Ph.D. értekezés. AZ α 1 -SAVAS GLIKOPROTEIN SZORPCIÓS TULAJDONSÁGAINAK FOLYADÉKKROMATOGRÁFIÁS VIZSGÁLATA ÉS GYÓGYSZERANALITIKAI ALKALMAZÁSA
|
|
- István Illés
- 8 évvel ezelőtt
- Látták:
Átírás
1 Ph.D. értekezés AZ α 1 -SAVAS GLIKOPROTEIN SZORPCIÓS TULAJDONSÁGAINAK FOLYADÉKKROMATOGRÁFIÁS VIZSGÁLATA ÉS GYÓGYSZERANALITIKAI ALKALMAZÁSA Gyimesiné Forrás Krisztina Témavezető: Dr. Szász György Professor Emeritus, a kémiai tudomány doktora SEMMELWEIS EGYETEM GYÓGYSZERÉSZI KÉMIAI INTÉZET 2001.
2 Ph.D. értekezés Az α 1 -savas glikoprotein szorpciós tulajdonságainak folyadékkromatográfiás vizsgálata és gyógyszeranalitikai alkalmazása Gyimesiné Forrás Krisztina Témavezető: Dr. Szász György Professor Emeritus, a kémiai tudomány doktora Budapest, Semmelweis Egyetem Doktori Iskola, 2001 Program: A gyógyszerészeti tudományok korszerű kutatási irányai Összefoglaló A bio- és gyógyszermolekulák analitikai meghatározásának világviszonylatban legelterjedtebb módszere a nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia. Rohamosan terjed ezen belül is a királis molekulák vizsgálata, amit az a felismerés tett indokolttá, hogy az enantiomerek hatásának erősségében, esetleg a hatás jellegében és toxicitásában alapvető eltérések mutatkozhatnak. Az enantiomerek elválasztása, mennyiségi meghatározása és tisztaság vizsgálata napjainkban elengedhetetlen és időszerű gyógyszeranalitikai feladatok. Disszertációs munkámban célul tűztük ki a szervezetben is jelenlévő α 1 -savas glikoprotein (AGP) alapú királis állófázis szorpciós tulajdonságainak vizsgálatát, amely az enantioszelektivitás szempontjából alapvető fontosságú lehet. A kötődési vizsgálatokkal újabb adatokat szolgáltattunk a kromatográfiás mechanizmus tekintetében is, amely az irodalmi adatok alapján még kevéssé tisztázott. Ezen ismeretek alapján lehetőség nyílik adott gyógyszeranalitikai feladatok megoldására alkalmas mozgó fázis összetételek tervezésére, beleértve a preparatív elválasztást is. Elsőként szolgáltattunk adatokat az alacsony dielektromos állandójához képest igen nagy elúciós erejű dioxán kötődésére. Megállapítottuk, hogy mind az acetonitril, mind a dioxán kötődése phfüggő: ph=7,2-nél telítési görbét ír le, míg ph=4,0-nél kétlépcsős, monoton görbével jellemezhető, amit a szelektor konformációváltozásával értelmeztünk. A konformációváltozás követésére és igazolására natív AGP-vel modellvizsgálatokat végeztünk. A kötődési meghatározás eredményeivel összhangban CD-spektroszkópiával megállapítottuk, hogy ph=4,0- nél az acetonitril koncentráció emelésével az α-hélix szerkezetre jellemző CD-spektrum jelenik meg. Ezzel szemben ph=7,2-nél az acetonitril koncentráció növelése nem idéz elő érdemi változást a spektrumban. Az AGP fluoreszcencia-kioltásos vizsgálatával először határoztuk meg 2,2,2-triklór-etanol felhasználásával adott acetonitril koncentrációk jelenlétében az effektív dinamikus kioltási állandókat. Egyezésben a CD mérések eredményeivel megállapítottuk, hogy a savas tartományban növekvő acetonitril koncentrációk esetében a kioltó hatás nő, amit az AGP triptofán-részek fokozódó belső mozgásával magyarázunk. A fenti eredményeket is figyelembe véve, savas (ibuprofen), bázikus (propranolol) és semleges (norgesztrel) gyógyszermolekulák felhasználásával új, gyógyszerkönyvi enantiomer tisztaság vizsgálati célra alkalmas, validált módszereket dolgoztunk ki. 2
