Nemlineáris mikroszkópia

Átírás

1 Nemlineáris mikroszkópia Szipıcs Róbert R 1,2 1 MTA Szilárdtestfizikai és s Optikai Kutatóint intézet 2 R&D Ultrafast Lasers Kft, Budapest r.szipocs@szipocs.com Sokszínő Optika Nyári Iskola Szeged, augusztus 26.

2 Tartalom 3D mikroszkópiás képalkotási módszerek Lineáris módszerek: Optikai koherencia tomográfia (Optical Coherence Tomography) 2D: fluoreszcancia mikroszkópia 3D: Konfokális fluoreszcancia mikroszkópia (Confocal microscopy) Nemlineáris módszerek: Két- vagy többfoton abszorpciós fluoreszcancia (2P, 3P, stb) Másodharmónikus keltéses (second harmonic generation, SHG) mikroszkópia CARS (Coherent Anti-Stokes Raman Scattering) mikroszkópia 2P FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging) mikroszkópia Orvosi, biológiai, gyógyszeripari alkalmazások in vitro vizsgálatok in vivo vizsgálatok -> Biztonságtechikai szempontok Biológiai minták károsodása (femtoszekundumos) lézerfény hatására - termikus károsodás lézerparaméterektıl való függése - genetikai károsodás lézerparaméterektıl való függése Mit vizsgálunk, milyen gerjesztési hullámhosszakon? - természetes fluorofórok (2P, 3P, FLIM) - mesterséges fluorofórok (2P, 3P, FLIM) - SHG-t keltı molekulákat, membránokat - a molekulák rezgési spektrumát (CARS) Milyen lézert használjunk? az alkalmazott femtoszekundumos lézerrendszerek, azok legfontosabb fizikai paraméterei Kétfoton abszorpciós fluoreszcencia mikroszkóp felépítése (általában in vitro vizsgálatokhoz) Nemlineáris mikroendoszkóp felépítése (in vivo vizsgálatokhoz) Példák a nemlineáris mikroszkópia alkalmazásaira - az idegtudomány, - a gyógyszeripar, és a - az orvosdiagnosztika területén

3 3D képalkotás elve

4 3D képalkotás, lineáris módszerek (OCT) Alkalmazások: pl. retina vizsgálata, szív koszorúér diagnosztika J. Fujimoto et al. Optics Express Vol. 10, No. 7, 8 April 2002

5 3D képalkotás, lineáris módszerek (OCT) A spektrális interferometria alkalmazása

6 Fluoreszcencia, fluoreszcencia mikroszkópia Normált abszorpció Normált fluoreszcencia Hullámhossz Jablonski diagram Tipikus fluoreszcencia élettartam 1-10 ns Módusszinkronizált lézerek tipikus ismétlési frekvenciája 100 MHz -> 13 ns R. Yuste, F. Lanni, A. Konnerth: Imaging Neurons (A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Lab. Press

7 Mit és hogyan mérünk? Különbözı sejtalkotók morfológiáját (pl. mitokondriális hálózat, sejtváz, stb. elhelyezkedését a sejten belül), vagy gyógyszerkészítmények eloszlását, bırön keresztül történı bejutását - specifikusan kötött festékekkel, vagy a sejtalkotó maga fluoreszkál (pl. természetes fluorofór, vagy a fehérjébe beépített GFP, YFP, stb.) Fiziológiáját (ion-koncentrációt, pl. idegsejtek esetében Ca 2+ -, Na + -ion koncentrációt, membránpotenciált feszültségérzékeny festékekkel vagy SHG-vel, kémhatást (ph), metabolikus állapotot)

8 . Kémhatás (ph) mérése LysoSensor (Molecular Probes)

9 Specifikusan kötött fluorofórok Pl. Alexa festékek a Molecular probes cégnél

10 Specifikusan kötött fluorofórok Pl. Alexa festékek a Molecular probes cégnél

11 Specifikusan kötött fluorofórok Pl. Alexa festékek a Molecular probes cégnél

12 Specifikusan kötött fluorofórok Alexa Fluor 488 (Ex-Max 495 nm/em-max 519 nm) conjugates are highly photostable and remain fluorescent over a broad ph range. The excitation and emission maxima are nearly identical to those of FITC, however Alexa Fluor 488 tends to be brighter and more optimal for intracellular applications. Due to nearly identical excitation and emission properties but different spillover characteristics, FITC and Alexa Fluor 488 cannot be used simultaneously. Alexa Fluor 488 exhibits extraordinary photostability, which makes it highly suitable for fluorescence

