Doktori értekezés tézisei



Hasonló dokumentumok
Tudományos tevékenység 2005

Nemszinaptikus receptorok és szubmikronos Ca2+ válaszok: A két-foton lézermikroszkópia felhasználása a farmakológiai vizsgálatokra.

Tudományos tevékenység 2009

A SZEROTONIN-2 (5-HT 2 ) RECEPTOROK SZEREPE A SZORONGÁS ÉS ALVÁS SZABÁLYOZÁSÁBAN. Kántor Sándor

Szent István Egyetem. Állatorvos-tudományi Doktori Iskola

Neurotoxikológia VII. Neurotoxikológiai vizsgáló módszerek elektrofiziológia és viselkedésvizsgálat

megerősítik azt a hipotézist, miszerint az NPY szerepet játszik az evés, az anyagcsere, és az alvás integrálásában.

Hiperlipidémia okozta neurodegeneratív és vér-agy gát-elváltozások ApoB-100 transzgenikus egerekben

A tremor elektrofiziológiai vizsgálata mozgászavarral járó kórképekben. Doktori tézisek. Dr. Farkas Zsuzsanna

A neurogliaform sejtek szerepe az agykéregben

Nagyon köszönöm a disszertáció alapvetően pozitív megítélését és a gondos bírálatot. A következőkben válaszolok a feltett kérdésekre.

AZ IDEGRENDSZER PLASZTICITÁSA TANULÁS. EMLÉKEZÉS (memória)

PÉCSI TUDOMÁNYEGYETEM

IONCSATORNÁK. I. Szelektivitás és kapuzás. III. Szabályozás enzimek és alegységek által. IV. Akciós potenciál és szinaptikus átvitel

GLUTAMÁTERG VEGYÜLETEK HATÁSA A TOVATERJEDŐ DEPOLARIZÁCIÓRA, ÉS FELISMERÉSI MEMÓRIÁBAN AZ EMLÉKNYOM KIALAKULÁSÁRA: GYÓGYSZERFEJLESZTÉSI SZEMPONTOK

A TEMPORÁLIS LEBENY EPILEPSZIA ÉS AZ ALVÁS: VIZSGÁLATOK AZ INTERIKTÁLIS TÜSKÉK ÉS A MEMÓRIAKONSZOLIDÁCIÓ SZEMPONTJÁBÓL

Xenobiotikum transzporterek vizsgálata humán keratinocitákban és bőrben

A zsírszövet mellett az agyvelő lipidekben leggazdagabb szervünk. Pontosabban az agy igen gazdag hosszú szénláncú politelítetlen zsírsavakban

Tudományos tevékenység 2007

Summer of LabVIEW The Sunny Side of System Design

Tanulás és memória. A tanulás és a memória formái, agyi lokalizációjuk és celluláris mechanizmusok. Pszichofiziológia ea.

GLUTAMINSAV-GABA CSEREFOLYAMAT A KÖZPONTI IDEGRENDSZERBEN

A GLIASEJTEK ÉS AZ EPILEPTIKUS AKTIVITÁS KAPCSOLATA GÁSPÁR ATTILA GLIA SEJTEK ÉLETTANA EA

CURRICULUM VITAE Course abroad: two weeks long intensive course on the subject of bioethics in Udine.

Élvezeti szerekhez történő hozzászokás in vivo és in vitro vizsgálata

Bevezetés. Spontán és kiváltott kisülések tulajdonságai emberi szubikulumban

A tanulási és emlékezési zavarok pathofiziológiája. Szeged,

Asztrociták: a központi idegrendszer sokoldalú sejtjei Dr Környei Zsuzsanna

A Neurológiai Osztály tudományos tevékenysége

Az agykéreg és az agykérgi aktivitás mérése

Mikroelektródás képalkotó eljárások Somogyvári Zoltán

A szelektív szerotonin felvétel gátló antidepresszánsok hatása egyes szerotonin receptor altípusok működésére patkányban. Ph.D.

A nemi különbségek vizsgálatáról lévén szó, elsődleges volt a nemi hormonok, mint belső környezetbeli különbségeket létrehozó tényezők szerepének

GYERMEKGYÓGYÁSZAT EPILEPSZIA. I. Alapvetõ megfontolások DEFINÍCIÓ PANASZOK, TÜNETEK A ROHAMOK OSZTÁLYOZÁSA: EüM

ZÁRÓJELENTÉS SZAKMAI BESZÁMOLÓ

B.V.Kirova A neurológiai tünetek EMF- (EHF)-punktúrás terápiája//a nemzetközi részvétellel megrendezett

ZÁRÓJELENTÉS KÖRNYEZETSZENNYEZŐ ANYAGOK HATÁSÁNAK VIZSGÁLATA ELEMI- ÉS KOMPLEX IDEGI FOLYAMATOKRA

A motoros funkciók és a beszéd reorganizációja

AsztroGlia - neuron interakció

Placebo-hatás a sportban

D D A HIPPOCAMPALIS INTERNEURONOKON. Attila. Semmelweis Egyetem Doktori Iskola. : Prof. Vizi E. Szilveszter, D.Sc

Doktori tézisek Csölle Cecília. Semmelweis Egyetem Idegtudományi Doktori Iskola

I. Spinális mechanizmusok vizsgálata

Conference presentations, abstracts and posters:

Humán asztrociták. Nagyobb és komplexebb. idegrendszeri fejlődésben jelentős szerepű

Doktori tézisek. Dr. Turu Gábor Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok Doktori Iskola

Szakmai Önéletrajz 2016.