3 Ph.D. Thesis Investigation of the sorption properties and pharmaceutical application of α 1 acid glycoprotein by liquid chromatography Krisztina Gyimesi-Forrás Prepared under guidance of Prof. Dr. György Szász D.Sc., in the Institute of Pharmaceutical Chemistry, Semmelweis University, School of Ph.D. Studies, in 2001 Programme: Recent trends in pharmaceutical sciences Summary High performance liquid chromatography is the most widely used method for the analytical determination of bio- and drug molecules. The investigation of chiral substances is rapidly developing within that field, because it has been recognized that the pharmacodinamic effect, efficacy and also the toxicity of the enantiomers may differ. The separation and quantitation of the enantiomers and also the determination of the enantiomeric purity are all current and indispensable tasks for the pharmaceutical analysis. The aim of this work was to study the sorption properties of the α 1 acid glycoprotein (AGP) based stationary phase, which may have crutial importance for the enantioselectivity. New binding data are presented for the mechanism of the chromatographic separation, which has not clarified in the literature yet. On the basis of these new findings the composition of the mobile phase for a given analytical separation can be designed, including the preparative separation, as well. Binding data for dioxan, known as a solvent with low dielectric constant, are determined at first time. It was found that the sorption of both acetonitrile and dioxane is ph-dependent: as at ph 7.2 the binding can be characterized by a saturation curve, while at ph 4.0 by a twostep, monotone curve. The ph-dependence of the adsorption has been explained by conformational changes of the selector, which were confirmed by CD-spectroscopic and fluorescence quenching study of the native AGP. In accordance with the binding study by increasing the acetonitril percentage at ph 4,0 a tipical α-helical peak was obsereved in the CD-spectrum. Opposite that at ph 7.2 the increase in the acetonitrile content does not result in any changes in the spectra. Effective dynamic quenching constants of AGP have been determined at given acetonitrile concentrations using 2,2,2-trichloroethanol as fluorescence quencher. In agreement with the results of the CD measurements at ph 4.0 it was found that the degree of quenching enhanced by increasing the amount of the acetonitrile, that can be explained by enhanced exposure of the buried tryptophan residues. Taking these results into account, new optimized and validated HPLC methods have been developed for compendial control in testing the enantiomeric purity of an acidic (ibuprophen), a basic (propranolol) and a neutral (norgestrel) drug molecule. 3
4 TARTALOMJEGYZÉK 1. BEVEZETÉS 6 2. CÉLKITŰZÉSEK 7 3. IRODALMI HÁTTÉR A királis gyógyszervegyületek bevezetésének indokai és korlátai Az enantiomer tisztaság meghatározása Az enantiomer arány közvetlen meghatározásának módszerei Az enantiomerek elválasztásán alapuló módszerek Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás (HPLC) módszerek Királis származékképzést követő elválasztás Királis mozgó fázis additívek alkalmazása Királis állófázisok alkalmazása Az AGP-alapú folyadékkromatográfiás állófázis Az AGP szerkezete Az AGP tulajdonságai Az állófázis előállítása Az állófázis alkalmazása Az állófázis stabilitása KÍSÉRLETI RÉSZ Anyagok, eszközök Vegyszerek, modellvegyületek Eszközök, készülékek Vizsgálati módszerek Az állófázis szorpciós tulajdonságainak gázkromatográfiás vizsgálata Cirkuláris dikroizmus (CD) spektroszkópiás vizsgálat Fluoreszcencia-kioltásos vizsgálat Az enantiomer tisztaság meghatározására szolgáló új módszerek Az S-(+)-ibuprofen vizsgálata Az S-( )-propranolol vizsgálata A D-( )-norgesztrel vizsgálata (3H)-kinazolon származékok enantiomerjeinek elválasztása AZ EREDMÉNYEK ÉS ÉRTÉKELÉSÜK 49 4
