cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 for use on the cobas s 201 system IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA. cobas TaqScreen MPX Test, v2.0 MPX v2.0 96 Tests P/N: 05969492 190 cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 MPX CTL v2.0 6 Sets P/N: 05965411 190 cobas TaqScreen Wash Reagent TS WR 5.1 L P/N: 04404220 190 A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel végzett kadáver minták vizsgálatához a felhasználónak a fenti készleteken kívül a következő készletre is szüksége van: cobas TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit CADV SPEC DIL 96 Tests P/N: 05002125 190 FELHASZNÁLÁS MÓDJA A cobas TaqScreen MPX Teszt, 2.0-s verzió (v2.0) a cobas s 201 rendszerrel való együttes használatra egy kvalitatív, in vitro vizsgálat az 1-es típusú, M csoportú humán immundeficiencia vírus (HIV-1) RNS, az O csoportú HIV-1 RNS, a 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-2) RNS, a hepatitis C vírus (HCV) RNS és a hepatitis B vírus (HBV) DNS direkt kimutatására humán plazmából. A vizsgálat célja donorminták szűrése HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatására egyéni humán donorok plazmamintáiból, beleértve a teljes vér és véralkotórészek (vörösvértest, vérlemezke és plazma) donorait és egyéb élő donorokat. A vizsgálat használható továbbá szerv- és szövetdonorok szűrésére is, amennyiben a mintákat akkor vették le, amikor a donor szíve még dobogott, valamint kadáver (nincs szívműködés) szerv- és szövetdonoroktól származó vérminták alapján. A szűrés során az összes donortól származó plazmát egyéni mintaként kell kezelni. Teljes vér és véralkotórészek donorainak esetében a plazmaminták vizsgálhatóak külön-külön, illetve egyéni minták részleteiből álló csoportokba gyűjtve, a HIV-, HCV- és HBV-szerológiával egybekötve. Egyéni minta esetén a vizsgálat párhuzamosan kimutatott, de külön eredményt ad HIV, HCV és HBV vírusokra. A cobas TaqScreen MPX v2.0 teszt olyan kiegészítő tesztnek tekinthető, amely igazolja az olyan minták HIV-fertőzöttségét, amelyek ismételten reaktívnak bizonyulnak egy engedélyezett donorszűrő HIV-antitestvizsgálaton, és reaktívak a cobas TaqScreen MPX v2.0 tesztben. A cobas TaqScreen MPX v2.0 teszt olyan kiegészítő tesztnek tekinthető, amely igazolja az olyan minták HCV-fertőzöttségét, amelyek ismételten reaktívnak bizonyulnak egy engedélyezett donorszűrő HCV-antitestvizsgálaton, és reaktívak a cobas TaqScreen MPX v2.0 tesztben. A cobas TaqScreen MPX v2.0 teszt olyan kiegészítő tesztnek tekinthető, amely igazolja az olyan minták HBV-fertőzöttségét, amelyek ismételten reaktívnak bizonyulnak egy engedélyezett donorszűrő Hepatitis B felületi antigénvizsgálaton, és reaktívak a cobas TaqScreen MPX v2.0 tesztben. Ez a vizsgálat nem a HIV-, HCV- vagy HBV-fertőzés diagnosztizálásának elősegítésére való. A Dokumentum verzióinformációi rész a dokumentum végén található. 1
A VIZSGÁLAT ÖSSZEGZÉSE ÉS MAGYARÁZATA A vér és véralkotórészek transzfúziója során lényeges problémát jelentenek a vírusfertőzések, különösen az 1-es és 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1, HIV-2), hepatitis C vírus (HCV) és hepatitis B vírus (HBV) esetleges átvitele. Ezen ágensek átvitele elsősorban fertőzött vér vagy vér- és plazmakészítmények, bizonyos szövetek vagy testfolyadékok által, nemi érintkezés során, illetve fertőzött anyáról újszülöttre lehetséges. A HIV-1 az egész világon elterjedt, becsült előfordulási gyakorisága világszerte 1,1% (0,56% Észak- Amerikában és 0,25% Nyugat-Európában). A HIV-1 fertőzött személyek a fertőzéstől számított 3-6 héten belül rövid, kezdetben akut, influenzaszerű megbetegedést tapasztalhatnak, amelyhez a perifériás vérben magas szintű virémia társul. 1 Jelenleg a HIV-1 három fő genetikai csoportja ismert: M csoport (main, fő), N csoport (nem-m-nem-o) és O csoport (outlier, kívülálló). Az M csoport igen elterjedt, és 9 szubtípusba, valamint számos cirkuláló rekombináns formába (CRF) sorolható. 2 A HIV-2-t 1986-ban izolálták először nyugat-afrikai betegekből. Mind a HIV-1, mind a HIV-2 azonos módokon vihető át, és hasonló opportunista fertőzésekkel, valamint szerzett immunhiányos tünetegyüttes (Acquired Immunodeficiency Syndrome - AIDS) kialakulásával társul. 3 A HIV-2 elterjedése egyes afrikai népek körében több, mint 1%-ra tehető, és a HIV-2 Európa bizonyos részein és Indiában is növekvő problémát jelent. 4 A HCV-t tartják a poszttranszfúziós non-a, non-b hepatitis esetek 90% 95%-áért felelős fő fertőző ágensnek. 5,6 A HCV világszerte előfordul, de incidenciája a fertőzés általános tünetmentessége miatt kevéssé ismert. Akárhogy is, a jelentett elterjedése a nyugat-európai 0,5 2,0% és az egyiptomi 20% között változik. A ma élő emberek közül több, mint 2 milliárdan fertőződtek életük folyamán valamikor HBV-vel. Közülük világszerte nagyjából 350 millióan maradtak krónikus fertőzöttek, és váltak vírushordozóvá. 7-11 A világ népességének háromnegyede él magas átfertőzöttségű területeken. Évente több, mint 4 millió akut klinikai HBV eset fordul elő. A szerológiai szűrővizsgálatok jelentősen csökkentették, de nem számolták fel a vírusfertőzések vér és vérkészítmények transzfúziójával történő átvitelének kockázatát. A donoroktól levett teljes vér és plazma HBV szűrését az 1970-es évek elején kezdték meg HBsAg vizsgálattal, és az 1980-as években anti-hbc vizsgálattal. A HBV-szűrésen kívül rutinszerűen végzik a vér és plazma HIV-1, HIV-2 és anti-hcv szűrését enzim immunoassay (EIA) vizsgálatokkal. A transzfúziós készítmények fertőző ágensekre történő magasabb szintű szűrésére támasztott közigény előmozdította a nukleinsav-vizsgálati (nucleic acid test, NAT) technológiák fejlődését. Klinikai vizsgálatok szerint a vírusnukleinsavak (HIV-1 RNS, 12-14 HCV RNS 5,13-16 és HBV DNS 17-20 ) kimutatása tovább csökkentheti az ágensek ablakperiódus alatti véradásból eredő átviteli kockázatát. Az ablakperiódust átlagosan 22 napra becsülik, de a HIV-1 esetében akár 6 hónap is lehet. 21 A HIV-1 kis csoportos minta (mini-pool) NAT vizsgálat kivitelezésével a fertőző ablakperiódus jelentősen lerövidíthető, így a HIV-1 átvitelének jelenlegi kockázatát hozzávetőleg 2 millió véradásból 1-re becsülik. 13-15 Hasonlóan, a HCV RNS NAT bevezetése az antitestnegatív ablakperiódust körülbelül 60 nappal csökkentette 13-16, a jelenlegi becsült kockázat hozzávetőleg 1 millió véradásból 1 2. A HBV DNS NAT szűrését egyre több helyen alkalmazzák. Az alacsony, közepes és magas HBV prevalenciájú országokban végzett klinikai vizsgálatok megmutatták a NAT eredményességét az ablakperiódus és késői HBV-fertőzött donorok esetében, és bebizonyították a HBV transzfúziós átviteli esélyének csökkenését. 15,19,20,22,23 A többszörös target vizsgálatok hatásfokának javítása érdekében a többféle vírus egyidejű kimutatására egy multiplex (MPX) polimeráz láncreakciót (PCR) fejlesztettek ki. A MPX PCR folyamán egy reakciócsőben egynél több targetszekvencia amplifikálása és kimutatása zajlik többféle primerpár és próba segítségével. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 egy kvalitatív multiplex vizsgálat, amely lehetővé teszi a HIV RNS, HCV RNS és HBV DNS, illetve a belső kontroll egyidejű kimutatását és megkülönböztetését egyetlen vizsgálatban fertőzött csoportos és egyéni plazmamintákból. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 általános nukleinsav-előkészítési eljárást alkalmaz a COBAS AmpliPrep készüléken. A HIV RNS (HIV-1 M és O csoport RNS, HIV-2 RNS), HCV RNS és HBV DNS amplifikációja, kimutatása és megkülönböztetése automatizált, valós idejű PCR eljárással történik a COBAS TaqMan Analizátoron. A vizsgálat nem tesz különbséget a HIV-1 M csoport, a HIV-1 O csoport és a HIV-2 között. Az eljárás egy belső kontrollt is magába foglal a teljesítmény monitorozására minden egyes vizsgálat során, és a megelőzően amplifikált anyag (amplikon) által okozott potenciális szennyezés csökkentésére AmpErase enzimet alkalmaz. HIV-1 O csoport és HIV-2 megkülönböztetésére alkalmas teszt nem áll rendelkezésre a Roche-tól. 2
AZ ELJÁRÁS ALAPELVEI A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas s 201 rendszeren való használatra 4 fő eljáráson alapul: 1. Automatizált mintacsoportosítás/pipettázás és kontroll pipettázás az opcionális Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral 2. Automatizált minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készülékkel 3. Nukleinsavak automatizált amplifikációja és PCR termékek valósidejű kimutatása és megkülönböztetése a COBAS TaqMan Analizátorral 4. Automatizált adatkezelés a csoportosító és adatkezelő (Pooling and Data Management, PDM) szoftverrel Automatizált mintacsoportosítás és pipettázás a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral A Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor a cobas s 201 rendszer részeként automatizálja a csoportok és egyéni donorminták pipettázását, a részletek átvitelét mély lyukú lemezekre (opcionális) és a vizsgálati kontrollok pipettázását. A cobas s 201 rendszer donor csoportok vizsgálatára, valamint a reaktív csoportok megerősítő vizsgálatára használatos, hogy azonosítsa a reaktív egyéni donormintákat. A cobas s 201 rendszert a minták tételekben történő feldolgozására tervezték. Egy tétel meghatározása a minták és kontrollok olyan gyűjteménye, amelyek pipettázása, kivonása, amplifikációja és kimutatása egyszerre zajlik. Miután a tétel pipettázása megtörtént a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral, a tétel a COBAS AmpliPrep készülékbe kerül az eljárás következő fázisának elvégzésére. A kézzel pipettázott minták közvetlenül a COBAS AmpliPrep készülékbe tölthetők, a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor előzetes használata nélkül. Megjegyzés: Kadáver minták vizsgálatakor a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor alkalmazását megelőzően el kell végezni a minták 1:5 arányú manuális hígítását a cobas TaqScreen kadáver minta oldószerben (CADV SPEC DIL). Automatizált minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készülékkel A targetből és a hozzáadott Armored RNA belső kontroll (internal control, IC) molekulákból (amelyek a minta-előkészítési és amplifikációs/kimutatási eljárás során kontrollként szolgálnak) származó nukleinsavak feldolgozása egyszerre zajlik. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagensei segítségével öt egymást követő lépés megy végbe a COBAS AmpliPrep készüléken. A proteinázoldat a fehérjék emésztésével elősegíti a lízist, inaktiválja a nukleázokat és lehetővé teszi az RNS és DNS felszabadítását a vírusrészecskékből. A lízisreagens hozzáadása a vírusok lízisét és a nukleázok inaktiválását eredményezi a fehérjék denaturálása által a mintában. Az RNS és DNS felszabadul és egyidejűleg védve van a nukleázok hatásától. A felszabadult nukleinsavak a hozzáadott mágneses üvegpartikulumok szilikonfelületéhez kötnek. Ez elsősorban az üvegpartikulumok felszínének nettó pozitív töltése és a nukleinsavak nettó negatív töltése miatt következik be a kaotróp sókoncentráció alatt és a lízisreakció ionerőssége miatt. A mosóreagens eltávolítja a nem kötött anyagokat és a szennyeződéseket, mint denaturált fehérjék, sejttörmelék és lehetséges PCR inhibitorok (például hemoglobin stb.), valamint csökkenti a sókoncentrációt. A mágneses üvegpartikulumokról a tisztított nukleinsavakat emelt hőmérsékleten az eluáló puffer szabadítja fel. Nukleinsavak automatizált amplifikációja a COBAS TaqMan analizátor segítségével Az automatizált minta-előkészítés során, a tisztított nukleinsavak humán plazmából történő izolálását követően, a HIV (HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport és HIV-2) és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS amplifikálása, kimutatása és megkülönböztetése a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 Master Mix (MPX2 MMX) segítségével történik. A mangán-acetátos aktiválást követően a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix lehetővé teszi az RNS targetek reverz transzkripcióját, majd ezt követően a HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2 és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS nagyfokban konzervált régióinak PCR amplifikációját specifikus primerekkel. Az amplifikált nukleinsavak párhuzamos kimutatása a master mixben ugyancsak jelenlevő HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV és IC próbák 5'-nukleolitikus bontása során keletkező fluoreszcens jelek segítségével megy végbe. Négy egyedi fluoreszcens festék használatos: egyik festék az IC próbát jelöli, a másik három pedig a HIV, HCV és HBV próbákat, lehetővé téve ezáltal a HIV, HCV és HBV targetek és az IC független azonosítását. A rendszer mindhárom HIV target azonosításához ugyanazt a festéket használja, így azokat nem különbözteti meg egymástól. 3
Reverz transzkripció és PCR-amplifikálás A reverz transzkripciós és amplifikációs reakciókat egy hőstabil rekombináns enzim, a Z05D DNS-polimeráz végzi. Mangán (Mn 2+ ) jelenlétében a Z05D DNS-polimeráz reverz transzkriptáz és DNSpolimeráz aktivitással rendelkezik. Ez lehetővé teszi a reverz transzkripció és a PCR-amplifikálás megtörténését ugyanazon reakcióelegyben. A PCR-amplifikálás a Z05D DNS-polimeráz segítségével megy végbe, amely a targettemplátok mentén meghosszabbítja a kapcsolódott primereket és dupla szálú DNS-t (amplikon) hoz létre. Ez a folyamat sok cikluson keresztül ismétlődik, és az amplikon DNS mennyisége minden ciklus során megduplázódik. Az targetgenomok amplifikálása csak a primerek közötti régiókban zajlik; a teljes genom nem amplifikálódik. Szelektív amplifikálás A mintában található targetnukleinsav szelektív amplifikálását a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 az AmpErase (uracil-n-glikoziláz) enzim és dezoxiuridin-trifoszfát (dutp) használatával hajtja végre. Az AmpErase enzim felismeri és katalizálja az olyan DNS-szálak lebontását, amelyek dezoxiuridint tartalmaznak 24, a dezoxitimidint tartalmazó DNS-ét