A mesterséges termékenyítés

Átírás

1 A mesterséges termékenyítés

2 A mesterséges termékenyítés előnyei Kevesebb apaállat kisebb költség Nagyobb szelekciós nyomás értékesebb utódok Az utódellenőrzés széleskörű elvégzése objektív Apaállat választás A legértékesebb apaállatok hosszabb ideig tenyésztésben tarthatók Megszakad a fertőzési lánc a párzáskor átvihető betegségek esetén A pároztatás tértől és időtől függetleníthető A fagyasztási technológia alkalmazásával génmegőrzés

3 A mesterséges termékenyítés hátrányai Egyes apaállatok túlzott favorizálása Rokontenyésztés A genetikai hibák hirtelen elterjeszthetők A meddőségre való hajlam rögzülhet egy állományban Hiányozhat a hímeket stimuláló hatása Fokozott szerepet kap az emberi tényező

4 Mit vizsgáljunk előzetesen andrológiai szempontból? here (méret, konzisztencia, struktúra) UH-os vizsgálat (Dr. Gábor György) B-mode scannert (Pie Medical, Model 100 LC VET) használunk, 8 MHz-es lineáris transducerrel. Standard ultrahang erősséget alkalmazunk. A transducert mindkét here esetében középen, a hossztengelyre merőlegesen helyezzük rá. Egy általunk erre a célra kifejlesztett elektro-mechanikus eszközbe helyezzük a fejet a vizsgálat előtt, ami segít abban, hogy minden vizsgálat során azonos erővel nyomjuk be a hereborék felszínét, ami az azonos gél vastagságot is biztosítja. Kb. 0.8 kg/cm 2 nyomást fejtünk ki, és ekkor egy rugós kapcsolót hozunk működésbe, ami az ultrahang berendezésben a képet megállítja, majd mentjük a képet.

5 Mit vizsgáljunk előzetesen andrológiai szempontból? here (konzisztencia) Tonométer (Dr. Gábor György) Két rugós vizsgálófejet használunk, a vizsgálat mindig 1500 gram/cm 2 nyomással történik. Mivel a két fej mérete erősen eltér egymástól, (1:3), a vizsgált szövetbe csak a kisebbik hatol be, a nagyobbik a felszínen marad. A beállított nyomás érték elérésekor a két fej felszíne közötti távolságot méri és rögzíti a kijelzőn a műszer, mm-ben kifejezve, 0.1 mm pontossággal. A bonyolult elektro-mechanika egy lineáris mozgást alakít át körmozgássá, majd egy ilyen módon mozgásba hozott körben mozgó kód (perforált) lemez megszakít egy infravörös fényt. Az impulzusokat egy mikroprocesszor számolja, és az összesített eredményt jeleníti meg a kijelzőn.

6 Mit vizsgáljunk előzetesen andrológiai szempontból? mellékhere (méret, állapot) ondóhólyag penis (tasakkal együtt)

7 Az ondóvétel A mesterséges termékenyítés legfontosabb mozzanata Az ejakulátum spermiumban gazdag, idegen anyagoktól mentes, csíraszegény legyen.

8 A spermavétel módjai maszturbáció műhüvely elektroejakulátor

9 A fedező partner lehet ivarzó nőstény másik apaállat fantom

10 Az ondó összetétele: alakos elemek + ondóplazma Alakos elemek spermiumok, éretlen ondósejtek, hámsejtek, fehérvérsejtek és vörösvérsejtek Az ondóplazma összetétele % víz % szárazanyag fehérjék, peptidek, aminosavak fruktóz elektrolitok (Na, K, Ca, Mg, Cl) citrátok, karbonátok, foszfátok vitaminok, hormonok

11 Fizikai tulajonságok Ozmózisos nyomás Kémhatás Fényelnyelő képesség Viszkozitás Fajsúly Elektromos tulajdonság

12 A csíraszegény ondó termelésének alapelve Meg kell akadályoznunk a sperma fertőződését (szennyeződését) - a termelés, - a kezelés, - a feldolgozás és - a tárolás minden fázisában. A szennyező mikroorganizmusok származhatnak: az apaállatból (tasak!) a környezetből ugratás (fedező partner) feldolgozás (eszközök, hígító) tárolás (levegő, N) során.

13 A spermavétel higiéniája A műhüvelyes és manuális ondóvétel során az ondót adó apaállat legyen mentes specifikus fertőző csíráktól. A mindenütt, de különösen a tasakban előforduló mikroorganizmusok miatt teljesen csíramentes ejakulátumot nem lehet nyerni. Ha a csírák nagy számban fordulnak elő a spermahígítóhoz hozzákevert antibiotikumok ellenére a termékenyítési eredményt kedvezőtlenül befolyásolhatják, vagy a megtermékenyített állatoknál a méh megbetegedései következhetnek be.