5 5.1. Új adatok a Chiral-AGP oszlop szorpciós tulajdonságaihoz A natív AGP CD-spektroszkópiás vizsgálata A natív AGP fluoreszcencia-kioltásos vizsgálata A Chiral-AGP oszlop gyógyszeranalitikai alkalmazásai Az enantiomer tisztaság meghatározására alkalmas 64 módszerek kidolgozása Az S-(+)-ibuprofen enantiomer tisztaságának meghatározása Vizsgálati módszer Validálási teljesítményjellemzők Az S-( )-propranolol enantiomer tisztaságának meghatározása A D-( )-norgesztrel enantiomer tisztaságának meghatározása Új 4(3H)-kinazolon származékok enantiomerjeinek elválasztása MEGBESZÉLÉS Az eredmények összefoglalása Az eredmények hasznosítása KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS IRODALOMJEGYZÉK MELLÉKLET 105 5
6 1. BEVEZETÉS Az azonos konstitúciójú, de eltérő konfigurációjú bio- és gyógyszermolekulákat az élő szervezet teljesen különböző ágensként ismeri fel. Az utóbbi évtizedek gyógyszerkutatásai igazolták, hogy a racém hatóanyagok enantiomerjei hatásának erősségében, esetleg jellegében és toxicitásában is alapvető eltérések mutatkozhatnak. Ennek ellenére jelenleg az tapasztalható, hogy a gyógyszerek terápiás felhasználásában és a gyógyszerkönyvekben továbbra is többségben szerepelnek a racém módosulatok. Ennek oka elsősorban a királis szintézis és az elválasztás költségessége. Ugyanakkor egyre gyakoribb, hogy a farmakológiai hatást hordozó, eutomer forma a hivatalos. Várható és remélhető, hogy a jövőben mind nagyobb számban kerülnek forgalomba a hatásos konfigurációs izomert tartalmazó gyógyszervegyületek, mivel a disztomert minden esetben potenciális szennyezésnek kell tekinteni, amely a szervezet méregtelenítő rendszerét terheli és nemkívánatos mellékhatások előidézője lehet. Következésképpen az enantiomer tisztaság a gyógyszeripari termék piacképességének feltétele, amelynek vizsgálata a gyógyszerellenőrzés szempontjából elengedhetetlen és időszerű feladat. A gyógyszer-törzskönyvező hatóságok az új racém gyógyszermolekulák engedélyezéséhez a nemzetközi irányelveknek megfelelően ma már a farmakokinetikai és a farmakodinámiás paraméterek meghatározását a racém vegyületre és az egyes enantiomerekre külön-külön is előírják. A fentiekből következik, hogy a gyógyszerfejlesztés és a gyógyszerellenőrzés céljára jól reprodukálható, nagy érzékenységű sztereoszelektív analitikai módszerekre van szükség, amelyek közül napjainkban a királis nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia (HPLC) bizonyult legalkalmasabbnak. Az enantiomerek elválasztására jelenleg legelterjedtebb a királis állófázisok használata, közülük igen jelentősek a fehérje alapú, azaz biomimetikus szorbensek. Kézenfekvő volt ugyanis az a felismerés, hogy a szervezetben funkcionáló fehérjéket a kromatográfiás gyakorlatban is felhasználják. Egyike az elsőként alkalmazott szelektoroknak a Hermansson által immobilizált α 1 -savas glikoprotein (AGP), amely különböző kémiai szerkezetű vegyületek enantiomerjeinek elválasztására alkalmas és amelyet napjainkban is széles körben használnak gyógyszerkémiai, valamint gyógyszeranalitikai kutatási célokra. 6
7 2. CÉLKITŰZÉSEK Jelen munka keretében célul tűztük ki a gyakorlatban használt különböző eluens-összetételek mellett, az AGP, ezen sajátos szerkezetű fehérje adszorpciós tulajdonságainak vizsgálatát, ami az enantioszelektivitás szempontjából alapvető fontosságú lehet. E célkitűzést annál inkább indokoltnak tartottuk, mivel az irodalmi adatok alapján az AGP-alapú oszlopon működő elválasztási mechanizmus még kevéssé tisztázott. Mivel ez utóbbi folyamatban igen jelentős tényező lehet a szelektor konformációváltozása, ennek igazolására, ill. követésére, natív AGP felhasználásával, cirkuláris dikroizmus (CD) spektroszkópiás, valamint fluoreszcencia-kioltásos vizsgálatokat terveztünk beiktatni a kötődési meghatározásokkal