13 Fluoreszcencia mikroszkópia

14 2D fluoreszcencia mikroszkópia Fluoreszcencia mikroszkóp felépítése: HBO: nagynyomású higanygız-lámpa (széles spektrum, UV+látható)

15 2D fluoreszcencia mikroszkópia gerjesztési és emissziós szőrık

16 2D fluoreszcencia mikroszkópia természetes fluorofórok Lepkeszárnyról fluoreszcencia mikroszkópiával CCD kamerával készített 2D kép az MTA SZFKI-ban

17 3D képalkotás elve

18 3D képalkotás konfokális mikroszkóppal egyfotonos gerjesztés

19 Kétfoton abszorpciós fluoreszcencia Az egy- és a kétfoton abszorpciós fluoreszcencia Gerjesztés ω Fluoreszcencia emisszió ω/2 Gerjesztés ω/2 Fluoreszcencia emisszió ω ω/2

20 Egyfotonos vs. kétfotonos gerjesztés 2 foton csak a fókusz kis környezetében gerjeszt

21 3D képalkotás elve

22 3D fluoreszcencia mikroszkópia természetes fluorofórok Lepkeszárnyról kétfoton abszorpciós fluoreszcencia mikroszkópiával készített 2D metszetkép (balra) Lepkeszárnyról fluoreszcencia mikroszkópiával CCD kamerával készített 2D kép (jobbra) az MTA SZFKI-ban A kétfoton mikroszkóppal készített kép sokkal tisztább, részletgazdagabb!

23 Természetes fluorofórok a bırben kollagén, elasztin Hans Georg Breunig, Hauke Studier and Karsten König, Opt. Exp. 18, 7857 (2010)

24 Természetes fluorofórok a bırben kollagén, elasztin, keratin

25 Természetes fluorofórok a bırben Hangolható (femtoszekundumos) lézer kell! Hans Georg Breunig, Hauke Studier and Karsten König, Opt. Exp. 18, 7857 (2010)

26 3D fluoreszcencia mikroszkópia természetes fluorofórok Harangvirág száráról kétfoton abszorpciós fluoreszcencia kép kép az MTA SZFKI-ban

27 2D és 3D fluoreszcencia mikroszkópia LSM 710 MP Axio Examiner kétfoton mikroszkóp az MTA SZFKI-ban (Carl Zeiss)

28 2D és 3D fluoreszcencia mikroszkópia Fényutak az LSM 710 MP Axio Examiner kétfoton mikroszkópban (Carl Zeiss)

29 Kétfoton vs. egyfoton 3D mikroszkópia Fluoreszcencia fény nagy része detektálható! Nagymérető fotodetektor (PMT) Kis festékkoncentráció kell Fotonszámlálásos technika

30 Kétfoton abszorpciós fluoreszcencia mikroszkópia A pásztázó kétfoton mikroszkópia elve Módusszinkronizált lézer Nanoszekundumos impulzustávolság IR gerjesztı fény Dikroikus tükör Szkennelı tükrök (x,y) Szkenlencse Színszőrı üveg PM T Látható fluoreszcens fény Fotoelektronsokszorozó Femtoszekundumos impulzusszélesség Z-fókusz Objektív Preparátum Denk, W., Strickler, J. H. and Webb, W. W. (1990) 2-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science 248,

31 Kétfoton abszorpciós fluoreszcencia mikroszkópia A two-photon and second-harmonic microscope Volodymyr Nikolenko,* Boaz Nemet, and Rafael Yuste Methods 30 (2003) 3 15

32 Színszőrık a kétfoton mikroszkópiában BS LBF PMT/ APD BS: LBF: HT nm HR nm HT nm HR nm BS: dikroikus nyalábosztó LBF: lézer blokkoló szőrı

33 Kétfoton vs. konfokális 3D mikroszkópia Fluoreszcencia gerjesztés hatáskeresztmetszete: 1 fotonos ~10-17 cm 2, míg 2 fotonos ~10-50 cm 2 s Kétfoton gerjesztés valószínősége ~ I 2 Hatékony kétfoton gerjesztés feltétele erısen fókuszált lézernyaláb, nagy NA objektív módusszinkronizálás; N 2f ~ P 2 NA 4 / τf 2 (P teljesítmény, τ impulzus hossz, f ismétlıdési frekvencia)

