Rendelési információk 05401640 190 Tina-quant Hemoglobin A1c Gen.2 (2 100 teszt) cobas c 111 04528417 190 C.f.a.s. HbA1c (3 2 ml) Kód 674 20764833 322 HbA1c Control N (4 0.5 ml) Kód 357 20764841 322 HbA1c Control P (4 0.5 ml) Kód 358 05479207 190 PreciControl HbA1c norm (4 1 ml) Kód 208 05912504 190 PreciControl HbA1c path (4 1 ml) Kód 209 05007232 190 Hemolyzing Reagent Gen.2 (8 6.3 ml) Kód 952 11488457 122 HbA1c Hemolyzing Reagent for Tina-quant HbA1c (1000 ml) Olyan analizátor(ok), amely(ek)en a készlet(ek) alkalmazható(k) Magyar Rendszerinformáció Teljes vér DCCT (): ACN 890 A1W2D Hemolizátum DCCT (): ACN 860 A1H2D Teljes vér IFCC (mmol/mol): ACN 262 A1W2M Hemolizátum IFCC (mmol/mol): ACN 250 A1H2M Alkalmazás In vitro vizsgálati eljárás a hemoglobin A1c mmol/mol-ban (IFCC) és -ban (DCCT/NGSP) történő kvantitatív meghatározására teljes vérből és teljes vérből készült hemolizátumból a cobas c 111 rendszeren. A HbA1c meghatározások cukorbetegségben (diabetes mellitus) szenvedő betegek hosszabb időszak alatti átlagos vércukorszintjének követésére használhatók. A vizsgálat ezen kívül a diabétesz diagnosztizálására használható, és a segítségével kiválaszthatók azok a betegek, akiknél fennáll a diabétesz kifejlődésének veszélye. Összegzés 1,2,3,4,5,6,7,8,9 A hemoglobin (Hb) a vörösvértestekben található, vörösre színezett fehérje molekula. Négy protein alegységből áll, amelyek mindegyikének az egyik fele egy heme. Legfontosabb szerepe, hogy az oxigént és a szén-dioxidot szállítja a vérben. Mindegyik Hb molekula négy oxigén molekulát képes megkötni. A hemoglobin különféle alegységekből és származékokból épül fel. A HbA1c a hemoglobinok ezen heterogén csoportjához tartozó egyik glikált hemoglobin. A glikált hemoglobinok úgy alakulnak ki, hogy a Hb molekulához különféle cukrok kapcsolódnak. A HbA1c egy kétlépéses, nem enzimatikus reakció során jön létre, amelynek során a glükóz molekula a normál felnőtt hemoglobin (HbA) β láncának N terminális aminocsoportjához kapcsolódik. A reakció első lépése még reverzibilis, amelynek során instabil HbA1c képződik. A reakció második lépésében ez átrendeződik, és stabil HbA1c-vé alakul át. A vörösvértestekben a stabil HbA1c molekulává átalakuló HbA relatív mennyisége a vércukor átlagos koncentrációjával arányosan nő. A stabil HbA1c molekulává történő átalakulás mértékét, a vörösvértestek kb. 100-120 napos átlagos élettartama korlátozza. Így a HbA1c a megelőző 2-3 hónap átlagos vércukorszintjét tükrözi. A HbA1c mérés tehát alkalmas a diabetes mellitusban szenvedő betegek hosszabb időszak alatti átlagos vércukorszintjének ellenőrzésére. Minél közelebb esik egy vércukorszint időpontja a vizsgálatéhoz, annál nagyobb a HbA1c szintre gyakorolt hatása. 1 A HbA1c szint és az utolsó 2-3 hónap átlagos vércukorszint értékei közötti összefüggés vizsgálatával számos klinikai vizsgálatsorozat foglalkozott. Egy közelmultban végzett klinikai vizsgálatsorozat az alábbi összefüggést állapította meg: Hitelesítés az IFCC előírások szerint (és újraszámolva a 8. szakirodalom szerint) Becsült átlagos glükóz koncentráció [mmol/l] = 0.146 HbA1c (mmol/mol) + 0.834 ill. Becsült átlagos glükóz koncentráció [mg/dl] = 2.64 HbA1c (mmol/mol) + 15.03 Hitelesítés a DCCT/NGSP előírások szerint 8 Becsült átlagos glükóz koncentráció [mmol/l] = 1.59 HbA1c () - 2.59 ill. Becsült átlagos glükóz koncentráció [mg/dl] = 28.7 HbA1c () - 46.7 Az anyagcsere nem megfelelő ellenőrzése növeli a diabéteszes szövődmények (pl. a diabétszes vesebetegség és szemideghártyabetegség) kialakulásának veszélyét. A HbA1c, mint az átlagos vércukorszint jelzője, alkalmas a cukorbetegeknél fellépő diabéteszes szövődmények kialakulásának előrejelzésére. 