és a ribouridint tartalmazó RNS-ét viszont nem. 25,26 A dezoxiuridin a természetes DNS-ben nincs jelen, ugyanakkor az amplikonban mindig megtalálható, miután az MPX2 master mix reagens a dntp-k egyikeként dezoxiuridin-trifoszfátot használ; így csak az amplikon tartalmaz dezoxiuridint. A dezoxiuridinnak köszönhetően a szennyező amplikont az AmpErase enzim még a target DNS amplifikálását megelőzően lebontja. Az AmpErase enzim lebont továbbá minden olyan nem specifikus terméket, amely a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix kezdeti, mangán okozta aktiválódása után képződik. Az MPX2 master mix reagensben lévő AmpErase enzim katalizálja a dezoxiuridint tartalmazó DNS hasítását a dezoxiuridin-csoportoknál úgy, hogy a dezoxiribózlánc felnyílását okozza a C1 helyen. Az első hevítési lépésben az amplikon DNS-lánc eltörik a dezoxiuridin helyén, tehát a DNS nem lesz amplifikálható. Az AmpErase enzim, ha egyszer 55 C feletti hőmérsékletnek lett kitéve, hosszabb ideig inaktív marad, ezért nem semmisíti meg a PCR után képződött targetamplikont. A PCR-termékek valósidejű automatizált kimutatása a COBAS TaqMan Analizátor segítségével A PCR-amplifikálás ciklusai során a váltakozó magas hőmérsékleten a target- és IC-amplikon denaturálódik, és egyszálú DNS-molekula keletkezik. A specifikus kimutatási oligonukleotid próbák az amplifikált DNS egyszálú molekuláihoz hibridizálnak. Az amplifikálás, hibridizáció és kimutatás egymással egyidőben zajlik. A PCR-termékek kimutatása 27,28 A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix a HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV, illetve IC nukleinsavra specifikus kimutatási próbákat tartalmaz. A HIV, HCV, HBV és IC kimutatási próbák mindegyike jelölve van 1) a négy közül egy, jelzőfestékként viselkedő, és 2) egy másik, blokkolófestékként viselkedő fluoreszcens festékkel. Három egyedi jelzőfesték a HIV-, HCV- vagy HBV-specifikus próbákhoz kapcsolódik, és mérésük adott hullámhosszakon történik. Egy negyedik jelzőfesték pedig az IC-specifikus próbához kapcsolódik, és mérése egy eltérő hullámhosszon történik. Minden próba esetében egyféle blokkolófesték használatos. Ez a rendszer lehetővé teszi az amplifikált HIV-, HCV- és HBV-targetek és az IC egyidejű kimutatását és megkülönböztetését négy hullámhosszon. A PCR-amplifikálás kezdete előtt a próbák még érintetlenek, és a blokkoló festék a jelzőfesték fluoreszcenciáját Förster-típusú energiatranszfer-effektus révén gátolja. A PCR-amplifikálás során a próbák a specifikus, egyszálú DNS-szekvenciákhoz hibridizálnak, amit az amplifikálással egyidőben a Z05D DNS-polimeráz 5' 3' nukleáz aktivitása révén hasít. Amint a hasítás következtében a jelző- és a gátlófesték elválik, a jelzőfesték fluoreszcens aktivitásának gátlása megszűnik. Minden egyes PCRciklus során megnő a hasított próbák mennyisége, és ennek velejárójaként növekszik a jelzőfestékből származó jel összesített nagysága is. A PCR-termékek valós idejű kimutatása és megkülönböztetése a felszabadult, vírustargeteket és IC-t reprezentáló jelzőfestékek fluoreszcencenciájának mérésével megy végbe. 4
Automatizált adatkezelés a PDM szoftver segítségével A Roche PDM szoftver lehetővé teszi, hogy a felhasználó áttekintse az eredményeket és jelentést készítsen. A Roche PDM szoftver minden vizsgálati eredményt nem reaktív, reaktív vagy érvénytelen jelöléssel lát el. A PCR-eredmények lekérésén és vizsgálatán felül a Roche PDM szoftver lehetővé teszi, hogy az üzemeltető a jelentéseket visszakeresés és tanulmányozás céljából kinyomtassa, az eredmények között keressen, a donoreredményeket elfogadja, illetve egy LIS kiszolgálóra továbbítsa. A ROCHE ÁLTAL BIZTOSÍTOTT ANYAGOK A HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, valamint HCV RNS és HBV DNS plazmamintákból való kimutatásához három készlet szükséges: 1) cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0, 2) cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 és 3) cobas TaqScreen mosóreagens. A biztonsági adatlapok (SDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. cobas TaqScreen MPX Test, v2.0 (P/N: 05969492 190) MPX2 CS1 (MPX mágneses üvegpartikulum reagenskazetta) MPX2 CS2 (MPX lízis reagenskazetta) MPX2 CS3 (MPX multireagens kazetta) MPX2 CS4 (MPX tesztspecifikus reagenskazetta) cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 (P/N: 05965411 190) MPX M(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX multi-pozitív kontroll, v2.0) (HIV-1 M pozitív kontroll) (HBV pozitív kontroll) (HCV pozitív kontroll) MPX O(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-1 O pozitív kontroll, v2.0) MPX 2(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-2 pozitív kontroll, v2.0) MPX ( ) C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX negatív kontroll, v2.0) cobas TaqScreen Wash Reagent cobas TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190) TS WR (cobas TaqScreen mosóreagens) MPX v2.0 MPX CTL v2.0 TS WR 96 teszt 6 készlet 5,1 l Megjegyzés: A HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatásához kadáver mintából a fent említett készleteken kívül a következő készlet szükséges és biztosított: cobas TaqScreen kadáver minta oldószer. cobas TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit cobas TaqScreen kadáver minta oldószer készlet (P/N: 05002125 190) CADV SPEC DIL (cobas TaqScreen kadáver minta oldószer) CADV SPEC DIL 96 teszt 5
EGYÉB SZÜKSÉGES, DE KÜLÖN ÁRUSÍTOTT ANYAGOK (A Roche-tól külön vásárolható) A vizsgálatot a cobas s 201 rendszeren kell végezni. A cobas s 201 rendszert egy Roche Diagnostics területi szerviz képviselőnek kell telepítenie, és egy komplett rendszer-konfigurációként kell azt használni. A cobas s 201 rendszer egyes komponensei nem használhatóak különálló készülékekként, és más komponensek sem helyettesíthetőek. A cobas s 201 rendszer az alábbi komponenseket használja. További részletekért kérjük, tanulmányozza a Termékinformáció kártyát. Műszerezettség és szoftver a cobas s 201 rendszerhez Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor, Pooling Manager munkaállomás és szoftver (opcionális) COBAS AmpliPrep készülék COBAS TaqMan Analizátor Dokkoló állomás (opcionális) AMPLILINK adatállomás és szoftver Roche PDM szerver, adatkezelő munkaállomás és szoftver Vizsgálatdefiníciós fájl a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0-hoz cobas s 201 konfigurációs fájl az AMPLILINK szoftverhez Állványok és egyszer használatos anyagok COBAS AmpliPrep mintaállványok (SK24) (P/N: 28122172001) COBAS AmpliPrep SPU-állványok (P/N: 05471664001) COBAS AmpliPrep reagensállványok (P/N: 28122199001) Mintafeldolgozó egységek (SPU): (P/N: 03755525001) Mintabeviteli csövek (S-csövek) vonalkódklipszekkel (P/N: 03137040001) K-hegy állványok (P/N: 03287343001) K-cső doboz 12 x 96 (P/N: 03137082001) COBAS TaqMan K-hordozó (P/N: 28150397001) Nagy térfogatú CO-RE hegyek (1000 µl), filter (P/N: 04639642001) Mély lyukú lemezek vonalkódcímkékkel (P/N: 04639634001) Mély lyukú lemezek zárótetejei (P/N: 04789288001) Mintahordozó 24 vizsgálati cső számára (P/N: 04639502001) Mintahordozó 32 vizsgálati cső számára (P/N: 04639529001) Hegyhordozó (P/N: 04639545001) Mély lyukú lemez hordozó (P/N: 04639553001) SK24 állványhordozó (P/N: 04639600001) Hamilton fertőtlenítő spray készlet (P/N: 06254250001) Hamilton MICROLAB detergens készlet (P/N: 06254268001) Egyszer használatos kesztyűk, púdermentes 6