34 A kétfotonos gerjesztés következményei a fluoreszcencia mikroszkópiában λ 2 λ; ~ tipikusan nm, NIR tartomány Szórás (~λ -4 ) kicsi Mélyebb behatolást tesz lehetıvé Kevésbé roncsolja a mintát (ω/2 fotonok) Könnyebb szétválasztani a gerjesztési és a fluoreszcencia spektrumot Biológiai minták elnyelése kisebb ezen a tartományon

35 Optikai ablak: nm

36 A kétfotonos gerjesztés következményei a fluoreszcencia mikroszkópiában 2 foton gerjesztés valószínősége ~ I 2 ~ 1/z 4 (fókusztól való távolság) Csak a fókusz kis környezetében gerjeszt Nincs szükség térbeli szőrésre (szórt fény is hasznos jel) Használható nagy NA objektív Fluoreszcencia fény nagy része detektálható Nagy jel/zaj viszony

37 Példa a kétfotonos gerjesztés másik alkalmazására: fotopolimerizáció kétfotonos gerjesztéssel Egy Ti:zafír lézer módusszinkronizált, kb. 5mW teljesítményő nyalábját egy 100X-os objektívvel fókuszáltuk SU-8 fotopolimerbe, amely a fókuszban kétfotonos polimerizációval szilárdul meg. A fókuszpontot mozgatva a polimerben tetszıleges 3D alakzatok alakíthatók ki kb. 600nm-es feloldással. Az így készült kereket a hozzá integrált, egyfotonos polimerizációval szilárdított fényvezetı szálból kilépı fény nyomása hozza forgásba. Lehetséges alkalmazás: egymolekula manipuláció. Készült: MTA Szegedi Biológiai Központ Biofizikai Intézet, Szeged Kelemen Lóránd, Valkai Sándor, Dr. Ormos Pál SEM kép: SZTE Növénytani tanszék, Dr. Mihalik Erzsébet S. Kawata et al. NATURE 412:697, 2001 P. Galajda, P. Ormos. APPLIED PHYSICS LETTERS 78:249, 2001

38 Két-foton abszorpciós fluoreszcencia Journal of Microscopy, Vol. 208, Pt 2 November 2002, pp

39 Három-foton abszorpciós fluoreszcencia Természtes sejtalkotók 3 fotonos abszorpciója és fluoreszcenciája

40 3D imaging by nonlinear microscopy Theory of CARS microscopy

41 3D imaging by nonlinear microscopy Theory of CARS microscopy

42 3D imaging by CARS microscopy

43 3D imaging by nonlinear microscopy FM CARS microscopy

44 3D imaging by nonlinear microscopy CARS microscopy

45 3D imaging by nonlinear microscopy CARS microscopy

46 3D imaging by CARS microscopy

47 3D imaging by CARS microscopy

48 3D imaging by nonlinear microscopy LASERS for CARS microscopy

49 3D imaging by CARS microscopy

50 3D imaging by FLIM microscopy Metabolic imaging of the relative amounts of reduced NADH and FAD and the micro environment of these metabolic electron carriers can be used to noninvasively monitor changes in metabolism. Metabolic imaging of the relative amounts of reduced NADH and FAD and themicroenvironment of thesemetabolic electron carriers can be used to noninvasively monitor changes in metabolism, , PNAS, December 4, 2007, vol. 104, no. 49

51 3D imaging by FLIM microscopy Pump-probe experiments at MTA SZFKI Spectrometer PC Piezo control Ti:S pump laser (λ = nm; τ = 100 fs) HR HR SHG Ti:S HR DM HR CM CM HR HR SHG OPO HR HR HR P CM CM BS HR Filter CM CM Fiber HR PPLN HR L DM DM Delay HR Output: SHG TI:S (λ = nm; τ = 100 fs) SHG OPO (λ = nm; τ = 100 fs) Legends: DM dichroic mirror; L lens; Fiber multimode optical fiber; CM chirped mirrors; P piezo translator; PPLN periodically poled lithium niobate; HR high reflector; Filter color filter; SHG second-harmonic generation; Delay delay line; BS beam splitter

52 3D imaging by FLIM microscopy Pump-probe experiments using lock-in amplifier

53 3D imaging by FLIM microscopy Development of up-conversion system Development of up-conversion system for time resolved spectroscopy Sándor Péter: Femtoszekundumos idıfelbontásos lézerspektroszkópiai mérırendszer fejlesztése (Diplomamunka, BME, 2008)