4,5 Rutin klinikai felhasználás esetén 3-4 havonta történő mérése általában elégséges. Bizonyos klinikai körülmények fennállásakor (például terhességi diabétesz esetén vagy a korábbi terápia jelentős megváltoztatását követően) hasznos lehet a HbA1c 2-4 hetenként történő ellenőrzése. 7 A módszer alapelve 10,11,12 Ez az eljárás a hemolizáló reagensben TTAB-t (tetradecil-trimetilammónium-bromidot) alkalmaz detergensként, hogy kiküszöbölje a fehérvértestekkel fennálló interferenciát (a TTAB nem roncsolja a fehérvértesteket). Nincs szükség arra, hogy az instabil HbA1c-frakció eltávolítása érdekében előkezeljék a mintát. A vizsgálat minden olyan hemoglobin variánst kimutat, amely a β lánc N terminális részén glikált, és vannak rajta a HbA1c-n találhatóval megegyező olyan régiók, amelyeket az antitest felismer. Így ezzel a vizsgálati eljárással meg lehet határozni az urémiában és a leggyakoribb hemoglobinopátiákban (HbAS, HbAC, HbAE) szenvedő betegek cukoranyagcsere állapotát. 13,14 Hemoglobin A1c A HbA1c meghatározás a hemolizált teljes vérből történő, turbidimetriás gátlásra épülő immunkémiai vizsgálaton (TINIA) alapul. Minta és R1 (puffer/antitest) hozzáadása: A mintában lévő glikohemoglobin (HbA1c) reakcióba lép a HbA1c elleni antitesttel, és a reakció során oldható antigén-antitest komplexek jönnek létre. Mivel a HbA1c molekulán csak egyetlen specifikus HbA1c antitestkötőhely található, ezért a reakció során nem képződnek komplexek. SR (puffer/polihaptén) hozzáadása és a reakció indulása: A polihaptének reakcióba lépnek a feleslegben jelenlévő HbA1c elleni antitestekkel. A reakció során oldhatatlan antitest-polihaptén-komplexek jönnek létre, amelyek mennyisége turbidimetriásan meghatározható. Hemoglobin A hemolizált mintából felszabaduló hemoglobinból jellegzetes abszorpciós spektrummal rendelkező származék képződik, amely a fent leírt immunkémiai reakció előinkubációs fázisában (minta + R1) bikromatikusan mérhető. Emiatt nincs is szükség külön Hb reagensre. A végeredményt - amelynek mértékegysége mmol/mol HbA1c vagy HbA1c - a HbA1c/Hb arányból lehet kiszámítani a következőképpen: 1. protokoll (mmol/mol HbA1c az IFCC előírásai szerint): HbA1c (mmol/mol) = (HbA1c/Hb) 1000 2. protokoll ( a DCCT/NGSP előírásai szerint): HbA1c () = (HbA1c/Hb) 91.5 + 2.15 Reagensek munkaoldatok R1 SR Antitest reagens MES a) puffer: 0.025 mol/l; TRIS b) puffer: 0.015 mol/l, ph 6.2; HbA1c antitest (juhszérum) 0.5 mg/ml; stabilizálószerek; tartósítószerek Polihaptén reagens MES puffer: 0.025 mol/l; TRIS puffer: 0.015 mol/l, ph 6.2; HbA1c polihaptén: 8 µg/ml; stabilizálószerek; tartósítószerek 2015-12, V 8.0 Magyar 1 / 6
a) MES = 2-morfolino-etán-kénsav b) TRIS = Tris(hidroximetil)-aminometán Óvintézkedések és figyelmeztetések In vitro diagnosztikai felhasználásra. A laboratóriumi reagensek kezelésénél szükséges normál óvintézkedéseket kell foganatosítani. A keletkező hulladékanyagokat a helyi előírásoknak megfelelően kell kezelni. A biztonsági adatlapot a szakmai felhasználóknak kérésükre megküldjük. A reagensek kezelése Felhasználásra kész Tárolás és eltarthatóság Felnyitatlanul 2 8 C-on: Az analizátoron használva és hűtve: A reagensen feltüntetett lejárati dátumig 4 hét Hemolyzing Reagent Gen.2, Kat. szám: 05007232 190 (hemolizáló reagens koncentrátum) Felnyitatlanul 2 8 C-on: Az analizátoron használva és hűtve: Lásd a lejárati dátumot a fiolacímkén 5 nap Ha 3 C alatti hőmérsékleten tárolják, akkor a reagens zavarossá válhat. Ennek nincs hatása a reagens működésére, és a folyamat magasabb hőmérsékletre melegítve visszafordítható. Ezért azt javasoljuk, hogy felhasználás előtt pihentessék 10 percig a reagenst szobahőmérsékleten, majd alaposan keverjék fel. Mintagyűjtés és -előkészítés Mintagyűjtéshez és -előkészítéshez csak a megfelelő csöveket ill. gyűjtőedényeket szabad alkalmazni. Csak az alábbi mintatípusokat vizsgáltuk meg és találtuk