Kísérletes kardiológia/experimental cardiology

Átírás

1 AZ IK S ÉS IK SZE RE PE A REPOLARIZÁCIÓS TAR TA LÉK BAN: FON TOS KÖ VET KEZ MÉ NYEK AZ ARIT MIA ELÕ RE JEL ZÉS SZEM PONT JÁ BÓL Baczkó Ist ván, Tá bo ri Ka ta lin, Len gyel Csaba, Krajcs Nó ra, Papp Gyula, Var ró And rás Sze ge di Tu do mány egye tem ÁOK, Far ma ko ló gi ai és Farmakoterápiás In té zet, Sze ged Szegedi Tu do mány egye tem ÁOK, I. Bel gyó gyá sza ti Kli ni ka, Sze ged MTA-SZTE Ke rin gés far ma ko ló gi ai Ku ta tó cso port, Sze ged A fej lesz tés alatt ál ló gyógy sze rek proaritmiás mel lék ha tá sa i nak meg bíz ha tó elõ re - jel zé se alap ve tõ, de nem meg ol dott. A kö zel múlt ban a QT-intervallum rö vid tá vú va ri a bi li tá sá nak (QT V ) meg ha tá ro zá sát ja va sol ták a repolarizáció za va ra in ala pu ló arit mi ák predikciójára. Mun kánk ban vizs gál tuk a Torsades de Pointes (TdP) arit - mia incidenciáját és en nek kor re lá ci ó ját a frek ven cia kor ri gált QT-intervallum (QT c ) meg nyú lá sá val, va la mint a QT V mér té ké vel az I Ks és I Kr, va la mint az IK és I Kr ára mok kom bi nált, far ma ko ló gi ai gát lá sát kö ve tõ en al ta tott nyú lon. EKG-t re - giszt rál tunk az I Kr -gátló dofetilid, az Ik s -gátló HMR-556 és az IK -gátló BaCl önál ló, va la mint kom bi nált int ra vé nás ada go lá sa elõtt, és azt kö ve tõ en. Míg a dofetilid szig ni fi kán san nyúj tot ta a QT c -intervallumot, és az ál la tok 8%-ában in - du kált TdP-aritmiát, a HMR-556 vagy BaCl ön ma gá ban nem be fo lyá sol ta a QT c -értékeket és nem oko zott TdP-t. A dofetilid és HMR-556, va la mint a BaCl és dofetilid kom bi ná ci ó ja szig ni fi kán san nyúj tot ta a QT c -t, nö vel te a QT V -t és ma - gas TdP-incidenciához ve ze tett (8% és 63%). A mo dellt tesz tel tük egy is mert TdP-t oko zó szer, a cisaprid önál ló, va la mint IK s gát ló HMR-556 elõ ke ze lést kö ve tõ ada - go lá sá val. A HMR-556 és cisaprid kom bi ná ció szig ni fi kán san emel te a QT V -t és a TdP elõ for du lá sát. Ös sze fog lal va, a QT V és a TdP elõ for du lá si gya ko ri sá ga je len - tõ sen nõtt az IK r és IK s, va la mint az IK és IK r kom bi nált far ma ko ló gi ai gát lá sát kö ve tõ en. A QT V si ke re seb ben je lez he ti elõ re a TdP-aritmia je lent ke zé sét, mint a QT c -megnyúlás mé ré se ön ma gá ban. Mo del lünk, amely ben a repolarizációs tar ta lék be szû kí té sét egy vagy több ká li um áram far ma ko ló gi ai gát lá sá val hoz zuk lét re, hasz nos le het a fej lesz tés alatt ál ló gyógy sze rek proaritmiás mel lék ha tá sá nak ha té - ko nyabb elõ re jel zé sé re. A vizs gá lat az OMFB-0383/006 és ETT 360/006 pá lyá - zat (B.I), és a Bo lyai Já nos Ku ta tá si Ösz tön díj (L.Cs.) tá mo ga tá sá val ké szült. CONTRIBUTION OF IK S AND IK TO REPOLARIZATION RESERVE: IMPLICATIONS FOR ARRHYTHMIA PREDICTION Keywords: repolarization reserve, proarrhythmia, Torsades de Pointes, IK s, IK The reliable assessment of proarrhythmic side effects of drugs in development is essential but remains elusive. Recently, the short-term beat-to-beat variability of the QT interval (QT V ) has been suggested as a novel parameter to predict ventricular arrhythmias due to repolarization disturbances. He re we studied the incidence of Torsades de Pointes (TdP) arrhythmias and its correlation with the frequency corrected QT (QT c ) interval and the QT V following combined pharmacological block of IK s and IK r, IK and IK r in anesthetized rabbits. ECGs were recorded before and after the administration of the IK r blocker dofetilide, the IK s blocker HMR-556 and the IK blocker BaCl and their combination, intravenously. While dofetilide significantly increased the QT c interval and induced TdP in 8% of animals, HMR-556 or BaCl alone had little effect on QT c and did not cause TdP. The combination of dofetilide and HMR-556, BaCl and dofetilide significantly increased the QT c interval, the QT V and led to a high incidence of TdP (8% and 63%). To test how this model responded to a drug with known TdP liability, cisapride was administered with and without pre-treatment with the IK s blocker HMR-556. The combination of HMR-556 and cisapride significantly increased QT V and incidence of TdP. In conclusion, the QT V and the incidence of TdP increased markedly following the combined pharmacological block of IK r and IK s as well as after combined block of IK and IK r. The QT V may be a better predictor of subsequent TdP development than the prolongation of the QT c interval alone. The current model, where repolarization reserve is impaired by pharmacological block of one or mo re potassium currents, may be utilized for mo re reliable test ing of drugs in development for their possible proarrhythmic side effects. Supported by OMFB-0383/006 and ETT 360/006 (I.B.), Bo lyai Research Scholarship (Cs.L.). A PARP-GÁTLÁS KÉS LEL TE TI A SZÍV ELÉG TE LEN SÉG KI ALA KU LÁ SÁT SPON TÁN HIPERTENZÍV PAT KÁNY MO DELL BEN Bartha Éva, Sol ti Izabella, Kereskai László, Plózer Eni kõ, Ma gyar Klá ra, Lan tos János 3, Kálai Tamás 4, Hi deg Kálmán 4, Sü me gi Balázs, Tóth Kál mán, Halmosi Ró bert Pé csi Tudományegyetem-OEKK, I. Bel gyó gyá sza ti Kli ni ka, Pécs Pécsi Tu do mány egye tem ÁOK, Bio ké mi ai és Or vo si Ké mi ai In té zet, Pécs Pécsi Tu do mány egye tem ÁOK, Pathológia In té zet, Pécs 3 Pécsi Tu do mány egye tem ÁOK, Se bé sze ti Ok ta tó és Ku ta tó In té zet, Pécs 4 Pé csi Tu do mány egye tem ÁOK, Szer ves és Gyógy szer ké mi ai In té zet, Pécs Be ve ze tés: Az oxidatív stressz kö vet kez té ben lét re jött ab nor má lis jel át vi te li ak ti vá - ció sze re pet ját szik a hi per tó nia mi att ki ala kult kardiális remodellációban. Mi vel az oxidatív stressz in du kál ta PARP-aktivációt szá mos mo dell ben le ír ták, ezért fel té te - lez tük, hogy a nuk le á ris PARP gát lá sa ja vít ja a szív funk ci ót, és las sít ja a hipertenzív cardiopathiából a szív elég te len ség be va ló át me ne tet spon tán hipertenzív pat kány (SHR) mo dell ben. Mód sze rek: Az SHR-patkányokat két cso port ba osz tot tuk. Az egyik cso port nem ka pott ke ze lést (SHR-C, n=35), a má sik cso por tot (SHR-L, n=35) 5 mg/kg/nap L-86-tal ke zel tük 46 hé tig. A har ma dik cso port ban normotenzív kont roll pat ká - nyok vol tak (CFY, n=0). Ered mé nyek: A kí sér let kez de tén a szisz to lés bal kam ra (LV) funk ció azo nos volt a CFY és SHR cso port ban. Az SHR-C-cso port ban a kí sér let vé gén ex cent ri kus hi - pert ró fi át ta lál tunk csök kent szisz to lés LV-funkcióval, míg a PARP-gátlóval ke zelt cso port ban jó ma radt a szisz to lés LV-funkció. Kö szön he tõ en en nek a ked ve zõ vál - to zás nak, a PARP-gátlóval ke zelt SHR-patkányok túl élé se ja vult (p<0,0). L-86 nem csök ken tet te je len tõ sen az SHR-ek vér nyo má sát, de mér sé kel te az emel ke dett plazma-bnp (p<0,0) szin tet és ja ví tot ta a gra vi met ri ás pa ra mé te re ket (p<0,05) (szív súly, kam rák sú lyai (WV), WV/ jobb tibia hossz, ned ves tü dõ/szá raz tü dõ súly, p<0,05 SHR-C vs. SHR-L), il let ve a miokardiális fibrózis mér té két (p<0,05) is. A PARP-gátlás jó té ko nyan be fo lyá sol ta az intracelluláris jel át vi te li uta kat az ál tal, hogy nö vel te az Akt-/GSK-3ß, ERK / és PKC e foszforilációját (p<0,0), il let ve csök ken tet te a JNK (p<0,05), a p-38 MAPK, a PKC pan ßII, a PKC zl (p<0,0), PKC a/ßii és d (p<0,05) foszforilációját. Kö vet kez te té sek: A kró ni kus PARP-gátlás ked ve zõ en be fo lyá sol ja az oxidatív stressz kö vet kez té ben a jel át vi te li út vo na lak ban ki ala kult vál to zá so kat, las sít ja a kardiális remodelling ki fej lõ dé sét, meg õr zi a szisz to lés funk ci ót és így kés lel te ti a szív elég te len ség ki ala ku lá sát SHR pat ká nyok ban. PARP-INHIBITION DELAYS TRANSITION OF HYPERTENSIVE CARDIOPATHY TO HEART FAILURE IN SPONTANEOUSLY HYPERTENSIVE RATS Keywords: PARP-inhibition, SHR, heart failure, signal transduction, echocardiography Aims: Oxidative stress followed by abnormal signaling can play a critical role in the development of long-term high blood pressure induced cardiac remodeling. Since oxidative stress induced PARP activation and cell death are seen in several experimental models, we raised the possibility that inhibition of the nuclear PARP can improve cardiac performance and delays transition from hypertensive cardiopathy to HF in spontaneously hypertensive rat (SHR) model of HF. Methods: SHRs were divided into two groups. One group received no treatment (SHR-C, n=35), while the other (SHR-L, n=35) received 5 mg/kg/day L-86 p. os, for 46 weeks. The third group was a normotensive age-matched control group (CFY, n=0). Results: At the beginning of the study systolic function was similar in both CFY and SHR groups. By the end of the study in SHR-C group eccentric hypertrophy with poor left ventricular (LV) systolic function was observable, while PARP in hi - bi tor treatment preserved systolic LV function. Due to this favourable change, the survival rate of SHRs was significantly improved (p<0.0) by the administration of PARP in hi bi tor (L-86). The used PARP in hi bi tor did not affect the blood pressure of SHR rats, but moderated the level of plasma-bnp (p<0.0), favourably influenced the gravimetric parameters (p<0.05), and the extent of myocardial fibrosis (p<0.05). The inhibition of PARP beneficially changed intracellular signaling pathways by increasing the phosporylation of Akt-/GSK-3ß, ERK / and PKC e (p<0.0), and by decreasing the phosphorylation of JNK (p<0.05), p-38 MAPK, PKC pan ßII and PKC zl (p<0.0), PKC a/ßii and d (p<0.05). Conclusions: These data demonstrate that chronic inhibition of PARP induces favourable changes in the most important signaling pathways related to oxidative stress, and prevents abnormal remodeling, preserves systolic funtion and delays transition of hypertensive cardiopathy to heart failure in SHRs. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A39

2 3D-ECHOKARDIOGRÁFIÁS MÓD SZER REL VÉG ZETT VIZS GÁ LA TOK A PERICARDIUM GYUL LA DÁ SOS MEG BE TE GE DÉ SE I NEK A BAL KAM RA HEMODINAMIKÁJÁRA ÉS TEL JE SÍT MÉ NYÉ RE GYA KO ROLT HA TÁ SÁ NAK FEL MÉ RÉ SÉ RE Be ne dek Im re, Be ne dek Theodora, Ko vács Ist ván, Sarbu Alexandru, Chitu Monica, Struczuy Me lin da, Matei Claudia, Ma da ras Szi lárd, Szõ ke Zsu zsan na Ma ros vá sár he lyi Kar di o ló gi ai Kli ni ka, Ma ros vá sár hely Be ve ze tõ: Pericarditisben, a gyul la dá sos fo lya ma tok pericardiumról szív izom ra va - ló át ter je dé se fal moz gás za var hoz ve zet het. Je len ta nul mány ban a pericarditishez tár su ló szív izom moz gás za va ra i nak 3D echokardiográfiás fel mé ré sé vel fog lal koz - tunk. Anyag és mód szer: 5 idült pericarditisben szen ve dõ be teg aki nél D echokar dio - grá fián pericardium meg vas ta go dást (4, mm±0,5 mm) és pericardiális folyadékgyülemet (5,6 mm±3, mm) fi gyel tünk meg, és amely a lateralis (7 beteg 46,66%), inferior (5 beteg 33,33%) és apicális (3 be teg 0%) szeg men tu mok ban volt ki mu tat ha tó. 3D echo-n QLab soft ware se gít sé gé vel vizs gál tuk meg fe le lõ szív - izom szeg men tu mok tér fo gat gör bé jét és po lá ris tér ké pet ké szí tet tünk a kez det és ma xi má lis kont rak ció kö zött el telt idõ rõl. Dopp ler-tér ké pe zés sel ki szá mí tot tuk az áram lá si se bes sé get, gyor su lást, il let ve las su lást. Ered mé nyek: az ös sze hú zó dá si za var nak (CD) te kin tet tük ha: a tér fo gat gör be la - pult volt, a ma xi má lis és mi ni má lis tér fo gat kö zött a kü lönb ség <3,5 ml és pont - jel zés a ké sé si gör bén amely a kont rak ció nö ve ke dé sé nek >50 msec-os ké sé sét je - lez te. A bal kam ra EF 3D echo-s meg ha tá ro zá sa min den est ben nor má lis volt (át - lag 53,4%±4,%). Ös sze hú zó dá si za vart a 3DE-n 6 eset ben (40%) a la te rá lis, 5 eset - ben (33,33%) az inferior, 3 be teg nél (0%) az apicalis és be teg nél (6,66%) pe dig a lateroapicális szeg men tum ban fi gyel tünk meg, a pericardiális gyul la dá sos fo lya mat lo ka li zá ci ó já nak meg fe le lõ en (p=0,00). A ma xi má lis és mi ni má lis tér fo gat el éré se kö zöt ti idõ kü lönb ség 375 msec volt a kontraktilitászavarban szen ve dõ te rü le te ken, az érin tet len te rü le tek hez ké pest, ahol 33 msec-t mér tünk (p=0.00). Min den eset ben a koronarográfia nor má lis volt. Dopp ler-tér ké pe zés sel bal kam rai intrakavitáris áram lá si za var nem volt ki mu tat ha tó. Kö vet kez te tés: A pericardium gyul la dá sos fo lya ma ta i nak myocardiumra va ló át ter - je dé se kontraktilitás za vart ered mé nyez het. No ha ta nul má nyunk ban nem volt ki - mu tat ha tó bal kam rai áram lás za var, amely tel je sít mény csök ke nés hez ve ze tett vol - na, to váb bi ku ta tá sok tisz táz hat ják a pericardiális gyul la dá sos fo lya ma tok ha tá sát a bal kam ra tel je sít mé nyé re. INFLUENCE OF PERICARDIAL INFLAMMATORY DISEASES ON THE LEFT VENTRICULAR HAEMODYNAMICS AND PERFORMANCE, EVALUATED WITH COMPUTERIZED 3D ECHOCARDIOGRAPHY Keywords: computerized 3D echocardiography, pericarditis, left ventricular haemodinamics Objectives: In pericarditis, extension of inflammatory process from the peri car - dium to myocardium could le ad to alteration of wall motion. This study use Computerized 3D echocardiography (C3DE) for evaluation of myocardial motion disorder associated with pericarditis. Methods: 5 pts with chronic pericarditis, in whom D echo showed presence of thick pericardium (4. mm±0.5 mm) and pericardial flu id (5.6 mm±3, mm), located at the level of lateral (7 pts 46.66%), inferior (5 pts 33.33%) and apical segments (3 pts 0%). C3DE was performed with using a QLab soft ware. Volu - metric curve of each myocardial segment during cardiac cycle and polar map of time delay from onset till the ma xi mum contraction were obtained. Using Dopp - ler mapping of flow velocities, flow acceleration and decelerations were calculated. Results: Contractility disorder (CD) was defined as a flat type of the volumetric curve, with the difference between the ma xi mum and mi ni mum volume <3.5 ml, and a spot on the time delay polar map, representing a delay in contraction aug - mentation > than 50 msec. LVEF calculated by C3DE was normal in all cases (avg. 53.4%+/-4.%). CD was revealed by C3DE located at the level of lateral segment in 6 cases (40%), inferior in 5 pts (33.33%), apical in 3 pts (0%) and lateroapical in patient (6,66%), in accordance with the location of the pericardial inflammation (p=0.00). Ti me difference between ma xi mum and mi ni mum volume was 375 msec in CD segments, versus 33 msec in the rest (p=0.00). In all cases coronary angiography was normal. Dopp ler mapping of flow velocities in the LV cavity showed no perturbance of intracavitary flow. Conclusions: Extension of the inflammatory process from the pericardium to the myocardium could influence myocardial contractility. However, this did not influence LV performance, expressed by LVEF or the intracavitary flow hemo - dynamics. Further studies are required to elucidate the impact of inflammatory process on LV performance. 3D ECHOKARDIOGRÁFIÁS MÓD SZER REL VÉG ZETT SZÍV IZOM-ÉLET KÉ PES SÉG VIZS GÁ LAT A SZÍV IZOM IN FARK TUS UTÁ NI REVASZKULARIZÁCIÓ ÉS ÕSSEJTBEÜLTETÉS CÉL TE RÜ LE TÉ NEK MEG HA TÁ RO ZÁ SÁ RA Be ne dek Theodora, Ko vács Ist ván, Sarbu Alexandru, Be ne dek Ist ván, Chitu Monica, Struczuy Me lin da, Matei Claudia, Ma da ras Szi lárd, Szõ ke Zsu zsa, Be ne dek Im re Ma ros vá sár he lyi Kar di o ló gi ai Kli ni ka, Ma ros vá sár hely Be ve ze tõ: A szív izom in fark tu son át esett be te gek túl élé si ará nyá nak ja ví tá sát cél zó be avat ko zá sok (õs sejt-te rá pia, kró ni kus tel jes el zá ró dá sok revaszkularizációja), ja val - la tá nak alap ját az élet ké pes szív izom te rü let, il let ve hibernáló szív izom ki mu ta tá sa ké - pe zi. Ha a stan dard imagisztikai el já rá sok, mint a SPECT vagy PET, nem el ér he tõk, ak kor a 3D-echokardiográfia je lent he ti az al ter na tív ki vizs gá lá si mód szert, amel lyel azo no sít ha tó a be avat ko zá sok cél te rü le tét ké pe zõ élet ké pes szív izom te rü let. Anyag és mód szer: A ta nul mány ba 34 szív izom in fark tu son át esett be te get so rol - tunk be.. be teg cso port: be teg aki nél si ke res pri mer PCI után 6 hét tel intra coro - náriás õs sejtbe ül te tést vé gez tünk.. be teg cso port: 5 pri mer PCI-n át esett be teg, aki nél nem vé gez tünk õs sejtbe ül te tést. 3. be teg cso port: 0 be teg, aki nél kró ni kus koronária-elzáródás revaszkularizációját vé gez tük. A revaszkularizáció, il let ve õs - sejt-te rá pia elõtt és után, a glo bá lis és szegmentáris bal kam ra-funk ció kö ve té sé re a 3D-echokardiográfia mód sze rét hasz nál tuk. Az utánkövetés idõ tar ta ma 3 hó nap volt. A szív izom élet ké pes sé gét a 3D-elemzéshez tár sí tott Dobutrex-teszttel vizs - gál tuk. Ered mé nyek: a be avat ko zá sok cél te rü le té nek ki je lö lé sé re a 3D-echokardiográfiás mód szer rel pon to san, ob jek tív pa ra mé te rek se gít sé gé vel: ma xi má lis és mi ni má lis tér fo gat kü lönb ség <3,5 ml, kont rak ció ké sés >50 msec azo no sít ha tó volt az élet - ké pes szív izom te rü let. Az. be teg cso port ban az EF 40,5%-ról 45,7%-ra nö ve ke dett, a. és 3. be teg cso port tal szem ben, ahol 44%-ról 47%-ra il let ve 4%-ról 46%-ra va - ló nö ve ke dést je gyez tünk fel. A 3 hó na pos utánkövetés so rán a 3DE-elemzés a szegmentális falmozgászavar ja vu lá sát mu tat ta. A 3DE-n szá mí tott ös sze hú zó dá si mu ta tó (contractility in dex) 4%-al ja vult az. be teg cso port nál, ös sze ha son lít va a. cso port tal ahol 8% ja vu lást mér tünk (p=0,05). A 3DE-n szá mí tott szinkro nizá - ciós mu ta tó (synchronicity in dex) ja vu lá sa 5% volt az., 4% a. és 34% a 3. be - teg cso port nál (p=0,0). Kö vet kez te tés: A 3DE ál tal szol gál ta tott ob jek tív pa ra mé te rek se gít sé gé vel si ke rült azo no sí ta ni az élet ké pes szív izom te rü le tet, meg ha tá roz ni a be avat ko zá sok cél te rü - le tét, ez ál tal ki emel ve az õs sejt-te rá pia és kró ni kus koronária-elzáródások revaszkularizációjának fon tos sá gát na gyobb hibernáló szív izom te rü le tek meg men - té sé ben. COMPUTERIZED 3D EVALUATION OF MYOCARDIAL VIABILITY IN SELECTION OF THE TARGET AREA FOR REVASCULARIZATION AND STEM CELL TRANSPLANTATION AFTER MYOCARDIAL INFARCTION Keywords: computerized 3D echocardiography, stem cell transplantation, myocardial infarction, PCI Introduction: Indication for different techniques designed to improve survival after myocardial infarction (like stem cell therapy or reopening of chronic total occlusion) is based on identification of viable, hibernated myocardium. When stan - dard imaging techniques like SPECT or PET are not available, Computerized 3D Echocardiography (C3DE) could represent an alternative to identify areas of viable myocardium as a target area for intervention. Materials and methods: 34 post myocardial infarction pts: Group : pts with intracoronary stem cell injection 6 weeks after successful primary PCI. Gr. : 5 pts with per primam PCI without stem cell transplantation. Gr. 3: 0 pts with late reopening of occluded coronary artery. We used C3DE to asess global and seg - mentar ventricular function before and after revascularization and trans plantation, and during the follow-up at 3 months. For myocardial viability dobutrex test associated with 3D analysis was performed. Results: C3DE accurately identified (using objective parameters like the difference between the ma xi mum and mi ni mum volume <3.5 ml, and delay in contraction augmentation > than 50 msec), viable myocardium as the target area for inter - vention. Ejection fraction increased from 40.5% to 45.7% in Group I, compared to an increase from 44% to 47% in Group II and from 4% to 46% in group III. At the 3 months follow-up, C3DE analysis showed the regression of the segmentary kinetics disorders (improvement of contractility in dex calculated by C3DE with 4% in Group I, compared to 8% in Group II p=0.05), and the improvement of synchronicity in dex calculated by C3DE with 5% in gr., 4% in gr., and 34% in gr.3 p=0.0. Conclusions: C3DE identified the viable myocardium as a target area for intervention, using objective parameters, and proved the role of stem cell therapy or late reopening of chronic coronary occlusion in sav ing larger areas of hibernated myocardium. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A40