azonos kísérleti körülmények mellett. A fenti kutatás eredményeit is felhasználva további célul tűztük ki a Chiral- AGP folyadékkromatográfiás oszlop gyógyszeranalitikai felhasználásának szélesítését. E munka keretében különböző kémiai szerkezetű királis gyógyszermolekulák enantiomerjeinek elválasztására alkalmas, új kromatográfiás rendszereket kívántunk kifejleszteni. Arra törekedtünk, hogy a kidolgozott elválasztási módszerek egyaránt alkalmasak legyenek az enantiomerek (1) azonosítására; (2) mennyiségi meghatározására és (3) megfelelő érzékenységű tisztaság vizsgálatára. E célkitűzést azért is tartottuk indokoltnak, mert a gyógyszerkönyvekben az enantiomer tisztaság ellenőrzésére szelektív vizsgálat alig szerepel, általában csupán a fajlagos forgatóképesség értékének meghatározását írják elő. Mivel az AGP-t az említett feladatokra alkalmas királis szelektornak véltük, célul tűztük ki, hogy a kifejlesztett módszerek modellként is szolgáljanak, tehát minél szélesebb körben felhasználhatók, standardizálhatók, gyógyszerkönyvi célra is alkalmasak legyenek. Szem előtt tartottuk azt is, hogy az optimált rendszerek alkalmasak legyenek a gyógyszeranyagok és gyógyszerkészítmények enantiomer-stabilitásának ellenőrzésére, valamint az ipari méretekben történő sztereoszelektiv szintézis reakciólépéseinek és köztitermékeinek nyomonkövetésére, továbbá alapul szolgáljanak az AGP oszlopon végzett preparatív munkához is. 7
8 3. IRODALMI HÁTTÉR A királis gyógyszervegyületek bevezetésének indokai és korlátai Az enantiomerek előállítására és elválasztására alkalmas sztereoszelektív módszerek megjelenésével az elmúlt 20 év alatt a gyógyszerfejlesztés, a gyógyszerkutatás, a gyógyszerellenőrzés és a gyógyszertörzskönyvezés területén a kiralitás jelentősége nagymértékben megnövekedett [1-3]. Az Európai Unió, Japán és az Amerikai Egyesült Államok gyógyszertörzskönyvező hatóságainak a királis vegyületekkel szemben támasztott követelményei 1991 óta a harmonizációs törekvések eredményeként közelítenek egymáshoz [4-6]. Az ICH (International Conference on Harmonization) irányelvek a gyógyszerek nemzetközi piacképességét szolgálják a megfelelő gyógyszerminőség, biztonság és hatásosság szavatolása mellett. A gyógyszer-törzskönyvezéshez szükséges validált, analitikai meghatározásokat a farmakokinetikai és a farmakodinámiás vizsgálatok eredményei együttesen szabják meg és valamennyi gyógyszermolekula esetén a hatóság egyedi elbírálással él. A gyógyszergyártónak azt is meg kell indokolnia, ha az eutomer forma helyett a racém módosulat kifejlesztése mellett dönt. Ilyen okok közé tartozik például: (1) az in vivo egyirányú konfigurációs átalakulás, ami a nem-szteroid gyulladásgátló (NSAID) 2-aril-propionát származékok körében megy végbe. Az ibuprofen S-(+)-enantiomerje in vitro 160-szor hatékonyabb ciklooxigenáz (COX)-gátló, mint az R-( )-antipód, azonban in vivo ez a különbség alig érzékelhető, ami az inaktív R-( )-enantiomer S-(+)-izomerré történő egyirányú, sztereoszelektív metabolikus átalakulásának a következménye [7]; (2) a két enantiomer közel azonos hatáserőssége, amikor az eutomer használata nem jár klinikai előnyökkel, mint pl. a propafenon esetében [8]; (3) az in vivo racemizáció pl. oxazepám [9]; (4) a két izomer egymás hatását erősítő kölcsönhatása pl. a levometorfán analgetikus hatása az antipód jelenlétében szignifikánsan nő, mivel az inaktív dextrometorfán gátolja az eutomer metabolikus eliminációját [10]. Az utóbbi években a hatóságok részéről egyre nagyobb az igény a tiszta eutomer tartalmú gyógyszervegyületek forgalomba hozatala iránt. Ezzel párhuzamosan megfigyelhető, hogy a gyógyszergyárak számos, régebb óta racém vegyületként használt farmakon hatékony enantiomerjének kifejlesztése mellett döntenek, elsősorban 8