megfelelőnek. Alvadásgátolt vénás vagy kapilláris vér Az alvadásgátlók közül kizárólag a Li-heparin, a K 2 EDTA, a K 3 EDTA és a kálium-fluorid/na 2 EDTA fogadható el. A felsorolt mintatípusokat a vizsgálat idején kereskedelmi forgalomban elérhető mintavételi csövek egy kiválasztott csoportjával vizsgáltuk, vagyis nem az összes gyártó összes beszerezhető csövét teszteltük. Az egyes gyártók mintavételi rendszerei ezektől eltérő anyagokat tartalmazhatnak, amelyek esetenként hatással lehetnek a teszteredményekre is. A primer csövekből (mintavételi rendszerek) történő mintafeldolgozás során a cső gyártójának az előírásai szerint kell eljárni. Eltarthatóság: 15 15 25 C-on 3 nap 2 8 C-on 7 nap ( 15) ( 25) C-on 6 hónap Az üledékes mintákban mért HbA1c arány-értékek reprodukálhatósága - különösen alig kezelt cukorbetegek esetén - némileg magasabb lehet. Ezen hatás csökkentése érdekében az ilyen mintákat érdemes mérés előtti átforgatással finoman átkeverni. Csak egyszer fagyasztható le. A Kiolvasztás után a mintát alaposan fel kell keverni. Teljes vér alkalmazás A teljes vér mintákat kupak nélküli primer - nem pedig (micro) - csövekben kell feltenni a készülékre. Hemolizátum alkalmazás Hemolizátum manuális elkészítése: 1. Felhasználás előtt a vérmintát és a Hemolyzing Reagent for Tina-quant HbA1c (Kat. sz.: 11488457 122) reagenst hagyni kell szobahőmérsékletre felmelegedni. 2. Közvetlenül a pipettázás előtt a mintát óvatosan fel kell keverni, hogy a vörösvértestek homogén keveréket alkossanak. Ügyeljenek arra, hogy elkerüljék a habképződést. 3. Az alábbi pipettálási rendek egyikét alkalmazva hígítsák meg a mintát 1:101 (1 + 100) arányban Hemolyzing Reagent for Tina-quant HbA1c reagenssel. Pipettázzák egy csőbe az alábbiakat: Hemolyzing Reagent for Tina-quant HbA1c: 500 µl Minta (beteg- vagy kontroll): 5 µl vagy Hemolyzing Reagent for Tina-quant HbA1c: 1000 µl Minta (beteg- vagy kontroll): 10 µl vagy Hemolyzing Reagent for Tina-quant HbA1c: 2000 µl Minta (beteg- vagy kontroll): 20 µl 4. Keverjék össze óvatos átforgatással vagy vibrációs keverővel. 5. A hemolizátum felhasználását akkor lehet elkezdeni, ha az oldat színe átváltozik vörösről zöldes-barnára (kb. 1 2 perc elteltével). A hemolizátum eltarthatósága: 15 15 25 C-on 4 óra 2 8 C-on 24 óra ( 15) ( 25) C-on 6 hónap A gyártó által biztosított anyagok A reagenseket lásd a "Reagensek - munkaoldatok" c. részben. További szükséges (de a csomagban nem található) anyagok Lásd a "Rendelési információk" c. részt Hemolyzing Reagent Gen.2, Kat. szám: 05007232 190 (hemolizáló reagens-koncentrátum teljes vérminták vizsgálatához). Ennek a hemolizáló reagensnek mindkét eljárás kalibrálásához rendelkezésre kell állnia az analizátoron. Hemolyzing Reagent for Tina quant HbA1c, Kat. szám: 11488457 122 (manuális hígításhoz). A hemolizátum készítésénél ezt a reagenst kell alkamazni. A minta-előkezelési eljárást lásd fent. Általános laboratóriumi felszerelés A vizsgálat elvégzése Az optimális vizsgálati teljesítmény elérése érdekében a jelen dokumentumnak az érintett analizátorra vonatkozó előírásai szerint kell eljárni. A vizsgálatra vonatkozó analizátor specifikus előírásokat a megfelelő felhasználói kézikönyv tartalmazza. Az általa nem validált alkalmazások teljesítményét a Roche nem garantálja, azt a felhasználónak kell megállapítania. Hb és HbA1c alkalmazás cobas c 111 Hb teszt definició Measuring mode Abs. calculation mode Reaction direction Wavelength A/B Absorbance Endpoint Increase Calc. first/last 6/16 Unit Reaction mode Pipetting parameters 378/659 nm g/dl R1-S Hb Diluent (H 2 O) R1 120 µl Sample 6 µl 0 µl Total volume 126 µl cobas c 111 HbA1c teszt definició Measuring mode Abs. calculation mode Reaction direction Wavelength A/B Absorbance Endpoint Increase Calc. first/last 16/34 340/659 nm 2 / 6 2015-12, V 8.0 Magyar