3 A ME REV NB TITIN IZOFORMA RE LA TÍV HIPOFOSZFORILÁCIÓJA NÖ VE LI A SZÍV IZOM SEJ TEK PAS SZÍV FE SZÜ LÉ SÉT SZÍV ELÉG TE LEN SÉG BEN Bor bély At ti la, Ines Falcao-Pires, Nazha Hamdani, Loek van Heerebeek, Jolanda van der Velden, Édes Ist ván, Adelino F. Leite-Moreira, Papp Zol tán, Ger J.M. Stienen, Walter J. Paulus 3 Deb re ce ni Egye tem, Or vos és Egész ség tu do má nyi Cent rum, Kar di o ló gi ai In té zet, Deb re cen Department of Physiology, University of Porto, Portugal Laboratory for Physiology, Institute for Cardiovascular Research, VU Medical Cen ter 3 Laboratory for Physiology, Inst. Be ve ze tés: A szív elég te len ség ben szen ve dõ be te gek megnövekedett bal kam rai fal - fe szü lé sé ért az intersticiális fibrózis és a szív izom sej tek megnövekedett pas szív fe - szü lé se (Fpassive) te he tõ fe le lõs sé. Az óri ás citoszkeletális fe hér je, a titin me re vebb, NB izoforma ará nyá nak nö ve ke dé se és/vagy csök kent foszforilációja nö vel he ti a szív izom sej tek pas szív fe szü lé sét. Mód sze rek és ered mé nyek: Szív elég te len ség ben (HF), aortastenosisban (AS) szen - ve dõ be te gek és meg õr zött szív funk ci ó val ren del ke zõ egyé nek (CON) bal kam rai biopsziáiból izo lált szív izom sej te ken erõ mé ré se ket haj tot tunk vég re és a min ták ban meg ha tá roz tuk a titin és titin izoformák expresszióját és foszforilációját. A biop - sziákat szív ka té te re zés so rán (44 HF, 3 CON), mû té ti úton (5 AS, 4 CON) és explantált szí vek bõl (4 HF, 8 CON) nyer tük. Az Fpassive-t permeabilizált szív - izom sej te ken, µm-es szarkomerhosszon mér tük. A titin izoformák ex presszi ó - ját és foszforilációját gélelektroforézis, ProQ Diamond és SYPRO Ruby fes té si el - já rá sok kal vizs gál tuk és izoforma (NB/NBA) és foszforilált izoforma (P-NB/P- NBA) arány ként fe jez tük ki. A HF be teg cso port ban mért szív izom sejt Fpassive (6,±0,4 kn/m ) szig ni fi kán san ma ga sabb volt, mint a CON (,3±0,3 kn/m ; p<0,0) vagy az AS (,±0, kn/m ; p<0,00) cso por tok ban. A titin izoformák össze té te le el té rõ volt a HF (NBA/NB=0,73±0,06) és a CON-cso port kö zött (NBA/NB=0,39±0,05; p<0,00), de nem kü lön bö zött a HF és az AS-beteg - csoportokban (NBA/NB=0,59±0,06). A titin foszforilációja ha son ló volt a HFés az AS-csoportban, de a me rev NB titin izoforma re la tív foszforilációja szig ni - fi kán san ala cso nyabb volt a HF (P-NBA/P-NB=0,77±0,05), mint az AS-cso - portban (P-NBA/P-NB=0,54±0,05; p<0,0). Kö vet kez te tés: A me rev NB titin izoforma hipofoszforilációja sze re pet ját szik a szív elég te len be te gek szív izom sejt je i nek kó ro san emel ke dett pas szív fe szü lé sé ben. A mun kát a DE OEC Me ce na tú ra Pá lyá zat (Mec-4/008) és az ESC-HFA basic research fellowship grant tá mo gat ta. RELATIVE HYPOPHOSPHORYLATION OF THE STIFF NB TITIN ISOFORM CONTRIBUTES TO THE ELEVATED CARDIOMYOCYTE REST ING TENSION IN FAILING HUMAN MYOCARDIUM Keywords: myocardium, heart failure, diastole, titin Background: High diastolic stiffness of failing myocardium results from inter sti - tial fibrosis and elevated rest ing tension (Fpassive) of cardiomyocytes. Alterations in cardiomyocyte Fpassive have been attributed to the giant cytoskeletal pro te in titin. A shift in titin isoform expression from NBA to NB isoform, and/or lower phosphorylation of the stiff NB titin isoform may raise Fpassive of cardio myo - cytes. Methods and results: In left ventricular (LV) biopsies of heart failure (HF) patients, aortic stenosis (AS) patients and controls (CON), we therefore related Fpassive of isolated cardiomyocytes to expression of titin isoforms, to phosphorylation of titin and titin isoforms. Biopsies were procured by transvascular technique (44 HF, 3 CON), perioperatively (5 AS, 4 CON) or from explanted hearts (4 HF, 8 CON). Isolated, permeabilized cardiomyocytes were stretched to. µm sarcomere length to measure Fpassive. Expression and phosphorylation of titin isoforms were analysed using gel electrophoresis with ProQ Diamond and SYPRO Ruby stains and reported as ratio of titin (NBA/NB) or of phosphorylated titin (P-NBA/P- NB) isoforms. Fpassive was higher in HF (6.±0.4 kn/m ) than in CON (.3±0.3 kn/m ; p<0.0) or in AS (.±0. kn/m ; p<0.00). Titin isoform expression differed between HF (NBA/NB=0.73±0.06) and CON (NBA/NB= 0.39±0.05; p<0.00) and was comparable in HF and AS (NBA/NB=0.59±0.06). Ove rall titin phosphorylation was also comparable in HF and AS but relative phosphorylation of the stiff NB titin isoform was significantly lower in HF (P- NBA/P-NB=0.77±0.05) than in AS (P-NBA/P-NB=0.54±0.05; p<0.0). Conclusions: Relative hypophosphorylation of the stiff NB titin isoform is a novel mechanism responsible for raised Fpassive of human HF cardiomyocytes. Supported by a Me ce na tú ra Grant of the UDMHSC (Mec-4/008) and a basic research fellowship grant from the Heart Failure Association of the ESC. VANILLOID-RECEPTOR- EXPRESSZIÓ VASZKULÁRIS SIMAIZMOKBAN Czikora Ágnes, Kark Tamás, Bagi Zsolt, Lizanecz Erzsébet, Pásztorné Tóth Enikõ, Erdei Nóra, Papp Zoltán, Édes István, Pórszász Róbert, Tóth Attila DEOEC, Kardiológiai Intézet, Klinikai Fiziológiai Tanszék, Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet, Debrecen A vanilloid receptor- (TRPV) egy Ca + -ionra átjárható nem-specifikus kation - csatorna, amely elsõsorban (de nem kizárólag) érzõidegekben expresszálódik. A TRPV aktiválható különbözõ fájdalmas stimulusokkal (alacsony ph, kapszaicin, magas hõmérséklet), de aktivációja bekövetkezik iszkémia során is. Kísérleteinkben a TRPV szerepét vizsgáltuk patkány vázizomerek (m. gracilis) átmérõjének sza - bályozásában. A mérésekben izolált, kanülált ereket használtunk, melyeket 80 Hgmm intralumináris nyomás alatt tartottunk (érátmérõ: 47±35 µm). Ered - ményeink szerint a TRPV stimulációjának (kapszaicin, 0- µm) kettõs hatása van: alacsony koncentrációban (0 nm alatt) dilatációt vált ki (maximális hatás: 3±%), míg magasabb koncentrációban (0,- µm) vazokonstrikciót (maximális hatás: 66±7%) figyeltünk meg. Endothelium fosztás vagy NO-szintetáz gátlása (N-Nitro-L-Arginin Methyl Ester, L-NAME) megszünteti a kapszaicin által ki vált - ható dilatációt, de nincs hatással a konstrikcióra. Végül, immunhisztokémiai mód - szerekkel kimutattuk a TRPV expresszióját simaizomsejtekben. Mindezekbõl arra következtetünk, hogy a vázizomerek simaizom rétegében expresszálódó TRPV sze repet játszik a rezisztencia erek átmérõjének szabályozásában. A TRPV stimulációjának kettõs hatása (alacsony szintû stimuláció: dilatáció; teljes aktiváció: konsrikció) felveti a TRPV ligandok alkalmazhatóságát a szöveti vérellátás sza - bályozásában. TISSUE-SPECIFIC REGULATION OF MICROVASCULAR DIAMETER: OPPOSITE FUNCTIONAL ROLES OF NEURONAL AND SMOOTH MUSCLE LOCATED VANILLOID RECEPTOR- Keywords: transient receptor potential type V channel (vanilloid receptor, TRPV), resistance artery, dilation, constriction, experimental cardiology The transient receptor potential type V channel (vanilloid receptor, TRPV) is a Ca (+) -permeable nonspecific cation channel activated by various painful stimuli including ischemia. We hypothesized that TRPV is expressed in the arterioles and is involved in the regulation of microvascular tone. We found that TRPV stimulation by capsaicin (intra-arterial administration) of the isolated, perfused right hind limb of the rat increased vascular resistance (by 98± mm Hg at 0 µg) in association with decreased skeletal muscle perfusion and elevation of skin perfusion (detected by dual-channel laser Doppler flowmetry). Denervation of the hind limb did not affect capsaicin-evoked changes in vascular resistance and tissue perfusion in the hind limb but reduced the elevation of perfusion in the skin. In isolated, pressurized skeletal (musculus gracilis) muscle arterioles (diameter, 47±35 ìm), capsaicin had biphasic effects: at lower concentrations, capsaicin (up to 0 nm) evoked dilations (maximum, 3±3%), whereas higher concentrations (0.- nm) elicited substantial constrictions (maximum, 66±7%). Endothelium removal or in - hi bition of nitric-oxide synthase abolished capsaicin-induced dilations but did not affect arteriolar constriction. Immunohistochemistry revealed expression primarily in the smooth muscle layers of the gracilis arteriole. These data demonstrate the functional expression of TRPV in vascular smooth muscle cells mediating vaso - constriction of the resistance arteries. Because of the dual effects of TRPV sti - mulation on the arteriolar diameter (dilation in skin, constriction in skeletal muscle), we propose that TRPV ligands represent drug candidates for tissuespecific modulation of blood distribution. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A4

4 A KONTRAKCIÓ CA + -ÉRZÉKENYÍTÉSÉNEK SZABÁLYOZÁSA IZOLÁLT ARTÉRIÁKON Daragó Andrea, Orosz Petra, Megyesi Zita, Papp Zoltán, Édes István, Tóth Attila DEOEC, Kardiológiai Intézet, Kardiológiai Klinika, Debrecen DEOEC, Kardiológiai Intézet, Klinikai Fiziológiai Tanszék, Debrecen A hipertónia kialakulása rendszerint kapcsolatban áll a vaszkuláris simaizomsejtek kontraktilis rendszerében megjelenõ fokozott Ca + -érzékenységgel. A Ca + -érzé - kenységet a miozin-foszfatáz aktivitása határozza meg, amelyet számos intra - celluláris mechanizmus befolyásol, mint például a protein-kináz C (PKC) és a Rhokináz rendszer. A vizsgálat célja a Ca + -érzékenyítés kontraktilis válaszban betöltött szerepének jellemzése volt patkány arteria basilarison különbözõ agonista szerek hatására. Módszerek: Érgyûrûn szimultán mértük a kontraktilis erõt (mn-ban) és az intracelluláris Ca + -koncentrációt ([Ca + ]i, 340/380-as arányszámként kifejezve) agonisták (KCl, szerotonin, U-46,69 és endotelin) valamint PKC-inhibítorok (GF 903x, ¾M) és Rho-kináz (fasudil,,5 µm) jelenlétében. Eredményeink: A KCl által kiváltott maximális kontrakció,97±0,33 mn volt 0,7±0,06-ig emelkedõ [Ca + ]i mellett. A szerotonin körülbelül,5-szer nagyobb (7,4±0,48 mn) kontrakciót váltott ki hasonló [Ca + ] i változás mellett (0,6±0,03). Az U-46,69 szignifikánsan alacsonyabb [Ca + ]i változás mellett (maximális válto - zás: 0,04±0,0) kevésbé volt hatékony (maximális kontrakció: 4,06± 0,58 mn). Az endotelin által kiváltott maximális erõhatás,97±0,43 mn volt, de az [Ca + ]i-ban nem történt lényegi változás. A PKC és a Rho-kináz inhibítorok képe sek voltak a szerotonin és az U-46,69 kiváltotta erõhatást gátolni, de az endote linre hatás - talanok voltak. Összefoglalás: Izolált érpreparátumok Ca + -érzékenyítésének meghatározására lét - re hoztunk és validáltunk egy olyan módszert, ahol a sejten belüli Ca + -szintet közvetlenül nem befolyásoltuk. Eredményeink azt mutatják, hogy a PKC és a Rho kináz különbözõ módon járul hozzá a kontraktilis rendszer Ca + -érzékenységéhez. Végezetül azt tapasztaltuk, hogy az endotelin anélkül generál valós kontrakciót, hogy megemelkedne az [Ca + ]i, hatása független a PKC és Rho kináz útvonalaktól. REGULATION OF CA + SENSITIVITY OF CONTRACTION IN ISOLATED ARTERIES Keywords: Ca + sensitivity, basilar artery, contractile system, vascular smooth muscle cell, myosine phosphatase, PKC, Rho kinase, serotonin, endotelin, KCl, U-46,69 The development of hypertension is usually associated with increased Ca + sensitivity of the contractile system of vascular smooth muscle cells. The Ca + sensitivity is determined by the activity of myosin phosphatase, which is regulated by various intracellular mechanisms, including the protein kinase C (PKC) and Rho kinase systems. The goal of the studies was to characterize the contribution of Ca + sensitivity to the contractile responses of various agonists in the basilar artery of the rat. Methods: The contractile force (in mn) and the intracellular Ca + concentrations ([Ca + ]i, expressed as 340/380 ratio) of vascular rings were measured simul ta - neously in the presence of agonists (KCl, serotonin, U-46,69 and endothelin) and inhibitors of PKC (GF903x, µm) and Rho kinase (fasudil,.5 µm). Results: KCl evoked a maximal contraction of.97±0.33 mn with a 0.7±0.06 increase in [Ca + ]i. Serotonin evoked about.5 fold higher contraction (7.4±0.48 mn) with similar changes in [Ca + ]i (0.6±0.03). U-46,69 was less effective (maximal contraction: 4.06±0.58 mn), with significantly lower [Ca + ]i changes (maximal change: 0.04±0.0). Endothelin evoked a maximal contraction of.97±0.43 mn, but no changes in [Ca + ]i (-0.0±0.03). PKC and Rho kinase inhibitors were able to inhibit force production evoked by serotonin and U-46,69, but were without effects in the case of endothelin. Summary: Here we developed and validated a method for the determination of Ca + sensitivity of isolated vascular preparations under conditions where the intra - cellular Ca + handling of the cells were unaffected. Our data suggested different contributions of PKC and Rho kinase to the Ca + sensitivity of contrac tile ma - chinery. Finally, it was found that endothelin evokes substantial contractions inde - pendently of elevations in the intracellular Ca + concentrations, PKC and Rho kinase. A POSZTKONDICIONÁLÁS IN FARK TUS MÉ RE TET CSÖK KEN TÕ HA TÁ SA EL VÉSZ VASZKULÁRIS NIT RÁT-TO LE RAN CI Á BAN Fe ke te Ve ro ni ka, Eda Aypar, Murlasits Zsolt, Pósa Ani kó, Szénási Gábor, Ferdinandy Pé ter, Csont Ta más SZTE ÁOK, Bio ké mi ai In té zet, Sze ged EGIS Gyógy szer gyár Nyrt., Bu da pest A szer ves nit rá tok ki emel ke dõ sze re pet töl te nek be az iszkémiás szív be teg ség te rá - pi á já ban, de hos szú tá vú al kal ma zá suk vaszkuláris nit rát-to le ran cia ki ala ku lá sá hoz ve zet. Is mert, hogy a szív izom iszkémiás adap tá ci ó ja kü lön bö zõ pa to ló gi ás ál la po - tok ban ká ro so dik. Ezért je len kí sér le te ink ben vaszkuláris nit rát-to le ran cia ál la po tá - ban vizs gál tuk az iszkémiás poszt kon di ci o ná lás ha tá sát a szív ben ki fej lõ dõ in fark - tus mé re té re. A vaszkuláris nit rát-to le ran cia ki ala kí tá sa cél já ból hím Wistar-pat ká - nyokat sc. ol tot tunk 3 na pon át na pon ta há rom szor 00 mg/kg nit ro gli ce rin nel, il - let ve an nak vi võ anya gá val. A ne gye dik na pon a szí ve ket izo lál tuk, és Langendorffszerint per fun dál tuk oxigenizált Krebs Henseleit-oldattal. A szí ve ket 30 perc re gi - o ná lis iszkémiának és 0 perc reperfúziónak tet tük ki. A poszt kon di ci o ná lást 6 0 /0 iszkémia/reperfúziós cik lus al kal ma zá sá val hoz tuk lét re a reperfúzió ele - jén. Az in fark tus mé re tét stan dard trifenil-tetrazolium-klorid fes tés sel ha tá roz tuk meg és a ri zi kó zó na szá za lé ká ban fe jez tük ki. A vi võ anyag gal ke zelt ál la tok szí vé - ben a poszt kon di ci o ná lás szig ni fi kán san csök ken tet te az in fark tus mé re tét 40,4±4,%-ról,8±,9%-ra (p<0,05) a nem poszt kon di ci o nált cso port hoz ké pest. A nit rát-to le ráns szí vek ben azon ban a poszt kon di ci o ná lás nem fej tett ki vé dõ ha - tást (9,±3,8% vs. kont roll 33,4±5,6%, nem szig ni fi káns). Ezen ered mé nye ink alap ján a vaszkuláris nit rát-to le ran cia ki ala ku lá sa meg gá tol ja az iszkémiás poszt - kon di ci o ná lás in fark tus mé re tet csök ken tõ ha tá sá nak ki ala ku lá sát. THE CARDIOPROTECTIVE EFFECT OF ISCHEMIC POSTCONDITIONING IS LOST IN VASCULAR NITRATE TOLERANCE Keywords: nitrate tolerance, postconditioning, infarct size Organic nitrates play an important role in the therapy of ischemic heart disease, but the long-term administration of organic nitrates leads to development of vascular nitrate tolerance. It is well known that the ischemic stress adaptation of the myocardium is impaired in several pathological states. Therefore the aim of our present study was to investigate whether nitrate treatment leading to the development of vascular nitrate tolerance affects the infarct size li mit ing effect of ischemic postconditioning in the heart. Male Wistar rats were treated 3 times a day for 3 days sc. with 00 mg/kg glyceryl trinitrate or its vehicle to induce the develop - ment of vascular nitrate tolerance. On the forth day the hearts were isolated and Langendorff-perfused with oxygenated Krebs-Henseleit buffer. The hearts were subjected to 30 min regional ischemia followed by 0 min reperfusion. Postcon - ditioning was induced by 6x0 /0 ischemia/reperfusion cycle at the beginning of reperfusion. Infarct size was measured by stan dard triphenyl tetrazolium chloride staining and was expressed as the percentage of area at risk. In non-tolerant hearts, postconditioning significantly decreased infarct size compared to the non-post - conditioned group (.8±.9% vs. 40.4±4.%; p<0.05). However, in the hearts of nitrate tolerant rats postconditioning has failed to decrease infarct size (9.±3.8% vs. control 33.4±5.6%). According to these results nitrate treatment leading to the development of vascular nitrate tolerance interferes with the infarct size li mit ing effect of ischemic postconditioning in rat hearts. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A4