14 A spermavétel higiéniája -2 A személyzet tiszta munkaruhát viseljen. Helyiségek Az ugrató helyiséget, a spermavétel befejeztével naponta alaposan ki kell takarítani, és fertőtleníteni. Apaállatok Az optimális tartásukat (rendszeres tisztítás, megfelelő alom, stb.) eleve feltételezzük. Spermavételhez az állatokat (különösen a kannál érdekes) tisztán kell felhajtani. Az állatokat szükség esetén meg kell mosni, de a spermavételre már meg kell szárítani. Spermavétel A műhüvelyt ugratás után akkor is sterilizálni kell, ha új belső részt húznak fel. A spermavétellel megbízott személy viseljen minden kannál új, eldobható kesztyűt. Az üvegeszközöket szárítószekrényben 3 órán keresztül 180 C-on sterilizálják.

15 Előrejelezhető-e a fertilitás (sperma)? Törekvés: Jó minőségű szaporítóanyagok előállítására, és forgalmazására de a mai napig nincs olyan biztos módszer, ami pontosan előre jelezné a fertilitást. Egy tanulmány (1986) a sperma laboratóriumi teszteléséről, megállapítja azt, hogy a módszerek pontosságának igazolása a legfontosabb, és ezt a tenyészetekben a vemhesülési arány követésével lehet a legjobban ellenőrizni.

16 Előrejelezhető-e a fertilitás (sperma)? (2) Mikroszkópos morfológiai vizsgálat Szubjektív, az eltérő vizsgálati módszerek miatt nagy különbségek vannak a laborok között és változó kutatási eredményeket közöltek a fertilitással való összefüggéséről.

17 Előrejelezhető-e a fertilitás (sperma)? (2) Mikroszkópos vizuális motilitás vizsgálat nagyon szubjektív, erősen minta függő, alacsony az ismételhetősége laboron belül és laborok között is, alacsony korreláció a fertilitással.

18 Előrejelezhető-e a fertilitás (sperma)? (3) Elektronikus motilitás vizsgálat (HTM) - nem ajánlják a magas ár és a gyenge ismételhetőség miatt. Sperma sűrűség: alacsony az ismételhetősége a laborok között, néhány módszernél túl nagy a variabilitás, limitált korreláció a fertilitással. Egyéb módszerek (nyák penetráció, hörcsög pete penetráció): limitált használati lehetőség és korreláció a fertilitással.

19 makroszkópos Az ondó vizsgálata mikroszkópos biológiai

20 Makroszkópos vizsgálatok Mennyiség Szín Szag Konzisztencia Kémhatás Sűrűség Idegen anyagok (fizikai szennyeződések)

21 A sperma bírálata: 1. makroszkópos vizsgálat Az ejakulátum mennyisége Szín, konzisztencia, idegen anyagok Az ejakulátum színe a fehérestől az elefántcsontszínig. A sárga szint flavonok okozzák és normálisnak tekinthető. Az ejakulátum vöröses illetve barnás színeződése friss vagy régebbi vért jelez. A spermaminta konzisztenciája a koncentrációtól függ. A tejsavószerű vagy vízszerű általában nem elég sűrű. A szín és konzisztencia alapján becsült koncentrációt mérésekkel állapítják meg.

22 A sperma bírálata: 1. makroszkópos vizsgálat A koncentráció meghatározása Fotométer vagy részecskeszámláló berendezés használatakor ezeket az eszközöket előzetesen számlálókamrában történő spermium meghatározással kell hitelesíteni. Fotométer A fotométer a meghatározott mértékben higított sperma fénytörését méri. A mérés hitelesítéséhez a fotométer értékeit nagyobb számú spermaminta számlálókamrás eredményeihez kell viszonyítani. Részecskeszámláló berendezés. Ezek a készülékek meghatározott nagyságú részecskéket ismert méretű kapillárison keresztül történő áramláskor elektronikus úton számolnak.

23 A sperma bírálata 2. mikroszkópos vizsgálat A melegítőasztallal és jó fáziskontraszt optikával ellátott mikroszkóp az üvegeszközök előmelegítésére további, a mikroszkóptól független melegítő asztal is

24 Műszeres vizsgálat / Mikroszkópos vizsgálat Az ondósejtek mozgása (egyedi- és tömegmozgás) Élő- és holt ondósejtek Morfológiai elváltozások CASA rendszer

25 A sperma bírálata: 2. mikroszkópos vizsgálat Tömegmozgás: a spermiumok összességének halvonulásszerű, hullámzó mozgása szoros nagyítással, 37 C-os melegítő tárgyasztalon (vaginális típusú állatoknál). Követelmény: élénk tömegmozgás Előrehaladó mozgás: az aktívan előrehaladó spermiumok %-os aránya szoros nagyításban, melegítő tárgyasztalon 37 C-on azonos rétegvastagságban. A jó ondó közvetlenül a levétel és/vagy hígítás után 70%-os előrehaladó mozgást mutat, az 50%-os tömegmozgást mutató ejakulátumot nem szabad felhasználni.