9 a kedvezőbb terápiás hatás biztosítása, a káros mellékhatások elkerülése és nem utolsó sorban a piacképesség érdekében. Így például az antihisztamin hatású Zyrtec készítmény ( )-cetrizin izomerjének szedatív mellékhatása a racém módosulathoz képest lényegesen kisebb mértékű, ezért az eutomerrel Európában már fázis III. klinikai vizsgálatokat végeznek [11]. A szelektív szerotonin visszavétel gátló fluoxetin jelenleg szintén racemátként van forgalomban (Prozac ). Az S-fluoxetin az antipódjával azonos hatáserősségű, azonban a szervezetből lassabban ürül ki, a hosszú időtartamú kezelések során pedig nagymértékben kumulálódik [12]. Mivel a rövidebb kiürülési idő növeli az antidepresszív kezelés rugalmasságát, a szélesebb körű felhasználás és a kedvezőbb terápiás hatás biztosítása céljából a fázis II. vizsgálat alatt álló R-fluoxetin forgalomba hozatalát tervezik [11]. Az asztma kezelésére a racém albuterol a világ vezető bronchodilatátor készítménye. Ugyanakkor 1999-ben az Amerikai Egyesült Államok Élelmiszer és Gyógyszerhatósága (FDA) a királis analitikai módszerekkel végzett vizsgálatok eredményei alapján törzskönyvezte az eutomert (levalbuterol), amely biztonságosabbnak és hatékonyabbnak bizonyult [13]. Hasonlóképpen, Németországban forgalomban van az S-ketamin injekciós narkotikum, amelyből a racemáthoz képest alacsonyabb dózis szükséges az intenzívebb anesztetikus hatás miatt. Ennek következtében a hatás gyorsabban lecseng és a zavaró mellékhatások is jelentősen csökkennek [14]. Bár az NSAID 2-aril-propionsav származékok S-enantiomerjeinek COXgátlóként történő alkalmazása jelenleg inkább csak teoretikus értelemben előnyös, Ausztriában és Svájcban az S-(+)-ibuprofen már hivatalos. Az S-izomer rövidebb idő alatt fejti ki hatását; azonban, az újabb kísérleti adatok szerint az R-( )-ibuprofen a racém elegy terápiás hatásához nemcsak az S-formába történő konfigurációs átalakulásával, hanem a COX-2 enzimindukciójának gátlásával is hozzájárul [15]. Mindezek alapján a nem-szteroid gyulladásgátlók tiszta enantiomerként történő felhasználásának ellentmondásai még összetettebbé válnak. 9
10 3.2. Az enantiomer tisztaság meghatározása Amennyiben a gyógyszergyártó a kulcsfontosságú farmakológiai és toxikológiai vizsgálatok alapján az eutomer kifejlesztése mellett dönt, a gyógyszeranyag és a gyógyszerkészítmény enantiomer tisztaságát meg kell határoznia, ami a gyógyszeripari termék piacképességének feltétele. Az enantiomer tisztaság meghatározása napjaink gyógyszeranalitikájának egyik legfontosabb kérdései közé tartozik. Jelentősége alapján az értekezésben az enantiomer tisztaság meghatározására alkalmas módszerek külön alfejezetben kerülnek bemutatásra. Ezek a módszerek két csoportba sorolhatók annak alapján, hogy az enantiomerek arányát közvetlenül vagy elválasztásuk után mérik. Az enantiomer arány többféle módon is kifejezhető. Legelterjedtebb az enantiomer felesleg (e.e.), az enantiomer tisztaság (EP) vagy az optikai tisztaság (P) deklarálása, amelyeket általában százalékban adnak meg [16]. másképpen felírva e.e.% = 100 (x -x) / (x +x), ahol x > x, (1) e.e.% = 100 (2x -1), (2) ahol x a feleslegben lévő, x a szennyező (minor) enantiomer móltörtje. EP% = 100 x / (x + x) (3) P% = 100 [α] / [α] max (4) ahol [α] a vizsgálandó vegyület fajlagos optikai forgatóképessége; [α] max az optikailag tiszta enantiomer fajlagos forgatóképessége. 10