5 A RÉS KAP CSO LA TOK SZE RE PE A PREKONDICIONÁLÁS KÉ SÕI ANTIARITMIÁS HA TÁ SÁ BAN Gönc zi Már ton, Nagy Nó ra, Végh Ág nes SZTE-ÁOK, Far ma ko ló gi ai és Farmakoterápiai In té zet, Sze ged A prekondicionálás (PC) kardioprotektív ha tá sa a PC-in ger után pár órá val meg - szû nik, majd 0-4 óra múl va új ra ész lel he tõ; a je len sé get ké sõi vé dõ ha tás nak ne - ve ztük. Mun ka cso por tunk ko ráb ban ki mu tat ta, hogy a PC ko rai antiaritmiás ha - tá sát, rész ben a rés kap cso la tok alat ti zá ró dá sá nak mér sék lé sén ke resz tül fej ti ki, amit az iszkémia alat ti gyors elekt ro mos im pe dan cia-vál to zá sok csök ke né se je lez. Je len kí sér le te ink ben azt vizs gál tuk, hogy a rés kap cso la tok hoz zá já rul nak-e a szív - in ger lés sel ki vál tott PC ké sõi vé dõ ha tá sá hoz. Pentobarbitállal al ta tott ku tyák ban in - ger lõ ka té tert ve zet tünk a jobb kam rá ba majd 4 5 per cen ke resz tül 40 ütés/perc frek ven ci á val szív in ger lést vé gez tünk. 4 óra el tel té vel az ál la to kat kloralóz és uretán ke ve ré ké vel új ra al tat tuk és a bal ko szo rú ér-ar té ria elül sõ le szál ló ágá nak 5 per ces el zá rá sá val miokardiális iszkémiát idéz tünk elõ, ame lyet az ér hir te len fel en - ge dé sé vel reperfúzió kö ve tett (n=6). A kont roll cso port ban (n=0) szív in ger lés nem tör tént. Kí sér le te ink ben meg ha tá roz tuk a kam rai arit mi ák okk lú zió alat ti szá mát és gya ko ri sá gát, va la mint mér tük a szív izom elekt ro mos im pe dan cia-vál to zá sa it. A kont rollcso port hoz ké pest szív in ger lés után 4 órá val je len tõ sen csök kent az iszkémia so rán je lent ke zõ kam rai ektópiás üté sek szá ma (0±9 vs. 4±8) és a kont roll cso port ra jel lem zõ im pe dan cia-vál to zá sok is mér sék lõd tek. Ered mé nye ink ar ra utal nak, hogy a rés kap cso la tok hoz zá já rul nak a szív in ger lés sel ki vál tott prekondicionálás ké sõi antiaritmiás ha tá sá hoz. THE ROLE OF GAP JUNCTIONS IN THE ANTIARRHYTHMIC EFFECT OF DELAYED PRECONDITIONING Keywords: gap junction, arrhythmia, delayed preconditioning The cardioprotective effect of preconditioning disappears shortly after the precon - ditioning stimulus but it reappears 0-4 hours later, which phenomenon is ter med as delayed preconditioning or the second window of protection. We have pre - vious evidence coming from tissue impedance measurements that the attenuation of closure of gap junctions during myocardial ischaemia plays a role in the early antiarrhythmic effect of preconditioning. In the present study we aimed to investigate whether gap junctions may also contribute to the delayed anti - arrhythmic protection induced by ra pid cardiac pacing. In dogs under light pentobarbitone anaesthesia a pacing electrode was inserted into the right ventricle and the hearts were paced four times for 5 min at a rate of 40 bpm (n=6). Twenty four hours later these dogs were reanaesthetised with a mixture of chloralose and urethane, and subjected to a 5 min occlusion and reperfusion of the left anterior descending coronary artery (LAD). Control dogs underwent a similar period of ischaemia/reperfusion without cardiac pacing (n=0). The number and incidence of ventricular arrhythmias and tissue impedance were assessed during ischaemia/ reperfusion. Compared to the controls, the total number of ventricular premature beats was markedly reduced in paced dogs (0±9 vs. 4±8), and in these animals changes in tissue impedance was also significantly attenuated. These results suggest a possible involvement of gap junctions in the delayed antiarrhythmic protection of preconditioning. A PROTEOGLIKÁNOK VÉ DÕ HA TÁ SÚ AK A SZÍV IZOM SEJ TEK HIPOXIA REOXIGENIZÁCIÓS KÁ RO SO DÁ SA EL LEN Gör be Ani kó, Szunyog And rea, Csont Ta más, Ferdinandy Pé ter Sze ge di Tu do mány egye tem ÁOK, Bio ké mi ai In té zet, Kardiovaszkuláris Ku ta tó cso port és Pharmahungary Cso port, Sze ged Ku ta tó cso por tunk ko ráb ban ki mu tat ta, hogy a biglikán ne vû proteoglikán szint jé - nek emel ke dé se ja vít ja a ma gas ko lesz te rin szint okoz ta pum pa funk ció-rom lást ko - lesz te rin nel ete tett apo-b00 transzgenikus ege rek szí vé ben. Je len vizs gá la ta ink ban a BG és a ve le ro kon dekorin kardioprotektív ha tá sát tesz tel tük hipoxia-reoxi ge - nizáció okoz ta sejt ká ro so dás sal szem ben. Eh hez új szü lött pat ká nyok ból pri mer szív izom sejt te nyé sze te ket ké szí tet tünk, ame lye ket 05 sejt/well sejt szám mal 4 lyu kú te nyész tõ edé nyek be szé lesz tet tünk. A cardiomyocytákat 0% szé rum mal ki - egé szí tett DME nö vesz tõ mé di um ban normoxiás kö rül mé nyek kö zött tar tot tuk (37 C, 5% CO -tenzió). A sej te ket, 3, 0, 30, és 00 nm-os kon cent rá ci ó ban al - kal ma zott biglikánnal, szén hid rát ol dal lán cok tól men tes biglikán ten gely fe hér jé vel (BG-core), vagy dekorinnal ke zel tük. A ke ze lé se ket 0 órá val a hipoxia elõtt kezd - tük és a szi mu lált iszkémia (50 perc, 95% N és 5% CO gáz ke ve rék kel át ára mol - ta tott hipoxiás kam rá ban, hipoxiás ol dat tal fed ve) és a reoxigenizáció (0 perc, normoxiás in ku bá tor, nö vesz tõ mé di um mal fed ve) alatt is al kal maz tuk. Ez után a sej te ken tripánkék fes tés sel viabilitás tesz tet vé gez tünk. A hipoxiás kont roll ban, a sej tek nek át la go san 4,8±,0%-a pusz tult el. A biglikán szig ni fi kán san csök ken tet - te a sejt el ha lást 3, 0, 30 és 00 nm-os kon cent rá ci ó ban. A vé de lem 30 nm ese tén volt a leg erõ sebb (7,3±,4%). A BG-core is csök ken tet te a sejt pusz tu lást, de csak 0 és 30 nm ese tén, amely szin tén 30 nm mel lett volt a leg ki fe je zet tebb (6,9±,%). A dekorin 0, 30 és 00 nm-os kon cent rá ci ó ban bi zo nyult vé dõ ha tá - sú nak, amely 00 nm ese tén volt a leg erõ sebb (34,7±3,3%). Vizs gá la ta ink kal bi zo - nyí tot tuk két extracelluláris proteoglikán, a biglikán és a dekorin kardioprotektív ha tá sát kardiomiocitákon a hipoxia-reoxigenizációs ká ro so dás sal szem ben. PROTEOGLYCANS PROTECT CARDIOMYOCYTES AGAINST HYPOXIA-REOXYGENATION INJURY Keywords: cardiomyocyte, simulated ischemia, cardioprotection, biglycan It was previously shown by our group, that biglycan, a small leucin rich pro - teoglycan improves left ventricular contractile function in the heart of ApoB transgenic mice subjected to cholesterol-enriched diet for 8 weeks. The aim of this study was to test whether biglycan and decorin (another proteoglycan showing structural similarity to biglycan) are cardioprotective against hypoxic injury of cardiomyocytes. Therefore, primary cardiomyocytes were prepared from newborn rats and seeded onto 4-wells plates (05 cells/well). Cells were kept in growing medium (90% DME medium, 0% fetal calf serum) under normoxic condition (at 37 C, 5% CO ). Two days old cultures were treated with, 3, 0, 30 and 00 nm biglycan, biglycan-core pro te in (without carbohydrate side chains), or decorin. After 0 hours pretreatment, medium of the cultures were replaced with a hypoxic solution and plates were kept in a hypoxic chamber (gased with 95% N and 5% CO at 37 C) for 50 minutes. Last step of the protocol was the reoxy - genation, when cells were covered with growing medium and kept in a normoxic incubator for 0 minutes. All treatments were continued throughout hypoxia and reoxygenation. Finally, viability tests were done in all groups with trypane blue staining and cells were counted in hemocytometer. After simulated ischemia and reoxygenation, 4.8±.0% of the cells died in control cultures. Biglycan signi fi - cantly decreased cell death at 3, 0, 30 and 00 nm concentrations. Protection was the strongest at 30 nm (7.3±.4%). Biglycan-core also decreased the cell death at 0 and 30 nm concentrations, having a maximal effect at 30 nm (6.9±.%). Decorin was found to be protective at 0, 30 and 00 nm con centrations, be ing the most effective at 00 nm (34.7±3.3%). According to our results we can conclude, that two extracellular proteoglycan, biglycan and decorin are cardioprotective in a hypoxia-reoxygenation model. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A43

6 AZ ARTICAIN ÉS ROPIVACAIN HA TÁ SA A KU TYA KAM RAI MYOCARDIUM CA + HÁZ TAR TÁ SÁ RA ÉS KONTRAKTILITÁSÁRA Har ma ti Gá bor, Szentandrássy Nor bert, Sza bó Adrienn, Almássy Já nos, Jóna Ist ván, Hor váth Ba lázs, Sza bó Ger gely, Bá nyász Ta más, Már ton Ildikó, Nánási Pé ter Pál, Ma gyar Já nos Deb re ce ni Egye tem OEC, Élet ta ni In té zet, Deb re cen Debreceni Egye tem OEC, Fogorvostudományi Kar, Deb re cen Be ve ze tés: Az articain és a ropivacain szé les kö rû kli ni kai al kal ma zá sa el le né re ke - vés in for má ció áll ren del ke zés re e sze rek szív izom sej tek Ca + ház tar tá sá ra ki fej tett ha tá sá ról. Je len mun ká ban te hát az articain és a ropivacain kon cent rá ció füg gõ ha - tá sát vizs gál tuk a ku tya szív izom sej tek intracelluláris Ca + homeosztázisának ösz - sze te võ i re. Mód sze rek: A kontraktilitás vizs gá la tá ra ku tya szív izom jobb kam rai trabekuláit hasz nál tuk. A [Ca + ]i tran zi en sek mé ré se izo lált kam rai szív izom sej te ken tör tént, me lye ket Fura- fes ték kel töl töt tünk fel és elekt ro mo san in ge rel tünk. Az L-tí pu - sú Ca + -áramok mé ré sét a patch-clamp tech ni ka tel jes sej tes kon fi gu rá ci ó já ban vé - gez tük. A Ca + -felszabadulás és vis sza vé tel vizs gá la ta sarcoplazmás retikulum vezikulákon tör tént. Ered mé nyek: Az articain és a ropivacain re ver zi bi li sen és kon cent rá ció füg gõ mó - don csök ken tet te a [Ca + ]i tran zi en sek amplitudóját (EC 50 =87,4#77 és 99,3#77 7 µm), amely ada tok egy be vág nak a ka pott kontraktilitás csök ken tés sel (EC 50 =73,7#77 0 és 7,8#77 4 µm). Nem ta lál tunk szig ni fi káns vál to zást a di - asz to lés Ca + -koncentrációkban. 300 µm-nál ki sebb kon cent rá ci ó ban sem az articain, sem a ropivacain nem be fo lyá sol ta a Ca + -felszabadulást és vis sza vé telt, vi - szont az L-tí pu sú Ca + -áramot mind két szer szig ni fi kán san gá tol ta. Az articain és a ropivacain ha tá sa kö zött je len tõs kü lönb sé get nem fe dez tünk fel, to váb bá egyik szer sem oko zott je len tõs vál to zást a vizs gált pa ra mé te rek ben a kli ni kai gya kor lat - ban al kal ma zott kon cent rá ci ók ese tén. Meg be szé lés: Az articain és a ropivacain meg fi gyelt ne ga tív inotróp ha tá sát az L-tí - pu sú Ca + -áram gát lá sa okoz za. Nor mál kli ni kai al kal ma zás so rán mind két szer men tes a kardiodepresszív mel lék ha tá sok tól, azon ban mér ge zés, vagy túl ada go lás ese tén szá mol ni kell ne ga tív inotróp ha tá sok kal is. EFFECTS OF ARTICAINE AND ROPIVACAINE ON CALCIUM HANDLING AND CONTRACTILITY IN CANINE VENTRICULAR MYOCARDIUM Keywords: articaine, ropivacaine, Ca + handling, Ca +, myocite, myocardium, contractility, calcium, negative inotropic, overdose, Background: In spite of the extended clinical use of articaine and ropivacaine there is little information available on the effects of these drugs on myocardial Ca + handling. That is why in the present study effects of articaine and ropivacaine on the components of intracellular Ca + handling and its concentration-dependent were studied and compared in canine ventricular myocardium. Methods: Contractility was measured in ventricular trabeculae, intracellular Ca + transients were recorded from electrically stimulated isolated ventricular myocytes loaded with the calcium-sensitive dye, fura-. L-type Ca + current was recorded by patch clamp technique, under whole cell conditions. Release and reuptake of Ca + was monitored in sarcoplasmic reticulum vesicles. Results: Articaine and ropivacaine caused a reversible and concentration-dependent decrease in amplitude of the [Ca + ]i transient (EC50=87.4#77 and 99.3#77 7 mum, respectively), which was congruent with the reduction obtained for contractility (EC 50 =73.7#77 0 and 7.8#77 4 mum, respectively). No significant change in diastolic ic. Ca + concentration was found. At concentrations less than 300 mum neither Ca + release, nor Ca + uptake of the sarcoplasmic reticulum vesicles was altered by articaine or ropivacaine, however, both drugs significantly reduced L-type Ca + current. There s no significant changes caused by articaine and ropivacaine at the therapeutically relevant concentrations of the micromolar range. No marked differences between the actions of articaine and ropivacaine were observed. Conclusions: The negative inotropic effect of articaine and ropivacaine is similar in extent, and can be mainly attributed to suppression of L-type Ca + current. Under conditions of normal clinical application both drugs seem to be free of cardiodepressant effect, however, negative inotropic effect can be definitely anti - cipated in case of accidental intravenous injection or overdose. A NIT RO GÉN-MO NO XID, A SZU PER OXID ÉS A PEROXINITRIT SZE RE PE A PREKONDICIONÁLÁS ÉS AZ EXOGÉN PEROXINITRIT ANTIARITMIÁS HA TÁ SÁ BAN AL TA TOTT KU TYA MO DELL BEN Kiss At ti la, Ju hász Lász ló, Seprényi György, Kaszaki József, Ku pai Krisz ti na 3, Végh Ág nes Sze ge di Tu do mány egye tem, Far ma ko ló gia és Farmakoterápiai In té zet, Sze ged Szegedi Tu do mány egye tem, Or vo si Bi o ló gia In té zet, Sze ged Szegedi Tu do mány egye tem, Se bé sze ti Mû tét ta ni In té zet, Sze ged 3 Szegedi Tu do mány egye tem, Bio ké mi ai In té zet, Sze ged Ko ráb bi kí sér le te ink ben a prekondicionálás és az exogén peroxinitrit (PN) csök - ken tet te az iszkémiás/reperfúziós (IR) kam rai arit mi á kat, va la mint az en do gén PN men nyi sé gét. Je len mun kánk ban azt vizs gál tuk, hogy az en do gén PN kép zõ dé sé - nek mér sék lõ dé se va jon a szu per oxid (O - ) vagy az nit ro gén-mo no xid (NO) csök - ke né sé nek az ered mé nye. Al ta tott (kloralóz-uretán), mell kas nyi tott ku tyák nak 5 per cen ke resz tül ic. só ol da tot (ph 8,4) ad tunk, majd a bal koronária-artéria elül sõ le szál ló ágát (LAD) 5 per ces le fog tuk (kont roll, n=4), amit hir te len reperfúzió kö ve te tett. A PC (n=9) és a PN (n=9) cso por tok ban, 5 perc cel a 5 per - ces okk lú zi ót meg elõ zõ en a LAD-ot 5 perc re le fog tuk, vagy ugyan ilyen idõ tar - ta mú PN-oldatot (00 nm, ic.) ad tunk. A kí sér let fo lya mán vett vér min ták ból (si - nus coronarius) meg ha tá roz tuk a nit rát/nitrit (NO x ; Griess-reakció) szin tet, va la - mint a reperfúziót kö ve tõ en vett szív szö ve ti min ták ból mér tük az O - (DHEfestés) és nitrotirozint (NT; ELISA) kép zõ dést. A kont roll hoz ké pest a PC és PN ha tá sá ra je len tõ sen csök kent az okk lú zió so rán fel lé põ kam rai ext ra szisz to lék (46±75 vs. 4±9 és 55±8) és kam rai tachycardiás epi zó dok szá ma (9,4±3,4 vs. 0,6±0,3 és 0,6±0,3), a kamrafibrilláció gya ko ri sá ga (43% vs. 0% és %.), va la mint a reperfúzióban ke let ke zõ NT (4,5±0,9 vs.,5±0,5 and,8±0,8) men nyi sé ge. El - len tét ben a kont roll cso port tal, amely ben az okk lú zió vé gé re csök kent a plaz ma NO x szint je (alap: 0,3±0, okk lú zió vé ge: 9,5±0,), mind a PC- és a PN-cso por - tokban az NO x -szintek je len tõ sen emel ked tek (alap: 0,6±0, és 0,4±0,3; okk lú - zió vé ge:,7±0,4 és,±0,5). Ugyan ak kor a reperfúzió kez de tén mért O -kép - zõdés a kont roll hoz ké pest (43,±,7) je len tõ sen mér sék lõ dött mind a PC (,±), mind a PN (5,7±,5) ke ze lést kö ve tõ en. Ered mé nye ink ar ra utal nak, hogy az PNés a PC-ke ze lés ha tá sá ra be kö vet ke zõ csök kent en do gén PN-képzõdés el sõd le ge - sen az O -produkció mér sék lõ dé sé nek tu laj do nít ha tó. Ez az NO-szint emel ke dé - sé vel együtt ma gya ráz hat ja az I/R so rán ta pasz talt antiaritmiás ha tást. Mun kán kat az OTKA (K-758) tá mo gat ta. THE ROLE OF NITRIC OXIDE, SUPEROXIDE AND PEROXYNITRITE IN THE ANTIARRHYTHMIC EFFECT OF PRECONDITIONING AND EXOGENOUS PEROXINITRITE IN ANAESTHETISED DOGS Keywords: arrhythmia, nitric oxide, superoxide We have evidence that preconditioning (PC) and intracoronary infusion (i.c.) of peroxynitrite (PN) markedly reduce ischaemia/reperfusion-induced (I/R) ventri - cular arrhythmias and also the formation of endogenous PN in anaesthetised dogs. The present study aimed to examine whether this attenuation in endogenous PN formation is due to a reduced nitric oxide (NO) or to a reduced superoxide pro - duction. In anaesthetised (mixture of chloralose and urethane) and thoracotomised dogs either ph 8.4 saline (Control, n=4) or 00 nm PN (n=9) was infused, or the coronary artery was occluded (PC; n=9) two times for 5 min, 5 min pri or to a 5 min occlusion and then reperfusion of the left anterior descending (LAD) coronary artery. Blood and tissue samples were taken at various time intervals during the experiments in order to measure plasma nitrate/nitrite (NO x ; Griess reaction) levels, superoxide production (O ; DHE staining) and nitrotyrosine formation (NT; ELISA). Compared to the controls PC and PN reduced the numbers of ventricular premature beats (46±75 cp 4±9 and 55±8) and episodes of ventricular tachycardia (9.4±3.4 cp 0.6±0.3 and 0.6±0.3), the incidence of ventricular fibrillation (43% cp 0% and %) during occlusion, and reduced NT formation (4.5±0.9 cp.5±0.5 and.8±0.4) following reperfusion. In contrast to the controls, in which plasma NO x levels were reduced from 0.3±0. to 9.5±0.; in the PC and PN treated dogs these were significantly increased (PC: 0.6±0. to.7±0.4 and from PN: 0.4±0.3 to.±0.5) by the end of the occlusion. However O production was substantially reduced in these dogs (.± and 5.7±.5) compared to the controls (43.±.7). We conclude that the reduced formation of endogenous PN following PC and PN is due to the decreased O. production. This effect together with an increase in NO formation might explain the marked antiarrhythmic protection. This work was supported by OTKA (K-758). Cardiologia Hungarica 009; 39 : A44

