ZÁRÓ BESZÁMOLÓ a Korszerű módszerek kidolgozása a trombotikus megbetegedések és a vérzékenység diagnosztikájára című támogatott projektről A projekt célkitűzései Versenyképes valamint tudományosan megalapozott új módszerek és ezek alapján a gyakorlati laboratóriumi vizsgálatokban alkalmazható reagens készletek kidolgozása a trombotikus megbetegedések és az öröklött vagy szerzett (hazánkban jelentősen alul-diagnosztizált) trombózis-hajlam valamint a vérzékenység diagnosztikájára. A projekt megvalósítása kapcsán és a fenntartási időszak alatt elért eredmények A projekt célkitűzéseiben meghatározott kutatási-fejlesztési feladatok maradéktalanul teljesültek, kidolgozásra kerültek az alábbi módszerek és reagens készletek: 1. a FXIII-A Val34Leu poliformizmus valós idejű PCR-FRET alapon való 2. az Antitrombin III kromogén szubsztráttal való mérésére, 3. a FXIII A alegység plazmából történő mérésére ELISA módszerrel, 4. a FXIII B alegység plazmából történő mérésére ELISA módszerrel, 5. a Protein C aktivitás mérésére plazmából alvadási módszerrel, 6. az MTHFR C677T mutációjának valós idejű PCR-FRET alapon való 7. a CBS 844ins68 mutációjának valós idejű PCR-FRET alapon való 8. az FXIII A alegység plazmából történő mérésére nefelometriás módszerrel. A kidolgozott módszerek és reagensek mérőműszerekre való adaptációja és kórházi laboratóriumi tesztelése megtörtént. Az elért eredmények hasznosítása, közzététele A DEOEC, Klinikai Kutató Központ saját és kollaborációk formájában történő kutatásaiban hasznosította a pályázat keretei között kidolgozásra került módszereket (A FXIII-A Val34Leu polimorfizmusának és az MTHFR C677T polimorfizmusának kimutatására szolgáló valós-idejű PCR, FRET alapú módszereket, a FXIII-A és FXIII-B alegység mérésére szolgáló ELISA módszereket és az Antitrombin III aktivitásának meghatározására szolgáló módszert). Az MTHFR C677T polimorfizmusának kimutatására szolgáló módszert a Labexpert Kft. beiktatta diagnosztikai szolgáltatásai közé. A FXIII-A és FXIII-B alegység mérésére szolgáló ELISA módszerekhez szükséges antitesteket a széles nemzetközi érdeklődésre tekintettel a Labexpert Kft. folymatosan előállítja és azokat kutatási reagensekként a Technoclone GmbH (Ausztria) forgalmazza. A FXIII alegységek meghatározására szolgáló ELISA módszereket a Klinikai kutató Központ kutatói tovább érzékenyítették (kemilumineszcens immunoassay kifejlesztésével), így alkalmassá tették a FXIII- alegységeket igen alacsony 1/5
koncentrációban tartalmazó testnedvekben (könny, cerebrospinalis folyadék, ascites) történő FXIII meghatározásra. Az Antitrombin III meghatározás módszerét a DEOEC, Klinikai Kutató Központ és a Labexpert Kft. két irányban továbbfejlesztette. Egyrészt kidolgozásra került a progresszív antitrombin aktivitás meghatározására is alkalmas reagens készlet, másrészt kifejlesztésre került a heparin koncentráció meghatározására szolgáló X-es faktor gátlás detektálásán alapuló diagnosztikai reagens, melyet a Labexpert Kft. gyárt. A protein C meghatározásra szolgáló reagens kutatási reagensként tudományos projektekben került hasznosításra. A fenntartási időszak alatt az elért tudományos eredmények bemutatása 9 publikáció és 24 kongresszusi prezentáció formájában történt. Publikációk: 1. Bereczky Z, Balogh E, Katona E, Czuriga I, Kárpáti L, Shemirani AH, Edes I, Muszbek L. Decreased factor XIII levels in factor XIII A subunit Leu34 homozygous patients with coronary artery disease. Thromb Res 2008;121:469-76. 2. Bagoly Z, Fazakas F, Komáromi I, Haramura G, Tóth E, Muszbek L. Cleavage of factor XIII by human neutrophil elastase results in a novel active truncated form of factor XIII A subunit. Thromb Haemost 2008; 99:668-74. 3. Ajzner É, Schlamadinger Á, Kerényi A, Bereczky Z, Katona É, Haramura G, Boda Z, Muszbek L. Severe bleeding complications caused by an autoantibody against the B subunit of plasma factor XIII; a novel form of acquired factor XIII deficiency. Blood 2009; 113: 723-725. 4. Karimi M, Bereczky Z, Kahan N, Muszbek L. Factor XIII deficiency: clinical manifestations and laboratory diagnostics. Semin Thromb Haemost 2009; 35: 426-438. 