REAGENSEK cobas TaqScreen MPX Test, v2.0 (P/N: 05969492 190) MPX2 CS1 MGP (mágneses üvegpartikulumok) mágneses üvegpartikulumok 93% izopropanol Xi 93% (w/w) izopropanol MPX v2.0 96 teszt 2 x 48 teszt 2 x 7,0 ml Irritatív F 93% (w/w) izopropanol Tűzveszélyes MPX2 CS2 LYS (lízisreagens) nátrium-citrát-dihidrát 42,5% guanidin-tiocianát < 14% polidokanol 0,9% ditiotreitol Xn 42,5% (w/w) guanidin-tiocianát 2 x 48 teszt 2 x 78 ml Ártalmas MPX2 CS3 Pase (proteináz oldat) trisz puffer < 0,05% EDTA kalcium-klorid kalcium-acetát < 7,8% proteináz glicerin Xn < 7,8% (w/w) proteináz 2 x 48 teszt 2 x 3,8 ml Ártalmas EB (eluáló puffer) trisz puffer EDTA 0,09% nátrium-azid < 0,002% poli-ra RNS (szintetikus) 2 x 7,0 ml 7
MPX2 CS4 MPX v2.0 MMX-R1 (MPX v2.0 master mix reagens 1) kálium-acetát mangán-acetát glicerin 14,4% dimetil-szulfoxid 0,08% nátrium-azid ecetsav MPX MMX-R2, v2.0 (MPX master mix reagens 2, v2.0) tricin puffer kálium-klorid kálium-hidroxid 6% dimetil-szulfoxid glicerin EDTA Tween 20 Igepal CA630 < 0,12% datp, dgtp, dctp, dutp < 0,01% upstream és downstream HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV, HBV és belső kontroll primerek < 0,01% fluoreszcens-jelölt HIV-1, HIV-2, HCV, HBV próbák < 0,01% fluoreszcens-jelölt belső kontroll próba < 0,01% oligonukleotid aptamer < 0,01% Z05D DNS-polimeráz (mikrobiális) < 0,01% AmpErase (uracil-n-glikoziláz) enzim (mikrobiális) 0,09% nátrium-azid MPX IC, v2.0 (MPX belső kontroll, v2.0) trisz puffer < 0,002% poli-ra RNS (szintetikus) EDTA 0,05% nátrium-azid < 0,001% nem fertőző, szintetikus belső kontroll RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva 2 x 48 teszt 2 x 3,0 ml 2 x 2,5 ml 2 x 8,0 ml 8
cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 (P/N: 05965411 190) MPX CTL v2.0 6 szett MPX M(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX multi-pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 M csoport RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva < 0,001% nem fertőző, szintetikus HBV DNS, lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva < 0,001% nem fertőző, szintetikus HCV RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke 6 x 1,6 ml Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. MPX O(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-1 O pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 O csoport RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke 6 x 1,6 ml Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. 9
MPX 2(+)C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX HIV-2 pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-2 RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke 6 x 1,6 ml Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. MPX ( ) C, v2.0 (cobas TaqScreen MPX negatív kontroll, v2.0) Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke 6 x 1,6 ml Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. cobas TaqScreen Wash Reagent cobas TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190) TS WR (cobas TaqScreen mosóreagens) nátrium-citrát-dihidrát 0,1% metilparabén tartósítószer TS WR 5,1 l cobas TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit cobas TaqScreen kadáver minta oldószer készlet (P/N: 05002125 190) CADV SPEC DIL (cobas TaqScreen kadáver minta oldószer) EDTA CADV SPEC DIL 96 teszt 4 x 100 ml 10
TÁROLÁSI ÉS KEZELÉSI KÖVETELMÉNYEK A. A szobahőmérséklet meghatározása 15 30 C. B. A reagenseket és kontrollokat ne fagyassza le. C. Az MPX2 CS1, MPX2 CS2, MPX2 CS3 és MPX2 CS4 reagenseket 2 8 C között tárolja. Használaton kívül ezek a reagensek a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. D. Felbontást követően a reagensek 2 8 C-on 20 napig stabilak (vagy a lejárati dátumig, amelyik előbb következik). E. A reagenseket a COBAS AmpliPrep készüléken legfeljebb 5 vizsgálati futtatás alakalmával és legfeljebb 40 összesített órán át lehet felhasználni. A futtatások között a reagenseket 2 és 8 C között tárolja. Az AMPLILINK szoftver ellenőrzi a reagenskazetták COBAS AmpliPrep készülékben töltött összesített idejét, és meggátolja a kazetták felhasználását a 40. összesített óra elérése után. F. A COBAS AmpliPrep készülékben a reagensek egyhuzamban összesen 24 órán keresztül maradnak stabilak. Az AMPLILINK szoftver nem ellenőrzi a reagenskazetták COBAS AmpliPrep készülékben töltött folyamatos idejét, sem a kazettákat felhasználó gépi ciklusok számát. A felhasználó felelőssége, hogy a 24 folyamatos óra vagy 5 gépi ciklus elérése után eldobja a reagenskazettákat. G. Az MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 és MPX ( ) C, v2.0 reagenseket 2 8 C között tárolja. A kontrollok a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. Felbontást követően a fel nem használt részt ki kell dobni. H. A TS WR reagenst 15 30 C között tárolja. Felbontás nélkül a TS WR reagens a feltüntetett lejárati időn belül stabil. Felbontást követően ez a reagens 15 30 C között 30 napig stabil (vagy a lejárati dátumig, amelyik előbb következik). I. A megbontatlan CADV SPEC DIL oldószert 15 30 C között tárolja. Felbontás nélkül a CADV SPEC DIL a feltüntetett lejárati időn belül stabil. Felbontást követően ez a reagens 2 8 C között 30 napig, illetve a lejárati dátumig stabil, amelyik előbb következik. ÓVINTÉZKEDÉSEK IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA. A. A minták fertőzőek lehetnek. A vizsgálat elvégzése közben be kell tartani az általános érvényű óvintézkedéseket. 29, 30 Csak a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszt használatához jól értő és a fertőző anyagok kezelésére kiképzett személyek végezhetik a munkafolyamatot. 0,5%-os nátrium-hipoklorit frissen készített desztillált vagy ioncserélt vizes oldatával (10%-os hígítású fehérítőszerrel) minden laboratóriumi felületet alaposan tisztítani és fertőtleníteni kell. Ezután törölje át 70%-os etanollal a felületet. B. FIGYELMEZTETÉS: Az MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 és MPX ( ) C, v2.0 emberi vérből származó plazmát tartalmaznak. A forrásanyag tesztekkel vizsgálva nem bizonyult reaktívnak HIV-1/2 antitestre, HCV antitestre, HIV p24 antigénre, HBsAg-re és anti- HBcAg antitestre. A forrásanyagot a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével ugyancsak vizsgálták. A negatív humán plazma PCR-technikákkal történő vizsgálata során HIV-1 (M és O csoport) RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS vagy HBV DNS nem volt kimutatható. Egyetlen ismert vizsgálati módszer sem nyújthat teljes garanciát arra, hogy a humán vérkészítményekben nincs jelen fertőző anyag. Minden humán vér eredetű anyagot potenciálisan fertőzőnek kell tekinteni, és az általános érvényű óvintézkedések betartásával kezelni. Kiömlés esetén azt azonnal fertőtlenítse frissen készített hígított fehérítőszer-oldattal, illetve kövesse a megfelelő helyszíni eljárásokat. C. Alkalmazza a szokásos laboratóriumi óvintézkedéseket. Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a kijelölt munkaterületen. Viseljen egyszer használatos kesztyűt, köpenyt és szemvédőt a minták és a készlet reagenseinek kezelése közben. A minták és tesztreagensek kezelését követően gondosan mosson kezet. 11