7 IVABRADIN HA TÁ SA A KAM RAI REPOLARIZÁCIÓRA EM LÕS SZÍV IZ MON Koncz Ist ván, Kris tóf Attila, Hor váth Zoltán, Jost Norbert, Far kas Sándor, Orosz Szabolcs, Papp Gyula, Var ró And rás, Vi rág Lász ló SZTE ÁOK, Far ma ko ló gi ai és Farmakoterápiai In té zet, Szeged MTA-SZTE, Ke rin gés far ma ko ló gi ai Ku ta tó cso port, Szeged Richter Ge de on Nyrt., Bu da pest Az ivabradin egy új antiiszkémiás, antianginás szer, amely a szinuszcsomóban iro - dal mi ada tok alap ján sze lek tí ven gá tol ja a pace ma ker -ára mot (I f ). Ke ve set tu dunk ar ról, hogy a szer ho gyan be fo lyá sol ja a repolarizációt és a fon to sabb ká li um ára - mo kat kam rai szív izom ban. Vizs gá la ta ink cél ja ezért az ivabradin elektrofiziológiai ha tá sa i nak celluláris szin tû ta nul má nyo zá sa volt kü lön fé le em lõs szív izom-pre pa - rá tu mo kon. Az ak ci ós po ten ci ál mé ré se ket kon ven ci o ná lis mikroelektród tech ni ká - val, az ion áram mé ré se ket pe dig a patch-clamp tech ni ka egész sej tes kon fi gu rá ci ó - já ban vé gez tük. Ku tya Purkinje-roston és papilláris iz mon 0, és µm-os kon cent - rá ci ó ban a szer nem be fo lyá sol ta a repolarizációt, de 0 µm ese té ben, Purkinjeroston az APD 50 ér té ké nél rö vi dü lést, hu mán és ku tya kam ra izom za ton pe dig APD 90 meg nyú lást ta pasz tal tunk. Az ivabradin és 0 µm-os kon cent rá ci ó ban frek ven cia-füg gõ V max -gátlást oko zott a pre pa rá tu mo kon. Nyúl papilláris iz mon µm ivabradin cse kély mér ték ben, míg 0 µm al kal ma zá sa kö ze pes mér ték ben nyúj tot ta az ak ci ós po ten ci ál idõ tar ta mát. Meg vizs gál tuk az ivabradinnak a gyors ké sõi egyen irá nyí tó (IK r ), a tran zi ens ki fe lé ha la dó (I to ) és a be fe lé egyen irá nyí tó (IK ) ká li um ára mok ra gya ko rolt ha tá sát. A szer 0 µm kon cent rá ci ó ban nem csök - ken tet te az IK -áramot nyú lon. 0 µm ivabradin nem be fo lyá sol ta az I to ára mot sem nyúl, sem ku tya bal kam rai myocytákon. Nyúl kam rai szív izom sej te ken az ivabradin kon cent rá ció füg gõ mó don csök ken tet te az I Kr -áram amp li tú dó ját (EC 50 ~ 3,6 µm). A V max -csökkenés és a Purkinje-roston ész lelt APD 50 rö vi dí tés hát te ré - ben Na + -csatorna gát lás áll hat; a kam rai APD 90 nö ve ke dé se pe dig az I Kr -áram gát - lá sá nak kö vet kez mé nye. Ered mé nye ink ar ra utal nak, hogy az ivabradin az I f gát lá - sa mel lett, már a te rá pi ás hoz kö zel ál ló kon cent rá ci ó ban, más ion csa tor nák ra is ha - tást fejt het ki, és így fi gye lem be vé ve a szer bradycardizáló ha tá sát al kal ma zá - sa ese tén nem le het ki zár ni a proaritmiás koc ká zat nö ve ke dé sét. EFFECTS OF IVABRADINE ON THE VENTRICULAR REPOLARIZATION IN MAMMALIAN CARDIAC MUSCLE Keywords: electrophysiology, ivabradine, potassium currents, action potential Ivabradine is a new antiischemic, antianginal agent, which based on the available data selectively blocks the pace ma ker current (I f ) in the sinoatrial node. There are, however, little information about the effects of this drug on the ventricular repolarization and potassium currents in general. The aims of the present work were to characterize the cellular electrophysiological effects of ivabradine in the mammalian cardiac ventricular tissue. Action potential measurements were carried out by applying the conventional microelectrode, ionic currents were recorded using the whole-cell patch clamp techniques. In dog Purkinje fibers and papillary muscle ivabradine at 0. and µm concentrations did not influence the ventricular repolarization. 0 µm ivabradine shortened the APD 50 in Purkinje fibers while in human and dog ventricular muscle the APD90 was increased by the drug. In these preparations ivabradine at 0. and µm concentrations rate-dependently decreased the maximal rate of depolarization (V max ). In rab bit papillary muscle µm ivabradine moderately, while 0 µm of the drug considerably lengthened the ventricular repolarization. The effects of the drug on ra pid delayed rectifier (IKr), the transient outward (I to ) and the inward rectifier (IK ) potassium currents were also measured. 0 µm ivabradine did not influence IK in rab bit. 0 µm ivabradine did not affect I to either in rab bit or in dog ventricular myocytes. In rab bit ventri - cular myocytes I Kr was concentration dependently inhibited by the drug (EC 50 ~ 3.6 µm). Decrease in V max and the shortening of APD 50 in Purkinje fibers may reflect Na + channel blockade; prolongation of APD 90 in the ventricle may reveal the inhibition of I Kr. Our results indicate that ivabradine in addition to block I f, may also affect other ionic channels at close to or at higher than the therapeutic concentration. Thus, considering the bradycardic effect of the drug which itself promote lengthening of repolarization the increasing proarrhythmic potency of ivabradine, related to possible action potential duration prolongation, can not be completely ruled out. A KÉ SÕI PREKONDICIONÁLÁS HA TÁ SA A GÉNEXPRESSZIÓS VÁL TO ZÁ SOK RA KU TYA SZÍV IZOM BAN Ko vács Má ria, Papp Ri ta, Pus kás László, Végh Ág nes SZTE ÁOK, Far ma ko ló gi ai In té zet, Sze ged SZBK, Funk ci o ná lis Genomika La bo ra tó ri um, Sze ged A prekondicionálás (PC) ál tal lét re ho zott vé dõ ha tás pon tos mo le ku lá ris alap ja nem tisz tá zott, a je len ség bo nyo lult több gént tar tal ma zó vol ta mi att. Je len kí sér le te ink - ben, ku tya szív izom szö vet min tá kon cdns mikrochip-analízist vé gez tünk génexpressziós vál to zá sok nyo mon kö ve té sé re a gyors szív in ger lés sel ki vál tott ké - sõi PC antiaritmiás ha tá sá ban. Min den kí sér let ben, szív in ger lõ elekt ró dot ve zet - tünk a jobb kam rá ba, majd a ku tyá kat há rom cso port ra osz tot tuk: a kont rol (SP, n=3) és az iszkémiás (IC, n=3) cso port ba tar to zó ál la tok ban szív in ger lés nem tör - tént, ugyan ak kor az IC-cso port ban 4 óra el tel té vel 5 per ces iszkémiát idéz tünk elõ a bal koronária elül sõ le szál ló ágá nak (LAD) le szo rí tá sá val. A szív in ge relt cso - port ban (PC, n=4) az in ger lést kö ve tõ en az ál la to kat szin tén 5 per ces iszkémiának ve tet tük alá. A kí sér le tek után a génexpressziós vál to zá so kat 300 cdns-t tar tal - ma zó mikrochipen kö vet tük nyo mon, az így nyert ada to kat hi te les sé gét real time PCR-al (RT-PCR) iga zol tuk vis sza. A gyors szív izom in ger lést kö ve tõ en 3 gén mu ta tott vál to zást, míg 0 gén expressziója vál to zott a 5 per ces iszkémia ha tá sá - ra, ezek kö zé tar toz nak transz krip ci ós fak to rok (MEF), szig nál transzdukciós utak tag jai, hor mo nok kal ro kon fe hér jék (V, V ) stb. A gé nek pon tos funk ci ó já - nak a ké sõi PC ha tá sá ban be töl tött sze re pük fel tá rá sá ra to váb bi kí sér le tek szük sé - ge sek. RT-PCR-t hasz nál tunk olyan gé nek expressziójának vizs gá la tá hoz is, ame - lyek rõl is mert, hogy sze re pük van a PC kardioprotektív ha tá sá ban. Ezért 46 gént vá lasz tot tunk ki (NO-termelõ en zi mek, antiapoptotikus/apoptotikus fe hér jék, hõ - sokk-pro te i nek, transz krip ci ós fak to rok). Az iszkémia ha tá sá ra 6 gén mu ta tott ma ga sabb expressziót és 5 ala cso nyab bat az alap szint nél. Ezek expressziója el len té - te sen vál to zott, vagy az alap szint ér té kén ma radt a szív in ger lés ha tá sá ra. Ered mé - nye ink in for má ci ót ad hat nak ar ról, hogy a PC-ben ed dig is mert gé nek kö zül me - lyek re gu lá ci ó ja ki emel ke dõ a PC ké sõi fá zi sá ban. GENE EXPRESSION CHANGES INDUCED BY DELAYED PRECONDITIONING IN THE CANINE HEARTS Keywords: delayed preconditioning, gene expression, microarray The precise molecular background of myocardial preconditioning (PC) induced car dio protection is still unclear because of its complex multigenic nature. The aim of this study was to explore gene expression changes in the late antiarrhythmic effect of PC, induced by ra pid cardiac pacing, in the canine using cdna microarrays. In all dogs a pacing electrode was introduced into the right ventricle, and then they were divided into three groups: control animals were sham operated and sham paced (SP, n=3), whereas dogs subjected to a 5 min occlusion of the left anterior descending coronary artery (LAD) without pacing were considered as ischaemic control (IC; n=3). In the paced group (PC, n=3), the dogs were paced and 4 hrs later these animals were subjected to a 5 min of ischaemia. cdna chip containing 300 cdna clones was used for the microarray analysis and real-time PCR (RT-PCR) was applied to confirm the expression alterations resulted from the chip analysis. We found 3 genes with altered expression in response to ra pid cardiac pacing and 0 genes in the IC when compared to SP. These genes involve transcription factors (MEF); members of signal transduction pathways (TGFß, PDE4D9) hormone related proteins (V, V ). To determine the precise role of these genes in PC-induced protection warrants further experiments. RT-PCR was also used to study different genes which are already known to have a role in the late phase of PC. Thus, 46 genes have been selected for QRT-PCR analysis: genes encoding NO producing enzymes; antiapoptotic/apoptotic proteins; heat shock proteins; transcription factors etc. In the IC group, we found 6 genes to be upregulated and 5 genes down-regulated, their expression ratios changed either to the opposite or showed no alteration as compared to the baseline after cardiac pacing. These results could provide information which genes are still highly regulated or not at the late phase of PC. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A45

8 MÁT RIX METALLOPROTEINÁZ- SZE RE PE A VÖ RÖS PÁL MA OLAJ JAL KI VÁL TOTT KARDIOPROTEKCIÓBAN IZO LÁLT PATKÁNYSZIVBEN Ku pai Krisz ti na, Bester Dirk, Szûcs Ger gõ, Rooyen van Jacques, Esterhuyse Johann, Cson ka Csa ba, Csont Ta más, Ferdinandy Pé ter SZTE ÁOK, Bio ké mi ai In té zet, Kardiovaszkuláris Ku ta tó cso port, Sze ged Experimental Anti-Oxidant Research Group, Cape Peninsula University of Technology, Cape Town, South Africa Szá mos ta nul mány szü le tett ar ról, hogy a szé les kör ben hasz nált vö rös pál ma olaj (red palm oil=rpo) ja vít ja a szív izom funk ci ó ját iszkémia/reperfúziót kö ve tõ en. Az azon ban még nem tisz tá zott, hogy ho gyan be fo lyá sol ja az in fark tus mé re tet. Je - len le gi kí sér le tünk cél ja az volt, hogy ta nul má nyoz zuk a RPO di é ta ha tá sát az iszkémia/reperfúziót kö ve tõ szív izom el ha lás mér té ké re. Az már bi zo nyí tott, hogy a mátrix-metalloproteinázoknak (MMP) sze re pük van az extracelluláris mát rix kol la gén jé nek le bon tá sá ban és át ala kí tá sá ban miokardiális in fark tus után, il let ve köz re ját sza nak a szív iszkémia/reperfúziós ká ro so dá sá ban. Ezért vizs gál tuk, hogy mi ként hat az MMP- ak ti vá ló dá sá ra és fel sza ba du lá sá ra a RPO-diéta. En nek tisz - tá zá sá ra hím Wistar-patkányokat nor mál és RPO-val (00 mg/nap) ki egé szí tett tá - pon ne vel tük 5 hé ten ke resz tül. Ezt kö ve tõ en a szí ve ket izo lál tuk, Langendorffszerint per fun dál tuk, 30 perc globál iszkémiának és 0 perc reperfúziónak tet tük ki. A reperfúzió el sõ 0 per cé ben gyûj tött perfuzátumból mát rix metalloproteináz- (MMP-) ak ti vi tást mér tünk zimográfiával. A reperfúzió vé gén a szí vek ben az in - fark tus mé re tét trifenil-tertrazoliumos fes tés sel ha tá roz tuk meg. A RPO-diéta szig ni fi kán san csök ken tet te az in fark tu sos te rü let nagy sá gát (9,7±,03%-ra 3,±3,97%-ról; p<0,05) és az iszkémiát kö ve tõ MMP- fel sza ba du lást/ak ti vi tást a kont roll cso port hoz ké pest. Meg ál la pít hat juk, hogy kí sér le te ink ben a RPO-diéta az is mert funk ci o ná lis pa ra mé te rek ja ví tá sán kí vül csök ken te ni ké pes a szö vet el ha lás mér té két, és az MMP- ak ti vá ló dá sá nak gát lá sa köz re mû köd het a RPO kardio - protektív ha tá sá ban. RED PALM OIL SUPPLEMENTATION REDUCES INFARCT SIZE IN RAT HEARTS: THE ROLE OF MATRIX METALLOPROTEINASE- Keywords: infarct size, matrix metalloproteinase-, cardioprotection, red palm oil Some studies have shown that red palm oil (RPO), one of the largest consumed vegetable oil in the world, protects against myocardial dysfunction following ischemia/reperfusion (I/R). He re, we aimed to determine whether dietary RPO supplementation reduces infarct size in rat hearts subjected to I/R and clarify a possible mechanism for the protection. We investigated whether RPO supple - mentation modulates ischemia-induced matrix metalloproteinase- (MMP-) activation and release. Male Wistar rats were randomly divided into groups and fed a normal chow or normal chow supplemented with RPO (00 mg/day) for 5 weeks, respectively. At the end of 5-week diet, isolated hearts were subjected to 30 min global ischemia and 0 min reperfusion. The coronary effluents were collected during the first 0 min of reperfusion for MMP- analysis by gelatin zymography. The extent of I/R injury was assessed by measuring infarct size using stan dard triphenyl tetrazolium chloride staining. We have found that RPO supplementation significantly decreased infarct size as compared to controls (9.7±.03% versus 3.±3.97%, p<0.05). The activation and release of MMP- from myocardial cells following ischemia, a key player in the mechanism of I/R injury, was significantly decreased due to RPO supplementation. We conclude that RPO supplementation provides cardioprotection characterized by a decrease in infarct size after acute I/R. A PI3K/AKT ÉS CALCINEURIN JEL ÁT VI TE LI UTAK SZE RE PE A HU MÁN EMB RI O NÁ LIS ÕS SEJT-ERE DE TÛ SZÍV IZOM SEJ TEK PROLIFERÁCIÓJÁBAN Lendvai Zsu zsan na, Maxime Mioulane, Merkely Bé la, Michael D. Schneider, Sian E. Harding, Nadire N. Ali, Föl des Gábor Sem mel we is Egye tem, Kar di o ló gi ai Köz pont, Bu da pest National Heart and Lung Institute, Imperial Coll ege, Lon don A hu mán emb ri o ná lis õs sejt bõl dif fe ren ci ált cardiomyocytáknak (hesc-cm) te rá - pi ás sze re pe le het a sé rült myocardium szö ve ti re ge ne rá ci ó já ban és funk ci ó já nak hely re ál lí tá sá ban. A sej tek nö ve ke dé sét és proliferációját mo du lá ló jel át vi te li utak azon ban még ke vés sé is mer tek. In vitro kí sér le te ink ben a calcineurin és a fosz fa - tidilinozitol-3-kináz/akt (PI3K/Akt) jel át vi te li rend sze re ket vizs gál tuk. Dif fe ren ci - á lat lan H7 hu mán emb ri o ná lis õs sej te ket Activin és BMP4 fak to rok kal ke zel tük, majd a szív izom sej te ket me cha ni kus és enzimatikus úton izo lál tuk. Immun cito - kémiai vizs gá la tok kal ki mu tat tuk, hogy az im mun mo du lá tor cyclosporin, a calci - ne urin rend szer in hi bi to ra, a hesc-cm proliferációs ak ti vi tá sát csök ken tet te (mi - to tikus marker Ki67 + /miozin ne héz lánc MHC + -sejtek ará nya, 0 µm: 53,5% 0. µm: 34,%,,8 µm: 5,4%, p<0,000, n=70). A cyclosporin a phenylephrine (PE, 0 µm, 48 h)-indukálta sejt mé ret nö ve ke dést ki véd te ( 3% vs. PE, p<0,0, n=50) és a sarcomer el ren de zõ dést gá tol ta (struk tu rált sarcomerû hesc-cm: 0 µm cyc - losporin: 8,8%, 0, µm: 9,8%,,8 µm: 4,% p<0,00, n=50). A PI3K in hi bi tor LY9400 (0 µm, 48 h) a sej tek proliferációs ak ti vi tá sát csök ken tet te (Ki67 + /MHC + -sej tek ará nya, 60% vs. kont roll, p<0,0, n=5). Az LY9400 a PEindukálta sarcomer el ren de zõ dést gá tol ta ( 60%, p<0,00, n=50), míg a sejt mé re - tet nem be fo lyá sol ta (p=0,63). A kont roll sej tek ci top laz má já ban és sejt mag já ban egy aránt ki mu tat ha tó volt a me ta bo liz mus ban és proliferációban sze re pet ját szó FOXOA transz krip ci ós fak tor. A cyclosporin és az LY9400 egy aránt nö vel te az ak tív for má jú FOXOA in ten zi tá sát a sejt mag ban (mind ket tõ p<0.05), ez a FOXOA ak ti vá ló dá sá ra utal. Ered mé nye ink azt mu tat ják, hogy a hesc-cm mé - re té nek, proliferációjának és éré sé nek sza bá lyo zá sá ban a PI3K/Akt és a calcineurin jel át vi te li rend sze rek fon tos sze re pet ját sza nak. A proliferációs fo lya ma tok sza bá - lyo zá sá nak tisz tá zá sa se gít het a sej tek ké sõb bi in vivo, immunszuppresszáns te rá pi - ák kal va ló kö zös al kal ma zá suk so rán. THE ROLE OF PI3K/AKT AND CALCINEURIN SIGNALLING PATHWAYS IN THE PROLIFERATION ACTIVITY OF HUMAN EMBRYONIC STEM CELL DERIVED CARDIOMYOCYTES Keywords: proliferation, cyclosporin, FOXOA, LY9400 Cardiac cell replacement therapy by using human embryonic stem cell-derived car - dio myocytes (hesc-cm) has emerged as a promising future approach to regenerate functional myocardium. However, the underlying signalling pathways of their growth and proliferation have not yet been fully identified. He re we examined the role of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt (PI3K/Akt) and calci - neurin pathways on the proliferation activity and growth of hesc-cm in vitro. Undifferentiated H7 hescs were treated with Activin (00 ng/ml, d) and BMP4 (0 ng/ml, 4d) factors in serum-free conditions to generate cardiomyocytes, which were then isolated and plated in 0%FCS. As assessed by immunocytochemistry, calcineurin in hi bi tor cyclosporine dose-dependently decreased the proliferative activity of single hesc-cm (percentage of mitotic marker Ki67 + /myosin heavy chain MHC + cells, cyclosporine at 0 µm: 53.5%, 0. µm: 34.%,.8 µm: 5.4%, p<0.000, n=70). Cyclosporine inhibited phenylephrine (PE, 0 µm, 48 h)-induced increase in cell size by 3% (p<0.0, n=50) and sarcomere as sembly (hesc-cm with structured sarcomere, 0 µm: 8.8%, 0. µm: 9.8%,.8 µm: 4.% p<0.00, n=50). Likewise, PI3K in hi bi tor LY9400 (0 µm, 48 h) decreased Ki67 + /MHC + cell ratio by 60%, (p<0.0, n=5). LY9400 blocked PE-induced sarcomere as - sembly (-60%, p<0.00, n=50) whereas it had no effect on cell size (p=0.63). FOXOA transcription factor, a re gu la tor of proliferation and metabolism, showed ubiquitous expression in the nuclei and cytoplasm of control hesc-cm. Cylosporine and LY9400 increased the nuclear intensity of active form of FOXOA (p<0.05, n=30), suggesting an increased activity. Our results suggest that the PI3K/Akt and calcineurin pathways play an important role in proliferation and maturation of hesc-cm. Understanding their proliferative regulation helps in the de sign of strategies for cardiac regeneration in vivo, and have implications for immunosuppressant therapies in combination with hesc-cm. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A46

