HASZNÁLATI UTASÍTÁSOK HASZNÁLATRA KÉSZ TÁPTALAJOK PA-254060.06 Változat: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) HASZNÁLATI JAVASLAT A BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) és a BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) nem szelektív táptalajok érzékeny mikroorganizmusok, különösképpen a Neisseria és Haemophilus fajok klinikai minták széles köréből való izolálására és tenyésztésére. AZ ELJÁRÁS ELVE ÉS MAGYARÁZATA Mikrobiológiai módszer. Carpenter és Morton egy a gonococcusok 24 órás izolálására tovább fejlesztett táptalajról számoltak be. 1 Ennek a táptalajnak, a hemoglobinnal és élesztő kivonattal kiegészített GC Agarnak a hatékonyságát tizenkét, ennek a mikroorganizmusnak az izolálására használt táptalaj bevonásával vizsgálták. 2 Később további módosításokat eszközöltek még a táptalajon. 3-5 A BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) táptalajban a tápanyagokat a GC II alap biztosítja, mely kazeint és válogatott hús peptonokat tartalmaz, mint nitrogén-forrás, foszfátot a ph megtartására, és kukoricakeményítőt az agarban esetleg jelenlévő toxikus zsírsavak semlegesítésére. A hemoglobin az X-faktort (hemin) biztosítja. A BD IsoVitaleX Enrichment egy jól leírt kiegészítő, mely a V-faktort biztosítja (nikotinamid adenin dinukleotid, NAD) mely a Haemophilus fajokra nézve esszenciális, valamint a vitaminokat, aminosavakat, koenzimeket, glükózt, vas (III) iont és más faktorokat, melyeket a patogén Neisseria és más érzékeny mikroorganizmusok igénylenek. A piridoxált és más specifikus növekedési faktorokat a grampozitív baktériumok növekedésének javítása érdekében adtak a táptalajhoz, míg a piridoxál a Granulicatella és Abiotrophia fajok (= a streptococusok tápanyagvariánsai) növekedésének támogatására is szolgál. 6-9 A Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) alternatív táptalaja az érzékeny mikroorganizmusok klinikai mintákból való izolálásához. 7 A proteóz peptont, emésztett májat és élesztőkivonatot tartalmaz mint nitrogén és vitamin forrást. A nátrium-klorid az ozmotikus egyensúlyt tartja fent. A hőkezelt (hő-denaturált) lóvér egyszerre biztosítja az X-faktort (heme), és mivel a táptalaj nem tartalmaz NADázt, a V-faktort (nikotinamid adenin dinukleotid, NAD), mely a Haemophylus influenzae növekedéséhez szükséges, valamint tartalmaz még más kiegészítő tápanyagokat is. REAGENSEK 1 liter szűrt vízre vonatkoztatva* Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Pankreatikusan emésztett kazein 7,5 g Proteóz pepton No. 3 15,0 g Válogatott hús pepton 7,5 g Emészett máj 2,5 g Kukoricakeményítő 1,0 g Élesztő kivonat 5,0 g K 2 HPO 4 4,0 g Nátrium-klorid 5,0 g KH 2 PO 4 1,0 g Lóvér (hőkezelt) 7% Nátrium-klorid 5,0 g ph 7,4 +/- 0,2 Agar 12,0 g Hemoglobin 10,0 g IsoVitaleX dúsítás 12,0 ml Pyridoxal 0,01 g Növekedési faktorok 0,5 g ph 7,2 +/- 0,2 *Úgy beállítva és/vagy összekeverve, hogy megfeleljen a működési követelményeknek. PA-254060.06-1 -
A BD IsoVitalex Enrichment a következő növekedési faktorokat tartalmazza (1 liter szűrt vízre vonatkoztatva*): B 12 vitamin 0,01 g L-glutamin 10,0 g Adenin 1,0 g Guanin-hidroklorid 0,03 g p-aminobenzoesav 0,013 g Nikotinamid adenin dinukleotid (NAD) 0,25 g Tiamin pirofoszfát 0,1 g Vas-(III)-nitrát 0,02 g Tiamin-hidroklorid 0,003 g Cisztein-hidroklorid 25,9 g L-cisztin 1,1 g Glükóz 100,0 g *Úgy beállítva és/vagy összekeverve, hogy megfeleljen a működési követelményeknek. FIGYELMEZTETÉS. Használata szakértelmet igényel. Ne használja a lemezeket, ha azon mikrobiális szennyeződés, kiszáradás és betöredezés, ill. a károsodás bármilyen más jelét észleli. A steril munkával, a biológiai veszélyekkel és a használt termékek hulladékként való kezelésével kapcsolatban olvassa el az