Az öregedésgátló peptidek kombinációja KOZMETIKAI SZEREKHEZ KIFEJLESZTETT GMP PEPTIDEK A KOZMETIKAI SZEREK ÚJ SZINTETIKUS ÖSSZETEVŐJE
ÖSSZEGZÉS: A ráncok kialakulását gátló peptidek felfedezése a racionális dizajntól a GMP kialakításáig vezető tudományos út következménye. Az alap biokémiai folyamatok kutatása forradalmian új peptidek felfedezéséhez vezetett, ami a kozmetika egész területén megdöbbentést keltett. Olyan ráncképződésgátló anyagot fedeztek fel, amely hatása a botulotoxinéhoz hasonlítható, ám kozkázat, magas költségek és injekciók használata nélkül érhető el. A mimikai ráncok kialakulását gátló új peptidek előnyei: -új alternatív in vitro mechanizmus a mimikai ráncok kialakulása ellen - több peptid hatékonyságát kiegészítő additív/ szinergikus hatás ÁLTALÁNOS LEÍRÁS A bőr öregedésének legszembetűnőbb jelei az arcon keletkező ráncok. Testünk öregedése természetes folyamat, amelyet fiziológiai, szövettani és biokémiai változások idéznek elő. A bőrre negatívan hat a külső környezet is. További- másodlagos- tényezők, amelyek felelősek a jellegzetes ráncok és az arc mélyedéseinek kialakululásáért: a gravitációs erő, az arcbőrre nehezedő folyamatos nyomás (pl. alvás közben) és az arc mimikai izmainak állandó, ismételt mozgása. A bőr öregedésében közrejátszó molekuláris folyamat (az alap fiziológiai folyamatoktól függetlenül) közvetlen kapcsolatban van a hármas helixet alkotó kollagén szerkezet változásaival, az elasztin polypeptidek degenerálódálásával és a bőr lipidburkában előforduló zavarokkal. Bebizonyított tény, hogy a szerkezeti változások és a lipidburokban előforduló zavarok az izomösszehúzódások modulációjával nagymértékben befolyásolhatók. A hólyag belsejéből felszabaduló neurotranszmiter átvételekor izomösszehúzódásra kerül sor. Az idegsejtek kapcsolódása helyén a neurotranszmiter felszabadulásakor fontos szerepet játszik a SNARE komplexum (SNAp REceptor- impulzus receptor) (A. Ferrer Montiel et al, The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272, 2634-2638). A komplexum 3 összetevőből áll- VAMP proteinek, syntaxin és SNAP-25 (SyNaptosomal Associated Protein- szinaptikus protein). A komplexum sejtkapocsként viselkedik, amely a neurotranszmiter felszabadulása érdekében a hólyagokat felfogja és összeköti a sejtmembránnal. A peptidek a SNAP-25 protein N-terminális végződéséhez hasonló anyagok, amelyek a SNARE komplexumbeli pozicióját veszik át- a komplexum összetétele változik. A SNARE komplexum kisebb destabilitása esetében a hólyag neurotranszmitereket nem szabadít fel, az izomösszehúzódás tompul, ráncok nem képződnek. (lásd 1. számú ábra)
Obr. 1. A peptidek biokémiai folyamata TULAJDONSÁG ÉS FELHASZNÁLÁS - a peptidek csökkentik a mimikai izomösszehúzódásoknál kialakult ráncok mélységét, főleg a homlokon és a szemkörnyéken - a peptidek a botulotoxin biztonságosabb, kevésbé költséges és gyengédebb változata, amely ugyanazon folyamatokat befolyásolja, csak más módon