9 CANNABINOID CB ÉS CB ANTAGONISTÁK TA NUL MÁ NYO ZÁ SA TE LÍ TET LEN ZSÍR SAV-DÚS DI É TA KARDIOPROTEKTÍV HA TÁ SÁ RA Lep rán Ist ván, Morvay Ni ko lett Sze ge di Tu do mány egye tem ÁOK, Far ma ko ló gi ai és Farmakoterápiai In té zet, Sze ged Be ve ze tés: Ál lat kí sér le tes és hu mán epi de mi o ló gi ai vizs gá la tok sze rint a te lí tet len zsír sav-dús di é ta (PUFA) csök ken ti a szív izom in fark tus ve szé lyét. Az en do gén cannabinoidok (pl. anandamid) a memb rán foszfolipidekbõl ke let ke zõ te lí tet len zsír sav szár ma zé kok. Je len kí sér le tünk ben azt vizs gál tuk, hogy az en do gén canna - binoidok szin té zi se mi lyen sze re pet ját szik a PUFA kardioprotektív ha tá sá ban. Mód sze rek: Kí sér le te in ket hím Sprague Dawley-patkányokon vé gez tük. Az ál la - tok hó na pon át 0% ser tés zsír ral (te lí tett zsír sav-dús: SF), vagy 0% nap ra for gó - olaj jal (te lí tet len zsír sav-dús: PUFA) ki egé szí tett tá pot fo gyasz tot tak. Ezt kö ve tõ - en pentobarbital nar kó zis ban a mell kas meg nyi tá sa után a bal koronária-artéria le - kö té sé vel akut szívizom-iszkémiát hoz tunk lét re, amit 6 perc el tel té vel reperfúzió kö ve tett. A kí sér le tek so rán fo lya ma to san re giszt rál tuk a bal kam rai nyo más vál - to zá sát és az EKG-t. Ered mé nyek: A PUFA-diéta je len tõ sen csök ken tet te a kam rai arit mi ák ki ala ku lá - sát és ja ví tot ta a túl élé si esé lye ket (86% vs. 4%, p<0,05). A cannabinoid CB (AM5, 3 mg/kg ip.), il let ve CB (AM630, mg/kg ip.) receptor-antagonista elõ - ke ze lés az SF di é ta ese tén nem be fo lyá sol ta je len tõs mér ték ben az alap hemo di - namikai pa ra mé te re ket, az arit mi ák gya ko ri sá gát, il let ve a túl élést. Ugyan ak kor az AM5, il let ve AM630 elõ ke ze lés után a PUFA-diéta vé dõ ha tá sa ke vés bé volt ki fe - je zett. Je len tõ sen több kam rai tachycardia (00%, il let ve 79% vs. 43%, p<0,05) ala - kult ki, csök ken tek a túl élés esé lyei (67%, illeve 57% vs. 86%) is. Kö vet kez te tés: Ered mé nye ink sze rint a cannabinoid CB -, il let ve CB -receptor ak - ti vá ció hoz zá já rul hat a PUFA-diéta vé dõ ha tá sá nak ki ala ku lá sá hoz a szív izom iszké - mia-reperfúzió so rán. Ké szült az ETT 494/996 tá mo ga tá sá val. INFLUENCE OF CANNABINOID CB AND CB ANTAGONISTS ON THE CARDIOPROTECTIVE EFFECT OF POLYUNSATURATED FATTY ACID-RICH DIET Keywords: experimental, arrhythmias, endocannabinoids, polyunsaturated fatty acid-rich diet Background: Experimental and human epidemiologic investigations demonstrate that feeding polyunsaturated fatty acid-rich diet (PUFA) decrease the risk a myocardial infarction and sudden cardiac death. Endocannabinoids (e.g. anandamide) are fatty acid derivatives synthesized from membrane phospholipids. The aim of our investigations was to study whether endocannabinoids contribute to the cardioprotective action of PUFA diet in experimental animals. Methods: Male Sprague-Dawley rats were fed a diet enriched with 0% pork fat (containing saturated fatty acids; SF) or 0% sunflower-seed oil (containing linoleic acid, as PUFA) for 4 weeks. At the end of the feeding period during pento bar - bitone anesthesia the chest wall was opened and acute coronary artery occlusion was produced for 6 min that followed by reperfusion. The ECG and the left ventricular pressure changes are continuously registered during the experiment. Results: PUFA diet significantly decreased the occurrence of ventricular arrhythmias and improved the survival rate during reperfusion (86% vs. 4%, p<0.05). Pretreatment with a cannabinoid CB re cep tor antagonist (AM5, 3 mg/kg ip.) or a CB antagonist (AM630, mg/kg ip.) did not influence the baseline haemodynamic parameters, and the development of arrhythmias in SF fed animals. However, in PUFA-fed animals both the AM5 and AM630 pre - treatments significantly increased the incidence of ventricular tachycardia (00%, and 79% vs. 43%, p<0.05), and decreased the survival rate (67%, and 57% vs. 86%). Conclusions: The present experiments suggest that the activation of cannabinoid CB and CB receptors may contribute to the development of the cardioprotective action of polyunsaturated fatty acid rich diet during myocardial ischemia-reper - fusion. Supported by ETT 494/996. AZ AGYI ISZKÉMIA/REPERFÚZIÓ MEG VÁL TOZ TAT JA AZ EXOFOKÁLIS AGYI, DE NEM BE FO LYÁ SOL JA A PE RI FÉ RI ÁS ÉR RE AK CI Ó KAT, IN VITRO Miklósné Ko vács Ani kó, Hárs ing Lász ló G. Jr., Szénási Gá bor EGIS Gyógy szer gyár Nyrt., Bu da pest Is me re tes, hogy a fokális agyi iszkémia/reperfúzió (I/R) funk ci o ná lis vál to zá so kat in du kál hat tá vo li szer vek ben. Ezek a vál to zá sok rész ben a las san ki ala ku ló gyul la - dá sos lánc re ak ci ók nak tu laj do nít ha tók. Nem is me re tes, hogy lé tez nek-e gyor san lét re jö võ, tá vo li vál to zá sok az erek si ma izom szö vet ének re ak ci ó i ban. Mun kánk cél - ja a fokális agyi iszkémia (jobb ol da li kö zép agyi ar té ria [MCA] órás okk lú zi ó ja, ame lyet -3 perc reperfúzió kö vet) ha tá sa i nak fel de rí té se volt a szerotoninra (5-HT) mu ta tott ér zé keny ség re (EC 50 ) és az 5-HT-val, va la mint a 0 mm K + túl sú lyos ol - dat tal ki vál tott ma xi má lis kont rak ci ók ra (E max ) kü lön bö zõ endothel fosztott ér pre - pa rá tu mok ban, mint pl. a jobb és bal ol da li MCA, ar té ria basilaris és a kis koro nária, tü dõ és ve se ar té ria ágak. Az 5-HT-re mu ta tott szen zi ti vi tás szig ni fi kán san csök - kent I/R után mind két ol da li MCA-ban az ál mû tött ál la tok ból vett pre pa rá tu mok - hoz ké pest, míg nem vál to zott a töb bi ér pre pa rá tum ban. A szerotonin Emax ér té - ke is le csök kent az okkludált MCA-ban, és nem várt mó don az el len ol da li MCAban és a basilaris ar té ri á ban is. A ma gas K + -tartalmú ol dat ra lét re jö võ E max -értékek is ki seb bek vol tak I/R után a kont roll hoz vi szo nyít va az MCA-ban és a basilaris ar - té ri á ban, a vazokonstriktor ka pa ci tás csök ke né sét de monst rál va, míg nem vál toz - tak a pe ri fé ri ás ar té ri ák ban. Az 5-HT-re adott ér vá la szok (EC 50 és Emax) szin tén nem vál toz tak a pe ri fé ri ás erek ben (kis koronária, tü dõ, és ve se ar té ri ák ban) az MCA órás okk lú zi ó ját kö ve tõ en, ame lyet rö vid reperfúzió kö ve tett. Ered mé nye - ink azt mu tat ják, hogy a fokális agyi iszkémia és rö vid reperfúzió után egy azon - nal lét re jö võ csök ke nés jö het lét re a szerotoninnal ki vál tott vazo kon striktor vá la - szok ban az agyi erek ben, míg a pe ri fé ri ás erek ben nem tör té nik vál to zás. Ez a je - len ség vé del mi me cha niz mus ként szol gál hat az iszkémia ál tal oko zott agyi per fú - zió le rom lá sá val szem ben. BRAIN ISCHAEMIA/REPERFUSION ALTERS VASCULAR REACTIONS IN REMOTE BRAIN, BUT NOT PERIPHERAL ARTERIES, IN VITRO Keywords: ischaemia/reperfusion, vascular reaction, 5-HT It is well known that focal brain ischaemia/reperfusion (I/R) may induce functional alterations in remote organs. These changes are partly due to an inflammatory cascade process developing after a certain lag time. It is not known whether there are promptly developing remote alterations in the reactions of vascular smooth muscle. The aim of our study was to evaluate the effects of focal brain ischaemia (right middle cerebral artery [MCA] occlusion for -hour) followed by a -3 min reperfusion on the vascular sensitivity (EC 50 ) and the ma xi mum contraction (E max ) to 5-HT and also on E max to 0 mm K + solution in various, endothelium denuded vascular preparations including the right and left MCA, basilar artery, and small coronary, pulmonary and renal arteries of the rat. After I/R sensitivity to 5-HT decreased in MCAs, while it remained unaltered in other vessels compared to those measured in sham-operated rats. The Emax of vasoconstrictor response to 5-HT was significantly reduced in the occluded MCA, and, unexpectedly, in the contra lateral MCA and also in the basilar artery. E max values to high K + solution were also reduced in MCA and basilar artery after I/R compared to that of control, demonstrating a depression of vasoconstrictor capacity, but on the contrary, they remained unchanged in the peripheral vessels. Vascular responses to 5-HT (sensitivity and E max ) were not altered after a -hour occlusion of the right MCA followed by -3 min of reperfusion in the peripheral vessels, namely in the small coronary, pulmonary and renal arteries of the rat. Our results demonstrate that a prompt depression of 5-HT-evoked vasoconstrictor responses may develop in remote brain arteries but not in peripheral vessels after focal brain ischaemia followed by a short reperfusion. This phenomenon may serve as a defence mechanism against ischaemia-evoked impairment of brain perfusion. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A47

10 ÉRETT ÉS PROGENITOR KE RIN GÕ ENDOTHELSEJTEK ELEM ZÉ SE INVAZÍV KORONÁRIA-BEAVATKOZÁS SO RÁN Mol nár And rea Ág nes, Hor váth Zsó fia, Vargová Katarína, Gulácsi Bár dos Petra, Ko vács Andrea, Tóth-Zsámboki Eme se, Kiss Ró bert Gá bor, Pré da Ist ván HM Ál la mi Egész ség ügyi Köz pont, Bu da pest MTA-Semmelweis Egye tem, Gyul la dás bi o ló gi ai és Immunogenomikai Ku ta tó cso port, Bu da pest A ke rin gõ endothelsejtszám (CEC) az endothelsérülés di rekt markere, az endothel - sérülésre adott re ge ne rá ci ós vá laszt a progenitor sej tek (EPC) biz to sít ják. Cé lunk az endothelkárosodás és a re ge ne rá ci ós fo lya ma tok elem zé se sta bil an gi na pectoris ese tén invazív kar di o ló gi ai be avat ko zást kö ve tõ en a CEC- és EPC-szám idõ be li vál - to zá sá val. Vizs gá la ta ink ba 9 egyént von tunk be. A koronarográfia ered mé nye alap ján há rom cso por tot al kot tunk: ne ga tív koronarográfia (NK), po zi tív koro - narográfia perkután koronária in ter ven ció (PCI) nél kül (PK), po zi tív korona - rográfia és PCI. Vér vé tel fel vé tel kor, invazív be avat ko zás után 6,, 4 és 48 órá - val tör tént. A CEC- és EPC-szá mot immunomágneses me to di ka se gít sé gé vel flu - o resz cens mik ro szkóp alatt ha tá roz tuk meg. Nem ta lál tunk je len tõs el té rést a fel - vé te li CEC, sem az EPC-szám te kin te té ben az egyes cso por tok kö zött. Koronaro - gráfia ön ma gá ban nem ve ze tett szig ni fi káns CEC-szám emel ke dés hez az el sõ 4 órá ban (6 óra: NK: median (M):,5/ml, IQR: -4/ml, óra: /ml, IQR: 0-4/ml, 4 óra: 3/ml, IQR: -3/ml; PK: 6 óra M: /ml, IQR: 0-4/ml, óra M: 3/ml, IQR: 3-5/ml). PK-csoportban 48 órá val a be avat ko zást kö ve tõ en azon ban je len tõs CECszám nö ve ke dés volt meg fi gyel he tõ (M: 9,5/ml, IQR: 6,5-8/ml). PCI cso port ban a CEC-szám a ma xi mu mot a be avat ko zás után 6 órá val ér te el. Az NK-csoportban szig ni fi káns EPC-emelkedés volt meg fi gyel he tõ 6 órá val a be avat ko zás után (M: 3/0, ml, IQR: 7-395/0, ml). A PK-csoportban eh hez ha son ló ko rai EPC-válasz nem volt meg fi gyel he tõ. A PCI-csoportban az EPC-szám 6 órá val a be avat ko zás után volt a leg ma ga sabb (M: 96/0, ml, IQR: /0, ml). Perkután koronáriabeavatkozás után ész lelt ko rai CEC és pár hu za mos EPC-emelkedés a PCI-okozta endothelsérülésre utal. A ké sõb bi ek ben ös sze füg gést ke re sünk az adverz koronáriaesemények és az endothel sé rü lé keny sé gét jel zõ CEC- és EPC-emelkedés kö zött. A progenitorsejtek ko rai emel ke dé se, amely nem jár az érett ala kok szá má - nak nö ve ke dé sé vel a ne ga tív cso port ban, fi zi o ló gi ás vá lasz nak te kint he tõ. CIRCULATING ENDOTHELIAL AND PROGENITOR CELL COUNT IN PATIENTS UNDERGOING CORONARY INTERVENTION Keywords: circulating endothelial cell, endothelial progenitor cell, stable an gi na pectoris, percutaneous coronary intervention Endothelial injury can be characterized by elevated circulating endothelial cell count (CEC). In contrast, circulating progenitor cells (EPC) represent an important mar - ker of endothelial regeneration. The aim of our study was to examine the CEC and EPC count in stable an gi na patients undergoing invasive coronary intervention. Nineteen patients enrolled to the study were divided into tree subgroups according to the coronarography results: negative coronarography (NK), positive corona ro - graphy without intervention (PK), and positive coronarography with subsequent stenting (PCI). Blood samples were drawn before and 6,, 4, 48 hours (h) after the intervention. The CEC and EPC count was determined by immunomagnetic method using fluorescent microscope. No significant differences were found between the initial CEC, or EPC count in NK and PK patients. Coronarography itself did not le ad to significant elevation of CEC count in the first 4 hours (NC: 6 h: median (M):,5/ml, IQR: -4/ml, h: /ml, IQR: 0-4/ml, 4 h: 3/ml, IQR: -3/ml; PC: 6 h: M: /ml, IQR: 0-4/ml, hours M: 3/ml, IQR: 3-5/ml). Consi - derable increase of CEC s was observed in PK group 48 hours after the procedure (M: 9,5/ml, IQR: 6,5-8/ml). In the PCI group, the CEC count reached the ma xi - mum value 6 hours after the intervention. Significant increase of EPC s was observed in NK group 6 hours after the procedure (M: 3/0, ml, IQR: 7-395/0, ml). In the PCI group, the highest EPC count was found 6 hours after the coronary intervention (M: 96/0. ml, IQR: /0. ml). Early increase of CEC and EPC count after the percutaneous coronary intervention indicate PCImediated endo thelial injury. In the future, examining association between adverse coronary event (stent-thrombosis) and endothelial vulnerability represented by elevated CEC and decreased EPC count would be desirable. Elevation of EPC s in subjects with negative angiography results might be considered as a physiological response to coronary intervention. A RÉS KAP CSO LA TO KAT NYI TÓ ROTIGAPTIDE ÉS A RÉS KAP CSO LAT-ZÁ RÓ CARBENOXOLON EGY ARÁNT CSÖK KEN TI AZ AKUT ISZKÉMIA OKOZ TA ARIT MI Á KAT Papp Ri ta, Gönc zi Már ton, Ko vács Má ria, Seprényi György, Végh Ág nes SZTE ÁOK, Far ma ko ló gi ai és Farmakoterápiai In té zet, Sze ged SZTE ÁOK, Or vo si Bi o ló gi ai In té zet, Sze ged Az akut iszkémia okoz ta arit mi ák ki vál tá sá ban je len tõs sze re pe van a rés kap cso la - tok be zá ró dá sá nak. Ezt iga zol ták azok a ko ráb bi ered mé nye ink is, ame lyek ben a rotigaptid koronária-okklúzió elõt ti és alat ti adá sa al ta tott, nyi tott mell ka sú ku - tyák ban ha té ko nyan csök ken tet te az arit mi á kat. Je len kí sér le te ink ben azt vizs gál - tuk, hogy ugyan eb ben az ál lat mo dell ben a rés kap cso lat-zá ró carbenoxolone (CBX) mi lyen mó don hat az akut iszkémia okoz ta kam rai arit mi ák ra? A CBX-t (50 µm) intrakoronáriás in fú zi ó ban ad tuk 5 per cig és az azt kö ve tõ 60 per ces LAD-okklú - zió so rán fo lya ma to san (CBX-PO), il let ve csak az okk lú zió so rán (CBX-O). A kont roll ku tyák ugyan ilyen mó don fi zi o ló gi ás só ol da tot kap tak. Ér de kes mó don a CBX szig ni fi kán san csök ken tet te az iszkémia okoz ta arit mi á kat (kam rai ext ra - szisz to lék szá ma: 38±58 a CBX-PO és 37±04 a CBX-O cso port ban, kont roll: 659±93). Az iszkémiás epicardium 3 pont já ról el ve ze tett uni po lá ris EKG-k alap - ján meg ha tá ro zott to tál ak ti vá ci ós idõ és az ST-eleváció mér té ke is csök kent, ez ar - ra utal, hogy a CBX-szel ke zelt ku tyák ban ja vult az in ge rü let ve ze tés, va la mint csök kent az iszkémia sú lyos sá ga. A kont roll cso port ban meg fi gyel he tõ és a rés kap - cso la tok zá ró dá sá ra uta ló me re dek im pe dan cia-vál to zá sok szin tén csök ken tek a CBX ha tá sá ra. Ugyan ek kor ezek ben az ál la tok ban az iszkémia el sõ per ce i ben me - re de kebb el len ál lás-nö ve ke dést és fá zis szög-csök ke nést ész lel tünk, amely ar ra utal - hat, hogy a rés kap cso la tok zá ró dá sa az iszkémia ko ráb bi sza ka szá ra to ló dott. Ered - mé nye ink bõl ar ra kö vet kez te tünk, hogy a rés kap cso la tok zá ró dá sa va ló szí nû leg más aritmogén té nye zõk kel együt te sen hat va, csak az iszkémia egy adott, ún. kri - ti kus sza ka szá ban vált hat ki arit mi á kat. Így pa ra dox mó don a rés kap cso lat-zá ró - dás csök ken té se a rés kap cso lat-nyi tó rotigaptiddel, va la mint a rés kap cso lat-zá ró dás az iszkémia ko ráb bi sza ka szá ra tör té nõ el to lá sa a rés kap cso lat-zá ró CBX-szel egy - aránt antiaritiás ha tást ered mé nyez het. Mun kán kat az OTKA tá mo gat ta (pro jekt szám: K-758). ATTENUATION OF ACUTE ISCHAEMIA-INDUCED ARRHYTHMIAS BY BOTH THE GAP JUNCTION OPENER ROTIGAPTIDE AND THE GAP JUNCTION BLOCKER CARBENOXOLONE Keywords: ischaemia, arrhythmias, gap junctions Gap junctional uncoupling is known to contribute to acute ischaemia-induced arrhythmias. This was supported by our earlier results, as these arrhythmias were effectively reduced by the gap junction opener rotigaptide, administered pri or to and during coronary artery occlusion in anaestetised, open-chest dogs. The present study aimed to examine whether the gap junction blocker carbenoxolone (CBX) would also modify acute ischaemia-induced ventricular arrhythmias in the same model. CBX (50 µm) was administered in an intracoronary infusion either 5 min pri or to and during (CBX-PO), or only during a 60 min occlusion of the LAD (CBX-O). Control dogs were given saline by the same route. Interestingly, CBX attenuated ischaemia-induced arrhythmias (e.g. total number of ventricular pre - mature beats CBX-PO: 38±58; CBX-O: 37±04; control: 659±93). Total activation time and ST elevation, determined from unipolar electrograms led from 3 points of the ischaemic epicardium, were also attenuated, indicating an improvement of conduction and reduced ischaemia severity in dogs treated with CBX. Gap junctional uncoupling, as shown by steep changes in tissue impedance in the control group, was also reduced by CBX; however, a steeper increase in resistivity and decrease in phase angle occurred in these dogs during the first minutes of ischaemia. The latter finding may indicate that gap junctional uncoupling was shifted to an earlier period of ischaemia. Our results suggest that gap junctional uncoupling, probably by acting together with other arrhythmogenic factors, facilitates arrhythmogenesis only during a critical period of ischaemia. Thus, paradoxically, a reduction of ischaemia-induced gap junctional uncoupling with rotigaptide, as well as shifting this uncoupling to an earlier period of ischaemia by the gap junction blocker CBX both may result in an antiarrhythmic effect. This study was supported by the Hungarian Research Fundation (OTKA, pro ject number: K-758). Cardiologia Hungarica 009; 39 : A48