26 A sperma bírálata: 3. mikroszkópos, számítógépes (CASA) vizsgálat Függetlenítik a spermabírálatot a vizsgálatot végző személy szubjektivitásától negatív fáziskontraszt megvilágításban a sötét háttérben világosan tűnnek fel a spermiumok videokamerán keresztüli vizsgálat

27 A sperma bírálata: 3. mikroszkópos, számítógépes (CASA) vizsgálat A vizsgálatokhoz speciális tárgylemezek szükségesek: Egyszer használatos, előre lefedett mikrocell tárgylemez. A kapillaritás elvén tölthető fel egy-egy csepp spermával. Csak igen híg (0,05-2,0 millió spermium/ml) minta vizsgálatára alkalmas. Makler-féle spermavizsgáló kamra. Ugyanabból a mintából több kép is vizsgálható, átlagolva ez adja a legpontosabb eredményt. (Ez a kamra 2 millió/ml-től millió/ml koncentrációjú spermaminták vizsgálatára alkalmas.)

28 A sperma bírálata: 4. mikroszkópos, morfológiai vizsgálat Élő- és holt festés Az elpusztult és élő spermiumokat lehet elkülöníteni. Az eredmény szoros összefüggésben van az előrehaladó mozgással, ezért szúrópróbaszerűen a motilitás becslésére is felhasználható. Az eozin-nigrozin festés alkalmazásakor az elpusztult spermiumok eozinnal festődnek, az pusztulók színeződnek, az élők festetlenek maradnak. Ez a festési módszer a spermiumok morfológiai vizsgálatára is alkalmas. Követelmény: A spermiumok 75%-a maradjon festetlen.

29 A sperma bírálata: 4. mikroszkópos, morfológiai vizsgálat Idegen anyagok A motilitás elbírálásánál festetlen készítményekben az idegen sejtek előfordulásáról és jellegéről is benyomást kapunk. A normális spermaminták is tartalmaznak bizonyos számú egyéb sejtet. Ezek 80%-a a spermiogenezisből ered. A legtöbb az un. csónak alakú sejt, és kevés a kerekded forma. Kerek és több-magvú sejtek, a here degeneratív megbetegedéseinél tűnnek fel. Felismerhetők a vérsejtek (vörösvértestek, fehérvérsejtek); hámsejtek (húgyhólyagból, húgycsőből, a tasakból és a tasaknyálkahártyájáról).

30 A sperma bírálata: 4. mikroszkópos, morfológiai vizsgálat Követelmények: Az idegen sejteket tartalmazó ejakulátumot csak akkor szabad feldolgozni, ha az idegen anyag nem lépi túl a megengedett mértéket, és az egyéb bírálati ismérveknek is megfelel. Leukocyták előfordulása súlyos elváltozásra utalhat (a mikrobatartalom ilyenkor gyakran jelentős).

31 A sperma bírálata: 4. mikroszkópos, morfológiai vizsgálat A rutin jellegű spermavizsgálat során általában nincs idő részletes morfológiai vizsgálatra. Ennek ellenére a nem festett és nem fixált készítményben is feltűnnek nagyobb számú deformált ondósejtek (pl. szabad fejek, körte alakú fejek, közép- ésfarokrész görbület, proximális plazmacsepp stb.

32 Spermiumanomáliák (Wekerle, 1983) Biológiai próbák Hidrogén-redukciós próba Rezisztenciapróba Hőtűrőpróba Élettartampróba Kégl-féle kataláz próba

33 Hidrogén-redukciós próba (Sörensen-féle) A próba alapja a metilénkék elszíntelenedik, ha hidrogénatom redukálja. Minél nagyobb egy ondó spermiumkoncentrációja és minél élénkebb a spermiumok mozgása, annál nagyobb redoxpotenciálú rendszert tartanak fenn. Vagyis: minél jobb minőségű a vizsgált ondó, annál hamarabb színtelenedik el a metilénkék. A próba menete: 0,8 ml tojássárgájás hígító + 0,2 ml ondó + 0,1 ml 0,1%-os metilénkék a készoldat színe: zöldeskék (rá paraffinolaj) 46 C-os vízfürdőbe tenni. A próba elbírálása (mennyi idő alatt nyeri vissza az oldat a sárga színét): A színváltásig eltelt idő alapján Az ondó minősítése 3-5 perc -kiváló 6-10 perc -jó perc -megfelelő több mint 15 perc -nem használható

34 Köszönöm a figyelmet!