Computational Neuroscience

(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

A DEPRESSZIÓ NEUROKÉMIAI HÁTTERÉNEK VIZSGÁLATA OTKA T Zárójelentés. Témavezető: Dr. Kiss János (MTA KOKI, Budapest)

A bokaízület mozgásterjedelmének változása lábszárhosszabbítás során, állatkísérletes modellen *

Dr. Cserépné Dr. Szabadits Eszter

Egy idegsejt működése

Rovarirtószerek idegrendszeri hatásainak elemzése ex vivo túlélő agyszelet technika alkalmazásával

Részletes kutatási jelentés. 1/ A szintetikus Aβ-aggregátumok jellemzése

Placebo-hatás a sportban

SZABADALMI LEÍRÁS. (21) A bejelentés ügyszáma: P (22) A bejelentés napja: (30) Elsõbbségi adatok: P

EPILEPSY TREATMENT: VAGUS NERVE STIMULATION. Sakoun Phommavongsa November 12, 2013

Az AT 1A -angiotenzinreceptor G-fehérjétől független jelátvitelének vizsgálata C9 sejtekben. Doktori tézisek. Dr. Szidonya László

There are no translations available. CURRENT APPOINTMENT(S):

NANOPARTIKULUMOK BEJUTÁSA AZ IDEGRENDSZERBE: A VÉR-AGY GÁT SZEREPE

Az anti-apoptózis mechanizmus vizsgálata agyi ischaemia/hypoxia modellekben

KÖZLEMÉNYEK: A vér-agy gát zárt koponyasérülést követ acut változásának nyomonkövetése MRvizsgálattal

A sejtmembrán szabályozó szerepe fiziológiás körülmények között és kóros állapotokban

A fog extracelluláris mátrixának és mikrocirculációjának vizsgálata

Anatómiai, Szövet-és Fejlődéstani Intézet tudományos diákkörének eredményei ( )

A humán tripszinogén 4 expressziója és eloszlási mintázata az emberi agyban

AZ ASZTROCITA DISZFUNKCIÓ SZEREPE AZ EPILEPSZIÁBAN

Jakus Rita. Idegtudományok Doktori Iskola, Semmelweis Egyetem. Budapest, Ph. D. értekezés tézisei

Hibridspecifikus tápanyag-és vízhasznosítás kukoricánál csernozjom talajon

PhD Disszertáció Tézis

DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI

Az AMPA glutamát-receptor antagonista GYKI mérsékli a konvulziók által kiváltott c-fos expressziót patkány agykéregben

Az idegsejtek kommunikációja. a. Szinaptikus jelátvitel b. Receptorok c. Szignál transzdukció neuronokban d. Neuromoduláció

Élő szervezetek külső sztatikus mágneses tér expozícióra adott biológiai válaszai

Irodalmazás. Szó szerinti idézés idézőjelben csak indokolt esetben.

A szinaptikus kapcsolatok szerepe a fiziológiás és patológiás talamikus oszcillációk kialakításában

A BÜKKI KARSZTVÍZSZINT ÉSZLELŐ RENDSZER KERETÉBEN GYŰJTÖTT HIDROMETEOROLÓGIAI ADATOK ELEMZÉSE

kórházba (SBO) kerülés idejének lerövidítése

Az ischaemiás-reperfúziós agyi károsodás korai fázisának vizsgálata szövettani, neurokémiai és funkcionális módszerekkel

Bevezetés. 2. Rhinitises/asthmás betegek kiemelése 880 dolgozót (695 beköltözot és 185 oslakost) kérdoív alapján emeltem ki ipari populációból Pakson.

Akut terápiás rendszerek. A multifiltrate rendszer : Az Ön választása az optimális terápiához

A posztszinapszis és a PSD (posztszinaptikus. szinaptikus plaszticitásban játszott szerepük

Abeta(1-42) enhances neuronal excitability and disrupts synaptic plasticity by altering glutamate-recycling

Doktori tézisek. Sedlák Éva. Semmelweis Egyetem Gyógyszertudományok Doktori Iskola

Irodalmazás Hivatkozás a szövegben: Szövegközi idézés f ormátumai: I. (Számozás), [Számozás]

A SZIHALOM KÖZSÉGET ÉRINTŐ DAGANATOS HALMOZÓDÁS GYANÚ KIVIZSGÁLÁSÁNAK EREDMÉNYEI

Rezisztens keményítők minősítése és termékekben (kenyér, száraztészta) való alkalmazhatóságának vizsgálata

dc_349_11 MTA Doktori Értekezés Tézisei A hippocampus gátló neuronhálózatainak átalakulása temporális lebeny eredetű epilepsziában Maglóczky Zsófia

a. Szinaptikus jelátvitel b. Receptorok c. Szignál transzdukció neuronokban d. Neuromoduláció. Szinaptikus jelátvitel.