11 Az enantiomer arány közvetlen meghatározásának módszerei Ezek a módszerek az enantiomer összetétel meghatározásához nem teszik szükségessé a sztereoizomerek elválasztását. Ebbe a csoportba tartozik a polarimetria, a cirkuláris dikroizmus (CD) és az optikai rotációs diszperzió (ORD) spektroszkópia, a nukleáris magrezonancia spektroszkópia (NMR), valamint a gyakorlatban gyógyszeranalitikai célra kevésbé alkalmazott izotópjelzéses meghatározás, a differencia pásztázó (scanning) kalorimetria (DSC) és számos enzim-technika. Az NMR meghatározás kivételével valamennyi fent említett módszer a tiszta enantiomer standard mért értékén alapul, ezért az összehasonlításhoz a tiszta enantiomer meghatározására is szükség van. Polarimetria. A legrégebben és a legszélesebb körben alkalmazott metodika, amely ma is a gyógyszerkönyvek általános módszere az eutomer gyógyszervegyületek tisztaságának ellenőrzésére. Ennél a módszernél - mivel az optikai forgatóképesség (α) függ az oldatkoncentrációtól, a rétegvastagságtól, az oldószertől, a hőmérséklettől és a mérés hullámhosszától - a vizsgálati paraméterek standardizálása szükséges. [α] C nm = 100 α l c (5) ahol α a mért optikai forgatóképesség (m ); l a rétegvastagság (dm); c az oldat koncentrációja (g/100ml). Mivel az optikai tisztaság kísérleti úton meghatározott kiroptikai tulajdonságokon alapul, számos metodikai hibát hordozhat, így a meghatározás az enantiomer összetételre vonatkozóan tetemes hibával járhat. Ezért általában sokkal megbízhatóbbak azok a módszerek, amelyek az egyes enantiomereket különböző ágensként ismerik fel. Mindezek ellenére a gyógyszerellenőrzésben csak egy fontos fizikai mutatószám, a fajlagos forgatóképesség értékének meghatározása terjedt el. A gyógyszerkönyvek ezeket a vizsgálatokat a legtöbb esetben a Na D -vonalán vagy a Hg-lámpa néhány 11
12 közeli spektrumvonalán végeztetik, amely hullámhosszon végzett mérések nem elég érzékenyek és az anyagra sem igazán jellemzőek. A meghatározás anyagigénye nagy, milligramm nagyságrendű. Mivel a módszer a királis molekulák optikai aktivitásán alapul, az alacsony fajlagos forgatóképességű izomerek esetén alkalmazhatósága az igen kis érzékenység miatt korlátozott. Így pl. a levodopa fajlagos forgatóképessége csak -12, ami nem elegendő az optikai tisztaság ellenőrzéséhez. Formaldehides ciklizációt követően viszont a képződő tetrahidro-izokinolin származék fajlagos forgatóképessége 10-szerese a levodopáénak és a polarimetriás analízis elvégezhető [17]. Cirkuláris dikroizmus (CD) és optikai rotációs diszperzió (ORD). Az enantiomer szennyezések érzékenyebb meghatározására szolgálnak azok a kiroptikai módszerek (CD, ORD), amelyekkel vagy közvetlenül a kiroptikai jelek nagyságából vagy HPLC-s detektorként alkalmazva határozható meg az enantiomer arány. A módszer alkalmazhatóságának feltétele azonban a királisan perturbált molekulaszerkezet. [18]. Az igen kis moláris ellipticitású vegyületek előnytelen kiroptikai jelet adnak, ami megfelelő származékképzést tesz szükségessé. Engle és mtsai [19] pszeudoefedrin és efedrin enantiomer keverék enantiomer tisztaságát határozták meg Co(II)-tartarát komplexeik ellipticitásának mérése alapján. A reakció egyszerű ligandumcsere a tartarát és a királis farmakon között, amelynek során a CD spektrum hullámhossza a látható fény tartományába tolódik el. Amennyiben kettős CD/UV detektálással a minta ellipticitása és abszorbanciája egyszerre mérhető, a (6) egyenlet segítségével számolható a királis kémiai anyagra jellemző anizotrópia faktor (g), illetve a vele arányos G-érték [20]. 12