ÁLTALÁNOS HASZNÁLATI ÚTMUTATÓT. TÁROLÁS ÉS ELTARTHATÓSÁG Átvétel után felhasználásig, a lemezeket sötét helyen, 2-8 C-on az eredeti lezárt tasakban tárolja. Kerülni kell a lemezek megfagyását, illetve túlmelegedését. A lemezeket a lejárati időn belül kell inokulálni (lásd: csomagolás címkéje) és az előírt inkubációs időt be kell tartani. A felbontott 10-es csomagolás lemezeit, tiszta helyen, 2-8 C-on tárolva, egy héten belül fel kell használni. FELHASZNÁLÓI MINŐSÉGI ELLENŐRZÉS Inokulálja a reprezentatív mintát a következő törzsekkel (a részletekért, lásd: ÁLTALÁNOS HASZNÁLATI ÚTMUTATÓT). Az inokulált lemezeket 35 ± 2 C-on, széndioxiddal dúsított, aerob körülmények között inkubálja. A lemezeket 18-24 óra és 42-48 óra inkubáció után értékelje. Törzsek* Haemophilus influenzae ATCC 10211 Neisseria gonorrhoeae ATCC 43069 Neisseria meningitidis ATCC 13090 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Nem inokulált BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Elégséges kiváló növekedés Csokoládé barna; átlátszatlan; enyhén inhomogén lehet * Ezenkívül, a streptococcusok tápanyagvariánsainak kimutatására, a BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) táptalajt a Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 törzzsel is tesztelni kell. 8,9 ELJÁRÁS Szállított anyagok BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) vagy BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), mindkettő 90 mm-es Stacker lemezekben. Mikrobiológiailag ellenőrzött Nem szállított anyagok Kiegészítő tápleves a tenyésztéshez, reagensek és szükséges laboratóriumi eszközök. PA-254060.06-2 -
Minták típusa Ezt a táptalajt elvileg minden olyan fertőzött mintához lehet használni, melyben vélhetőleg érzékeny mikroorganizmusok találhatók, különösképpen, de nem kizárólag eredetileg steril testüregekből származó mintákhoz (pl. gerincvelői folyadék, tályogok). Elsősorban a Neisseria, Haemophilus és más olyan baktériumok nem szelektív izolálására használják, melyek a rutinszerűen használt véres agarokon (pl. Columbia Agar with 5% Sheep Blood) nem mindig nőnek,. Ezenkívül, a BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) táptalajt az Abiotrophia és Globicatella fajok (= a streptococcusok tápanyagvariánsai) izolálásához is lehet használni. 8,9 A táptalajt vérkultúrák szubkultúráihoz is alkalmazzák. (Lásd még TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK ÉS AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI) Minták gyűjtése és szállítása A Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus és más érzékeny mikroorganizmusok érzékenyen reagálnak a kedvezőtlen környezeti tényezőkre. Ezért az összes minta szállításához megfelelő transzportközeget kell használni. A mintákat a lehető leghamarabb el kell juttatni a laboratóriumba és még akkor sem lehetnek 24 óránál régebbiek, ha transzportközegben szállítják azokat. Az optimális szállítási hőmérséklet 20-25 C. A mintákat ne hűtse! 10,11 A teszt kivitelezése A mintákat, amint beérkeztek a laboratóriumba BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) vagy táptalajra széleszteni kell. A szélesztett lemez elsősorban a vegyes flórájú mintákból való elsődleges tiszta tenyészetek izolálására szolgál. Amennyiben a tenyésztést közvetlenül a mintavételi pálcáról indítja, forgassa meg a pálcát a táptalaj kis felületén, majd onnét, szélesztéssel inokulálja a lemezt. Amennyiben a mintát egy normál flórájú testüregből vették, úgy azt, annak függvényében, hogy milyen patogén ágenst kíván izoláni, a megfelelő szelektív táptalajra is inokulálni kell. A Neisseria gonorrhoeae esetében a BD Martin-Lewis Agar, modified vagy a BD GC-Lect Agar táptalajt, Haemophilus esetében pedig a BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin táptalajt kell alkalmazni. Az inokulált lemezeket 35 ± 2 C-on, széndioxiddal dúsított, aerob körülmények között inkubálja. A lemezeket 18-24 óra és 42-48 óra inkubáció után értékelje. Eredmények A telepek jellegzetes morfológiája a következő: Mikrooganizmus BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Haemophilus influenzae Kicsi (1 mm), nedves, gyöngyházfényű, jellegzetes egér szaggal Neisseria gonorrhoeae Kis méretű, szürkésfehér-színtelen, nyálkás Neisseria meningitidis Közepes-nagy, kék-szürke, nyálkás Streptococcus pneumoniae Kicsi, lapos vagy nagyobb, nyálkásan zöld telepek, a közepes övező telepek esetenként zöldesek Granulicatella (Abiotrophia) Kis méretű, szürkés zöld telepek, a telepek körüli táptalaj adiacens* zöldes lehet TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK ÉS AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI A BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) és a BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) dúsított, nem szelektív táptalajok, melyeken a érzékeny és nem érzékeny mikroorganizmusok, a normál flóra tagjait is beleértve, jól nőnek. Ezért, a normál flórájú testüregből vett mintával ajánlott a megfelelő szelektív táptalajt is inokulálni. Az érzékeny baktérium fogalom olyan baktériumokat takar, melyek nem, vagy csak gyengén nőnek általános, juhvért tartalmazó táptalajokon, például Haemophilus, patogén Neisseria és néhány más mikroorganizmus. Részletes leírást, hogy mely mintákat kell ezeken a táptalajokon vizsgálni és mely mikroorganizmusok izolálásához lehet ezeket a táptalajokat használni, az ide vonatkozó hivatkozásokban találhat. 8,9,11,12 PA-254060.06-3 -
Számos fertőző ágensnek számító baktérium faj és típus létezik. Ezért, mielőtt ezeket a táptalajokat rutinszerűen használnák ritkán izolált vagy újonnan leírt mikroorganizmusokhoz, a felhasználónak a célorganizmus tiszta tenyészetei segítségével a táptalajok alkalmasságáról meg kell győződnie. A táptalajt nem tesztelték arra nézve, hogy támogatja-e az Abiotrophia fajok és a streptococcusok más tápanyagvariánsainak fejlődését. A streptococcusok tápanyag variánsainak leírását az idevonatkozó hivatkozásokban találja 6,8,9,13 6,8,9,13 meg. IRODALOMJEGYZÉK 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton. 1947. An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27:58-60. 2. Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer. 1949. Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33:164-176. 3. Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen. 1988. Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer. 1967. Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82:361-363. 5. Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi. 1974. Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28:688-690. 6. Ruoff, L.R. 2003. Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous. 1998. DIFCO Manual, 11th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller. 1981. Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14:329-332. 9. Collins, M.D., and P.A. Lawson. 2000. The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: 365-369. 10. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L. 2003. Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. KISZERELÉSEK Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Cat. No. 254060 Használatra kész táptalajok, 20-as csomag Cat. No. 254089 Használatra kész táptalajok, 120-as csomag PA-254060.06-4 -
Cat. No. 257011 Használatra kész táptalajok, 20-as csomag Cat. No. 257456 Használatra kész táptalajok, 120-as csomag TOVÁBBI INFORMÁCIÓK További információkért forduljon a BD helyi képviselőjéhez. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. 2011 BD PA-254060.06-5 -