11 ÁRAMLÁSI CITOMETRIA ALKALMAZÁSA MEMBRÁNFOSZTOTT SZÍVIZOMSEJTEK FEHÉRJE-ÖSSZETÉTELÉNEK VIZSGÁLATÁRA Papp Zoltán, Pásztorné Tóth Enikõ, Nizsalóczki Enikõ, Balogh Ágnes, Tóth Attila, Bodnár Andrea DEOEC, Kardiológiai Intézet, Klinikai Fiziológiai Tanszék, Debrecen DEOEC, MTA-DE Sejtbiológiai és Jelátviteli Kutatócsoport, Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet, Debrecen Az áramlási citometria (FACS) olyan laboratóriumi módszer, amely lehetõséget nyújt eltérõ fehérjemintázatú sejtpopulációk felismerésére. A szív kontraktilis fehérjék expressziójában és/vagy foszforilációs állapotában bekövetkezõ változások messzemenõen megszabják a szívizomsejtek Ca + -aktivált erõgenerálási folya ma - tát, amelynek paramétereit (pl. a Ca + -aktivált erõ Ca + -érzékenysége) laborató riu - munkban izolált szívizomsejtes mérõrendszerrel határozzuk meg. Ehhez memb - ránfosztott szívizomsejteket alkalmazunk, amelyek csak a kontraktilis rendszer fehérjéit tartalmazzák. Ismert, hogy a Ca + -érzékenység szoros összefüggést mutat a troponin I foszforiláltsági szintjével, amely krónikus szívelégtelenség során jelen - tõs mértékben változhat. Az elektromos ingerléssel kiváltott szívelégtelenség mini sertés modelljében immunhisztokémiai módszerrel azt is megfigyeltük, hogy a foszfo-troponin I intenzitás sejtenkénti változékonysága a beteg állatokban jelen - tõsen fokozódott. Ezért merült fel, hogy a különbségek értékelésére a FACSmódszert is alkalmazzuk. Ismereteink szerint membránfosztott szívizomsejteken még nem végeztek FACS-analízist, ezért magunknak kellett kidolgozni azt a protokollt, amelyben a fehérjék jelölése és egyben FACS mérésre való elõkészítés ezeken a nem intakt szívizomsejteken lehetõvé vált. Eddigi eredményeink alapján elmondható, hogy a kontroll és a beteg mintában egyaránt megkülönböztethetünk (foszforilációra érzékeny és érzéketlen) troponin I ellenes antitestekkel jelölhetõ, illetve nem jelölhetõ alpopulációkat. Azonban a beteg mintában a nem jelölhetõ sejtek aránya nagymértékben megemelkedett az egészséges mintához képest (kontroll: 0%, beteg: 40%), mely a szívelégtelenségbõl származó minták eltérõ mechanikai viselkedését magyarázhatja. Összefoglalva, a FACS-módszert sikerült adaptálnunk a szívizom kontraktilis fehérjéit érintõ változások elemzésére, amely lehetõvé teszi a szívizomzaton belül egyenlõtlenül érvényesülõ fehérjeeltérések számszerû jellemzését is. FLOW CYTOMETRY ASSISTED ANALYSIS OF THE PROTEIN COMPOSITION OF PERMEABILIZED CARDIOMYOCYTES Keywords: experimental cardiology, flow cytometry, permeabilized cardiomyocytes, chronic heart failure, contractile proteins, protein phosphorylation Flow cytometry (FACS) allows the recognition of subpopulations of cells with distinct protein compositions. We investigate the parameters of Ca + -regulated force production (e.g. the Ca + -sensitivity of force) in isolated cardiomyocytes whose mechanical properties is influenced by possible changes in the expression and phosphorylation of contractile proteins. The mechanical measurements are performed in permeabilized cardiomyocytes containing only contractile proteins. It has been recognized earlier that the Ca + -sensitivity of force production is tightly related to the phosphorylation state of troponin I, which in certain cardiac patho - logies (e.g. chronic heart failure), may be altered to a great degree. For example, in a pacing induced mini pig model of heart failure we observed a high level of cell to cell variation in the intensity of phospho-troponin I staining in immuno hysto - chemical studies. This prompted us to employ the FACS method for the quan - tification of these differences. To our knowledge, there have been no FACS investigations performed in permeabilized cardiomyocytes before, hence we had to develop the protocols for protein labeling and sample pretreatment for the FACS investigation in these non-intact cardiomyocytes. Our results allowed the separation of subpopulations of cardiomyocytes based on their different staining intensities both in the control and heart failure groups using (phosphorylation sensitive and phosphorylation insensitive) anti-troponin I antibodies. The pro - portion of poorly stained cardiomyocytes in the heart failure group increased to a great degree (control unstained: 0%, heart failure unstained: 40%), suggestive for a possible explanation for the altered mechanical behavior of the failing cardio - myocytes. Taken together, we adopted the FACS method for the evaluation of the changes in myocardial contractile protein composition that allowed the quantitative analysis of inhomogenous protein alterations within the myocardium. MIGRATION OF CARDIAC INJECTED PORCINE MESENCHYMAL STEM CELLS IN REMOTE HEALTHY ORGANS: COMPARISON OF INTRACORONARY AND INTRAMYOCARDIAL DELIVERY Pávóné Gyön gyö si Ma ri ann, Silvia Charwat, Rayyan Hemetsberger, Pósa Ani kó, Petneházy Örs, Petrási Zsolt, Dietmar Glogar Dept. of Cardiology, Medical University of Vienna University of Ka pos vár Keywords: stem cell therapy, myocardial infarction, migration Background: Male porcine bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSC) were transiently transfected with luciferase (Luc) and green fluorescent pro te in (GFP) (Luc-GFP-MSC) for tracking cardiac delivery of MSCs to the myocardium and remote organs after intramyocardial or intracoronary delivery. Methods: Closed-chest, reperfused myocardial infarction (MI) was created in female domestic pigs. The male Luc-GFP-MSC (8.4± ) were delivered either transendocardially in the infarct border zone or intracoronary in the open infarctrelated artery 0±3 days post-mi in female pigs. Tissue samples were collected 3 h, 4 h, and 7 days post-delivery from the myocardium and non-cardiac organs (lung, liver, spleen, lymphatic node, kidney, bone marrow). Tissue luciferase activity was measured in the homogenized tissues using dual-luciferase reporter assay. Quantitative TaqMan polymerase chain reaction (PCR) was performed in the female hearts and remote organs to detect the sex-mismatch MSC. Results: The highest luciferase activity was found in the intramyocardial injection sites at 3 h post delivery (58±448 relative light units [RLU]/µg pro te in) and decreased to 38±09 and 6±58 RLU/µg pro te in at 4 h and 7 days, respectively. Significantly less Luc-GFP-MSC was retained 3 h, 4 h and 7 days after intraco - ronary delivery (4±8, 96±46 and 76±38 RLU/µg pro te in, p=0.03, p=0.0 and p=0.048, respectively). At 7-day, % of totally injected Luc-GFP-MSC was found in all non-cardiac organs, with no difference between intramyocardial or intracoronary administration. PCR confirmed the presence of male Luc-GFP-MSC in female infarcted hearts 4 h post-injections by both delivery methods. Conclusions: Intramyocardial delivery of MSC is mo re effective in cell retention in the infarcted myocardium as compared to intracoronary delivery. Reporter gene method is a useful means to track the biodistribution of the transplanted cells quantitatively. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A49

12 A FOSZFODIÉSZTERÁZ-5-GÁTLÓ KE ZE LÉS HA TÁ SAI DI A BÉ TE SZES KARDIOVASZKULÁRIS DISZFUNKCIÓRA Radovits Ta más, Bömicke Timo, Kö kény Gábor, Karck Matthias, Sza bó Gábor Sem mel we is Egye tem, Bu da pest Ruprecht-Karls Egye tem, Szív se bé szei Kli ni ka, Heidelberg, Né met or szág Semmelweis Egye tem, Kór élet ta ni In té zet, Bu da pest Cu kor be te gek ben rom ló szív mû kö dés és ge ne ra li zált endotheliális diszfunkció fi - gyel he tõ meg, amit az ér fa li nit ro gén-mo no xid- (NO) ter me lés csök ke né se kí sér. Az NO ér fa li ha tá sa it köz ve tí tõ cgmp intracelluláris szint jé nek emel ke dé se újabb ku ta tá si ered mé nyek sze rint je len tõs kardioprotektív ha tás sal ren del ke zik több kór ál la pot ban. Kí sér le te ink ben azt vizs gál tuk, hogy a foszfodiészteráz-5-gátló var - de nafil az NO-cGMP jel át vi te li út kró ni kus ak ti vá lá sá val ké pes-e ja ví ta ni pat kány - mo del lünk ben a di a bé te szes kardiovaszkuláris diszfunkciót. Pat ká nya ink ban egy - sze ri ip. sztreptozotocin-injekcióval -es tí pu sú cu kor be teg sé get vál tot tunk ki. A di a bé te szes ál la tok 8 hé ten át vardenafilt (0 mg/kg/nap po.; ke zelt cso port), il let ve pla ce bót (kont roll cso port) kap tak. Millar kon duk tan cia mikrokatéter se gít sé gé vel bal kam rai nyo más-tér fo gat ana lí zist vé gez tünk és kontraktilitás-indexeket [pl. a végszisztolés nyo más-tér fo gat ös sze füg gés egye ne sé nek me re dek sé gét (E max )] szá - mí tot tunk a szív funk ció meg íté lé sé re. Izo lált aor ta gyû rûk endothelfüggõ és nem endothelfüggõ vazorelaxációját vizs gál tuk acetilkolin, il let ve nátrium-nitroprusszid adá sá ra. Funk ci o ná lis kí sér le te in ket mo le ku lá ris bi o ló gi ai és immunhisztokémiai mé ré sek kel egé szí tet tük ki. Az egész sé ges kont roll ál la tok hoz vi szo nyít va cu kor be - teg pat ká nya ink ban fo ko zott miokardiális és vaszkuláris TGF-ß -expressziót, csök - kent bal kam rai kontraktilitást (E max :,04±0,07 vs.,3±0,0 Hgmm/µl; p<0,05), va la mint vaszkuláris diszfunkciót de tek tál tunk. A vardenafillal ke zelt cu kor be teg ál la tok ban ma ga sabb cgmp-szintet, csök kent TGF-ß -expressziót, je len tõ sen ja vult kardiális funk ci ót (E max :,03±0,4 vs.,04±0,07 Hgmm/µl; p<0,05) és vazore - laxációs vá la szo kat fi gyel tünk meg. Ered mé nye ink ar ra utal nak, hogy a csök kent ér fa li cgmp-jelátvitel sze re pet ját szik a di a bé te szes kardiovaszkuláris diszfunkció ki ala ku lá sá ban, amely ha té ko nyan ja vít ha tó kró ni kus foszfodiészteráz-5-gátló ke - ze lés sel. EFFECTS OF PHOSPHODIESTERASE-5-INHIBITION ON DIABETIC CARDIOVASCULAR DYSFUNCTION Keywords: diabetes, phosphodiesterase-5, cgmp, cardiac function, vascular function Patients with diabetes mellitus exhibit generalized endothelial and cardiac dys - function with decreased nitric oxide (NO) production. It has been reported, that elevated intracellular cgmp levels contribute to an effective cardioprotection in different pathophysiological conditions. In this study we investigated whether chronic treatment with the phosphodiesterase-5 in hi bi tor vardenafil could improve diabetic cardiovascular dysfunction by upregulating the NO-cGMP pathway in the vessel wall and myocardium. In young rats, type diabetes was induced by a single ip. injection of streptozotocin. In the treatment group, vardenafil (0 mg/kg/d) was applied orally for 8 weeks. Diabetic control animals received vehicle for the same time. Left ventricular pressure-volume relations were measured by using a microtip Millar pressure-volume conductance catheter, and in de xes of contractility (e.g. slope of end-systolic pressure-volume relationship [E max ]) were calculated. In organ bath experiments for isometric tension with isolated aortic rings, endothelium-dependent and -independent vasorelaxation was investigated by using acetylcholine (ACh) and sodium nitroprusside (SNP). Additionally, molecular biological and immunohistochemical experiments were performed. When compared to the non-diabetic controls, diabetic rats showed increased myocardial and vascular TGF-ß expression, impaired left ventricular contractility (E max :.04±0.07 vs..3±0.0 mmhg/µl; p<0.05) and vascular dysfunction. Treatment with vardenafil resulted in higher cgmp-levels, reduced TGF-ß expression, signi - ficantly improved cardiac function (E max :.03±0.4 vs..04±0.07 mmhg/µl p<0.05) and higher vasorelaxation to ACh and SNP in diabetic animals. Our results demonstrate that impaired vascular cgmp-signalling contributes to the develop - ment of diabetic vascular and cardiac dysfunction, which can be prevented by chronic phosphodiesterase-5 inhibition. AZ ISZKÉMIA-REPERFÚZIÓ OKOZ TA APOPTÓZIS CSÖK KEN TÉ SE IZO LÁLT CARDIOMYOCYTÁKBAN Rõth Er zsé bet, Jancsó Gá bor, Gal lyas Fe renc jr., Balatonyi Bor bá la, Reglõdi Dóra, Gasz Balázs 3, Rácz Boglárka PTE, Se bé sze ti Ok ta tó és Ku ta tó In té zet, Pécs PTE ÁOK, Bio ké mi ai In té zet, Pécs PTE ÁOK, Hu mán Ana tó mi ai In té zet, Pécs 3 Zalaegerszegi Kór ház Szív se bé szet, Pécs A hi po fí zis ere de tû adenilát-cikláz ak ti vá ló polipeptid (PACAP) és re cep to rai ki fe - je zet ten expresszálódnak az ideg rend szer ben és szá mos egyéb szö vet ben. A peptid je len van a kardiovaszkuláris rend szer ben is kü lön bö zõ ha tá so kat ki fejt ve. Így in - ger li az intrakardiális neuronokat, be fo lyá sol ja a szív frek ven ci át, a kontraktilitást, a perc vo lu ment és a nátriuretikus peptid fel sza ba du lá sát. Kü lön bö zõ sejt vo na la kon a PACAP je len tõs antiapoptotikus ha tá sát mu tat ták ki. Sa ját ko ráb bi vizs gá la ta ink iga zol ták, hogy a PACAP mér sék li sejt kul tú rá ban az oxidatív stressz ál tal in du kált sejt el ha lást és vé di a cardiomyocytákat az iszkémia-reperfúzió ál tal oko zott apop - tózissal szem ben. In vitro kí sér le te ink ben ha son ló sejt vé dõ ha tá sát mu tat tuk ki az intermittáló iszkémiás cik lu sok kal lét re ho zott prekondicionálásnak a reperfúziós ká ro so dá sok kö vet kez mé nye i nek csök ken té sé ben, il let ve gát lá sá ban. Je len vizs gá la - ta ink cél ja volt, hogy meg vizs gál juk va jon a PACAP ké pes-e fo koz ni a prekon di - cionálás protektív ha tá sát az iszkémiás-reperfúziós ká ro so dás so rán. Kí sér le te ink el sõ so ro za tá ban szív izom-sejt te nyé szet ben órás iszkémiát kö ve tõ 4 órás reper - fúzió so rán ér té kel tük a PACAP-elõkezelés (0 nm és 00 nm), il let ve az cik lus - ban vég zett prekondicionálás apoptózist csök ken tõ ha tá sát, va la mint ezek kom bi - ná ci ó ját. A kí sér le tek má so dik so ro za tá ban vizs gá la ta in kat meg is mé tel tük, az zal a kü lönb ség gel, hogy az iszkémiás prekondicionálást két cik lus ban vé gez tük ugyan - csak ki egé szít ve a PACAP elõ ke ze lés sel. A reperfúzió vé gén meg ha tá roz tuk az apoptótikus és az in takt, élõ sej tek ará nyát és a caspase- 8 ki áram lá sát flow citometriával. Ered mé nye ink sze rint mind a PACAP, mind a prekondicionálás je - len tõs vé dõ ha tás sal ren del ke zik izo lált cardiomyocytákban az iszkémia-reperfúzió ál tal in du kált apoptózissal szem ben, azon ban a ket tõ kö zött ad di tív ha tás nem mu - tat ha tó ki. A ku ta tást tá mo gat ta:otka TO4885, ETT 439/006 EFFECTS OF PACAP AND PRECONDITIONING AGAINTS ISCHEMIA/REPERFUSION-INDUCED CARDIOMYOCYTE APOPTOSIS Keywords: isolated cardiomyocytes, ischaemia-reperfusion, PACAP, preconditioning, apoptosis The neuropeptide pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) and its receptors are widely expressed in the nervous system and various other tissues. The peptide is present in the cardiovascular system and has various distinct effects: it affects exitability of intracardiac ne u rons, cardiac rythm, out put, contractility and the release of natriuretic peptide. It is well established that apoptosis contribute to myocardial cell death following ischemia/reperfusion injury. Therefore, inhibition of apoptotic pathways attenuate cardiomyocyte damage induced by myocardial reperfusion injury and so can significantly contribute to minimize the morbidity of myocardial infarction in human patients. We have been demonstrated earlier that PACAP has protective effects against in vitro ischemia/reperfusion induced apoptosis in cardiomyocytes.preconditioning with brief intermittent periods of ischemia is known to provide protection against ischemic injury. The aim of the present study was to investigate whether PACAP could enhance the pro - tective effect of preconditionong against in vitro ischemic injury. Cultured cardio - myocytes were exposed to brief preconditioning ischemia followed by hours ischemia and 4 hours reperfusion. Both PACAP treatment and precon ditioning alone significantly increased cell viability and decreased the ratio of cell death. Pretreatment with PACAP was found to further reduce the level of cleaved caspase-8, however, it did not le ad to additional survival rate when compared to cells treated with PACAP or preconditioning alone.these results show, that although both PACAP and preconditionong have protective effect againts ischemia/ reperfusion-induced cardiomyocyte apoptosis, buth theire effects are not additive. The present work was supported by Grants OTKA TO4885, ETT 439/006 Cardiologia Hungarica 009; 39 : A50