13 G = [ θ ] c l =3298 g (6) ε c l ahol ε a moláris abszorbancia (l x mol -1 x cm -1 ); c a koncentráció (mol x l -1 ); l az optikai úthossz (cm); [Θ] a moláris ellipticitás ( x cm 2 x decimol -1 ). A G számértéke a két enantiomer esetén azonos abszolút értékű, ellentétes előjelű paraméter, amely keverékek esetében, adott hullámhosszon, az enantiomer összetétel függvénye. A G-érték abban a tartományban független a koncentrációtól, ahol mind az ellipticitás, mind az abszorpció a koncentráció lineáris függvénye. Az enantiomer tisztaság (EP) a fenti paraméterek felhasználásával a következő összefüggés szerint számolható: EP % = 100 G G tiszta mért (7) ahol G tiszta a szennyezésmentes többségi enantiomer; G mért a vizsgálandó minta mérése alapján számított G-érték. Következésképpen ennél a módszernél is szükség van a standard érték meghatározására. A fenti összefüggés alapján határozták meg Horváth és mtsai [21] a fenilglicin és a mandulasav enantiomer összetételét. Bertucci és Salvadori [22] a 3-metilciklopentolát és a 3-metil-dezmetil-diazepám esetében 0,1 %-os enantiomer szennyezést mutattak ki. Nukleáris magrezonancia spektroszkópia (NMR). Ez a módszer abban az esetben tesz különbséget az egyes enantiomerek között, ha azok alkalmas királis reagenssel kölcsönhatásba lépve diasztereomereket képeznek. A legrégebbi, Mislow és Mosher [23] által kidolgozott módszer homokirális származékképzők felhasználásán alapul. Az enantiomerek közvetlen meghatározása két módon valósítható meg, amelyek közül a Pirkle és mtsai [24] által 1966-ban bevezetett, királis oldószerek alkalmazása terjedt el 13
14 elsőként. Különösen gyakori az (R)-( )-2,2,2-trifluor-1-fenil-etanol használata. A királis oldószer az egyes enantiomerek magjai között kémiai eltolódást indukál, amelynek megfelelően a csúcsok integrálásával az enantiomer arány közvetlenül fejezhető ki. A módszer előnye, hogy az oldószer enantiomer tisztasága nem befolyásolja az integrálás eredményét vagyis a csúcs-arányt, csak a csúcsok kémiai eltolódásaira van hatással. A speciális műszerigény azonban még nem teszi lehetővé a módszer rutinanalitikai felhasználását. A királis shift reagensek közül igen jelentősek a 6-os koordinációs számú lantanoida kelátkomplexek. Mint gyenge Lewis savak, az elektron-donor csoportokat tartalmazó vegyületekkel kölcsönhatásba lépnek, ami a kölcsönhatás közelében lévő magok alacsonyabb térerő irányába történő eltolódását okozza. Az eltolódás mértéke a diasztereomer-komplex stabilitása, valamint a mag és a paramágneses átmeneti fém ion (Eu 3+, Pr 3+ ) közötti távolság függvénye [25]. Hanna és mtsai [26] (S)-( )-timolol maleát enantiomer összetételét határozták meg prazeodímium (Pr (3+) ) shift reagenssel, ahol a szennyező antipód kimutatási határa 2%-nak, a visszanyerés 99,5±1,17%-nak adódott. Izotópjelzéses technika. Ez a módszer kétféleképpen alkalmazható az enantiomer tisztaság meghatározására. Egyik esetben jelzett racém vegyületet (izotóp-higításos módszer), míg a másik esetben jelzett tiszta enantiomert adnak az ismeretlen összetételű mintakomponenshez [27]. Mindkét eljárásnál két paraméter, a fajlagos optikai forgatóképesség, valamint az izotóp tartalom meghatározása szükséges. Az előbbi polarometriás, az utóbbi tömegspektrometriás úton vagy szcintillációs számláló felhasználásával határozható meg, ami a módszer alkalmazhatóságát jelentősen korlátozza. Enzim reakción alapuló meghatározás. Régóta ismert, hogy számos enzimreakció nagyfokú sztereospecificitást mutat [28]. Pasteur [29] már 1856-ban a racém borkősav reszolválásához Penicillium glaucum penészgombát használt, ami csak a (+)- izomerrel lépett reakcióba. Amennyiben a királis enzimmolekulák az optikai antipódokkal lényegesen eltérő sebességgel képeznek diasztereomer vegyületpárokat, a reakció az alacsonyabb aktiválási energiájú enantiomerre nézve sztereospecifikus és analitikai célra is felhasználható. A módszert a gyakorlatban elsősorban aminosavak 14