Unit Reaction mode Pipetting parameters g/dl R1-S-SR HbA1c Diluent (H 2 O) R1 120 µl Sample 6 µl 0 µl SR 24 µl 0 µl Total volume 150 µl Kalibráció Hb Kalibrátor HbA1c Kalibrátor Kalibrátor hígítási arány Kalibrátor hígítószer Kalibráció gyakorisága C.f.a.s. HbA1c C.f.a.s. HbA1c 1:1, 1:1.67, 1:2, 1:5, 1:25, 1:100, a készülék automatikusan elvégzi Hemolyzing Reagent Gen.2 Mindegyik lot első használatakor, 14 naponta és ha a minőség-ellenőrzési eljárások után szükséges Visszavezethetőség: Ezt az eljárást az IFCC által a HbA1c humán vérből történő meghatározására jóváhagyott referenciaeljárással szemben hitelesítették, 16,17 és az eredménye átszámítható a DCCT/NGSP előírások szerinti értékekre. Megjegyzés Írják be a megadott lot-specifikus és alkalmazás-specifikus kalibrátor értékeket. Csak a megfelelő C.f.a.s. HbA1c kalibrátort szabad alkalmazni. Az analizátoron a cobas c 111 Hemolyzing Reagent Gen.2 (Kat. sz.: 05007232 190) hemolizáló reagensnek rendelkezésre kell állnia. Nélküle nem lehet végrehajtani a kalibrációt. Minőség-ellenőrzés Minőség-ellenőrzésre a "Rendelési információk" c. részben felsorolt kontrollanyagokat lehet alkalmazni. Ezeken kívül más megfelelő kontrollanyagok is alkalmazhatók. A kontrollmérések gyakoriságát és a kontrollmérési határértékeket az adott laboratórium egyedi igényeinek megfelelően kell megállapítani. A mért értékeknek a megadott értékhatárokon belülre kell esniük. Minden laboratóriumnak javító intézkedéseket kell meghatároznia arra az esetre, ha a mért értékek kívül esnek a megadott tartományon. A vonatkozó központi és helyi minőség-ellenőrzési előírásokat és irányelveket kell alkalmazni. Megjegyzés A HbA1c kontrollokon csak a HbA1c arány deklarációja szerepel. A Hb és a HbA1c koncentrációk deklarációját nem tartalmazza. A HbA1c kontrollokat fell kell venni a cobas c 111 rendszer minőség-ellenőrző programjába. A hemolizátum-teszthez a HbA1c kontrollokat még a minőség-ellenőrző programhoz történő felhasználás előtt, manuálisan kell hemolizálni. A megadott HbA1c célértékek IFCC szerinti mmol/mol mértékegységben nem szerepelnek a kontrollvonalkódokban, ezért azokat a felhasználónak magának kell manuálisan beírnia. Számítás A cobas c 111 analizátor mindegyik mintában automatikusan kiszámolja az A1c és a Hb arányát. Korlátozások - interferencia 13,14,18,19,20,21,22 1. Diagnosztikai célokra a mmol/mol HbA1c (IFCC) és a (DCCT/NGSP) értékeket mindig a beteg kórtörténetével, szakorvosi vizsgálataival és egyéb leleteivel együtt kell értelmezni. 2. A vizsgálat célja csupán a mmol/mol HbA1c (IFCC) és a (DCCT/NGSP) értékek pontos és precíz mérése. Az össz-hb és a HbA1c koncentráció-eredményt nem kell kiadni. 3. Alapelv, hogy amennyiben a betegnél fennáll a Hb variánsok valamelyike, úgy azt a kapott HbA1c eredmények értékelése során figyelembe kell venni. A rendellenes hemoglobin értékek befolyásolhatják a vörösvérsejtek feleződési idejét ill. az in vivo glikáció sebességét. Ilyen esetekben még az analitikailag korrekt eredmények sem tükrözik azt a glikémiás kontrollszintet, amely elvárható lenne normál hemoglobin-szintű betegek esetén. 23 Ha feltételezhető, hogy valamilyen Hb variáns (pl. HbSS, HbCC vagy HbSC) jelenléte befolyásolja a HbA1c érték és a vércukorszint ellenőrzés közötti korrelációr, akkor a HbA1c módszert nem szabad a diabetes mellitus diagnosztizálására használni. 4. A vörösvértestek élettartamát lerövidítő bármely ok csökkenti a vörösvértestek glükózzal történő érintkezésének időtartamát, és ennek következtében csökkenni fog a mmol/mol HbA1c (IFCC) és a (DCCT/NGSP) érték is, még akkor is, ha az adott időszakban az átlagos vércukorszint magasabb volt. A vörösvértestek élettartamát lerövidítő esetleges okok: hemolitikus anémia vagy más hemolitikus betegség, homozigóta sarlósejtes anémia, terhesség, akut vagy krónikus vérvesztés stb. Ha egy betegnél fennáll a fentiek valamelyike, akkor a kapott HbA1c eredmények értékelése során fokozott figyelemmel kell eljárni. Ilyen betegek esetén a diabetes mellitus diagnosztizálására nem szabad a HbA1c eredményt alkalmazni. 