D. Az EB, MPX v2.0 MMX-R1, MPX MMX-R2, v2.0 és MPX IC, v2.0 tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaznak. Ne használjon fém vezetékezést a reagenstranszferhez. Amennyiben azidot tartalmazó oldatot önt a vízvezeték-hálózatba, hígítsa azt fel, és öblítse le nagy mennyiségű folyóvízzel. Ezek az óvintézkedések arra szolgálnak, hogy elkerülje az üledék lerakódását a fém csővezetékben, ahol azáltal robbanásra alkalmas körülmények alakulhatnak ki. E. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Az eljáráshoz ne használjon heparinos plazmát. F. Steril, egyszer használatos pipetták és nukleázmentes pipettahegyek használata javasolt. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő, ha nem ügyel a minták keresztszennyeződésének elkerülésére a mintakezelés és -feldolgozás során. G. Az optimális vizsgálati feltételek biztosítása érdekében csak a szállított vagy az előírtan szükséges egyszer használatos eszközöket alkalmazza. H. A minták és kontrollok keresztszennyeződésének elkerülésére kezeljen minden mintát és kontrollt tartalmazó anyagot a helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) szerint. I. Felhasználás előtt szemrevételezzen minden reagenskazettát, kontrollcsövet és mosóreagenst, hogy nem tapasztal-e szivárgásra utaló jeleket. Szivárgás esetén azt az anyagot ne használja fel a vizsgálathoz. J. Minden anyagot, amely mintákkal vagy reagensekkel kapcsolatba került, az országos, szövetségi, állami és helyi szabályozások szerint semmisítsen meg. K. Ne használjon lejárt cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0, cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0, vagy cobas TaqScreen mosóreagens vagy cobas TaqScreen kadáver minta oldószer készleteket. A különböző készletekből származó, illetve eltérő tételszámú reagensek felcserélése, összekeverése vagy kombinálása tilos. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS AmpliPrep készülékbe. L. A biztonsági adatlapok (SDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. M. Kerülje a reagensek bőrrel, szemmel vagy nyálkahártyákkal való érintkezését. Ha érintkezés mégis bekövetkezik, azonnal mossa le nagy mennyiségű vízzel, ellenkező esetben égési sérülés jelentkezhet. Ha ezek a reagensek kiömlenek, feltörlés előtt hígítsa fel azokat vízzel. N. Ne engedje, hogy a LYS reagens, amely guanidin-tiocianátot tartalmaz, nátrium-hipoklorit (fehérítőszer) oldattal érintkezzen. Az ilyen keverékből erősen mérgező gáz fejlődhet. O. A vizsgálat helyes kivitelezésének biztosítása végett szigorúan tartsa be a megadott eljárásokat és irányelveket. A megadott eljárásoktól és irányelvektől való bármilyen eltérés befolyásolhatja a vizsgálat teljesítményét. P. Ne használjon nagymértékben hemolizált élő donor mintákat. Q. A plazmaminták vörösvértest-szennyezettsége (> 2,5%) gátolhatja a cobas TaqScreen MPX v2.0 vizsgálatot. R. A vizsgálat egyik szakaszában se használjon sérült vonalkódú összetevőket. S. Az összes mintát tárolja az előírt hőmérséklettartományban. A vizsgálat eredményét befolyásolhatja a helytelenül tárolt minta. Sajátos utasításokért tanulmányozza a MINTAVÉTEL, -TÁROLÁS ÉS - CSOPORTOSÍTÁS részt. Egyes HCV izolátumok hőérzékenyek lehetnek. Minimalizálni kell a minták magas hőmérsékletnek való kitettségét. KONTROLLOK ÉS REAGENSEK ELŐKÉSZÍTÉSE A cobas TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészletet és a cobas TaqScreen MPX v2.0 tesztet a használat előtt legalább 30 perccel ki kell venni a hűtőből. 12
MINTAVÉTEL, -TÁROLÁS ÉS -CSOPORTOSÍTÁS MEGJEGYZÉS: Valamennyi mintát fertőző ágensként kell kezelni. Élő donor minták A. EDTA, CPD, CPDA1 és CP2D-beli plazma és 4%-os nátrium-citrát antikoaguláns alkalmazható a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszthez. A minták kezelésére és centrifugálásra vonatkozóan kövesse a mintavevő cső/zacskó gyártójának utasításait. A minták stabilitását befolyásolja a magasabb hőmérséklet. B. Az EDTA, CPD, CPDA1 vagy CP2D antikoagulánsban gyűjtött vérre az alábbi tárolási feltételek vonatkoznak: 2 és 25 C között max. 48 óráig, 2 és 8 C között max. 72 óráig tárolható. A sejtektől való elkülönítés után a plazma 2 és 8 C között max. 7 napig, 3 fagyasztás-kiolvasztás ciklus mellett 18 C alatt pedig max. 30 napig tárolható. C. A Becton Dickinson Vacutainer PPT használatával gyűjtött vér a plazma vörösvértestektől való centrifugás elkülönítése előtt 2 és 30 C között max. 72 óráig tárolható. A PPT-beli gélelkülönített plazma 2 és 8 C között további kilenc napig tárolható. 40 D. A 4%-os nátrium-citrát antikoagulánsbeli plazma az alábbi két feltétel teljesülésével tárolható: 2 és 25 C között max. 48 óráig, 2 és 8 C között max. 28 napig, valamint 1 fagyasztáskiolvasztás ciklus mellett 18 C alatt max. 30 napig tárolható. 2 és 25 C között max. 48 óráig, 2 és 8 C között max. 20 napig, valamint 2 fagyasztáskiolvasztás ciklus mellett 18 C alatt max. 6 hónapig tárolható. 13
E. A plazmatérfogatokra vonatkozó következő előírások 13 x 100 mm-es műanyag donorcsövekből Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral történő pipettázáson alapulnak. A felsorolt mennyiségek a csomagolt vörösvértesteken felüli plazmára vonatkoznak, és a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszt futtatásakor alkalmazandók. Csoporttípus Elsődleges csoport Ismételt csoport Megerősítési csoport Legkisebb plazmatérfogat 3 ml 1,5 ml 2 ml F. A teljes vért tilos fagyasztani. 40 G. Fedett mély lyukú tálcában lévő plazma az alábbi két feltétel teljesülésével tárolható: 2 és 8 C között max. hét napig. 18 C alatt max. 7 napig. H. A csoportosított vagy egyenként hűtött donormintákat használat előtt legalább 30 percig kell állni hagyni szobahőmérsékleten. I. Eltérő gyűjtési és tárolási feltételeket a felhasználónak validálnia kell. Amennyiben a minták szállítása szükséges, akkor azokat a minták és kóroki ágensek transzportjára vonatkozó szövetségi és nemzetközi előírásoknak megfelelően kell csomagolni és felcímkézni. 31 J. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő a minták keresztszennyeződéséből adódóan, ha azok nem voltak megfelelően kontrollálva a mintakezelés és -feldolgozás során. Kadáver minták A. Kadáver donor eredetű minták osztályozása: a szalmasárgától a rózsaszínűig mérsékelten hemolizált minta, a pirostól a sötétpiros, illetve barna színűig pedig nagyfokban hemolizált minta. B. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel EDTA antikoagulánst tartalmazó csövekbe, illetve szérumcsövekbe levett kadáver vérminták használhatók. Kövesse a cső gyártójának utasításait. Az emelkedett hőmérséklet befolyásolja a minták stabilitását. C. Az EDTA antikoagulánst tartalmazó csőbe vett kadáver eredetű vérminták a plazma elválasztását megelőzően 2 30 C-on legfeljebb 24 óráig, 2 25 C-on további 24 óráig tárolhatók. 48 óránál hosszabb tároláshoz válassza el a plazmát a vörösvértestekről centrifugálással, és távolítsa el a plazmát a vörösvértestekről tárolás előtt. Eltávolítást követően a plazma 2 8 C-on még további nyolc napig tárolható. Máshogy: a vörösvértestek eltávolítása után a plazma 18 C-on legtöbb 30 napig tárolható. A kadáver EDTA-s plazma legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel. 14