54 3D imaging by FLIM microscopy Development of up-conversion system Development of up-conversion system for time resolved spectroscopy Sándor Péter: Femtoszekundumos idıfelbontásos lézerspektroszkópiai mérırendszer fejlesztése (Diplomamunka, BME, 2008)

55 3D imaging by FLIM microscopy Development of up-conversion system Development of up-conversion system no SFG signal (τ > 100 fs) SFG/CARS signal (τ ~ 0 fs) ω SFG (τ) = ω TiS + ω OPO (τ), where τ is the relative delay Sándor Péter: Femtoszekundumos idıfelbontásos lézerspektroszkópiai mérırendszer fejlesztése (Diplomamunka, BME, 2008)

56 3D imaging by FLIM microscopy Development of up-conversion system Sándor Péter: Femtoszekundumos idıfelbontásos lézerspektroszkópiai mérırendszer fejlesztése (Diplomamunka, BME, 2008)

57 3D imaging by FLIM microscopy Development of up-conversion system at SZBK A fluoreszcencia up-conversion mérıberendezés sémája Groma Géza (SZBK): FIBERSC2 Projekt, 1. szakmai részbeszámoló (2010)

58 3D imaging by FLIM microscopy Development of up-conversion system at SZBK A Malachid green fluoreszcencia kinetika (A) idı- és hullámhossz függésben, (B) idıbeli metszet 510 nm-nél, kék: kísérleti görbe, piros: illesztett modell. Groma Géza (SZBK): FIBERSC2 Projekt, 1. szakmai részbeszámoló (2010)

59 A BİR TERMIKUS KÁROSODÁSA Biztonságtechnikai vizsgálatok: Két-foton képalkotás során károsító tényezık lehetnek: - hı- és mechanikai - akusztikai károsító hatások - fotokémiai (intracell. kromofórok két foton excitációja következtében alakul ki, sejtes rendszerekben ez a károsodás teljesen hasonló az UV besugárzás által okozotakkal) Ciklobután-pirimidin dimerek (CPD): - UVB és UVC sugárzás által kiváltott elváltozások: CC > TT és C > T - Kimutatás: IF technika Mizuno et al. (1991) elsıdleges antitest: egér TDM-1 (2D Scientific, UK) másodlagos IF antitest: nyúl antitest Alexa 514 (Csertex, HU)

60 UVB-vel besugarazott egérbır CpD fluoreszcens jelölése Alexa514-el CPD szigetek kialakulása UV-B fény hatására Haluszka Dóra, SE

61 A BİR TERMIKUS KÁROSODÁSA Nonlinear microscopy (2P, SHG, CARS, etc) allows in vivo high-resolution imaging of human skin structure with a penetration depth over 0.1 mm in the optical window (600 to 1300 nm) The major damage mechanism during two-photon skin imaging is associated with the formation of cavitation at the epidermal-dermal junction, which results in thermal mechanical damage of the tissue Simple heat diffusion model for skin under femtosecond pulse laser illumination Minimizing thermal mechanical damage is vital for the use of two-photon imaging in noninvasive optical biopsy of human skin in vivo

62 THERMAL DAMAGE OF SKIN The number of photon pairs absorbed per second via twophoton excitation is: where A is the focused beam area, E is the pulse energy, f is the repetition rate, τ is the pulse duration of the laser two-photon excitation probability fluorescence intensity is a linear function of pulse repetition rate, and a quadratic function of laser pulse energy Reduction of repetition rate while keeping average power results in higher fluorescence signal (down to ~4 MHz)! B. R. Masters, P. T. C. So, C. Buehler, N. Barry, J. D. Sutin, W. W. Mantulin, E. Gratton, "Mitigating thermal mechanical damage potential during two-photon dermal imaging," J. Biomed. Opt. 9, (2004).

63 FLIM ADVANTAGES Sensitive to local environment (e.g., ion concentrations, ph) Detects probes with a low fluorescence quantum yield Can distinguish fluorophores with overlapping emission spectra FREQUENCY DOMAIN MEASUREMENTS USING CW LASERS Cheaper, ns resolution, monoexponential decay - X - TIME DOMAIN MEASUREMENTS USING ULTRAFAST LASERS Maximum measurable lifetime (τ FL ) depends on the repetition rate (f rep = 1/T) of the laser system: τ FL > 3 * T Expensive laser source due to costly pump laser requirement CAN WE HELP ON THESE PROBLEMS?