5. A glikált HbF-et a vizsgálati eljárás nem mutatja ki, mivel az nem tartalmazza a HbA1c-re jellemző glikált β-láncot. Az össz-hb vizsgálati eljárással mért eredményben azonban benne van a HbF értéke is, ezért nagy ( 10 ) HbF tartalmú minták esetén a vizsgálati eljárás a vártnál alacsonyabb mmol/mol HbA1c (IFCC) és (DCCT/NGSP) értéket mutathat ki. 13,22 6. A mmol/mol HbA1c (IFCC) és a (DCCT/NGSP) értékek a terhességi diabétesz diagnoszizálására nem alkalmasak. 24 7. Ha gyorsan kifejlődő 1-es típusú diabétesz van jelen, akkor az ilyen rendkívül ritka esetekben a HbA1c értékek növekedése eltolódhat a glükóz-koncentráció akut növekedéséhez képest. Ilyenkor a diabétesz mellituszt a plazma glükóz koncentrációja és / vagy a tipikus klinikai tünetek alapján kell megállapítani. 24 Kritérium: Reprodukálhatóság az eredeti érték ± 10 -on belül. Ikterusz: 1026 µmol/l ill. 60 mg/dl konjugált és nem-konjugált bilirubinkoncentrációig nincs jelentősebb interferencia. Lipémia: 800 mg/dl intralipid-koncentrációig nincs jelentősebb interferencia. A triglicerid-koncentráció és a turbiditás között csak alig van a korreláció. Glikémia: 55.5 mmol/l (1000 mg/dl) glükóz szintig nincs jelentősebb interferencia. Az éhgyomri minta nem követelmény. Reumafaktor: A reumafaktor 750 IU/mL szintig nem okoz jelentősebb interferenciát. Gyógyszerek: Elterjedten alkalmazott szerekből álló paneleken folytatott vizsgálatok során terápiás koncentrációknál nem tapasztaltak interferenciát. 25,26 Egyéb: Nem volt észlelhető kereszt-reakció a vizsgálati eljárásban alkalmazott HbA1c elleni antitestek és az alábbiak között: HbA0, HbA1a, HbA1b, acetilált hemoglobin, glikált-albumin és labilis HbA1c. Diagnosztikai célokra az eredményeket mindig a beteg kórtörténetével, klinikai vizsgálataival és egyéb leleteivel együtt kell értelmezni. SZÜKSÉGES TEVÉKENYSÉG Speciális átmosás programozása: Ha egy cobas c 111 analizátoron bizonyos vizsgálatok követik egymást, akkor speciális átmosási lépéseket kell beiktatni közéjük. A CLEAN eljárásleírásban található az átszennyezés elkerülési lista (Carry over evasion list) legújabb verziója, amely tartalmazza azt, hogy milyen egymást követő vizsgálatok esetén van speciális átmosási lépésekre szükség. A teendőket a felhasználói kézikönyv ismerteti. Ahol szükséges, ott az érintett vizsgálatok leletezése előtt speciális átmosás/átszennyezés elkerülés programmozást kell alkalmazni. Határértékek és tartományok Mérési tartomány Hb: 4 35 g/dl HbA1c: 0.3 2.5 g/dl* *A HbA1c eljárás mérési tartománya 0.3 g/dl és a felső mesterkalibrátor koncentrációja között fekszik. A fenti értéktartományt a 2.5 g/dl jellemző kalibrátorérték alapján határozták meg. 2015-12, V 8.0 Magyar 3 / 6
15 g/dl tipikus hemoglobin-koncentrációnál ez 20 167 mmol/mol HbA1c (IFCC) és 4 17.4 (DCCT/NGSP) mérési tartománynak felel meg. A teljes vér alkalmazásnál esetleg ritkán megjelenő ">test rng" hibajelzés esetén keverjék meg újra a teljes vér mintát, és változatlan beállítással ismételjék meg a mérést. Alsó méréshatárok A vizsgálati eljárás alsó észlelési határa: Hb: 0.5 g/dl HbA1c: 0.1 g/dl A vizsgálati tartományra a HbA1c arány jellemző alsó határértéke az adott Hb koncentráció alapján kiszámítható. 