D. A szérumként vett kadáver eredetű vérminták a vértestek elválasztását megelőzően 2 30 C-on legfeljebb 24 óráig, 2 25 C-on további 24 óráig tárolhatók. 48 óránál hosszabb tároláshoz válassza el a szérumot az alvadéktól centrifugálással, és távolítsa el a szérumot az alvadékról tárolás előtt. Az alvadékról való eltávolítást követően a szérum 2 8 C-on még további nyolc napig tárolható. Máshogy: az alvadékról való eltávolítása után a szérum 18 C-on legtöbb 30 napig tárolható. A kadáver eredetű szérum legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel. E. A PPT csövekbe vett kadáver eredetű vérminták a plazma centrifugálás útján való elválasztását megelőzően 2 30 C-on legfeljebb 24 óráig, majd 2 25 C-on további 24 óráig tárolhatók. 48 óránál hosszabb tároláshoz a gélben elválasztott plazma PPT csőben, 2 8 C között további nyolc napig tárolható. F. A cobas TaqScreen kadáver minta oldószerrel 1:5 arányban hígított kadáver minták 2 8 C-on legfeljebb 7 napig tárolhatók, és újrakeverés után (fel-le pipettázás négyszer (4) minden csőben) vizsgálhatók a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel. G. A cobas TaqScreen kadáver minta oldószerrel 1:5 arányban hígított kadáver minták 18 C-on való tárolását nem vizsgálták. H. Amennyiben a minták szállítása szükséges, akkor azokat a minták és kóroki ágensek transzportjára vonatkozó szövetségi és nemzetközi előírásoknak megfelelően kell csomagolni és felcímkézni. 31 I. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő a minták keresztszennyeződéséből adódóan, ha azok nem voltak megfelelően kontrollálva a mintakezelés és -feldolgozás során. MINTACSOPORTOSÍTÁS ÉS -PIPETTÁZÁS A. A cobas s 201 rendszer a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort használja pipettázási és csoportosítási tevékenységekhez. A Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor elvégzi a vonalkódleolvasási és csoportosítási műveleteket, minek során a mintákból csoportokat hoz létre. B. A cobas s 201 rendszer telepítése lehetséges Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor nélkül is, ekkor azonban a vonalkódazonosítók manuális bevitele szükséges. Használati útmutatás céljából tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyvét. C. Ha a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reaktív csoportot mutat kit, a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor használható az egyéni minták pipettázásához a mély lyukú lemezekből vagy eredeti mintacsövekből a másodlagos vizsgálathoz. ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS MEGJEGYZÉSEK A. Felszerelés 1. A használathoz készítse elő a cobas s 201 rendszert a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításainak megfelelően. 2. A helyes működés érdekében végezze el a javasolt karbantartást a készülékeken. B. Reagensek 1. A cobas TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészletet és a cobas TaqScreen MPX v2.0 tesztet a használat előtt legalább 30 perccel ki kell venni a hűtőből. A cobas TaqScreen mosóreagens hőmérsékletét használat előtt szobahőmérsékletre kell hozni. A reagensek tárolási feltételeit a tárolási és kezelési követelményekről szóló rész ismerteti. 2. Valamennyi cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlet összesen 96 vizsgálat elvégzéséhez elegendő reagenst tartalmaz, amelyek futtatását SK24 állványonként 24 vizsgálatot tartalmazó tételekben célszerű kivitelezni. Minden egyes tétellel vagy SK24 állvánnyal együtt egy negatív kontrollt (MPX ( ) C, v2.0) és a pozitív kontrollok mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni. 15
3. Minden cobas TaqScreen MPX kadáver minta oldószer készlet összesen 96 vizsgálat elvégzéséhez elegendő anyagot tartalmaz, amelyek futtatását SK24 állványonként 24 vizsgálatot tartalmazó tételekben célszerű kivitelezni. Minden egyes tétellel vagy SK24 állvánnyal együtt egy negatív kontrollt (MPX ( ) C, v2.0) és a pozitív kontrollok mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni. A kontrollokat élő donor minta és kadáver minta esetében azonos módon kell feldolgozni a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel. 4. Minden kontrollt csak egyszer lehet felhasználni. 5. A rendszer megakadályozza, hogy a COBAS AmpliPrep készülékben tölthető időt (a felbontást követően összesen 40 órát, vagy a felbontástól számítva 20 napot) túllépő reagenseket, lejárt reagenseket, illetve a rendszerben már korábban használt többkazettás szettből származó kevert kazettákat használjon. C. Mintafeldolgozás 1. A minták és kontrollok kezelése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére. 2. Legyen óvatos, hogy elkerülje a minták és az MPX ( ) C, v2.0 kontroll szennyezését a pozitív kontrollokkal. D. Egyéni vírustarget azonosítása A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 egyidejűleg kimutatja és megkülönbözteti a HIV, HCV és HBV targeteket. A rendszer a három HIV targetet (HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport és HIV-2) nem különbözteti meg egymástól. HASZNÁLATI UTASÍTÁS A cobas s 201 rendszer négy fő eljárást foglal magában: Minta és kontroll pipettázása az opcionális Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral, minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készüléken a cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel, amplifikálás/kimutatás a COBAS TaqMan analizátoron, valamint adatkezelés. Minden cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlet nyolc kazettát tartalmaz: két MPX2 CS1 kazettát mágneses üvegpartikulumokkal, két MPX2 CS2 kazettát lízisreagenssel, két MPX2 CS3 kazettát proteináz-oldattal és eluáló pufferrel, valamint két MPX2 CS4 kazettát az MPX belső kontroll, v2.0, MPX v2.0 Master Mix Reagens 1 és MPX Master Mix Reagens 2, v2.0 reagensekkel. A tesztkészletet a cobas TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészlettel és a cobas TaqScreen mosóreagenssel együtt kell használni, továbbá a kadáver eredetű minták feldolgozásához a cobas TaqScreen kadáver minta oldószer készlettel. Megjegyzés: Ne nyissa ki a kazettákat. Megjegyzés: Ne öntsön össze különböző tételekből, vagy azonos tételből, de különböző flakonokból származó reagenseket. Megjegyzés: Ne keverje a különböző készletből származó reagenseket (se a kazettákat). Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS AmpliPrep készülékbe. Megjegyzés: Ne válassza le a kontrollcsöveket az adapterről (a műanyag kontrollcsőtartó). Megjegyzés: A PDM szoftver nyomon követi és biztosítja, hogy a tétel egyetlen COBAS AmpliPrep készüléken és COBAS TaqMan analizátoron fusson, amelyek egyazon AMPLILINK adatállomáshoz csatlakoznak. Megjegyzés: Egy tételt tilos egynél több COBAS AmpliPrep készüléken vagy COBAS TaqMan analizátoron futtatni. Végezzen el minden szükséges karbantartást a cobas s 201 rendszer használati útmutatójának megfelelően. Részletes használati útmutatás céljából tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyvét. Fontos, hogy a felhasználó kövesse a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv ének utasításait a vizsgálat megfelelő kivitelezése érdekében. 16