5. Nagy Jr B, Simon Z, Bagoly Z, Muszbek L, Kappelmayer J. Binding of plasma factor XIII to thrombin-receptor activated human platelets. Thromb Haemost 2009; 101: 83-89. 6. Orosz Zs, Katona E, Facskó A, Berta A, Muszbek L. A highly sensitive chemiluminescence immunoassay for the measurement of coagulation factor XIII subunits and their complex in tears. J Immunol Meth 2010; 353: 87-92. 7. Orosz ZZ, Katona E, Facskó A, Módis L, Muszbek L and Berta A. Factor XIII subunits in human tears; their highly elevated levels following penetrating keratoplasty. Clin.Chim.Acta 2011; 412: 271-276. 8. Bereczky Z, Kovács KB, Muszbek L. Protein C and Protein S deficiencies; similarities and differences between two brothers playing in the same game. Clin Chem Lab Med 2010; accepted 9. Muszbek L, Bereczky Z, Kovács B, Komáromi I. Antithrombin deficiency and its laboratory diagnostics. Clin Chem Lab Med 2010; accepted Kongresszusi prezentációk: 1. Muszbek László: Update on methodological problems concerning the measurement of FXIII activity and antigen in FXIII concentrates. FXIII and Fibrinogen Scientific and Standardization Committee Meeting of the ISTH, 2008. július 3., Bécs, Ausztria 2/5
2. Katona Éva: Factor XIII in body fluids other than plasma. FXIII and Fibrinogen Scientific and Standardization Committee Meeting of the ISTH, 2008. július 3., Bécs, Ausztria 3. Katona Éva: Factor XIII levels in patients with different stages of alcoholic liver cirrhosis. XIX Congress of the International Society for Fibrinolysis and Proteolysis, 2008. július 6-10. Bécs, Ausztria (poszter) 4. Shemirani Amir Houshang: Factor XIII val34leu Polymorphism in patients surviving or not surviving ischemic stroke. XX International Congress on Thrombosis, 2008. június 25-29., Athén, Görögország 5. Katona Éva: Factor XIII-A Val34leu Polymorphism and fibrinogen modulate factor XIII levels in patients with coronary artery disease. XX International Congress on Thrombosis, 2008. június 25-29., Athén, Görögország (poszter) 6. Csapó Andrea: Plasma Coagulation Factor XIII in cerebrospinal fluid. XX International Fibrinogen Workshop, 2008. Július 9-14.,Velence, Olaszország (poszter) 7. Prof. Muszbek László: The laboratory diagnosis and classification of FXIII deficiencies. 6th ECAT Participiant s Meeting, 2008. November 5-9. 8. Komáromi István: The Structure of Factor XIII in its Active Conformation (FXIII-A) as Molecular Modeling Predicts. 53rd Annual meeting of Society of Thrombosis and Haemostasis Research (2009. február 04-07.) Bécs, Ausztria 9. Shemirani Amir Houshang: Factor XIII Val34Leu polymorphism in patients surviving or not surviving ischemic stroke. 53rd Annual meeting of Society of Thrombosis and Haemostasis Research (2009. február 04-07.) Bécs, Ausztria 10. Katona Éva: Interaction between homocysteine and lipoprotein(a) increases the risk of coronary sclerosis/myocardial infarction in Hungarian women. 53rd Annual meeting of Society of Thrombosis and Haemostasis Research (2009. február 04-07.) Bécs, Ausztria (poszter) 11. Bereczky Zsuzsanna: Interaction between homocysteine and lipoprotein(a) increases the risk of coronary sclerosis/myocardial infarction in Hungarian women. The 3rd International Symposium on Women s Health Issues in Thrombosis and Haemostatsis (2009. február 05-08.), Prága, Csehország 12. Muszbek László: Factor XIII VAL34LEU Polymorphism in patients surviving or not surviving ischemic stroke. The 3rd International Symposium on Women s Health Issues in Thrombosis and Haemostatsis (2009. február 05-08.), Prága, Csehország (poszter) 13. Muszbek László: Factor XIII a Subunit Val34leu Polymorphism in Patients Surviving or not Surviving Ischemic Stroke. Euromedlab 2009 in Innsbruck 18 th IFCC- FESCC European Congress (2009. június 7-11.), Innsbruck, Ausztria (poszter) 14. Bereczky Zsuzsanna: Interaction between homocysteine and lipoprotein (a) increases the risk of coronary sclerosis/myocardial infarction in women. Euromedlab 2009 in Innsbruck 18 th IFCC- FESCC European Congress (2009. június 7-11.), Innsbruck, Ausztria (poszter) 15. Katona Éva: Factor XIII Subunits in Non-Stimulated and Stimulated Human Tears and in Tears Produced Following Penetrating Keratoplasty. 3/5
