt protokollok: harmonizáci ciós s törekvt rekvések Európai nemzeti protokollok: BSAC (British Society) SMF (France( France) DIN (Deutsche( Industrie Norm) CRG (Netherland( Netherland) SRGA (Swedish( Reference Group) NWGA (Norwegian( Norwegian) Európai harmonizáci ció: EUCAST (European( Commitee for Antimicrobial Susceptibility Testing) USA protokoll NCCLS=CLSI (Clinical( Laboratory Standards Institute )
Standardizáci ció szüks kségessége (Clin. Microbiol. Infec.. 2000 6 290-293) 293) NCCLS BSAC NWGA SRGA E.Coli (n=198) S R S R S R S R amoxycillin 71 21 72 28 8 21 5 28 cefuroxim 90 3 65 3 15 9 65 9 S.aureus (n=67) penicillin 27 73 34 66 39 58 39 60 oxacillin 97 3 100 0 85 3 85 15
NRI : Normalized Resistance Interpretation (Int.J.Antimic.Agents 22 2003 7-137 Kornwal et al.) Matematikai algoritmus: 1.Jobbról l indulva megkeresi az inflexiós s pontot(mozgó átlag) 2.Kiszámolja az ideális görbe fele alatti izolátumok számát 3.Ugyanennyi izolátumot tesz a bal oldalra, és kalkulálja: lja: Mean ±S.D. Határvonal:3 SD(99.9%)
NRI:laboratórium rium-specifikus, specieshez rendelt cut-off értékek E.Coli n=359 Laboratórium rium-specifikus és s species specifikus cut off érték (breakpoint)) a ceftazidim 30ug disk vonatkozásában CLSI 2005 breakpoint (R 14 ill. S 18) S
Perspektívák k a rezisztencia vizsgálatokban 1. Adott species milyen rezisztencia mechanizmussal rendelkezhet? -természetes és s szerzett rezisztenciák -áttörhetı-e a rezisztencia dózis d emeléssel - indukálhat lható-e e az adott rezisztencia 2. Van-e validált lt módszer a rezisztencia mechanizmus vizsgálat latára? - automata rendszerek NEM mindenhatóak! ak! - korong-diff diffúziós s módszer m (automatizálhat lható!) - MIC meghatároz rozás s (E-teszt vagy higítási sor)
Régi kórokozk rokozók új j rezisztencia mechanizmusok Évente megjelenı új beta-laktam laktamázok száma Jelenleg > 530 enzim ismert (K.Bush,, 9th International Congress of Beta-lactamases lactamases, Italy) Új j generáci ciós s enzimek Evolúci ciós s potenciál magas (transzmisszió, mutáci ció)
ESBL PROTOKOLLOK: CLSI (Eur J Clin Microbiol infect Dis 2004 23 813-17) 17) Organisms: E.coli. K.pneumoniae, K.oxytoca Screen:cefotaxime cefotaxime, ceftazidim, ceftriaxon, atreonam: : MIC 2 ug/ml, /ml,cefpodoxim MIC 8 Screening test sensitivity% CTX 98.6 100 CAZ 92.8 99 CPD 97.1 100 CTX+CAZ 100 99 CTX+CPD 98.6 100 CAZ+CPD 98.6 99 specificity%
Confirmation ESBL PROTOKOLLOK: CLSI DD method: ceftazidim ±clavulanate and ( 5mm increase in zone diameter ) E-tests: cefotaxim, ceftazidim ( 3 twofold concentration decrease in MIC) Confirmatory test CTX DD method 91.3 CTX E-testE 97.1 CAZ DD method 75.4 CAZ E-testE 92.8 CPD DD method 85.5 CTX E-test E + CAZ E-testE 98.6 Sensitivity% cefotaxim±clavulanate clavulanate
ESBL detektálására non-escherichia coli és non-klebsiella speciesben CLSI 2005: P. mirabilis rutin szőrését t ugyan nem javasolja, de releváns klinikai esetben vizsgálat latát t igen (J.Clin. Microbiol 2004 42 294-98) 98) Speciesek: Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Morganella, Proteus,, Providencia, Serratia n=690 Screen pozitív: n= 355 Confirmáci ció után n pozitív: n=15 Probléma: Az ESBL screen pozitív izolátumok >80% 80%-a a olyan rezisztencia profillal rendelkezett, mely AmpC jelenlétére utalt (cefoxitin( MIC magas, cefepim MIC alacsony) ezért lehetséges, hogy elfedte a clavulanat hatását
ESBL NORVÉG G PROTOKOLL (J.Clin.Microbiol.2007 45 199-205) Species:K.pneumoniae (SHV 80%), E.coli (CTX-M M 90%) Screen:cefotaxim cefotaxim,ceftazidim,cefpodoxim: : MIC 1ug/ml Confirmáci ció :E-test:CTX, CAZ, FEP, CDM: CTX,CAZ,CPD,(,(Combined Disc Method) módszer szezitivitás % CTX E-testE 97 CTX CDM 99 CAZ E-testE 95 CAZ CDM 35 FEP E-testE 99 CPD CDM 99
ESBL BSAC (British guideline) Livermore 2004 Screen: ceftazidim MIC 2 ug/ml cefotaxim,cefpodoxim cefpodoxim MIC 1ug/ml Confirmáci ció: : E-test E vagy CDM Interpretáci ció:rezisztensnek kell kiadni valamennyi penicillinre (kivéve ve temocillin), ),cefalosporinra (kivéveve cefoxitin) és aztreonamra,, függetlenf ggetlenül l a rutin érzékenységi teszt eredmény nyétıl.
ESBL detektálás s automata rendszerrel (BD) (J.Clin.Microbiol 2006 44 485-94)
ESBL detektálás s automata rendszerrel (MicroScan) A:E.coli E.coli, K.pn.. B:K.oxytoca C:Enterobacter Citrobacter spp.. D:Serratia spp. Enterobacter,
ESBL detektálás s automatával (Vitek) Zónaátmérık k eloszlása sa ESBL pozitív v ill. negatív v E. cloaceae (ceftazidim R) körülk (J.Antimic.Chemoth.. 2001) VITEK: 2 000 fenotípus 20 000 MIC eloszlás Advanced Expert System
New agar plate for the recovery of ESBL from feces or rectal swabs (Diagn Microbiol Infect Dis 2005 51 51-55) 55) Drigalski agar with cefotaxime on one half and ceftazidim on other half of the plate. Cut off /CFU/plate plate/ Sensitivity % Specificity% 25 88 53 250 100 27 It is sensitive method for screen the rectal samples, but the confirmation must be done with conventional method!
PARADIGMA VÁLTV LTÁS??? 1.KALIBR KALIBRÁCIÓ Normalized Resistance Interpretation 2.MIC interpretáci ció Rezisztencia mechanizmus!