Az agykérgi gátló idegsejt hálózatok konvergens és divergens elemeinek a vizsgálata. Ph.D. tézisek. Szabadics János


Jegyzőkönyv. dr. Kozsurek Márk. A CART peptid a gerincvelői szintű nociceptív információfeldolgozásban szerepet játszó neuronális hálózatokban

A membránpotenciál. A membránpotenciál mérése

A 2012/12. SZÁM TARTALMA. Sárdi S., Szentpáli-Gavallér K., Bakonyi T., Szenci O., Kutasi O.: Lovak

A LÁTÁS BIOFIZIKÁJA AZ EMBERI SZEM GEOMETRIAI OPTIKÁJA FOTORECEPTOROK A LÁTÁS MOLEKULÁRIS MECHANIZMUSA A SZÍNLÁTÁS ELMÉLETE ELEKTRORETINOGRAM

(AD) β (A ) (2) ACDP ACDP ACDP APP. APP-C99 γ (3) A 40 A 42 A A A A 42/A 40. in vivo A A A A

Halvány sárgásbarna színű, lekerekített sarkú négyzet alakú, metszett élű, 9,4 mm-es tabletta, az egyik

Udvardyné Tóth Lilla intézeti biológus

Ph.D. ÉRTEKEZÉS TÉZISEI

Átírás:

Doktori értekezés tézisei Indukált görcstevékenység befolyásolhatóságának és szinaptikus folyamatokra gyakorolt krónikus hatásának elemzése 4-amino-piridin modellekben Borbély Sándor Doktorjelölt Témavezető: Dr Világi Ildikó Doktori Iskola: Biológia Doktori Iskola Vezető: Dr Erdei Anna, Doktori program: Idegtudomány és Humánbiológia Vezető: Dr Détári László, ELTE TTK Élettani és Neurobiológiai Tanszék Budapest 2009

BEVEZETÉS Az epilepszia változatos megjelenési formával bíró idegrendszeri működési rendellenesség, melynek során az idegsejtek spontán, rohamokban jelentkező szinkronizált működése alakul ki. A betegségre jellemző, hogy az agy serkentő és gátló átviteli folyamatainak egyensúlya felborul, ennek következtében túlserkentettség alakul ki, ami idővel provokáció nélküli görcstevékenység kialakulását eredményezi. Az előagy legfőbb serkentő ingerületátviteli rendszere a glutaminsav transzmitterrendszer, melynek az agykérgi túlaktiváció kialakulásában kiemelt jelentősége lehet. Számos epilepszia szindróma köthető a limbikus rendszer vagy a szomatoszenzoros kéreg (talamokortikális rendszer) kóros működéséhez, ezért ezen kéregterületek görcstevékenységben betöltött szerepének vizsgálata nagy jelentőségű. Habár az idegi hálózatok kóros működésével kapcsolatban sok ismeret áll már rendelkezésre, a hálózat, ill. annak elemei - sejtek, szinapszisok, receptorok - szintjén még nem tisztázott teljes mértékben az epilepszia kialakulásában, fenntartásában fontos szerepet játszó összes tényező, és ezek összefüggései. CÉLKITŰZÉSEK Vizsgálataimban a 4-amino-piridin (4-AP) nevű görcskeltővel váltottam ki epilepsziás rohamokat élő állatokban és túlélő agyszeletekben azzal a céllal, hogy a limbikus rendszerben vagy a szomatoszenzoros kéregben megjelenő rohamok kialakulásában érintett hálózati elemek szerepéről nyerjünk újabb ismereteket, amik közelebb vihetnek az epilepsziás működészavar háttérmechanizmusának megismeréséhez. Az alábbi, konkrét kérdések megválaszolása volt kísérleteim célja: A gyakorta epilepsziás gócként működő entorhinális kéreg irtása milyen hatással van az akut görcstevékenység kialakulására? Hogyan befolyásolja az ismétlődő konvulzió a limbikus rendszer, köztük az entorhinális kéreg és a hippokampusz, valamint a szomatoszenzoros kéreg rohamérzékenységét? Milyen receptoriális szintű és ingerületátviteli változások állnak a vizsgált területek esetleges megváltozott működése mögött?

A görcstevékenység szempontjából kevésbé feltárt szomatoszenzoros kéregben mely hálózati elemek érintettek az epilepsziás működés kialakulásában és fenntartásában? A szomatoszenzoros kéregben kialakuló akut görcsaktivitás milyen farmakológiai befolyásolhatósággal rendelkezik? ALKALMAZOTT MÓDSZEREK 4-AP indukálta epilepsziás rohamok vizsgálata in vivo EEG regisztrálással, kontroll és egyoldali laterális entorhinális kéreg irtáson átesett felnőtt patkányokban. Ismétlődő 4-AP konvulzión átesett patkányok glutamáterg transzmitterrendszerének funkcionális vizsgálata in vitro elektrofiziológiai módszerekkel. A nem-nmda receptorok kalcium permeabilitás megváltozásának tanulmányozása szövettani eljárással az ismételt rohamokon átesett állatokban. Az akut 4-AP indukált görcstevékenység fenntartásában érintett mikrohálózat azonosítása áramforrás-sűrűség meghatározási módszerrel és belső optikai jelek detektálásán alapuló eljárással. Az akut görcstevékenység farmakológiai befolyásolhatóságának vizsgálata in vitro elektrofiziológiai kísérletekben. KÍSÉRLETI EREDMÉNYEK A laterális entorhinális kéreg egyoldali irtásának következményei. Az abláción átesett állatok esetében az első generalizált tónusos-klónusos roham megjelenési ideje számottevően megnövekedett, illetve a vizsgálat időtartama alatt kevesebb roham jelent meg a kontrollokhoz képest. A 4-AP által indukált, hippokampuszból elvezett rohamok mintázata is átalakult a kéregirtás következtében. A nagyrohamok tónusos szakaszának időtartama számottevően megnövekedett, míg a klónusos szakasz jelentős frekvencia csökkenést mutatott. Összességében elmondható, hogy az állatok görcsérzékenysége lecsökkent, ami a rohamlatencia növekedésében és a rohamok számának, intenzitásának csökkenésében nyilvánult meg.