Euromedlab 2009 in Innsbruck 18 th IFCC- FESCC European Congress (2009. június 7-11.), Innsbruck, Ausztria (poszter) 16. Muszbek László: An update of the laboratory diagnosis of inherited thrombophilia, difficulties and new possibilities. 1 st Congress of the Romanian Association of Medical Laboratories with International Participation (2009. június 24-27.), Tirgu Mures, Románia 17. Muszbek László: Diagnosis of factor XIII deficiency, outline of a position paper. XXII. Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis (2009. július 11-16.), Boston, USA 18. Muszbek László: Factor XIII A Subunit Val34leu Polymorphism in Patients Surviving or not Surviving Ischemic Stroke. XXII. Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis (2009. július 11-16.), Boston, USA (poszter) 19. Orosz Zsuzsanna: Factor XIII Subunits in Non-Stimulated and Stimulated Human Tears and in Tears Produced Following Penetrating Keratoplasty. XXII. Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis (2009. július 11-16.), Boston, USA (poszter) 20. Bereczky Zsuzsanna: Interaction between homocysteine and lipoprotein (a) increases the risk of coronary sclerosis/myocardial infarction in women. XXII. Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis (2009. július 11-16.), Boston, USA (poszter) 21. Csapó Andrea: FXIII in cerebrospinal fluid. XXII. Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis (2009. július 11-16.), Boston, USA (poszter) 22. Muszbek László: Factor XIII-the state of the art. 6 th Croatian Congress of Medical Biochemist (2009. szeptember 29-október 4.), Horvátország, Brac 23. Muszbek László: An update of the laboratory diagnosis of inherited thrombophilia, difficulties and new possibilities. 1 st National Conference of the Romanian Society on Hemostasis and Thrombosis (2009. november 5-7.), Románia, Bukarest 24. Bereczky Zsuzsanna: Type II HBS antithrombin Budapest 3 is the primary antithrombin deficiency in the Hungarian population; clinical consequences and diagnostic difficulties. 21st International Thrombosis Congress (2010. Július 6-9.), Milánó, Olaszország (poszter) Az eredmények hasznosítása a felsőoktatásban: 1. A FXIII-A alegység és a FXIII-B alegység mérésére alkalmas ELISA módszerek, a FXIII-A Val34Leu polimorfizmusának, valamint az MTHFR C677T mutációjának kimutatására szolgáló valós idejű PCR alapú módszerek kidolgozása lehetővé tették a Klinikai Kutató Központ számára a kardiovaszkuláris rizikófaktorok kutatásának kiterjesztését és a FXIII szintek vizsgálatát különböző testfolyadékokban. A kutatási témákban 4 PhD hallgató foglalkoztatása történik. 2. A projekt során kidolgozásra került valós idejű PCR-FRET alapú módszerek oktatása bekerült a DEOEC, ÁOK, Orvosi Kutató Laboratóriumi Analitikus képzés molekuláris genetika tantárgyába és a posztgraduális, molekuláris genetikai diagnosztika szakképzés kurrikulumába. 4/5
3. A projekt során kidolgozásra került Antitrombin III és Protein C meghatározások oktatása bekerült a DEOEC, ÁOK, Orvosdiagnosztikai és Kutató Laboratóriumi Analitikus képzés hemosztázis tantárgyába A projekt eredményeire épülő új nemzetközi együttműködések: 1. Részvétel a FXIII Subcommittee Scientific and Standardization Comittee (International Society on Thrombosis and Haemostasis) munkájában 2. Kollaboráció kialakítása a bécsi AKH hemosztázis kutató laboratóriumával a FXIII deficienciák karakterizálására 3. Együttműködés kialakítása a bonni Institute of Hematology and Transfusion Medicine -vel a FXIII kutatásban 4. Együttműködés kialakítása az antitrombin III és protein C kutatásban a zágrábi Clinical Institute of Laboratory Diagnosis-sal (Clinical Hospital Center Zagreb University, School of Medicine, Zagreb, Croatia) 5. Együttműködés a Laboratorium voor Klinische Biologie/Labo Bloedstolling, Gent, Belgium-mal FXIII deficienciák karakterizálására 6. Együttműködés a Marosvásárhelyi Orvosi és Gyógyszerésztudományi Egyetem, Gyógyszerészeti Kar, Gyógyszerészeti Biokémiai-Egészségügyi Kémiai Tanszékével, Marosvásárhely, Románia. Budapest, 2011. Január. 25. 5/5