64 Fs lasers for nonlinear microscopy REQUIREMENTS Broad tuning range in the optical window for efficient 2P excitation Pulse duration should be minimum at the focus of the objective -> precompensation of broadband pulses, or -> pulse duration is set around 150 to 250 fs, which is not sensitive for dispersion of the microscope elements (AO, objective, etc) Gaussian beam profile Low RMS noise Automatic control, NoTouch operation What about cost and repetition rate?

65 Fs lasers for nonlinear microscopy Ultrabroadband chirped mirrors for broadly tunable fs lasers E.J. Mayer, J. Möbius, A. Euteneuer, W. Rühle, R. Szipıcs: Opt. Lett. 22, (1997). Transmission Broadband Optics withλ-track Extend the Reach of Multiphoton Microscopy Wavelength (nm) Increased reflectivity band and smooth dispersion Over the nm wavelength range.

66 Femtosecond pulse laser products from R&D Ultrafast Lasers Ltd FemtoRose 100 TUN Compact, NoTouch (10W pump) Ultrabroadband, ion-beam sputtered chirped mirror set for broad tunability HR range: 680 to 1060 nm

67 Reduction of repetition rate by an extended cavity Aim: to develope a low repetition rate (~20 MHz), tuneable Ti:sapphire laser for nonlinear and FLIM microscopy Conventional lasers have a ~ 80 MHz repetition rate 20 MHz ADVANTAGES: FLIM: Measuring biological samples containing longer lifetime molecules Nonlinear microscopy: : Lower thermal damage of the sample Low pump threshold: Lower laser cost HOW CAN WE MAKE IT?

68 Hangolható hosszúrezonátoros Ti-zafír lézer. Szipıcs R, Antal P, Szigligeti A, Kolonics A; Tunable, Low Repetition Rate, Femtosecond Pulse Ti:Sapphire Laser for In Vivo Imaging by Nonlinear Microscopy; In: OSA: BODA/NTM/OMP/OTA, 2011

69 Final setup of the long cavity laser Setup of the long-cavity oscillator. L: pump focusing lens, IC: input coupler mirror, Ti:Sa: titaniumsapphire crystal BRF: birefringent filter for wavelength tuning, P: prism, HCM: Herriott-cell mirror, OC: output coupler, S: slit for hard-aperture Kerr-lens mode-locking.

70 Final laser setup of the long cavity laser Pump laser PM HCM SM2 Ti:Sa SM1 BRF PR M4 P1 M3 f rep = 22,2 MHz M1 P2 M5 S OC M2 HCM SLIT hard-aperture Kerr-lens mode-locking GDD (fs 2 ) GDD Reflektancia (%) Ion-beam sputtered UBCM mirrors 100,00 99,95 99,90 R nm , Hullámhossz (nm) Hullámhossz (nm)

71 Laser performance of the long cavity laser 350 Average output power (mw) MW OC SW OC Wavelength (nm) Output power versus wavelength. Two different output couplers were used for short wavelengths (SW OC, crosses) and for longer wavelengths (MW OC, circles). Pump power was between 2.29 and 2.59 W.

72 Laser performance of the long cavity laser Nearly transform limited, τ FHHW < 300 fs pulses ~ 22 MHz repetition rate 170 nm wide tuning range (between 712 nm and 882 nm) Pump power < 2.6 W Average output power > 300 mw Maximum pulse peak power: ~ 49 kw.

73 Sample: fluorescent micro-bead 22 MHz vs. 76 MHz laser performance in a 2P microscope Expected increase in fluorescent signal: C C 22,2MHz 76MHz = 76 MHz 22,2 MHz = 3,45 Fitting parabolas on measured data C 2 22,2MHz Pátlag Two-photon excitation (at 800 nm) 250 C 2 76MHz Pátlag N 1 f ism δ ( λ) P 2 Aτ C 2 átlag E. R. Tkaczyk et. al., CLEO 2007, paper CTuP7 Measured ratio: C C C 22,2MHz C 76MHz 22,2MHz 76MHz = 3,33 = 1,82 Fluoreszcencia jel (rel. egys.) Lower Lower thermal thermal load load at at 22,2 22,2 MHz MHz 0 22,2 MHz 76 MHz 22,2 MHz Gerjesztés átlagteljesítménye (µw) 76 MHz

74 Application of the LC laser for 2P imaging of skin Two-photon examination of murine unhaired dorsal skin by Low Repetition Rate, Femtosecond Pulse (20 MHz) and traditional (76 MHz) Ti:Sapphire Laser. A: Structure of mouse skin: upper covering layer contains keratin up to µm depth in normal circumstances; B: 2PF excitation of keratin at 800 nm results in emission in the nm range. C, D: Low Repetition Rate, Femtosecond Pulse (22 MHz) Ti:Sapphire Laser resulted in more detailed structural resolution of keratin distribution compared to traditional (76 MHz) Ti:Sapphire Laser. Both lasers detected last trace of keratin around 15 µm depth.