Az ismételt 4-AP kezelés serkentő ingerületátvitelre gyakorolt hatása Az ismételt 4-aminopiridin kezelés által kiváltott konvulziók számos változást eredményeztek a kérgi hálózatok görcsérzékenységében, amit in vitro túlélő agyszeletpreparátumban vizsgáltunk a kezelést követően feláldozott állatokból. Ezen receptoriális változások leginkább az AMPA-receptorok által közvetített gyors szinaptikus áttevődést érintették. A túlélő agyszeletekben mért kiváltott válaszok korai komponensének vizsgálatai szerint a szomatoszenzoros kéregben az alapingerlékenységet illetően kisfokú csökkenés állt be, míg ezzel ellentétes irányú változás zajlott le a két vizsgált limbikus területen, az entorhinális kéregben és a hippokampuszban. A receptor-farmakológiai érzékenységben jelentős csökkenést tapasztaltunk, az AMPA-receptor antagonista GYKI 52466 (1-(4-aminofenil)-4-metil-7,8-metiléndioxi-5H-2,3-benzodiazepin) hatékonysága romlott az ismételt 4-AP előkezelésen átesett állatok esetében a limbikus struktúrákban, míg a szomatoszenzoros kéregben nem történt relatív érzékenységbeli változás. Az NMDA-receptoron ható APV (D-2-amino-5-foszfono-valeriánsav) esetében - habár gátolta a szinaptikus ingerületátvitelt minden vizsgált területen - nem tapasztaltunk eltérést a hatékonyságában a különböző kérgi struktúrákból származó eredmények összevetésekor. Az NMDA-receptorokat esetlegesen érintő funkcionális változások alaposabb tanulmányozása végett vizsgáltuk a hosszútávú szinaptikus hatékonyságnövekedés (LTP; long-term potentiation) kiválthatóságát is. Akárcsak az APV vizsgálatakor, az LTP kiválthatósága esetében sem volt az 4-AP előkezelésnek kimutatható hatása egyik vizsgált területen sem. Az idegsejtmembrán ligand vezérelt ioncsatornákon keresztüli kalcium-permeabilitására utaló kobaltfelvételi vizsgálatok alapján a szomatoszenzoros kéreg esetében a 2/3. és 5. rétegekben, míg az entorhinális kéregben a 1-3. rétegek esetében kimutatható kalcium-áteresztőképesség csökkenést tapasztaltunk. A hippokampusz esetében a CA1 és DG régiók fokozott kalcium áteresztőképességet mutattak. Az általunk alkalmazott módszer specifikus a nem-nmda receptorokra, emiatt kijelenthetjük, hogy a tapasztalt változások az AMPA- és KAIN-receptorokat érintették. Az akut görcstevékenység fenntartásában érintett mikrohálózatok azonosítása Szeletpreparátumban váltottunk ki rohamszerű eseményeket 20 µm 4-AP segítségével és 16 csatornás fémelektróddal vezettük el a spontán kialakuló epileptikus aktivitást. A görcskeltővel végzett kezelés közben folyamatosan rögzítettük a szelet optikai tulajdonságainak megváltozásait is.