13 A GHRELIN HATÁSÁNAK VIZSGÁLATA IZOLÁLT KUTYA KORONÁRIA ARTERIOLÁKON Sax Balázs, Túri Katalin, Hirschberg Kristóf, Fürjész Dóra, Ahres Abdelkrim, Nádasy György, Monos Emil, Szabó Gábor, Merkely Béla, Kékesi Violetta Semmelweis Egyetem, Kardiológiai Központ, Budapest Semmelweis Egyetem, Klinikai Kísérleti Kutató- és Humán Élettani Intézet, Budapest Ruprecht-Karls Egyetem, Szívsebészeti Klinika, Heidelberg, Németország Háttér: A ghrelin (GHR) a növekedési hormon elválasztását serkentõ receptor (GHS-R) endogén ligandja. A peptid fõként a gyomorban termelõdik, de mrns-e több sejtféleségben, így érendothel- és szívizomsejtekben is kimutatható. A GHR a növekedési hormon elválasztásán és összetett anyagcsere-hatásain túl kardio vasz - kuláris hatásokkal is rendelkezik. Direkt érhatása azonban nem tisztázott: dilatátor vagy konstriktor választ fajonként és érterületenként eltérõ módon egy aránt képes kiváltani. Célkitûzés: Célunk a GHR koronária hatásának vizsgálata volt spontán és emel - kedett értónus mellett. Vizsgáltuk továbbá a GHR jellemzõ hatásait közvetítõ receptor (GHS-Ra) szerepét az érválasz létrejöttében. Módszer: Vizsgálatainkat egészséges kutyaszívbõl izolált és kanülált intramurális ko ro nária arteriolákon, mikroangiometriás módszerrel végeztük (n=6, belsõ át - mérõ: 0±6 µm). A GHR-hatásokat ( nm) spontán tónus mellett, majd tromboxán analóg (U4669, µm) adásával megemelt tónusú ereken vizs - gáltuk (n=8). A GHS-Ra-receptorok jelenlétét immunhisztokémiai úton, az érhatások GHS-Ra függését specifikus blokkolószer (D-Lys3-GHRP-6, 50 µm) mellett vizsgáltuk (n=8). Eredmények: A GHR nem okozott szignifikáns érátmérõ-változást (DD) a normál tónussal rendelkezõ izolált érszakaszon. U4669-el végzett prekontrakciót (DD max : 5±4%, p<0,0) követõen azonban a GHR további kontrakciót idézett elõ (DD max : 33±9%, az U4669 hatás százalékában, p<0,05). GHS-Ra immun pozi - tivitást találtunk a koronária arteriolák simaizomzatában. Ugyanakkor a D-Lys3- GHRP-6 nem befolyásolta a GHR által kiváltott vazokonstrikciót. Következtetések: Eredményeink szerint a GHR kutya koronária arteriolákon meg - emelt tónus esetén érszûkítõ hatással bír. Noha a specifikus receptor jelen van az érfalban, a vazokonstriktor válasz nem a GHS-Ra aktivációján keresztül jön létre. Felmerül a GHS-Rb-receptorok szerepe a válasz közvetítésében, ez azonban specifikus blokkolók hiányában még nem vizsgálható. EFFECT OF GHRELIN ON ISOLATED CANINE CORONARY ARTERIOLES Keywords: ghrelin, coronary constriction, growth hormone secretagouge receptor Background: Ghrelin (GHR) is the endogenous ligand of the growth hormone secretagouge receptor (GHS-R). The peptide is mainly produced in the stomach, but its production has recently been described in various tissues including the vascular endothelium and the myocardium. Beside the stimulation of the growth hormone secretion and complex metabolic effects GHR also possesses cardio - vascular effects. However, contradictory data are available on the direct vascular actions of GHR: either vasodilation or vasoconstriction may occur depending on the organ and species. Aims: To characterize the direct effect of the peptide on canine coronary bed with spontaneous and elevated tone and to evaluate the role of GHS-R a-type in the vascular effect of GHR. Methods: Vascular responses to GHR ( nm) of isolated and cannulated canine coronary arterioles (n=6, mean inner diameter±sem: 0±6 µm) with spontaneous tone or after preconstriction evoked by the thromboxane mimetic agent U4669 ( µm) were recorded by microangiometry. Presence of GHS-Ra in the coronary arterioles was investigated with immunohistochemistry. Experiments were also performed in the presence of the GHS-Ra antagonist D-Lys3-GHRP-6 (50 µm). Results: On coronary arterioles with spontaneous tone GHR did not elicit significant effect on vessel diameter. However, in the case of elevated vascular tone (5±4% decrease in diameter) GHR evoked significant vasoconstriction with a maximum of 33±9% of the effect of U4669 (p<0.05). Positive immunostaining for GHS-Ra was detected in the wall of coronary arterioles. However, the vaso - constrictor effect was not abolished by the blockade of GHS-Ra. Conclusions: The results suggest that GHR induces constriction of canine coronary arterioles with elevated vascular tone. This effect despite their presence in coronary arterioles is likely not mediated by GHS-Ra. The possible role of GHS-Rb due to the lack of specific antagonists cannot be tested yet. A RÖ VID TÁ VÚ QT-VARIABILITÁS SZE RE PE A HERG-BLOKKOLÓK TORSADOGÉN HA TÁ SÁ BAN, ÉBER NYÚL BAN Szénási Gá bor, Wellmann Já nos, Ko vács Ani kó, He ge dûs Má ria Egis Gyógy szer gyár Nyrt., Bu da pest A kü lön bö zõ herg-blokkolók erõ sen el té rõ gya ko ri ság gal okoz nak torsade de pointes po li morf kam rai tachycardiát ha son ló QT c -megnyúlás el éré se el le né re is. Az I Kr -blokkolók proaritmiás ha tá sá nak egyik fõ oká nak a rö vid tá vú QT-varia - bilitás (STV[QT]) emel ke dé sét te kin tik. Azon ban Michael és mtsai ki mu tat ták, hogy a STV(QT) nem tud ta meg jó sol ni a TdP elõ for du lást E-403-cal ke zelt éber nyu - lak ban (Br J Pharmacol 007; 5: 5). Ezért meg vizs gál tuk a dó zis füg gõ QT c és STV(QT) vál to zá so kat, ame lyet az is mer ten ala csony, kö ze pes és ma gas arit mo - genitású risperidon, dofetilid és cisaprid oko zott. Egy 0 per ces kont roll pe ri ó dus után az anya gok nö vek võ dó zi sa it 0 per cen ként, 5 perc alatt iv. infundáltuk éber nyu lak nak. Mind há rom ve gyü let dó zis füg gõ en meg nyúj tot ta az EKG QT c (Bazett) in ter val lu mát mint egy 40%-os csúcs ha tást el ér ve, de egyik gyógy szer sem be fo lyá sol ta a szív frek ven ci át mi e lõtt arit mi át oko zott. A tar tós ma xi má lis QT c - megnyúlás el le né re csak risperidonnal (0.03, 0., 0.3,.0 és 3.0 mg/kg; n=8) ke - zelt ál lat ban lát tunk TdP-t. A dofetilid (,, 7, 0 és 70 µg/kg; n=8) 4 nyúl ban oko - zott TdP-t, ami ál lat ban kamrafibrillációhoz (VF) ve ze tett. A cisaprid (0,, 0,3,,0, 3,0 és 0,0 mg/kg; n=6) min den ál lat ban TdP-t és 3 nyúl ban VF-t idé zett elõ. Az egyes ve gyü le tek leg na gyobb QT c nyúj tó ha tá sa ál la ton ként je len tõs dó zis kü lönb - ség gel je lent ke zett, de az el sõ TdP csak a ma xi má lis QT c -megnyúlás el éré se után for dult elõ. Mind egyik ve gyü let eny he és vál to zó mér té kû STV(QT) vál to zást ho - zott lét re, és nem tud tunk kap cso la tot ki mu tat ni az STV(QT) nö ve ke dés és az aritmogenitás kö zött. Meg ál la pít hat juk, hogy el té rõ en más fa jok tól a nyúl ban a rö - vid tá vú QT-variabilitás fo ko zó dá sa gyen ge elõ re jel zõ je az Ikr-blokkolók torsadogén ha tá sá nak. THE ROLE OF SHORT-TERM QT VARIABILITY IN THE TORSADOGENIC EFFECT OF HERG BLOCKERS IN CONSCIOUS RABBITS Keywords: arrhythmia, heart rate Different herg blockers induce torsade de pointes polymorphic ventricular tachycardia (TdP) with disparate incidence rates despite causing similar QT c lengthening. Increased short-term variability of the QT intervals (STV[QT]) is considered to be one of the ma in causes of proarrhythmic effect of I Kr blockers. However, Michael et al. have shown that changes in STV(QT) failed to predict the induction of TdP in conscious rabbits treated with E-403 (Br J Pharmacol 5:5, 007). Therefore, we explored the dose-dependent changes in QT c and STV(QT) induced by risperidone, dofetilide and cisapride known to have low, medium and high arrhythmogenicity, respectively. The drugs were infused i.v. over 5 min at increasing doses administered at 0 min intervals after a 0 min control period in conscious rabbits. All 3 drugs lengthened the QT c (Bazett) intervals of the ECG in a dose-dependent manner causing about 40% peak QT c change but neither drug altered heart rate significantly before causing arrhythmia. TdP was observed only in animals treated with risperidone (0.03, 0., 0.3,.0 and 3.0 mg/kg; n=8) despite maximal QT c lengthening for a long time. Dofetilide (,, 7, 0 and 70 µg/kg; n=8) caused TdP in 4 rabbits resulting in ventricular fibrillation (VF) in animals. Cisapride (0., 0.3,.0, 3.0 and 0.0 mg/kg; n=6) produced TdP in all animals leading to VF in 3 rabbits. The dose of a drug that produced ma xi mum QT c prolongation varied considerably among animals but the first TdP appeared only after ma xi mum QT c prolongation was achieved. All compounds caused small and variable changes in STV(QT), and no relationship between the increases in STV(QT) and arrhythmogenicity could be established. In conclusion, in contrast to other spe ci es increased short-term variability of the QT interval is a poor indicator of the torsadogenic effect of IKr blockers in the rab bit. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A5

14 A KOMPLEMENTFEHÉRJÉK SZE RE PE AZ ATEROSZKLEROTIKUS ÉR BE TEG SÉ GEK PROG RES SZI Ó JÁ NAK ELÕ RE JEL ZÉ SÉ BEN Szép la ki Gá bor, Prohászka Zoltán, Var ga Lilian, Karádi István, Merkely Bé la, Füst György Sem mel we is Egye tem, Kar di o ló gi ai Köz pont, Bu da pest Semmelweis Egye tem, III. Bel gyó gyá sza ti Kli ni ka, Bu da pest A komplementrendszer a ve le szü le tett im mu ni tás fon tos ré sze, je len tõs sze re pet ját szik a fer tõ zé sek el le ni vé de lem ben, az immunkomplexek el tá vo lí tá sá ban és a ter mé sze tes és szer zett im mun vá lasz ös sze kap cso lá sá ban. Is mert, hogy a komplementrendszer ak ti vá ci ó ja szá mos be teg ség patomechanizmusában így az ateroszklerózis ki ala ku lá sá ban is fon tos sze re pet tölt be. Az ateroszklerózis kró ni - kus gyul la dás sal já ró fo lya mat: a gyul la dás ra jel leg ze tes el té ré sek fo lya ma to san je - len van nak kezd ve az endothel-diszfunkciótól egé szen a plakk ruptúráig. Ezért sú - lyos ateroszklerózistól szen ve dõ be te gek ben szá mos gyul la dá sos marker szint je emel ke dett le het. A leg is mer tebb ilyen markerek az akut fá zis-fe hér jék (pl. C-reak - tív pro te in), citokinek (interleukin-6), il let ve a komplementfehérjék (C 3, C -inhi - bitor) kö zé tar toz nak. Mun ka cso por tunk cél ja az volt, hogy kap cso la tot ke res sünk az ateroszklerózis prog res szi ó ja és a komp le mentrend szer ak ti vá ci ó ja kö zött. Az egyes komplementfehérjék (C 3, C -inhibitor) ri zi kó becs lés ben be töl tött sze re pét prospektív kli ni kai vizs gá la tok ban ta nul má nyoz tuk. Nõ be te gek ben a ma gas C 3 - szint (³,8 g/l) elõ re jel zi az új kardiovaszkuláris ese mé nyek meg je le né sét koro - nária-bypass mû tét után, az esély há nya dos ér té ke 4, (95%-os kon fi den cia in ter val - lum:,3 3,6, p=0,049). Az élet kor ra, testtömegindexre és do hány zás ra ad jusz - tált esély há nya dos ér té ke 4,8 (95% CI:,37 0,070, p=0,033). A ma gas C 3 -szint ös sze függ a ko rai restenosis je len lé té vel everziós carotis endarterectomia (CEA) után; az ös sze füg gés rész ben mannose binding lectin (MBL) ge no tí pus depen - dens. Az ala csony C -inhibitor szint (<5%) elõ re jel zi a ko rai restenosis meg je le né - sét CEA után, az élet kor ra és nem re ad jusz tált esély há nya dos ér té ke 6,9 (95% CI:,55 3,0), p=0,03). Ered mé nye ink alap ján el mond ha tó az, hogy egyes komp - lementfehérjék szé rum szint je ös sze füg gést mu tat az ateroszklerózis prog resszi ó já - val, meg ha tá ro zá suk je len tõs kli ni kai ha szon nal bír hat. THE ROLE OF COMPLEMENT PROTEINS IN THE RISK PREDICTION OF ATHEROSCLEROTIC VASCULAR DISEASES Keywords: atherosclerosis, complement, risk, C -inhibitor, C 3, restenosis, CABG, endarterectomy, inflammation The complement system is a part of the innate immune system, which plays essential role in the defense against microbial infections, clearance of immune complexes and bridging innate and adaptive immunity. Moreover, it is well known that inappropriate activation of complement contributes to the pathophysiology of several diseases such as atherosclerosis. Atherosclerosis is an inflammatory disease; the inflammatory mechanisms are present in all phases of plaque development from endothelial dysfunction to plaque rupture. Several markers of ongoing inflammation may be elevated in the affected patients. Some of the beststudied markers belong to the acute phase proteins (as C-reactive pro te in), cytokines (interleukin-6) and the complement system (C 3, C -inhibitor). Our group aimed to provide evidence on the association of the complement system with atherosclerotic vascular diseases in human clinical studies. Therefore prospective clinical studies were developed to study the role of risk prediction based on complement measurements. High C 3 levels (³.8 g/l) predict new vascular complications of atherosclerosis in women, who underwent coronary artery bypass graft surgery (odds ratio: 4. (95% confidence interval:.3 3.6, p=0.049). In a model adjusted for age, body mass in dex and smoking the odds ratio was 4.8 (95% CI: , p=0.033). High C 3 levels are associated with the development of an early restenosis following eversion type carotid endarterectomy (CEA), partially depending on the mannose binding lectin (MBL) genotype. Low C-inhibitor levels (<5%) predict restenosis following CEA, the age and gender adjusted odds ratio is 6.9 (95% CI: ), p=0.03). Based on our results, complement proteins are associated with the presence and with the progression of atherosclerosis, thus determining complement proteins might have an important clinical role. MIOKARDIÁLIS ADRENOMEDULLIN GÉN TRANSZ FER JA VÍT JA A SZÍVIZOM-KONTRAKTILITÁST Szokodi Ist ván, Fü re di Gá bor, Leskinen Hanna, Rauma-Pinola Tanja, Ruskoaho Heikki PTE, Szív gyógy ásza ti Kli ni ka, Pécs Institute of Biomedicine, Department of Pharmacology and Toxicology, University of Oulu, Oulu, Finland Be ve ze tés: Az adrenomedullin (AM) sze re pe a szívizom-kontraktilitás sza bá lyo zá - sá ban el lent mon dá sos. Je len mun kánk ban a peptid ha tá sát di rekt, bal kam rai adre - no medullin gén transz fer se gít sé gé vel vizs gál tuk. Mód sze rek: Kí sér le te in ket hím, 7-8 he tes Sprague Dawley-patkányokon vé gez - tük. Az AM-gént egy adenovírus vek tor hoz kö töt ten (Ad5RSVrAM) (5 0 8 ) pfu 00 µl-ben) in jek tál tuk a bal kam ra fa lá ba. Ne ga tív kont roll ként ß-galaktozidázt expresszáló konstruktumot (Ad5RSVLacZ) hasz nál tunk. In vivo a bal kam ra-funk - ci ót echokardiográfia se gít sé gé vel vizs gál tuk. A kam rai kontraktilitást di rekt mó - don ex vivo, izo lált pat kány szív mo del len ta nul má nyoz tuk. A bal kam rai min ták - ból tör tént fehérje-extrakció után az egyes kinázok foszforiláltsági szint jét Western-blot se gít sé gé vel vizs gál tuk. Az AM kam rai génexpresszióját RNSizolálást kö ve tõ en Northern-blot tech ni ká val kö vet tük. Ered mé nyek: Di rekt AM gén transz fer 0,9-sze re sé re (p<0,00) nö vel te a bal kam - rai AM mrns-szintet. Echokardiográfiás vizs gá la tok sze rint a frakcionális rö vi dü - lés 4%-kal (p<0,05), az ejekciós frak ció 8%-kal (p<0,05) nõtt az AM gén transz - fer után. Ex vivo, izo lált per fun dált pat kány szí ve ken az AM-géntranszfer szig ni fi - kán san fo koz ta a Frank Starling-választ. A kont rol lok hoz ké pest a dp/dt(max) ér - té ke %-kal (P<0.05), 9%-kal (p<0,05), il let ve 6%-kal (p<0,05) volt ma ga sabb 0, 5, il let ve 0 Hgmm-es vég di asz to lés nyo más mel lett. A szisz to lés funk ci ó tól el - té rõ en a di asz to lés funk ció nem vál to zott. Western-blot ana lí zis sze rint az AM overexpresszió je len tõs mér ték ben fo koz ta a pro te in kináz C egyes izoformáinak (PKC-e és a PKC-d) transz lo ká ci ó ját a szolubilis frak ci ó ból a memb rán sejt frak ci - ó ba, va la mint csök ken tet te a p38 mitogén-aktiválta pro te in kináz foszforilációját. Kö vet kez te té sek: Ered mé nye ink sze rint az AM-géntranszfer ja vít ja a szisz to lés funk ci ót, míg a di asz to lés funk ci ót nem be fo lyá sol ja. A ha tás hát te ré ben fel te he - tõ leg a PKC-e fo ko zott ak ti vá ci ó ja áll. MYOCARDIAL ADRENOMEDULLIN GENE TRANSFER IMPROVES CARDIAC FUNCTION Keywords: myocardial basic research, myocardial contraction, gene therapy, adrenomedullin Background: Controversy persists regarding the effect of adrenomedullin (AM) on cardiac contractility. He re, we explored the potential role of AM on cardiac function by direct recombinant adenoviral AM gene delivery into the left ventricle. Methods: The experiments were conducted on male 7-8-week-old Sprague-Dawley rats. Adenoviral vectors with a full-length coding reg ion of rat AM cdna (Ad5RSVrAM) (5 0 8 pfu in 00 µl) were injected directly into the anterior wall of the left ventricle. ß-galactosidase expressing construct (Ad5RSVLacZ) was used as the negative control for AM gene transfer. The AM effects were analyzed with echocardiography and in an isolated perfused rat heart preparation. The expression of AM and the activation of underlying signaling pathways were also investigated using Northern-blotting and Western-blotting, respectively. Results: AM gene delivery increased left ventricular AM mrna by 0.9-fold (p<0.00). AM overexpression improved fractional shortening by 4% (p<0.05) and ejection fraction by 8% (p<0.05) compared to control animals. AM gene transfer augmented the Frank-Starling response in isolated perfused hearts. The maximal derivative of isovolumic left ventricular pressure (dp/dt(max)) increased by % (p<0.05), 9% (p<0.05) and 6% (p<0.05) when left ventricular enddiastolic pressure was increased to 0, 5 or 0 mmhg in AM injected hearts compared to the control group. In contrast to systolic function, no alterations in diastolic properties were noted. The overexpression of AM activated pro te in kinase C (PKC-e and PKC-d isoforms) in the left ventricle, whereas p38 mitogenactivated pro te in kinase activity decreased. Conclusions: Our results indicate that AM overexpression improves left ventricular systolic function without altering cardiac diastolic properties in the normal heart. Moreover, activation of PKC-e may mediate the cardiac effect of AM. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A5