13.2 g/dl-es tipikus Hb koncentrációt feltételezve a vizsgálati tartomány alsó határa a HbA1c arányra 8 mmol/mol HbA1c (IFCC) és 2.9 (DCCT/NGSP). Az alsó észlelési határ az a legalacsonyabb mérhető analitszint, amely még megkülönböztethető a nullától. Ezt a legalacsonyabb kontroll fölött 3 szórásnyival fekvő értékként lehet meghatározni (1. kontroll + 3, ismételhetőség, n = 21). Referencia-értéktartomány 1. protokoll (az IFCC előírások szerint): 29 42 mmol/mol HbA1c 27 2. protokoll (a DCCT/NGSP előírások szerint): 4.8 5.9 27 Ezt a referenciatartományt diabetes mellitusban nem szenvedő jól jellemezhetően egészséges 474 személy méréséből határoztuk meg. A meghatározott referencia tartomány feletti HbA1c szintek a megelőző 2-3 hónap során vagy még régebb ideje fennálló hiperglikémiát jeleznek. Az American Diabetes Association (ADA) ajánlásai értelmében 48 mmol/mol (IFCC) ill. 6.5 (DCCT/NGSP) feletti HbA1c szint esetén állapítható meg diabetes mellitus. 24,28 A 39 46 mmol/mol (IFCC) ill. 5.7 6.4 (DCCT/NGSP) tartományba eső HbA1c szintű betegeknél fennállhat a diabétesz kifejlődésének a veszélye. 24,28 Rosszul karbantartott diabétesz esetén a HbA1c szintek elérhetik vagy meghaladhatják a 195 mmol/mol HbA1c (IFCC) ill. a 20 (DCCT/NGSP) értéket. 64 mmol/mol HbA1c (IFCC) ill. 8 (DCCT/NGSP) feletti szintek esetén terápiás beavatkozás ajánlott. 53 mmol/mol HbA1c (IFCC) ill. 7 (DCCT/NGSP) alatti szintű diabétesz betegeknél teljesül az ADA által elvárt szint. 19,29 A megállapított referencia-tartomány alatti HbA1c szint a nemrégiben előfordult hypoglikémiás állapotokat, Hb variánsok jelenlétét vagy a csökkent vörösvértest élettartamot jelezheti. Minden laboratóriumnak meg kell vizsgálnia a megadott várható normál értékek adaptálhatóságát a saját betegcsoportjában, és ha szükséges, meg kell határoznia a laboratórium saját referencia értékeit. Jellemző teljesítményadatok A cobas c 111 rendszerre jellemző teljesítmény-adatok az alábbiakban találhatók. Az egyes laboratóriumokban kapott értékek ezektől eltérőek is lehetnek. Teljes vér alkalmazás precizitása A precizitást egy belső protokoll (ismételhetőség - n = 21 - és köztes precizitás - mérési sorozatonként 3 adag, naponta 1 mérési sorozat, 10 napig) szerint, humán minták és kontrollok segítségével határoztuk meg. Az alábbi eredményeket kaptuk (DCCT/NGSP szerinti értékek alapján): Ismételhetőség Kontroll Level 1 6.13 0.049 0.81 Kontroll Level 2 11.2 0.060 0.54 Humán minta 1 4.73 0.074 1.56 Humán minta 2 11.1 0.072 0.65 Köztes precizitás Kontroll Level 1 6.21 0.122 1.96 Kontroll Level 2 10.7 0.328 3.06 Humán minta 3 5.94 0.097 1.64 Humán minta 4 7.93 0.165 2.08 Hemolizátum alkalmazás precizitása A precizitást egy belső protokoll (ismételhetőség - n = 21 - és köztes precizitás - mérési sorozatonként 3 adag, naponta 1 mérési sorozat, 10 napig) szerint, humán minták és kontrollok segítségével határoztuk meg. Az alábbi eredményeket kaptuk (DCCT/NGSP szerinti értékek alapján): Ismételhetőség - abszolút Hb g/dl Hb g/dl Hb Kontroll Level 1 11.7 0.061 0.52 Kontroll Level 2 11.7 0.053 0.45 Humán minta 1 11.8 0.069 0.59 Humán minta 2 12.6 0.085 0.67 Ismételhetőség - abszolút HbA1c g/dl HbA1c g/dl HbA1c Kontroll Level 1 0.55 0.008 1.44 Kontroll Level 2 1.16 0.011 0.92 Humán minta 1 0.43 0.006 1.46 Humán minta 2 1.29 0.006 0.48 Ismételhetőség - Kontroll Level 1 6.39 0.047 0.73 Kontroll Level 2 11.0 0.089 0.81 Humán minta 1 5.50 0.044 0.80 Humán minta 2 11.3 0.056 0.50 Köztes precizitás - Kontroll Level 1 6.43 0.152 2.36 Kontroll Level 2 11.0 0.175 1.58 Humán minta 3 6.31 0.147 2.33 Humán minta 4 7.90 0.104 1.32 Módszerek összehasonlítása Teljes vér alkalmazás Humán vérminták segítségével összehasonlítottuk az ugyanazzal a reagenssel cobas c 111 analizátoron (y) és COBAS INTEGRA 800 analizátoron (x) kapott (DCCT/NGSP) értékeket. Mintaszám (n) = 78 Passing/Bablok 30 Lineáris regresszió y = 0.999x + 0.143 y = 1.001x + 0.124 τ = 0.924 r = 0.997 A mintakoncentrációk 5.03 és 15.1 (DCCT/NGSP) közé estek. Módszerek összehasonlítása Hemolizátum alkalmazás Humán vérminták segítségével