A görcstevékenység következtében a szeletpreparátum fénytörési, fényvisszaverési tulajdonságai jelentősen megváltoztak. A belső optikai jelek intenzitása legerőteljesebben az elsődleges szomatoszenzoros kéreg motoros kéreggel határos részén, a másodlagos szomatoszenzoros kéregben, hippokampusz CA1 régióban, a gyrus dentatusban és a szubikulumban növekedett. A neokortikális területekről elvezetett spontán görcskisülések áramsűrűség elemzése a 2/3. rétegben mutatott ki nagyobb szinaptikus áramokat, melyek intenzitása összhangban volt az optikai mérések eredményeivel. Összefoglalva az agyszövet saját optikai tulajdonságainak megváltozása és a CSD elemzés egybehangzóan a szupragranuláris rétegek erőteljesebb szinkronizációs készségét mutatta ki a 4-aminopiridin indukálta akut epilepsziamodellben. Az akut 4-AP indukált görcstevékenység farmakológiai befolyásolhatósága A farmakológiai vizsgálataink eredménye szerint az 50 µm koncentrációban alkalmazott lamotrigin hatékonyan gátolta az extracelluláris elvezetéssel mért kiváltott mezőpotenciál változások (fepsp) korai komponensét, mind a kontroll, mind a 4-AP kezelt szeletekben, míg a késői komponenst csak a 4-AP kezelt szeletekben csökkentette le. A 1,5 µm memantin (NMDA antagonista) hatékonyan gátolta a fepsp korai komponensét a kontroll szeletekben, míg a késői kompensre inkább a 4-AP érzékenyített szeletekben volt hatással. KÖVETKEZTETÉSEK A 4-AP kísérleti modell A feszültségfüggő K + csatorna blokkoló 4-AP-t széles körben alkalmazzák akut görcstevékenység kialakítására mind in vivo, mind in vitro modellekben (Fragoso-Veloz és mtsai, 1990). Előnye, hogy amint kiürül a szervezetből vagy in vitro kísérletek esetén kimosódik a preparátumból a túlserkentettségi állapot megszűnik. Mivel a 4-AP által indukált, mérsékelt görcstevékenység hosszútávon sem vált ki epileptikus állapotot, kiválóan alkalmas a rohamtevékenység közvetlen idegsejthálózatokra gyakorolt hatásának vizsgálatára anélkül, hogy jelentős neurodegeneratív folyamatokkal kellene számolnunk. Kísérleteinkben emiatt esett a választás ezen görcskeltőre az aktivációs vizsgálatokban.

Az unilaterális entorhinális kéregirtás hatása Az entorhinális kéregirtás rohamrezisztencia-fokozó hatására magyarázat lehet a kéregterület görcsiniciációban játszott szerepe. Patkány agyszeletben végzett vizsgálatok szerint 4-AP hatására hippokampális eredetű interiktális aktivitás alakul ki, ami gátolja a perirhinális és entorhinális kérgi iktális tevékenység megjelenését. A parahippokampális területek szeparálása után az entorhinális és perirhinális kéregterületeken továbbra is detektálhatók iktális jelenségek (Barbarosie és Avoli, 1997). Az entorhinális kéreg diszinhibíciója szintén iktális rohamok kialakulásához vezet (de Curtis és Pare, 2004). Az entorhinális kérgi túlaktiváció könnyen lép be a triszinaptikus hurokba, majd a hippokampuszból felerősítve érkezik vissza a kéregbe. Eltávolítása emiatt jelentős mértékben csökkentheti a görcsérzékenységet, amivel összhangban vannak a mi vizsgálati eredményeink. A krónikus 4-AP kezelés hatására bekövetkező változások elemzése Együttműködő partnereink a Szegedi Tudományegyetem Anatómiai Intézetében kimutatták a glutamát receptorok ismétlődő gyenge konvulziók hatására bekövetkező alegység-összetétel megváltozását immunhisztoblot metodikával. Saját elektrofiziológiai adatainkat ezen kísérleti eredményekkel vetettük össze annak érdekében, hogy pontosabban meghatározhassuk az általunk tapasztalt funkcionális változások esetleges háttérmechanizmusait. Az idegrendszer legfőbb sajátsága, hogy általa a szervezet az aktuális körülményekhez megfelelően alkalmazkodni tud. Az alkalmazkodás az idegrendszer esetében természetesen az ingerületátviteli folyamatok, idegi hálózati aktivitások módosulását jelenti, ami nem mehet végbe receptoriális, vagy morfológiai változások nélkül. A szinapszisokban jelen lévő receptorok mennyisége, alegység-összetétele, foszforiláltsági állapota meghatározza az ingerületátvitel hatékonyságát a posztszinaptikus sejten. Az ismételt 4-AP kezelésen átesett patkányok agyából készített túlélő agyszelet preparátumokon végzett vizsgálatok szerint az AMPA-receptorok által közvetített ingerületi folyamatok erősödtek meg, míg az NMDA-receptorok esetében nem történt jelentős változás. Az epileptikus folyamatokban eddig főleg az NMDA-receptorok érintettségét mutatták ki, a túlaktivációval járó állapot fenntartásában ennek a receptornak tulajdonítanak nagy jelentőséget. Mivel vizsgálatainkban az APV nem mutatott eltérő hatékonyságot, feltételezhető, hogy nem történt jelentős módosulás az NMDA-receptorok által közvetített folyamatokban. Ezt alátámasztja az a kísérleti eredmény is, miszerint az LTP kiválthatósága sem változott. A hosszútávú szinaptikus hatékonyságnövekedésben az NMDA receptorok

