Mikrobiológia gyakorlat 3. A mikroorganizmusok leküzdése 1
halott mikroorganizmus DEF.: Egy mikroorganizmus akkor tekinthető élettelennek, ha már optimális növekedési feltételek mellett sem képes reprodukcióra. A gyakorlatban mindig populációk, nem pedig az egyes sejtek pusztulását tanulmányozzák. 2
Sterilizálási fogalmak Sterilizálás: valamennyi mikroorganizmus és spóra megsemmisítése a használt anyagok, eszközök felületén, táptalajokban. Fertőtlenítés: olyan fizikai vagy kémiai eljárás, amely célja valamennyi kórokozó mikroorganizmus elpusztítása. Nem hat azonban a bakteriális endospórákra. 3
Higiénizálás: a használt anyagok, eszközök felületének olyan mértékű megtisztítása, amely nem csupán a mikroorganizmusok és spórák többségének eltávolítását jelenti, hanem egyben a szerves szennyezőanyagokét is, melyeken a mikrobák elszaporodhatnának. 4
Sterilizálási fogalmak értelmezése a kézmosás példáján: sterilizálás fertőtlenítés higiénizálás klór tartalmú szerekkel kórokozókat és nem kórokozókat egyaránt elpusztítja híg fenollal (karbolsavval) csupán a kórokozókat és a nem kórokozók egy részét pusztítja el (sanitization) szappannal nemcsak a kórokozók és nem kórokozók egy részét pusztítja el, hanem az elszaporodásukat elősegítő szerves anyagokat is eltávolítja a kézről 5
Kemoterápiás szerek élő szervezeten használják szelektív legyen a kórokozóra alkalmazott koncentráció fontos antibiotikumok is ilyenek 6
Tartósítás: a különböző anyagokban, élelmiszerekben lévő baktériumok élettevékenységének ill. szaporodásának gátlása. Reverzibilis hatású anyagok mikrosztatikus hatás (bakterio-, fungi- ) irreverzibilis hatású anyagok baktericid, fungicid, sporocid, virucid, biocid 7
Sterilizálási eljárások Hőkezelés (hőhalálpont, hőhalálidő) - lánggal égetés - száraz-hővel sterilizálás (160-180 C, 4h) - nedves-hővel sterilizálás (121 C, 1 bar, 15 ; 135 C, 2 bar, 15 ; 115 C, 0,75 bar, 15 ) Autokláv: hermetikusan záró, nagy belső nyomást kiálló tartály, melyben gőz fejlesztése mellett történik a sterilizáció. 8
Az autokláv gőzterének hőmérséklete levegő jelenlétében Túlnyomás (at) Tiszta gőz, hőmérséklete levegő nélkül C Hőmérséklet az autoklávban Gőz 1/3 Gőz 1/2 levegővel, levegővel, Hőmérsékl hőmérséklet et C C Gőz összes levegővel, hőmérséklet C 0,33 107 100 97 72 0,66 115 109 105 90 1,00 121 115 112 100 1,33 126 121 118 109 1,66 130 126 124 115 2,00 135 130 128 121 9
Sterilizálási eljárások (folyt.) Hőkezelés kíméletesebb módjai: - tyndallizáció (3 x 30, áramló gőzben) - pasztőrözés (72-78 C, 10-40 ) - ultrapasztőrözés (140 C) Fagyasztás: - 4 C, pár nap-hét - -18 C, 1/2-2 év - -96 C, 5-10 év - folyékony N-ben, 30-50 év 10
Sterilizálási eljárások (folyt.) Sugárzások: - elektromágneses (γ-, röntgen-, UV-) - részecskesugárzás (nagyenergiájú elektronok alkotta β- vagy katódsugárzás) hatásuk szerint: - ionizáló sug. - nem ionizáló sug. 11
Sterilizálási eljárások (folyt.) Szűrés: - szitahatású membránszűrők (cellulózészter, poliészter, teflon), 0,02-8 µm - adszorpciós hatású szűrők (azbeszt, üveg Fritt-lemezek, réz-frittek, műanyagok, GlasFaser) 12
Sterilizálási eljárások (folyt.) Kémiai szerek: - kemoterápia mesterséges szerekkel - antibiotikumok, mesterséges drogok 13
Kémiai szerek főbb csoportjai Alkoholok: - alifásak: etilalkohol, izopropil alkohol - aromásak: fenolszármazékok (karbol) halogének: F, Cl, I, Br Cl 2 + H 2 0 HCl + HClO HCl + 0 HClO + H 2 0 HCl + H 2 0 2 H 2 0 + 0 14
Kémiai szerek főbb csoportjai (folyt) aldehidek (-CHO): formaldehid, formalin alkilezőszerek nehézfémek (Cu, Ag, Au, Hg, As, Zn, Pb) sterilizáló hatású gázok: kéngőzök, etilénoxid, propilénoxid detergensek vagy felületaktív anyagok: nem ionos szappanok, kationaktív kvat. NH 4+ sók 15
Laboreszközök, edények sterilizálása Lánggal (oltókacs, csipesz, szike, stb.) hőlég-sterilizátorban, becsomagolva alufóliába vagy Petri-csészében spec. oltófülkében vagy steril szobában lamináris box 16
Antibiotikumok hatásmechanizmusa Fehérjeszintézis szelektív gátlása nukleinsav szelektív gátlása baktérium-sejtfalszintézis gátlása (penicillin!) specifikus kötődés bakt.-ok és gombák sejtmembránjához anyagcsereutak metabolit-analógjai gombás fertőzések ellen membránlipidek analógjai antivirális szerek (genom átírást, transzlációt blokkolnak, vagy az érési folyamatot gátolják) 17
Immunológia Aktív immunizálás: célja a tartós védettség kialakítása olyan kórokozókkal, melyekkel életünkben később is találkozunk. (megelőző) passzív imm.: ált.-ban a már bekövetkezett fertőzést követően alkalmazzák (pl. kígyóméreg elleni antiszérumok) antitesteket termelő gének átvitele, beültetése 18