összehasonlítottuk az ugyanazzal a reagenssel cobas c 111 analizátoron (y) és COBAS INTEGRA 800 analizátoron (x) kapott (DCCT/NGSP) értékeket. Mintaszám (n) = 78 Passing/Bablok 30 Lineáris regresszió y = 1.026x + 0.006 y = 1.016x + 0.024 τ = 0.894 r = 0.997 A mintakoncentrációk 5.02 és 15.4 (DCCT/NGSP) közé estek. A hemolizátum eljárás és a teljes vér eljárás összehasonlítása Összehasonlítottuk a hemolizátum eljárást és a teljes vér eljárást is. Gyors ülepedésű teljes vérmintákat a hemolizátum eljárással is lehet vizsgálni. Ez összemérhető mmol/mol HbA1c (IFCC) és (DCCT/NGSP) eredményt szolgáltat. Mintaszám (n) = 78 4 / 6 2015-12, V 8.0 Magyar
Passing/Bablok 30 Lineáris regresszió y = 1.002x - 0.033 y = 1.009x - 0.045 τ = 0.915 r = 0.997 A mintakoncentrációk 5.19 és 15.0 (DCCT/NGSP) közé estek. Analitikai specifitás Hb származékok Hb variánsok A labilis HbA1c (pre-hba1c), acetilált Hb és karbamino- Hb nem befolyásolják a vizsgálat eredményét. A nagy (> 10 ) HbF tartalmú minták a vártnál kisebb HbA1c értékeket eredményezhetnek. Figyelem: Az American Diabetes Association (ADA), az European Association for the Study of Diabetes (EA), az International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC) és az International Diabetes Federation (IDF) közös nyilatkozata értelmében a HbA1c eredményeket mmol/mol HbA1c (IFCC szerinti) és (DCCT/NGSP szerinti) értékekkel egyaránt leletezni kell. 31 Ezen kívül a leletben szerepeltetni lehet a HbA1cből származtatott átlagos glükóz koncentrációt is, amelyet a jelen módszerleírás Összegzés c. részében található képletek segítségével lehet kiszámítani. A korábban használatos (IFCC szerinti) értékeket nem szabad alkalmazni, mivel azok félreértelmezhetőek ill. összekeverhetőek a (DCCT/NGSP szerinti) értékekkel. A cobas c 111 analizátoron egy új aránytényezőt kell meghatározni annak érdekében, hogy a mindkét féle - az IFCC szerinti (mmol/mol) és a DCCT/NGSP szerinti () mértékegységben mért - eredmény leletezéséhez ne kelljen az analizátoron kétszer kérni a vizsgálatot. Ha az arány beprogramozásához segítségre van szükségük, akkor kérjük, forduljanak a helyi Roche Diagnostics támogatási csoporthoz. Kérésre külön ügyfélinformációt is biztosítunk. Az új IFCC mértékegység (mmol/mol) leletezésének előfeltétele, hogy az analizátor szoftver ne legyen 3.0-nál korábbi verziójú. Irodalomjegyzék 1 Goldstein DE, Little RR, Lorenz RA, et al. Tests of glycemia in diabetes. Diabetes Care 1995;18:896-909. 2 Goldstein DE, Little RR. More than you ever wanted to know (but need to know) about glycohemoglobin testing. Diabetes Care 1994;17:938-939. 3 Santiago JV. Lessons from the diabetes control and complications trial. Diabetes 1993;42:1549-1554. 4 The effect of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long-term complications in insulin-dependent diabetes mellitus. The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. N Engl J Med 1993;329:977-986. 5 Intensive blood glucose control with sulfonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes (UKPDS 33). UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group. Lancet 1998;352:837-853. 6 Finke A, Kobold U, Hoelzel W, et al. Preparation of a candidate primary reference material for the international standardization of HbA1c determinations. Clin Chem Lab Med 1998;36(5):299-308. 7 Goldstein DE, Little RR, Wiedmeyer HM, et al. Glycated hemoglobin: methodologies and clinical applications. Clin Chem 1986;32:B64-B70. 8 Nathan DM, Kuenen J, Borg R, et al. Translating the A1C assay into estimated average glucose values. Diabetes Care 2008;31:1473-1478. 9 Bunn HF, Gabbay KH, Gallop PM. The glycosylation of hemoglobin: relevance to diabetes mellitus. Science 1978;200:21-27. 10 Zander R, Lang W, Wolf HU. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemiglobin method. I. Description of the method. Clin Chim Acta 1984;136:83-93. 11 Wolf HU, Lang W, Zander R. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemiglobin method. II. Standardization of the method using pure chlorohaemin. Clin Chim Acta 1984;136:95-104. 12 Little RR, Wiedmeyer HM, England JD, et al. Interlaboratory standardization of measurements of glycohemoglobins. Clin Chem 1992;38:2472-2478. 13 Chang J, Hoke C, Ettinger B, et al. Evaluation and Interference Study of Hemoglobin A1c Measured by Turbidimetric Inhibition Immunoassay. Am J Clin Pathol 1998;109(3):274-278. 14 Frank EL, Moulton L, Little RR, et al. Effects of hemoglobin C and S traits on seven glycated hemoglobin methods. Clin Chem 2000;46(6):864-867. 15 Data on file at Roche Diagnostics. 16 Kobold U, Jeppsson JO, Duelffer T, et al. Candidate reference methods for hemoglobin A1c based on peptide mapping. Clin Chem 1997;43:1944-1951. 17 Jeppsson JO, Kobold U, Finke A, et al. Approved IFCC reference method for the measurement of HbA1c in human blood. Clin Chem Lab Med 2002;40:78-89. 18 Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32:470-475. 19 Sacks BW, Bruns DE, Goldstein DE, et al. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002;48:436-472. 20 Martina WV, Martijn EG, van der Molen M, et al. β-n-terminal glycohemoglobins in subjects with common hemoglobinopathies: relation with fructosamine and mean erythrocyte age. Clin Chem 1993;39:2259-2265. 21 Weykamp CW, Penders TJ, Muskiet FAJ, et al. Influence of hemoglobin variants and derivatives on glycohemoglobin determinations, as investigated by 102 laboratories using 16 methods. Clin Chem 1993;39:1717-1723. 22 Rohlfing C, Connolly S, England J, et al. Effect of elevated fetal hemoglobin on HbA1c measurements: four common assay methods compared to the IFCC reference method. Clin Chem 2006;52 Suppl 6:A108. 23 Miedema K. Influence of hemoglobin variants on the determination of glycated hemoglobin. Klin Lab 1993;39:1029-1032. 24 International Expert Committee Report on the Role of the A1C Assay in the Diagnosis of Diabetes. Diabetes Care 2009;32(7):1327-1334. 25 Breuer J. Report on the Symposium Drug effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34:385-386. 26 Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-385. 27 Junge W, Wilke B, Halabi A, et al. Determination of reference intervals in adults for hemoglobin A1c (HbA1c). Poster presentation 18th International Diabetes Federation Congress, Paris, 2003. 28 Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Diabetes Care 2010;33(1):62-69. 29 American Diabetes Association. Standards of Medical Care for patients with diabetes mellitus. Diabetes Care [Suppl.] 1995;18(1):8-15. 30 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790. 31 Consensus statement on the worldwide standardization of the hemoglobin A1c measurement. American Diabetes Association, European Association for the Study of Diabetes, International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine and International Diabetes Federation Consensus Committee. Diabetes Care 2007;30:2399-2400. Ebben az eljárásleírásban a decimális számértékek egész- és törtrésze közötti határ jelölésére decimális szeparátorként mindig tizedespontot (és nem tizedesvesszőt) használunk. A számjegyeket nem választjuk el hármasával. 2015-12, V 8.0 Magyar 5 / 6
Szimbólumok Az ISO 15223 1 szabványban említetteken kívül a Roche Diagnostics az alábbi szimbólumokat és jelöléseket alkalmazza. GTIN A csomag tartalma Reagens Elkészítés ill. keverés utáni térfogat Globális kereskedelmi áruazonosító szám A bővítéseket, törléseket és változtatásokat a lap szélén függőleges vonalak jelzik. 2015, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com 6 / 6 2015-12, V 8.0 Magyar