kiemelten fontos szerepet töltenek be, a gyakran ismétlődő depolarizáció hatására tartósan kinyílnak, ami az intracelluláris kalcium koncentráció megemelkedését, és ezáltal a szinapszis megerősödését lehetővé tévő folyamatok beindulását eredményezi. A hisztoblot mérések kimutatták az NR2A alegység fokozott expresszióját, míg a többi NMDA-receptor alegység esetében nem tapasztaltunk jelentős változást. Felnőtt patkányok idegrendszerében epileptikus inzultusokra az NR2A alegység expresszió csökkenése figyelhető meg (Silva és mtsai, 2005; Zhu és mtsai, 2004), ami összhangban van a mi eredményeinkkel. A görcskeltővel való kezelés közben a rohamok újbóli kiváltásához fokozatosan emelni kellett a dózist, tehát tolerancia alakult ki. A jelenség receptoriális magyarázata az lehet, hogy az NR2A alegység kisebb ionáram létrehozására képes, és inaktivációs időállandója is kisebb a többi a NR2 alegységénél (Cull-Candy és mtsai, 2001). Elektrofiziológiai vizsgálataink szerint a szomatoszenzoros kéregben nem változott, viszont a limbikus kéregben megnövekedett az AMPA-receptorok által közvetített ingerületátvitel mértéke, és ezzel összhangban a nem-nmda-receptorok kalcium permeabilitása is megváltozott. A kobalt felvétel vizsgálatok lecsökkent kalcium áteresztőképességet mutattak a szomatoszenzoros és entorhinális kérgi területeken, míg a hippokampusz CA1 régióban és a gyrus dentatusban növekedés történt. Az AMPA-receptorok kalcium permeabilitása a GluR2 alegység kifejeződésének függvénye. Az editált GluR2 alegység jelenléte a kalcium ionok számára átjárhatatlanná teszi a receptort (Bigge, 1999). A kainát-receptorok minden esetben kismértékben átjárhatók a kalcium ionok számára. A neurodegenerációt kiváltó inzultusok általában a GluR2 receptorok kifejeződésének nagyfokú csökkenésével járnak, ami az intracelluláris kalcium koncentráció megnövekedése révén apoptotikus folyamatok beindulásához vezet (Pellegrini-Giampietro és mtsai, 1997). A hisztoblot méréseink szerint a limbikus rendszer vizsgált területein némileg lecsökkent a GluR2 AMPA-receptor alegységek expressziója, ami magyarázata lehet a hippokampuszban tapasztalt kalcium permeabilitás növekedésnek. Az entorhinális kéregben tapasztalt kobalt felvétel csökkenés a GluR2 expresszió downregulációja ellenére bekövetkezett, aminek feltételezhető oka, hogy a KA-2 receptorok mennyisége is csökkenést mutatott. Mivel az elektrofiziológiai vizsgálataink hasonló eredményt hoztak a limbikus kérgi területeken, feltételezhető, hogy az AMPA-receptorok alegységösszetételének azonos módon való megváltozása áll a funkcionális változások hátterében. A szomatoszenzoros kéregben nem tapasztaltunk jelentős módosulást az ingerületátvitelben, ami feltételezhetően a GluR2 alegység kifejeződés megváltozásának hiányára vezethető vissza. A kobalt felvétel vizsgálatok viszont lecsökkent kalcium áteresztőképességet mutattak ki ebben a kérgi

struktúrában. A háttérben valószínűleg az AMPA-receptor alegységek általános expressziócsökkenése és a KA-2 alegységek kisfokú nem szignifikáns downregulációja állhat. Mivel a kezelt állatokban rohamrezisztencia alakult ki, feltételezhető, hogy az agy egyéb részein is a szomatoszenzoros kéregben tapasztaltakhoz hasonló változások következtek be. Az akut görcstevékenység kialakulásában, fenntartásában érintett mikrohálózatok azonosítása A belső optikai jelek mérésén alapuló módszerünk és az áramsűrűség meghatározás egyöntetűen a szupragranuláris rétegek erőteljesebb aktivációját mutatta ki mind az elsődleges, mind a másodlagos szomatoszenzoros kéregben. A legtöbb, rágcsálókból származó epileptikus aktivitást vizsgáló kísérleti eredmény az 5. rétegben bekövetkező görcsindukciót ír le, amiért az itt lévő IB piramidális sejteket teszik felelőssé (Chagnac-Amitai és Connors, 1989). A szupragranuláris rétegek aktiválódásának lehetséges magyarázata lehet, hogy a 2/3. réteg piramissejtjei túlélő agyszeletben nagyobb mértékben aktiválódnak, mivel egyes feltételezések szerint a preparálás során az érzékenyebbnek vélt gátló interneuronok nagyobb mértékben degenerálódnak, mint a serkentő idegsejtek. Lehetséges azonban, hogy a gátló interneuronok sértetlensége esetén is kialakulhat a spontán epileptikus aktivitás 2/3. rétegbeli görcsfókusszal, amit alátámaszt, hogy humán epileptikus szövet in vitro vizsgálatakor (Köhling és mtsai, 1999) is hasonló mintázat detektálható. A 4-AP akut hatásának farmakológiai befolyásolhatósága A két általunk alkalmazott antiepileptikum eltérő hatásmechanizmussal rendelkezik, amiből adódik a feltételezés, hogy az általuk kialakított antikonvulzív hatás is különbözhet. Egyik vegyület sem lép interakcióba a feszültségfüggő kálium csatornákkal, így nincs közvetlen interakció a görcskeltőként alkalmazott 4-AP-nel. A lamotrigin feszültségfüggő nátrium csatorna blokkolóként csökkenti az idegsejtek ingerlékenységét ezáltal gátolva a rohamok kialakulását. Az általunk alkalmazott akut modellben nagyobb hatékonysággal gátolta a szinaptikus ingerületátvitelt a 4-AP jelenlétében ezért feltételezhető, hogy egyéb mechanizmusok is szerepet játszanak a rohamtevékenység gátlásában. Mivel a lamotrigin nem fejt ki közvetlen hatást a glutamáterg receptorrendszerre, a kísérleteink során megfigyelt terápiás dózis következtében kialakuló erőteljes gátló hatás feltételezhetően a kalcium csatornák gátlása révén lecsökkenő preszinaptikus transzmitter felszabadulás miatt jelenik meg. Ezt a feltételezést támasztja alá, hogy patkány amigdalában a