A. Kontrollok és minták pipettázása a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral Megjegyzés: A minták és kontrollok előkészítése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére. Megjegyzés: Keverje meg a kontrollokat legalább háromszori óvatos döntögetéssel úgy, hogy ne képződjenek buborékok, az alábbiak szerint. A döntögetés minden alkalommal azt jelenti, hogy a kontrollt fejtetőre fordítja, majd vissza. A döntögetés során mindig tartsa a kontroll legalább 2 másodpercig mindegyik helyzetben (azaz fordítsa a kontrollt fejtetőre, és tartsa így legalább 2 másodpercig. Majd fordítsa vissza a kontrollt, és így is tartsa legalább 2 másodpercig.) Megjegyzés: A kontrollbeli víruscélpontok, valamint a csoportosított és egyenkénti minták a rendszeren (max. 30 C-ig) legalább 18 órán keresztül stabilak maradnak a COBAS AmpliPrep készüléken történő extrakció előtt. A1. Helyezze üzembe a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort, majd a képernyőn megjelenő utasításokat követve indítsa el a Roche PDM csoportosítási varázslót. A2. Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a mintacsövek és kontrollcső adaptorok azonosító vonalkódját. Ha sérült, a rendszer nem fogja felismerni a mintákat vagy kontrollokat. A3. Távolítsa el a kontrollcsövek kupakját és helyezze a mintákat, fogyóeszközöket és kontrollokat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorba. A minták, fogyóeszközök és kontrollok betöltése után a készülék átviszi a kontrollokat és mintákat az S-csövekbe. A4. Egyéni kadáver minták esetében pipettázzon 2000 µl CADV SPEC DIL oldószert a megfelelően jelölt 13 x 100 mm-es csövekbe, adagoljon minden egyes csőbe 500 µl kadáver mintát, és keverje meg azokat négyszeri (4) fel-le pipettázással. Ügyeljen a minták helyes azonosítására a manuális hígítási eljárás során. Töltse be a hígított kadáver mintákat, fogyóeszközöket és kontrollokat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorba. A hígított kadáver minták, fogyóeszközök és kontrollok betöltése után a készülék átviszi a kontrollokat és hígított mintákat az S-csövekbe. A5. A pipettázási folyamatot követően tekintse át a figyelmeztetéseket és nyomtassa ki a csoportosítási jelentés(eke)t. Ellenőrizze a csoportokat és a mély lyukú lemezek lyukait. Érvénytelenítse a csoportokat és/vagy lyukakat, ha vörösvértest-szennyeződést észlel, illetve a térfogatok nem egyenletesek. A6. Helyezze vissza az S csövek tetejét, majd nukleinsav-extrakció céljából helyezze át az SK24 állvány(oka)t a COBAS AmpliPrep készülékre. A7. Fedje le és helyezze tárolásba a mély lyukú tálcákat (ha a tálcák a pipettázással elkészültek). A8. Távolítsa el a tároló- és donorcsöveket. A feltételek végett tanulmányozza a Mintavétel, -tárolás és -csoportosítás részt. A9. Távolítsa el és dobja ki a kontrollcsöveket. (A kontrollcsöveket csak egyszer lehet felhasználni.) B. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagensek előkészítése és betöltése Megjegyzés: Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a kazetták címkéit. A COBAS AmpliPrep készülék vonalkód leolvasója automatikusan leolvassa minden kazetta vonalkódcímkéjét a reagensállvány készülékbe történő betöltése folyamán. B1. Használat előtt legalább 30 perccel vegye ki a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszt reagenseit a hűtőből. Nincs szükség egyéb reagens-előkészítési lépésre. B2. Az indítást megelőzően annyi kazettát kell betölteni, hogy elegendő legyen a feldolgozásra kerülő minták teljes számának befogadására a COBAS AmpliPrep készülék a folyamatos üzeme során. Mindegyik kazetta 48 vizsgálatra elegendő reagenst tartalmaz. A reagensek folyamatos üzem során való betöltéséről a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv vonatkozó fejezetében tájékozódhat. 17
B3. Helyezze az MPX2 CS1 kazettát a reagensállványba úgy, hogy a kazetta vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. Az MPX2 CS1 kazettákat együtt, egy másik reagensállványon kell betölteni, mint a többi kazettát. B4. Helyezze az MPX2 CS1 kazettát tartalmazó reagensállványt az A állványpozícióba. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a készülékbe. B5. Helyezzen egy-egy szett MPX2 CS2, MPX2 CS3 és MPX2 CS4 kazettát mindegyik MPX2 CS1 kazetta számára a reagensállvány(ok)ba úgy, hogy a kazetták vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. B6. Helyezze be a reagensállvány(oka)t a B, C, D, illetve E állványpozícióba. B7. A COBAS AmpliPrep készülék állapotsorán a LED-ek zöldre váltanak, ha a készlet minden szükséges eleme a készülékben van, és a készülék felismerte azokat. C. Nukleinsavak kivonása a pipettázott mintákból és kontrollokból Megjegyzés: Az alábbi lépéseket tiszta munkapadon végezze el. C1. Távolítsa el a mintafeldolgozó egység (SPU) csomagolását, de hagyja a szalagot és a műanyag fedőt érintetlenül. C2. Úgy, hogy az SPU-állvány nagy füle a felhasználó felé nézzen, illessze az SPU-öblítő nyalábot az SPU-állvány jobb oldalához. C3. Távolítsa el a szalagot és a műanyag fedőt az állványba illesztett SPU-król. Ellenőrizze, hogy minden SPU megfelelően benyomva, egy szintben legyen és teljes mértékben illeszkedjen az állványba. Egy elmozdult SPU műszerhibát okozhat. Ne nyomja meg a SPU-ban található S-hegyet. C4. Csúsztassa a betöltött SPU-állványokat a COBAS AmpliPrep készülék I, J, illetve K SPUpozícióiba addig, amíg teljesen nem illeszkednek és a készülék fel nem ismeri azokat. A készülék egyszerre 72 SPU befogadására alkalmas. Töltsön be legalább a futtatáshoz megkívánt számú SPU-t, illetve helyezzen be továbbiakat, ha szükséges. C5. Távolítsa el a gyártó által betöltött K-csövek és K-hegyek celofán csomagolását, és vigyázzon, hogy ne döntse meg az állványokat. Ellenőrizze, hogy megfelelően illeszkednek-e. C6. Csúsztassa be legalább a szükséges számú K-cső állványt a COBAS AmpliPrep készülék M, N vagy O pozícióiba, illetve K-hegy állványt a készülék M, N, O vagy P pozícióiba. C7. Töltse be a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral pipettázott mintákat tartalmazó SK24 állványokat a COBAS