15 A VÖ RÖS PÁL MA OLAJ DI É TA CSÖK KEN TI A SZÍV IZOM IN FARK TUS MÉ RE TÉT KO LESZ TE RIN NEL ETE TETT PAT KÁ NYOK BAN Szûcs Ger gõ, Dirk J. Bester, Ku pai Krisz ti na, Jacques van Rooyen, Adriann Johannes Esterhuyse, Cson ka Csa ba, Csont Ta más, Ferdinándy Pé ter SZTE ÁOK, Bio ké mi ai In té zet, Kardiovaszkuláris Ku ta tó cso port, Sze ged Cape Peninsula University of Technology, Cape Town, South Africa Cél ki tû zés: Egyes ta nul má nyok ki mu tat ták, hogy a vö rös pál ma olaj (red palm oil, RPO) vé del met nyújt az iszkémia/reperfúziót kö ve tõ miokardiális diszfunkció ki - ala ku lá sa el len. Azon ban az is jól is mert, hogy egyes kardioprotektív me cha niz mu - sok ká ro sod nak hypercholesterinaemiában. Ezért je len cél ki tû zé sünk az volt, hogy meg vizs gál juk a RPO-diéta ho gyan be fo lyá sol ja az in fark tus mé re tét ko lesz te rin - nel ete tett pat ká nyok szí vé ben. Me tó dus: En nek tisz tá zá sá ra hím Wistar-patkányokat % ko lesz te rin nel dú sí tott, il let ve nor mál táp pal etet tünk 9 hé ten ke resz tül. Az utol só 5 hét ben az ál la tok fe - lé nél mind két di é tát ki egé szí tet tük 0, g/ál lat/nap RPO-val. A di é ta be fe jez té vel a szí ve ket izo lál tuk, és oxigenizált Krebs Henseleit-oldattal Langendorff-szerint per fun dál tuk. A szí ve ket 30 perc globál iszkémiának és 0 perc reperfúziónak tet - tük ki, majd trifenil-tetrazolium-klorid fes tés sel meg ha tá roz tuk az in fark tus mé - re tét. Ered mé nyek: A RPO-diéta szig ni fi kán san csök ken tet te az in fark tus mé re tet a nor - mál tá pon tar tott cso por tok ban (3,5±,8%-ról 9,±,0%-ra, p<0,05). A ko lesz te - rin ben gaz dag di é ta szig ni fi kán san meg emel te az in fark tus mé re tét (37,±3,6%, p<0,05), azon ban a RPO-diétával ki egé szít ve szig ni fi káns csök ke nést ta pasz tal - tunk az in fark tus mé re té ben (6,9±3,0%, p<0,05). Konk lú zió: Meg ál la pít hat juk, hogy a RPO-diéta nemcsak egész sé ges pat ká nyok - ban biz to sít vé del met az iszkémia/reperfúziós ká ro so dás sal szem ben, ha nem ko - lesz te rin-ete tés sel lét re ho zott kí sér le tes hyperlipidaemiában is. DIETARY RED PALM OIL SUPPLEMENTATION DECREASES MYOCARDIAL INFARCT SIZE IN CHOLESTEROL-FED RATS. Keywords: red palm oil, infarct size, cardioprotection, hypercholesterolemia Purpose: Some studies have shown that red palm oil (RPO), one of the largest consumed vegetable oil in the world, protects against myocardial dysfunction following ischemia/reperfusion (I/R). However, cardioprotective mechanisms are impaired in hypercholesterolemia. In this study we aimed to investigate the effect of dietary RPO-supplementation on myocardial infarct size in rats fed a choles - terol-enriched diet. Methods: Male Wistar rats were randomly divided into four diet groups. Rats were fed either a stan dard rat chow or that supplemented with % cholesterol for a 9- week period. In the last 5 weeks of the diet, half of the normal and cholesterol-fed groups were treated with 0. g RPO bak ing fat per day, respectively. At the end of the diet, hearts were isolated and perfused with Krebs-Henseleit buffer using a Langendorff perfusion apparatus. The perfusion protocol included a 0 minute ae - ro bic perfusion period followed by 30 minutes of normothermic global ischemia and 0 minutes of reperfusion. After the perfusion, infarct size was determined by stan dard TTC staining. Results: In the normal groups, RPO supplementation significantly decreased infarct size (9.±.0% versus 3.5±.8%, p<0.05). Cholesterol enriched diet significantly increased infarct size (37.±3.6%, p<0.05), however, RPO supplementation significantly decreased infarct size in the hypercholesterolemic group as well (6.9±3.0%, p<0.05). Conclusions: Dietary RPO-supplementation was able to offer protection against ischemia/reperfusion injury not only in healthy rats, but also in experimental hypercholesterolemia induced by cholesterol-enriched diet. AZ ACE-GÁTLÓ TERÁPIA HATÉKONYSÁGÁNAK VIZSGÁLATA Tóth Attila, Fagyas Miklós, Megyesi Zita, Orosz Petronella, Daragó Andrea, Szerafin Tamás, Galajda Zoltán, Mányiné Siket Ivetta, Lizanecz Erzsébet, Édes István, Papp Zoltán, Szentmiklósi József DEOEC, Kardiológiai Klinika, Debrecen DEOEC, Kardiológiai Intézet, Szívsebészeti Tanszék, Debrecen DEOEC, Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézet, Debrecen Háttér: A magas vérnyomás népbetegségnek számít a magyar lakosság körében. Az egyik leggyakrabban alkalmazott vérnyomáscsökkentõ gyógyszercsoport az an - gio tenzin konvertáló enzimet (ACE) gátló szereké. Bár nagy klinikai tanul mányok bizonyítják az ACE-gátlók vérnyomáscsökkentõ hatékonyságát, hosszú távú kezelés során a magas vérnyomás sok esetben mégis visszatér. Jelen tanul - mányunkban a hosszú távú ACE-gátló kezelés hatékonyságát kutattuk. Módszerek: Szívmûtéten átesett betegek szövet- (bypass mûtétbõl visszamaradt a. mammaria, a. radialis, v. saphena) és vérmintáit vizsgáltuk. Meghatároztuk a bete - gek klinikai (pl. vérnyomás), biokémiai (szérum ACE-mennyiség és aktivitás) és élettani (izolált érgyûrûk kontraktilis válaszai) jellemzõit. Eredmények: Az ACE-gátlók csökkentik a szérum ACE aktivitását (0,8±, U szemben az ACE-gátlót nem szedõknél kapott 7,4±,3 U értékkel), ellenben nincsenek hatással az enzim expressziójának mértékére (±8 ng/ml szemben a kontrollnál kapott 34±3 ng/ml értékkel). A szöveti ACE aktivitásának meghatározásához az angiotenzin- és angiotenzin- által kiváltott kontraktilis válasz mértékét vizsgáltuk (maximális kontraktilitás: 89±5% és 79±5%, EC 50 -érték: 3±4 nm és 4,9±0,6 nm). Összevetettük az ACE-gátló szereket szedõ és nem szedõ betegek esetében az angiotenzin- mediált kontraktilitás paramétereit, hogy jellemezzük az ACE-inhibitor terápia szöveti hatásait. Az összefüggés hiá nyából feltételeztük, hogy nem alakult ki szöveti adaptáció az ACE-inhibitor kezelés során. Összefoglalás: Az ACE-gátló szerek úgy csökkentik a szérum ACE aktivitását, hogy közben nem módosítják az angiotenzin- által kiváltott szöveti választ, tehát az ACE-gátlók alkalmasak hosszú távú terápiás kezelésre. A magas vérnyomás visszatérése vélhetõen az alapbetegség progressziójának eredménye és nem az ACE-gátló szerre kialakult rezisztencia (ún. ACE escape ) következménye. INVESTIGATION OF THE EFFECTIVENESS OF ACE INHIBITOR THERAPY Keywords: angiotensin convertase enzyme, ACE inhibitor, hypertension, ACE activity, vascular contractility Background: Hypertension affects a large population in Hungary. One of the major antihypertensive drugs is the angiotensin convertase enzyme (ACE) inhibitors. Although large trials support the effectivity of ACE inhibitors to reduce blood pressure, upon long term application hypertension tends to re-appear. The goal of the present study was to investigate the effectivity of long term ACE inhibitor treatments in patients. Methods: Vascular graft tissue (remained from bypass surgery: a. mammaria, a. radialis, v. saphena) and blood samples were collected from patients undergoing cardiac surgery. Clinical (e.g. blood pressure), biochemical (serum ACE amount, activity) and physiological (measurements of contractile force of isolated ring preparations) parameters were determined. Results: ACE inhibition therapy resulted in a decereased serum ACE activity (0.8±. U versus 7.4±.3 U in patients without ACE inhibition), while ACE expression was unaffected (±8 ng/ml versus 34±3 ng/ml, respectively). As a matter of tissue ACE activity, angiotensin I and II mediated responses were measured (maximal responses: 89±5% and 79±5%, EC 50 values: 3±4 nm and 4.9±0.6 nm, respectively). To reveal the possible changes in tissue ACE respon - siveness to ACE inhibitor therapy, angiotensin I responsiveness was correlated to the medication. The lack of correlation suggested no adaptation to ACE inhibitors. Summary: ACE inhibitors reduce serum ACE activity, without effect on tissue angiotensin I responsiveness, therefore ACE inhibitors are effective in long term applications. Re-appearance of hypertension is probably the result of the progression of the disease, instead of ACE inhibitor resistance (sometimes called ACE escape). Cardiologia Hungarica 009; 39 : A53

16 MYOZIN KÖ TÕ C-FEHÉRJE (MYBPC3) GÉN MU TÁ CI ÓT HOR DO ZÓ CSA LÁ DOK KLI NI KAI ÉS GE NE TI KAI ANA LÍ ZI SE Tóth Tí mea, Orosz And rea, Nagy Vik tó ria, Hõgye Már ta, Forster Ta más, Csanády Mik lós, Sepp Ró bert Sze ge di Tu do mány egye tem, II. Bel gyó gyá sza ti Kli ni ka és Kar di o ló gi ai Köz pont, Sze ged Hát tér: A hi pert ró fi ás cardiomyopathia (HCM) a szív izom zat pri mer be teg sé ge, amely el sõ sor ban a sarcomert kó do ló gén mu tá ci ók kö vet kez té ben ala kul ki. A HCM-ben érin tett egyik leg gya ko ribb gén a myozin kö tõ C-fehérje gén (MYBPC3). Be teg és mód szer: Mun kánk ban öt, iga zolt MYBPC3 gén mu tá ci ót (Gln6Stop, Arg73+X, Ala953+94X, Lys590+X, 35Tyrdel) hor do zó csa lád kli ni kai és ge - ne ti kai ana lí zi sét vé gez tük el. A csa lád tag ok nál kar di o ló gi ai szû rõ vizs gá lat tör tént (anamnézisfelvétel, ko ráb bi or vo si do ku men tá ció át te kin té se, fi zi ká lis vizs gá lat, el ve ze té ses EKG, il let ve echokardiográfia). A csa lád tag ok mutációhordozó stá tu sát az érin tett MYBPC3 exon polimeráz lánc re ak ci ó val va ló amplifikálást kö ve tõ en di - rekt szekvenálással ha tá roz tuk meg. Ered mé nyek: Ös sze sen 59 csa lád ta got vizs gál tunk (9 fér fi, 30 nõ, élet kor: 44±0 év). A csa lád tag ok kö zött 7 (46%) mutációhordozót azo no sí tot tunk (Gln6Stop: 3, Arg73+X: 7, Ala953+94X: 5, Lys590+X:, 35Tyrdel: ). A 7 mutációhordozó kö zül 0 eset ben (37%) le he tett HCM je len lét ét iga zol ni (Gln6Stop: /3, Arg73+X: 5/7, Ala953+94X: /5, Lys590+X: /, 35Tyrdel: /), míg 7 csa lád tag (63%) kli ni ka i lag tü net men tes mutáció hordo - zónak bi zo nyult. A tü net men tes mutációhordozók szig ni fi kán san fi a ta lab bak vol - tak, mint a kli ni ka i lag érin tett csa lád tag ok (45±8 év vs. 6± év). A tü net men tes mutációhordozók mind egyi ke élet ben volt az utánkövetés vé gén, míg a 0 kli ni ka - i lag is érin tett csa lád tag kö zül ha tan meg hal tak (hir te len szív ha lál: 4, stroke: 4, gyo - mor rák. ). Ös sze fog la lás: Ered mé nye ink, ko ráb bi vizs gá la ta ink kal együtt ar ra utal nak, hogy a MYBPC3 gén az egyik leg gyak rab ban érin tett gén ma gyar HCM-es be te gek ben. A MYBPC3 gén mu tá ci ók idõ sebb élet kor ban ma ni fesz tá lód hat nak, és egyes ese - tek ben rossz prog nó zis sal bír nak. CLINICAL AND GENETIC SCREENING IN FAMILIES WITH MYOSIN BINDING PRO TE IN C GENE (MYBPC3) MUTATIONS Keywords: hypertrophic cardiomyopathy, myosin binding pro te in C gene Background: Hypertrophic cardiomyopathy (HCM) is a primary disease of the myocardium due to mutations in genes encoding for mainly sarcomeric proteins. One of the most frequently affected disease gene in HCM is the myosin binding pro te in C gene (MYBPC3). Patients and methods: We analysed 5 HCM families carrying known MYBPC3 mutations (Gln6Stop, Arg73+X, Ala953+94X, Lys590+X, 35Tyrdel). Family members underwent clinical screening (including history taking, physical examination, review of previous medical records, -lead ECG and echocardiography). Carrier sta tus was determined by direct sequencing after polymerase chain reaction (PCR) amplification of given MYBPC3 exons. Results: Ove rall, 59 family members were screened (9 males, 30 females, age: 44±0 yrs). Among the family members, 7 (46%) mutation carriers were identified (Gln6Stop: 3, Arg73+X: 7, Ala953+94X: 5, Lys590+X:, 35Tyrdel: ). Of the 7 mutation carriers, ten family members (37%) manifested HCM (Gln6Stop: /3, Arg73+X: 5/7, Ala953+94X: /5, Lys590+X: /, 35Tyrdel: /), while 7 family members (63%) proved to be clinically silent mutation carriers. Silent gene carriers were significantly younger than those exhibiting the disease (45±8 yrs vs. 6± yrs). All of the silent gene carriers were alive at the end of follow up, while 6 out of the 0 affected family members died during follow up (sudden cardiac death: 4, stroke:, gastric cancer: ). Summary: In the light of our previous results these findings indicate that MYBPC3 gene is one of the most frequently affected disease gene in Hungarian HCM patients. MYBPC3 gene mutations may manifest itself later in adulthood, and in some cases harbour a malignant prognosis. A KALCIUM-IONOFÓR IONOMYCIN KORONÁRIATÁGÍTÓ HATÁSÁNAK MECHANIZMUSA Túri Katalin, Sax Balázs, Szabó Hajnalka, Forgács Gábor, Nagy Andrea, Nádasy György, Monos Emil, Merkely Béla, Kékesi Violetta SE, Kardiológia Központ, Kísérleti Laboratórium, Budapest SE, Klinikai Kísérleti Kutató- és Humán Élettani Intézet, Budapest Bevezetés: Régóta gyûlnek azok az ismeretek, amelyek szerint a Ca az endothel mûködésétõl függetlenül kettõs szerepet tölthet be az értónus szabályozásában: konstrikciót és relaxációt egyaránt képes elõidézni. Utóbbira példa az endogén Caionofór, parathormon, amely endothel-független, erõteljes koronáriatágulatot ké - pes létrehozni. Korábban kimutattuk, hogy a szintetikus Ca-ionofór, az iono mycin (IONO) in vivo szintén erõs koronáriadilatátor, és ez a hatás nitrogén-monoxidszintáz (NOS) gátlással csak részben csökkenthetõ. Célkitûzés: Jelen kísérleteinkben az IONO koronáriarezisztencia erekre gyakorolt hatását és annak endothelfüggését vizsgáltuk. Módszer: A kísérleteket izolált, patkány koronária arteriolákon (érátmérõ, D: 84± µm, n=8) végeztük ép endotheliumú, illetve endothel-irtott ereken. Az endothelfunkciót bradikinin (00 nm), a simaizom válaszkészséget nátrium-nit - roprusszid ( µm) adásával teszteltük. Az IONO (00 pm- µm) érválaszokat endotelin- (00 nm) elõkezeléssel megnövelt tónusú koronáriákon az átmérõ változásaként (mikroarteriográfia) vizsgáltuk. Eredmények: Az IONO dózisfüggõ relaxációt váltott ki intakt endothel mellett (DD max : +9±6%, p<0,05) és endothel-irtott preparátumokon is. A denudált ereken az IONO-válasz kisebb mértékû volt, a relaxáció 0±4%-kal (ns.) mérséklõdött. Az érátmérõ legnagyobb növekedése az IONO 0nM-nál kö - vetkezett be, ennél nagyobb koncentrációk mellett a hatás megfordult, az erek összehúzódtak (DD max : 0±, p<0,0). Következtetések: A Ca-ionofór IONO kettõs érhatást vált ki izolált arteriolákon: alacsonyabb dózisokban szignifikáns relaxációt, nagy dózisban kontrakciót idéz elõ. A koronária tágulat endothel-irtással hasonlóan, mint in vivo, a NOS-enzim gát - lá sával nem szüntethetõ meg. Ez arra utal, hogy a relaxáció érsimaizom-függõ me chanizmus révén jöhet létre, megerõsítve azt a feltételezést, hogy ér-sima izom - ban a transzmembrán Ca-fluxus és a relaxáció között közvetlen kapcso lat állhat fenn. THE MECHANISM OF THE VASODILATORY EFFECT OF THE CA-IONOPHOR AGENT IONOMYCIN Keywords: Ca-influx, coronary vasodilation, ionomycin Introduction: According to a growing body of evidence, ionic Ca has a dual face effect on the regulation of the vascular tone. Independently of the endothelial function Ca-influx may initiate either vasoconstriction or vasorelaxation. A good example for the latter phenomenon is the vascular effect of the endogenous Caionophor parathormone, which is an endothelium independent strong vaso dila - tation. Previously we have shown that a synthetic Ca-ionophor agent ionomycin (IONO) causes vasodilatation in vivo, which can not be abolished by the blockade of the NOS enzime. Aim: To study the vasorelaxant effect of IONO in coronary resistance arteries and the role of the endothelium in this effect. Methods: Experiments were performed on isolated, cannulated rat coronary arterioles (diameter, D: 84± µm) with intact or damaged endothelium (n=8). The endothelial and the smooth muscle function was tested with bradykinin (00 nm) and with sodium-nitroprussid ( µm), respectively. The effect of IONO (00 pm- µm) was studied as changes in diameter (microarteriography) on vessels with endothelin--induced (00 nm) increased arterial tone. Results: IONO induced dose dependent vasorelaxation of the isolated arterioles both with intact (DD max : +9±6%, p<0.05) and damaged endothelium. On denuded arteries the effect of IONO was diminished by 0±4% (ns). Higher doses (00 nm- µm) of IONO evoked vasoconstriction (DD max : 0±, p<0.0). Conclusions: Low doses of IONO induced significant vasorelaxation on isolated arterioles, whereas high doses lead to vasoconstriction. As the vasorelaxation was observed on the denuded vessels and it was not abolished by the blockade of the NOS enzyme in vivo, we conclude that the vasodilatory effect of IONO is at least partly due to its smooth-muscle dependent action. These results offer additional data supporting the hypothesis of a direct link between the vasorelaxation and the transmembrane Ca-influx of the smooth muscle cells. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A54

17 A VARDENAFIL JA VÍT JA A MYOCARDIUM ÉS ENDOTHELIUM FUNK CI Ó JÁT CARDIOPULMONALIS BYPASS UTÁN Ve res Gá bor, Radovits Tamás, Miesel-Gröschel Christiane, Bährle Susanne, Karck Matthias, Sza bó Gábor Ér- és Szív se bé sze ti Kli ni ka, Bu da pest Ruprect-Karls Egye tem, Szív se bé sze ti Kli ni ka, Kí sér le ti Ku ta tó La bo ra tó ri um, Heidelberg A vardenafil egy vazodilatátor ha tás sal ren del ke zõ foszfodieszteráz-5-gátló, amely a cgmp szint nö ve lé sén ke resz tül fej ti ki ha tá sát. Mun kánk ban a vardenafilelõkezelés szív mû kö dés re és endothelfunkcióra ki fej tett ha tá sát vizs gál tuk kardioplégiás szív meg ál lás és extrakorporális ke rin gés mo dell jén. ku tyát ope rál - tunk meg kardiopulmonalis bypass (CPB) fel hasz ná lá sá val (n=6: kont roll cso port, n=6 vardenafillal (30 µg/kg iv.) elõ ke zelt cso port). A 60 per ces hipotermiás szív - meg ál lás után 60 per ces reperfúziót kezd tünk. Nyo mástér fo gat kon duk tan cia ka - té ter rel re giszt rál tuk a jobb és bal kam rai hemodinamikai vi szo nyo kat a kí sér let kez de tén, va la mint a 60 per ces reperfúziót kö ve tõ en. A bal elül sõ le szál ló koro ná - rián mér tük a koronária-áramlást, va la mint vizs gál tuk a vazodilatációs vá laszt ace - til kolin (ACh) adá sá ra. A kí sér let vé gén meg ha tá roz tuk a miokardiális ATP-tar - talmat, s izo lált koronária-érgyûrûkön vizs gál tuk a vaszkuláris funk ci ó kat. A var - denafil-elõkezelés szig ni fi káns ja vu lást oko zott (a ki in du lá si ér ték %-ában meg ad - va) a bal (75±5% vs. 49±5%, p<0,05) és a jobb kam rai (99±7% vs. 65±5% p<0,05) végszisztolés nyo más-tér fo gat ös sze füg gés me re dek sé ge mint ér zé keny kontrak - tilitás-index te kin te té ben a 60 per ces reperfúzió után a kont roll cso port hoz ké - pest. A vardenafilos cso port ban na gyobb koronária-áramlást (58± vs. ±3 ml/min, p<0.05), szig ni fi kán san ja vult endothelfüggõ vazodilatációt és ma ga sabb ATPtartalmat de tek tál tunk (5,±, vs. 9,6±, µmol/g, p<0,05). Ex vivo vaszkuláris mé ré sek kel ki mu tat tuk, hogy a vardenafillal ke zelt cso port ban az ACh ál tal ki vál - tott vazoralaxáció dózis-hatás-görbéje bal ra to ló dott, míg nátrium-nitroprusszid ha tá sá ra nem mu tat ko zott kü lönb ség a cso por tok közt. A vardenafil-elõkezelés ja - vít ja a bal és jobb kam rai kontraktilitást és az endothelfunkciót CPB után. Ada ta - ink alap ján az iszkémia/reperfúziót kö ve tõ funk ci o ná lis ja vu lá sért a Vardenafil vazodilatátor ha tá sa mel lett na gyobb részt prekondícionálás jel le gû ha tás le het fe - le lõs. VARDENAFIL IMROVES ENDOTHELIAL FUNCTION OF MYOCARDIUM AFTER CARDIOPULMONARY BYPASS Keywords: vardenofil, endothelial function, cardiopulmonary bypass Vardenafil is a novel phosphodiesterase-5 blocker with known vasodilatory properties via enhanced cgmp accumulation. In the present pre-clinical study, we investigated the effects of vardenafil pretreatment on myocardial and endothelial function in an experimental model of cardioplegic arrest and extracorporal circulation. Twelve anesthetized dogs, underwent hypothermic cardiopulmonary bypass. 6 dogs received vardenafil (30 µg/kg) pri or initiation of cardiopulmonary bypass. After 60 minutes of hypothermic cardiac arrest, reperfusion was started. Biventricular haemodynamic variables were measured using a combined pressurevolume-conductance catheter at baseline and after 60 minutes of reperfusion. Left anterior descendent coronary blood flow (CBF) and endothelium-dependent vasodilatation to acetylcholine (ACh) were determined. In addition ATP contents were also assessed. Ex vivo vascular function was measured on coronary rings isolated at the end of the experiments The administration of vardenafil led to a significantly better recovery (given as per cent of baseline) of left (75±5 % vs. 49±5%, p<0.05) and right ventricular Ees (99±7% vs. 65±5% p<0.05). CBF was also significantly higher in the vardenafil group (58± vs. ±3, ml/min, p<0.05). ACh resulted in a significantly higher increase in CBF in the vardenafil group. ATP contents were significantly higher in the vardenafil group (5.±. vs. 9.6±. µmol/g, p<0,05). Ex vivo vascular function measurements revealed a significant (p<0.05) leftward shift of the dose-relaxation curves to ACh in the vardenafil group, while no differences were found in the response to sodium nitroprusside. Application of Vardenafil improves biventricular and endothelial function after cardiopulmonary bypass with hypothermic cardiac arrest. The data presented suggest that mo re preconditioning like effects than direct vasodilatory properties are responsible for the functional improvement after ischemia/reperfusion. Cardiologia Hungarica 009; 39 : A55