terápiás dózistartományban csökkenti a GABA-erg ingerületátvitelt is, a hatás itt is feltételezhetően a feszültségfüggő Ca 2+ csatornák közvetítésével alakul ki (Braga és mtsai, 2002). A memantint nem-kompetitív NMDA-receptor antagonistaként tartja számon a szakirodalom, de számos egyéb transzmitterrendszeren is hatást fejt ki (Parsons és mtsai, 1999), az alkalmazott koncentráció függvényében. Mivel a fepsp késői komponensének kialakulása jellemzően az NMDA-receptorok aktiválódását jelzi, egy antagonista alkalmazásakor leginkább ezen összetevő amplitúdójának csökkenésére számítunk. A memantin azonban kizárólag a 4-AP kezelt szeletek esetében csökkentette le ezt a komponenst, a kontroll szeletekben nem mutatott gátló hatást. Ismert, hogy a memantin akkor képes hatékonyan lecsökkenti az NMDA-receptorok aktivitását, amikor a glutamát extracelluláris koncentrációja tartósan magas (Chen és Lipton, 1997), akárcsak a 4-AP-nel kezelt szeletek esetében. Ezen feltételezést alátámasztja, hogy a gátló hatás az ingerlési feszültségtől függetlenül közel állandó szintű volt, tehát a preszinaptikus transzmitter felszabadulás nem befolyásolja az antagonista működését. FELHASZNÁLT IRODALOM 1. Barbarosie, M. and Avoli, M., (1997) CA3-driven hippocampal-entorhinal loop controls rather than sustains in vitro limbic seizures, J. Neurosci., 17, 9308-9314. 2. Bigge, C.F., (1999) Ionotropic glutamate receptors, Curr. Opin. Chem. Biol., 3, 441-447. 3. Braga, M.F., Aroniadou-Anderjaska, V., Post, R.M., Li, H., (2002) Lamotrigine reduces spontaneous and evoked GABAA receptor-mediated synaptic transmission in the basolateral amygdala: implications for its effects in seizure and affective disorders, Neuropharmacology, 42, 522-529. 4. Chagnac-Amitai, Y. and Connors, B.W., (1989) Horizontal spread of synchronized activity in neocortex and its control by GABA-mediated inhibition, J. Neurophysiol., 61, 747-758. 5. Chen, H.S. and Lipton, S.A., (1997) Mechanism of memantine block of NMDA-activated channels in rat retinal ganglion cells: uncompetitive antagonism, J. Physiol, 499 ( Pt 1), 27-46. 6. Cull-Candy, S., Brickley, S., Farrant, M., (2001) NMDA receptor subunits: diversity, development and disease, Curr. Opin. Neurobiol., 11, 327-335. 7. de Curtis, M. and Pare, D., (2004) The rhinal cortices: a wall of inhibition between the neocortex and the hippocampus, Prog. Neurobiol., 74, 101-110. 8. Fragoso-Veloz, J., Massieu, L., Alvarado, R., Tapia, R., (1990) Seizures and wet-dog shakes induced by 4- aminopyridine, and their potentiation by nifedipine, Eur. J. Pharmacol., 178, 275-284. 9. Kohling, R., Qu, M., Zilles, K., Speckmann, E.J., (1999) Current-source-density profiles associated with sharp waves in human epileptic neocortical tissue, Neuroscience, 94, 1039-1050. 10. Parsons, C.G., Danysz, W., Quack, G., (1999) Memantine is a clinically well tolerated N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor antagonist--a review of preclinical data, Neuropharmacology, 38, 735-767. 11. Pellegrini-Giampietro, D.E., Gorter, J.A., Bennett, M.V., Zukin, R.S., (1997) The GluR2 (GluR-B) hypothesis: Ca(2+)-permeable AMPA receptors in neurological disorders, Trends Neurosci., 20, 464-470. 12. Silva, A.V., Regondi, M.C., Cipelletti, B., Frassoni, C., Cavalheiro, E.A., Spreafico, R., (2005) Neocortical and hippocampal changes after multiple pilocarpine-induced status epilepticus in rats, Epilepsia, 46, 636-642. 13. Zhu, L.J., Chen, Z., Zhang, L.S., Xu, S.J., Xu, A.J., Luo, J.H., (2004) Spatiotemporal changes of the N- methyl-d-aspartate receptor subunit levels in rats with pentylenetetrazole-induced seizures, Neurosci. Lett., 356, 53-56.

