A hem-oxigenáz/vegf rendszer indukciója nőgyógyászati tumorokban Óvári László
HO-1, CO,VEGF biokémia rendszer Gyulladások Sebgyógyulás Placentáció
HO-1, VEGF-onkológia-irodalom HO-1 nagy mértékében expresszálódik a különböző tumorokban, egyidejűleg jelentős szövetspecificitás is HO-1 a fals friend? antiinflammatory antiapoptotic, antioxydative, angiopoetic effect VEGF jelen van a tumorban, szükséges a metasztázishoz, terápia
HO-1, VEGF-onkológia-irodalom Jozkowicz et al.: Oxygenase-1 in Tumors: Is It a False Friend? Antioxid Redox Signal. 2007 December ; 9(12): 2099 2118
HO-1, VEGF-onkológia-irodalom
Nőgyógyászati onkológia Cervix karcinóma Corpus karcinóma Ovarium karcinóma
Ovarium tumor Gyors progresszió Lymphatikus terjedés Intrakavitális metasztázis Rossz prognózis PFS,OAS
Irodalmi háttér Világszerte közel 200.000 nő betegszik meg évente ovárium carcinómában A petefészekrák rendkivül agresszív tumor, az esetek 70%-ában késői a diagnózis Többnyire előrehaladott stádiumban kerül felismerésre Magas mortalitás (75%-os a halálozás) Bár kemoszenzitív tumor, de gyakori recidiva Elsődleges kemoterápia: karboplatin és paklitaxel kombinációja Másodlagos terápia: karboplati és doxorubicin (50mg/testsúly kg) A tumor biológiai ismeretek minden bizonnyal segítik a klinikai munkát is. A különböző tumorok különböző módon expresszálják a Ho-1-t és VEGF-et. Az adatok gyakran ellentmondásosak. Általánosan elfogadott, hogy a tumor túlélésében, a direkt szöveti terjedésében és a metasztázis képzésben a tumor számára fontosak ezek a molekulák.
Korábbi patohisztológiai eredményeink (HO-1): M60 Cystadenocarcinoma ovarii
M60 Adenocarcinoma ovarii-g2 H-ferritin (AF488), HO-1 (TRITC), VEGF (AF647) H-Ferritin HO-1 VEGF
M108/2- Adenocarcinoma Ovarii-G3 H-ferritin (AF488), HO-1 (TRITC), VEGF (AF647) H-Ferritin HO-1 VEGF
M112/2-Adenocarcinoma Endometrioides G1 H-ferritin(AlexaF488), HO-1(TRITC),VEGF(AlexaF647) H-ferriti HO-1 VEGF
A2780,AD2780 Ovarian cancer cell line Kontrol HUVEC Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVEC A2780
Kezeletlen tumorsejtek HO-1 termelése
Kezeletlen tumorsejtek VEGF expressziója
Kezeletlen sejtek HO-1, VEGF termelése HO-1 RT-PCR VEGF ELISA HO-1/18S copy number 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 HUVEC A2780 VEGF(pg/mL/mg protein) 250 200 150 100 50 0 HUVEC A2780
A sejtkultúrák HO-1 expressziója hem kezelés hatására HUVEC A2780
Sejtkultúrák VEGF expressziója hem kezelés hatására A2780 HUVEC
5µM hem kezelés HO-1 RT-PCR VEGF ELISA 3,5 800 HO-1/18S copy number 3 2,5 2 1,5 1 VEGF (pg/ml/mg protein) 700 600 500 400 300 200 0,5 100 0 HUVEC A2780 0 HUVEC A2780
Hemoxigenase-1 indukció Kezelés: 4h 1%-os mediumban.
rubicin A doxorubicin (C27H29NO11) citosztatikus hatású antraciklin-glikozid. Ismeretes, hogy az antraciklinek az eukarióták számos biokémiai és biológiai funkcióját befolyásolják, a doxorubicin citotoxikus és/vagy antiproliferatív tulajdonsága mégsem tisztázott teljesen. Amikor a vegyület bekerül a sejtbe, elsősorban annak kromatin állományához kötődik. A doxorubicin komplexet képez a DNS-sel és a bázispárok közötti interkaláció révén meggátolja a DNS és az RNS szintézist az osztódási ciklus S fázisában. A fenti hatásmechanizmus mellett szabadgyökök képződését segíti, amely citotoxikus és a legkomolyabb mellékhatások egyik oka. Például Myocardiopathia
A kemoterápia hatása a különböző sejtvonalak túléléseire Életképesség- kezelés 1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM 3% Triton A2780 HUVEC Kezelés: 16h 1% FBS tart. DMEM-ben illetve CM199-ben, utána MTT assay
rubicin dózisgörbe A2780 sejtvonalon 400 VEGF(pg/mL/mg protein) 350 300 250 200 150 100 50 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM
A VEGF és az életképesség alakulása rubicin kezelés hatására A2780 és HUVEC sejtkultúrákon A2780 HUVEC 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM VEGF % 250 200 150 100 50 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM VEGF % Kezelés: 16h 1%-os médiumban Három mérés átlaga
Vasular endothelial growth factor Quantikine ELISA 350 VEGF(pg/mL)/mg protein 300 250 200 150 100 50 A2780 HUVEC 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM Kezelés: 16h 1% FBS tart. DMEM-ben illetve CM199-ben
Hemoxigenase-1 aktivitás a sejtkultúrákon: HO-1 aktivitás 250 Pmol/h/ mg protein 200 150 100 50 A2780 HUVEC 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM Kezelés: 16h 1% FBS tart. DMEM-ben illetve CM199-ben
Biokémia markerek és életképesség a dózis függvényében A2780 700 600 500 400 300 200 aktivitás VEGF Életk.% 100 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM
rubicin kezelés 16-120 óra VEGF A2780-VEGF ELISA VEGF(pg/mL/mg protein) 600 500 400 300 200 100 0h 16h 120h 0 NK 2µM 2µM + 20µM DF 2µM + 20µM DFC
Az életképesség alakulása rubicin és Desferal valamint Desferricoprogen együttes kezelésénak hatására A2780 HUVEC 1,4 0,25 OD-570nm 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 2µM 2µM + 20µM DF 2µM + 20µM DFC OD-570nm 0,2 0,15 0,1 0,05 2µM 2µM + 20µM DF 2µM + 20µM DFC 0 0.nap 1.nap 3.nap 5.nap 0 0.nap 1.nap 3.nap 5.nap
Konklúzió HO-VEGF biokémiai markerek tumor biológiai expressziója HO-1,VEGF indukálhatósága fiziológiás stimulusokkal HO-1, VEGF indukálhatósága onkoterápiás beavatkozás során