AmpliPrep készülék F, G, illetve H pozícióiba. Csúsztassa kattanásig az állványokat. Ellenőrizze a rendszer mintaállapot ablakában, hogy a készülék az összes állvány összes mintáját felismerte-e. C8. Az AMPLILINK szoftver segítségével ellenőrizze, hogy elegendő mennyiségű reagens és fogyóeszköz lett-e betöltve a kívánt minta-előkészítési eljáráshoz. C9. Nyomja meg az AMPLILINK szoftver munkaállomás Start gombját, hogy elindítsa a COBAS AmpliPrep készülék minta-előkészítési eljárást. D. Amplifikálás és kimutatás Megjegyzés: Az SK24 állványban lévő master mix munkareagens plusz feldolgozott minták korlátozott stabilitásúak. A COBAS TaqMan Analizátornak késznek kell lennie a minták fogadására, mire a COBAS AmpliPrep készülék végez a mintaelőkészítési eljárással. D1. Dokkolóállomás nélküli kiépítés esetén az amplifikálás és kimutatás automatikus indításához helyezze át a feldolgozott mintákat és a Master Mix reagenst tartalmazó SK24 állványt a COBAS TaqMan analizátorra. Az AMPLILINK szoftver az összes feldolgozott mintában nyomon követi a Master Mix hozzáadásának időpontját, és érvényteleníti a mintákat, ha az amplifikálás nem kezdődött meg a vizsgálatdefiníciós fájlban meghatározott időn belül. A munkafolyamat egyszerűsítése érdekében az állvány minta-előkészítésének elkészülte után 1 órán belül helyezze át az SK24 állványt a COBAS TaqMan analizátorra. 18
D2. Ha befejeződött az amplifikálás és kimutatás a COBAS TaqMan Analizátoron, a vizsgált K-csövek automatikusan a hulladékgyűjtőbe kerülnek. D3. Az eredményeket a rendszer automatikusan elfogadja és a PDM szoftverre továbbítja. E. Eredmények áttekintése és kiadása E1. Jelentkezzen be a Roche adatkezelő munkaállomásra. E2. Keresse ki a még nem értékelt tételeket az adatkezelő munkaállomás Review Batches füle alatt. E3. Tekintse át a figyelmeztetéseket úgy, hogy kijelöli a tételt és a Next gombra kattint. E4. Tekintse át a kontrolleredményeket a Controls Review fül alatt. A kontrollok érvényességi kikötései a Minőség-ellenőrzés részben találhatók. E5. Tekintse át a csoporteredményeket a kiválasztott tétel Pools Review füle alatt. A nem reaktív csoportok szükség esetén a felhasználó által manuálisan érvényteleníthetők. Az érvénytelen csoportok minden donormintáját újra kell vizsgálni. E6. Tekintse át és adja ki a donoreredményeket a kiválasztott tétel Donor Review füle alatt. E7. Nyomtassa ki a jelentéseket és küldje tovább a laboratóriumi információs rendszerre (LIS), ha ilyen rendelkezésre áll. MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS 1. Minden egyes tétellel együtt egy negatív kontrollt (MPX ( ) C, v2.0) és a három pozitív kontroll mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni. 2. Tétel állapota: A Complete, Valid tételállapot jelenik meg, ha a tételkontrollok érvényesek. Ha a tételen belül bármelyik kontroll érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz, és a vizsgálatot meg kell ismételni. Az eredmények kontrollhibából adódó érvénytelenítését a PDM szoftver automatikusan elvégzi. a. Negatív kontroll Ahhoz, hogy egy tétel érvényes legyen, a negatív kontrollnak (MPX ( ) C, v2.0) érvényesnek kell lennie. Ahhoz, hogy a negatív kontroll érvényes legyen, az eredmény nem reaktív kell, hogy legyen, valamint a járulékos belső kontrollnak érvényesnek kell lennie. Ha a negatív kontroll eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz. b. Pozitív kontrollok Ahhoz, hogy egy tétel érvényes legyen, a 3 pozitív kontrollnak (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) érvényesnek kell lennie. Ahhoz, hogy a 3 pozitív kontroll érvényes legyen, az eredmény mindegyik pozitív kontroll esetén reaktív kell, hogy legyen, valamint a járulékos belső kontrollnak érvényesnek kell lennie. Ha a pozitív kontrollok bármelyike eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz. 3. Donorminták belső kontrollja a. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, nem reaktív ( ) vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes kell, hogy legyen, ellenkező esetben a nem reaktív eredmény érvénytelen lesz, és a donorminta vizsgálatát meg kell ismételni. b. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, reaktív vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes vagy érvénytelen is lehet. 19
EREDMÉNYEK 1. A mintaeredmények csak akkor érvényesek, ha a teljes, őket tartalmazó tétel érvényes. Az elfogadhatóság feltételei a Minőség-ellenőrzés részben találhatók. Minden minta esetében négy paraméter mérésére kerül sor, egy-egy mindegyik vírustargetre, és egy másik a belső kontrollra vonatkozik. 2. A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 PDM szoftver által jelentett végső donoreredményei a következők: Donorstátusz Completed Non-Reactive Accepted Non-Reactive Completed Reactive Accepted Reactive Completed Unresolved Accepted Unresolved Magyarázat A rendszer meghatározta a végső eredményt mindegyik targetre, és valamennyi target nem reaktív. A Completed Non-Reactive eredményt elfogadták. A rendszer meghatározta a végső eredményt mindegyik targetre, és legalább egy target reaktív. A Completed Reactive eredményt elfogadták. Az életképességi időkorlát lejárt, mielőtt az eredményt elfogadták volna, és egyik eredmény sem volt reaktív. A Completed Unresolved eredményt elfogadták. Egyéni minta ismétlése A vizsgálatot a többi target végső eredményétől függetlenül meg kell ismételni az olyan donorcsövek esetén, amelyek végső eredménye egy targetre érvénytelen. Ugyanakkor a felhasználónak lehetősége van a Force Unresolve gomb kiválasztásával befejezni a donorhoz tartozó munkafolyamatot. A Force Unresolve funkció Accepted Unresolved donorstátuszt ad azoknak a donoroknak, akiknek nincs reaktív végső eredményük egyetlen targetre sem, illetve Accepted Reactive státuszt ad azoknak a donoroknak, akiknek van reaktív eredményük egy vagy több targetre. Másodlagos csoportosítási vizsgálat A vizsgálatot meg kell ismételni az olyan több mintát tartalmazó csoport donorcsövei esetén, amelyek végső eredménye egy targetre érvénytelen, amennyiben a többi target eredménye nem reaktív vagy érvénytelen. Amikor egy több mintát tartalmazó csoport kap reaktív értékelést, a cobas s 201 rendszer a csoportban található összes donort megjelöli, hogy másodlagos csoportosítási vizsgálat szükséges. Ezeket a donormintákat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor pipettázza (a mély lyukú lemezekből vagy az eredeti donorcsövekből) kevesebb donort vagy egyetlen donort tartalmazó kisebb csoportokba, és további vizsgálatuk a cobas TaqScreen MPX v2.0 teszttel történik a megerősítő eljárás részeként a reaktív egyéni donorminták azonosítása céljából. A megerősítő vizsgálatra vonatkozó specifikus információk végett tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításait. Ha egy kisebb csoportokra osztott, több mintát tartalmazó csoport valamennyi targetre nem reaktívnak bizonyul, akkor az egyedi mintá(ka)t rendszer úgy adja ki, mint Completed, végső eredmény nem reaktív. 20