A témával kapcsolatban megjelent teljes közlemények 1. Borbely, S., Halasy, K., Somogyvari, Z., Detari, L., Vilagi, I., (2006) Laminar analysis of initiation and spread of epileptiform discharges in three in vitro models, Brain Res. Bull., 69, 161-167. IF: 1.94 2. Borbely, S., Dobo, E., Czege, D., Molnar, E., Bakos, M., Szucs, B., Vincze, A., Vilagi, I., Mihaly, A., (2009) Modification of ionotropic glutamate receptor-mediated processes in the rat hippocampus following repeated, brief seizures, Neuroscience, 159, 358-368. IF: 3.35 3. Kopniczky, Z., Dobo, E., Borbely, S., Vilagi, I., Detari, L., Krisztin-Peva, B., Bagosi, A., Molnar, E., Mihaly, A., (2005) Lateral entorhinal cortex lesions rearrange afferents, glutamate receptors, increase seizure latency and suppress seizure-induced c-fos expression in the hippocampus of adult rat, J. Neurochem., 95, 111-124. IF: 4.45 4. Mihaly, A., Borbely, S., Vilagi, I., Detari, L., Weiczner, R., Zador, Z., Krisztin-Peva, B., Bagosi, A., Kopniczky, Z., Zador, E., (2005) Neocortical c-fos mrna transcription in repeated, brief, acute seizures: is c-fos a coincidence detector?, Int. J. Mol. Med., 15, 481-486. IF: 1.85 5. Vilagi, I., Dobo, E., Borbely, S., Czege, D., Molnar, E., Mihaly, A., (2009) Repeated 4-aminopyridine induced seizures diminish the efficacy of glutamatergic transmission in the neocortex, Exp. Neurol. (Epub nyomtatás előtt), IF: 3.98 A témával kapcsolatban megjelent konferencia prezentációk 1. Borbély S., Halasy K., Somogyvári Z., Számadó Cs., Világi I. (2003) Study on initiation and spreading of epileptiform activity by electrophysiological and immunocytochemical methods. Clinical Neuroscience Supplement 56 (Suppl. 2): 14 2. Borbély S., Tarnawa I., Világi I. (2005) Study on the effect of lamotrigine in different in vitro seizure models. Clinical Neuroscience Supplement 58 (Suppl. 1): 18 3. Weiczner R., Borbély S., Világi I., Détári L., Zádor Zs., Krisztin-Péva B., Bagosi A., Kopniczky Zs., Zádor E., Mihály A., (2005) Neocortical c-fos mrna transcription in repeated, brief, acute seizures: Is c-fos a coincidence detector? Clinical Neuroscience Supplement 58 (Suppl. 1): 105 4. Kopniczky Z., Dobó E., Krisztin-Péva B., Borbély S., Világi I., Détári L., Molnár E., Bagosi A., Mihály A. (2005) Entorhinal lesions rearrange afferents, glutamate receptors, increase seizure latency and suppress seizure-induced c-fos expression in the hippocampus of adult rat. Clinical Neuroscience Supplement 58 (Suppl. 1): 53 5. Borbély S., Lojkova D., Mares P., Világi I. (2006) Comparative analysis of two antiepileptic drugs in different animal models. Epilepsia, 47(S3) p80-81, 2006 6. Borbély S., Világi I., (2006) Optical recording of seizure activity in neocortical slices. Clinical Neuroscience Supplement 59 (Suppl. 1): 13 7. Czégé, D., Borbély, S., Dobó, E., Mihály, A., Világi I. (2007) Study on the changes of glutamatergic receptor system in 4-aminopyridine induced epilepsy model. Clinical Neuroscience Supplement 60 (Suppl. 1):13 8. Borbély, S., Dobó E., Czégé D., Mihály A., Világi, I. (2008) Adaptation of glutamatergic transmission following repeated 4-aminopyridine treatment. A hippocampal slice study Clinical Neuroscience Supplement 61 (in press) 9. Czégé D., Dobó E., Borbély, S., Mihály A., Világi, I. (2008) Repeated mild seizures reduce non-nmda receptor activity in rat somatosensory cortex Clinical Neuroscience Supplement 61 (in press) 10. Borbély S., Dobó E., Czégé D., Szucs B., Vincze A., Mihály A. & Világi I. (2008) Alteration in hippocampal and cortical glutamatergic transmission, following repeated 4-aminopyridine treatment in rat. FENS Abstr. vol 4, A050.3, 2008 11. Borbély S., Dobó E., Czégé D., Mihály A., Világi, I. (2009) Convulsion induced modification of glutamatergic receptor system in rat entorhinal cortex. Clinical Neuroscience Supplement 62 (in press) 12. Világi I., Borbély S., Körössy Cs., Somogyvári Z. (2009) Cortical region and layer specific activation during epileptiform seizure. Epilepsia (in press) A szerző egyéb cikkei 1. Zielinska E., Kocki T., Saran T., Borbely S., Kuc D., Világi I., Urbanska E., Turski W. A., (2005) Effect of pesticides on kynurenic acid production in rat brain slices. Ann. Agric. Environ. Med. 12: 177 179, IF: 1.07 2. Világi I., Kiss D.S., Farkas A., Borbély S., Tárnok K., Halasy K., Bánóczi Z., Hudecz F. and Friedrich P. (2008) Synthetic calpain activator boosts neuronal excitability without extra Ca 2+. Molecular and Cellular Neurosci. 38:629-636 IF: 3.99