HATÉKONYSÁG In vitro" tesztek A peptides SNARE komplexum kialakulásának modulációja A teszt segítségével nyomon követhetjük a rekonstruált SNARE komplexum kialakulását és terminális stabilitását. Mivel a peptidek a SNAP-25 protein N-terminális területéhez hasonlóak, a SNARE komplexum egyes pozicióiért harcot vivnak. A teszt értékeli a peptidek antagonisztikus konkurens teljesítményét a szabályozatlan SNAP- 25-el szemben ( SNARE komplexum során a syntaxissal és synaptobrevin-nel való összekapcsolódási képesség). A SNAP-25 koncentrációja határérték- a peptidek és a SNAP-25 között hatékony harc jöhet létre. A transzformált [ 35 S]-SNAP-25 in vitro alkalmazásával nagymértékben nőtt a módszer minősége,ezáltal a minta érzékenységi szintje is. A SNARE komplexum in vitro rekonstrukció és muduláció része a syntaxin és synaptobrevin rekombinált proteinek felfedezése és tisztítása, a[ 35 S]-SNAP-25 transzformációja, a SNARE komplexum létrehozása és peptides modulációja. A rekombinált syntaxin és a synaptobrevin ekvimol mennyisége peptidek jelenlétében és jelentéte nélkül, 4º C hőmérsékletnél, 2 órán keresztül inkubálódott. Ezt követően 4 ul [35S]- SNAP-25 hozzáadásával a keverék 4º C hőmérsékletnél további 12 órát inkubálódott. A SNARE komplexum elemzése 12%-os gélen, SDS-PAGE alkalmazásával történt, ezt követően Kodak X-OMART AR röntgenfilmeken röntgenografikus detekciót végeztek. A rekombinált SNARE komplexumot hőmérséklettől függő bomlása által azonosították. A peptideket nm koncentrációnál tesztelték. A 2. számú ábrán szemléltetett elektrofrézis - felső sávban a SNARE komplexum kialakulását az alsó sávban pedig a SNAP-2 jelenlétét ábrázolja. A bal szalag az érintetlen SNARE komplexummal végzett vizsgálatot, a második szalag pedig a SNARE komplexum hővel történő megsemmisítését szemlélteti- a komplexum szalagon nincs ábrázolva, csak a SNAP-25 látható a szalagon. A fennmaradó szalagokon a peptides SNARE komplexum keletkezésének inhibicióját figyelhetjük meg. 2. számú ábra: A peptides SNARE komplexum keletkezésének modulációja HEXAPEPTID
In vivo" tesztek A ráncképződés elleni hatékonyság tesztelése egészséges önkéntes személyeken A bőrfeltérképezés elemzése a peptidek hatékonyságát mutatja ki, mely során 17 egészséges nő szemkörnyékéről szilikonos lenyomatot vettek. A szilikon lenyomatok a teszt megkezdése előtt és 28 napos (naponta kétszeri) alkalmazás után készültek.a lenyomatok elemzése konfokális mikroszkópiával és lézeres szkenneléssel történt, a bőr kezelés alatti és utáni változásainak elbírálása érdekében. A 3. számú ábrán az optikai részek háromdimenziós rekonstrukciójáról készült felvételek láthatóak. A 28 napos kezelés után a ráncok mélysége nagymértékben csökkent, ami alátámasztja a biokémiai folyamatokról szóló hipotézist. 1.számú minta 2. számú minta 0. nap 28. nap 4. számú ábra: A két bőrminta topográfiája szemléltetve: bal oldalon kezelés nélkül, jobb oldalon pedig a 28 napos peptides kezelést követően. A fenti felvételek egy önkéntes személy bőrmintáját, az alsó ábrán pedig másik önkéntes személy bőrmintáját ábrázolják.
A peptidek hatékonysága A peptidek hatékonysága 0-10 -2,99-20 A ráncok csökkenése % -30-40 -34,98-50 -60-70 -63,13 Placebo Egy peptid hatékonysága A peptidkombinácó maximális hatása Maximális hatékonyságot több peptid kombinációjával érhetünk el - 63,13%. Az in vivo és in vitro tesztek kimutatták, hogy több peptid együttes kombinációja cca. 30%-kal hatékonyabb, mint az egyes peptidek külön-külön.