75 Application of the LC laser for 2P imaging of skin Examination of Alexa-514 labelled nanoparticle penetration into unhaired mouse dorsal skin by Low Repetition Rate Ti:Sapphire laser after 2 hours. In case of A.P. Nanoparticle and Penetration Enhancer optimal activation of dentitic Langerhans cell was performed. This special pretreatment was omitted in case of A.P. Nanoparticle section, where only nanoparticles suspension was dropped onto the skin surface. Control section was to inform about the basal state of skin autofluorescence after 2PE. The data suggested that nanoparticles penetrated far better in case of Langerhans challenge reaching µm depth after 2 hour.

76 In vivo nonlinear microendoscopy A Miniature Head-Mounted Two-Photon Microscope: High resolution Brain Imaging in Freely Moving Animals. Neuron, Vol. 31, , September 27, 2001 F. Helmchen, M.S. Fee, D. W. Tank, W. Denk Possibility of in vivo imaging in 3D Problem: ps excitation pulses, low efficiency

77 A diszperzió és a nemlinearitások hatása a femtoszekundumos lézerimpulzusokra

78 A diszperzió és a nemlinearitások hatása a femtoszekundumos lézerimpulzusokra 40 mw 70 mw

79 Photonic crystal fibers (PCF) MAIN TYPES Hollow core PCF-s Small core area PCF-s Large core area PCF-s Doped PCF-s NOTE: Problems with using hollow core fibers: Water adsorption in air tubes! Still total internal reflection!

80 Photonic crystals in 1D and 2D GROUP DELAY (fs) POSITIVE GDD λ/4 stack mirror at 800 nm Substrate (HL) 10 H Air ZERO GDD POSITIVE TOD NEGATIVE GDD WAVELENGTH (nm)

81 Experience with hollow core photonic bandgap fibers DISTORTION FREE DELIVERY AND COMPRESSION BY HOLLOW CORE FIBERS

82 Development of solid core and hollow core photonic bandgap fibers for fs fiber lasers, amplifiers and fiber OPO-s (FOPO-s) Z. Várallyay, K. Saitoh, A. Szabó, R. Szipıcs: Photonic bandgap fibers with resonant structures for tailoring the dispersion, Optics Express 17, (2009)

83 Development of solid core and hollow core photonic bandgap fibers for fs fiber lasers, amplifiers and fiber OPO-s (FOPO-s) Z. Várallyay, K. Saitoh, A. Szabó, R. Szipıcs: Photonic bandgap fibers with resonant structures for tailoring the dispersion, Optics Express 17, (2009)

84 Development of solid core and hollow core photonic bandgap fibers for fs fiber lasers, amplifiers and fiber OPO-s (FOPO-s) Z. Várallyay, K. Saitoh, A. Szabó, R. Szipıcs: Photonic bandgap fibers with resonant structures for tailoring the dispersion, Optics Express 17, (2009)

85 Development of solid core and hollow core photonic bandgap fibers for fs fiber lasers, amplifiers and fiber OPO-s (FOPO-s) Z. Várallyay, K. Saitoh, A. Szabó, R. Szipıcs: Photonic bandgap fibers with resonant structures for tailoring the dispersion, Optics Express 17, (2009)

86 Development of solid core and hollow core photonic bandgap fibers for fs fiber lasers, amplifiers and fiber OPO-s (FOPO-s) Z. Várallyay, K. Saitoh, A. Szabó, R. Szipıcs: Photonic bandgap fibers with resonant structures for tailoring the dispersion, Optics Express 17, (2009)

87 Solid core photonic crystal fibers Wavelength conversion by solid core PCF

88 A new laser CARS system by R&D

89 Fs lasers for nonlinear microscopy Femtosecond lasers at the MTA SZFKI

90 FemtoFiber Yb-fiber laser/amplifier R&D Ultrafast Lasers Ltd.

91 A new CARS laser system at SZFKI

92 A new CARS laser/microscope system at SZFKI Honlap: Köszönöm a figyelmet!