15 meghatározására alkalmazzák, amely a szennyező enantiomer enzimatikus oxidációján vagy dekarboxilezésén alapul. A D - és az L - aminosav-oxidázok felhasználásával a többségi izomerben 0,1% minor komponens is kimutatható [30]. Ezzel szemben csak az L-aminosavak dekarboxilezése katalizálható enzimes úton, ezért a dekarboxiláz enzimekkel csak a D-aminosavak enantiomer tisztasága határozható meg Az enantiomerek elválasztásán alapuló módszerek Ebbe a csoportba tartoznak a gyakorlati szempontból legjelentősebb kromatográfiás és azokkal rokon elválasztástechnikai módszerek. Disszertációs munkámban a nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia (HPLC) alkalmazása kerül részletesebb bemutatásra, ezért a vékonyrétegkromatográfia (TLC) [31], a gázkromatográfia (GC) [32], a szuperkritikus folyadékkromatográfia (SCF) [33] és a kapilláris elektroforézis (CE) [34,35] tárgyalásától eltekintünk, csupán néhány összefoglaló munkát említünk meg. A GC technika alkalmazhatóságának e területen is határt szab, hogy a mintakomponens hőstabilitását, valamint megfelelő illékonyságát teszi szükségessé. A GC-MS kapcsolt technika megjelenése azonban az érzékenység növelése révén a GC gyógyszeranalitikai felhasználási körét is szélesíti. A szuperkritikus folyadékok viszkozitása a hagyományos értelemben vett folyadékok viszkozitásához képest lényegesen alacsonyabb, ami a mintakomponens gyorsabb diffúzióját teszi lehetővé. Ennek megfelelően az SCF módszerrel az analízis idő jelentős mértékben lerövidíthetőhető, a kromatográfiás felbontás (R s ) csökkenése nélkül. A gyakorlatban legelterjedtebb mozgó fázis a széndioxid, állófázisként a fehérje és a cellulóz-triacetát-alapú kolonnák kivételével valamennyi kereskedelmi forgalomban lévő királis HPLC-s oszlop felhasználható. A kapilláris elektroforézis a gyógyszeranalitika területén az 1990-es évek kezdetén jelent meg és a folyamatos térhódítás jellemzi, jelenleg azonban érzékenysége és pontossága még nem éri el a HPLC módszerét [36]. A királis HPLC területén szerzett tapasztalatokat felhasználva az enantiomerek elválasztására és meghatározására a CE számos módozata alakult ki, amelyeket az 1. táblázatban foglaltuk össze. 15
16 1. táblázat. A CE királis elválasztásra alkalmas módozatai CE módozat Királis szelektor kapilláris zónaelektroforézis (CZE) ciklodextrinek (CD) [37], koronaéterek [38] elektokinetikus kapilláris kromatográfia (EKC) -micelláris EKC (MEKC) -ciklodextrinnel módosított MEKC (CD- MEKC) -töltéssel rendelkező ciklodextrin származékkal módosított EKC (CD-EKC) -affinitás EKC (AEKC) -felületaktív anyagok pl. epesavak és sóik [39] -ciklodextrinek: pl. hidroxi-etil-β-ciklodextrin [40] -pl. 2-O-karboxi-metil-β-ciklodextrin [41] -fehérjék pl. α 1 -savas glikoprotein, humán és szarvasmarha szérum albumin [42], -ionizált poliszacharidok pl. heparin [43], -makrociklusos antibiotikumok pl. rifampicin, amellyel az izoproterenolban 0,1% enantiomer szennyezést határoztak meg [44]. kapilláris gélelektroforézis (CGE) poliakrilamid gélbe ágyazott ciklodextrinnel töltött kapilláris pl. hidroxi-etil-βcd nel a terbutalin kevesebb, mint 1%-ban jelenlévő enantiomer szennyezését mérték meg [45]. kapilláris izotachoforézis (CITP) ciklodextrinek kapilláris elektrokromatográfia (CEC) A kapilláris falára vagy szilárd hordozóra immobilizált királis szelektorok pl. α 1 -savas glikoprotein [46]. Várható, hogy a jövőben a módszer egyre jelentősebb lesz az enantiomer tisztaság meghatározásának területén is, hiszen anyagigénye kicsi, az analízis idő általában rövid, ami jelentős költségmegtakarításhoz vezethet. Az enantiomer szennyezés érzékeny és pontos meghatározására valamennyi előzőleg említett módszer közül napjainkban legelterjedtebb a királis HPLC, amely az utóbbi időkben folyamatos dinamikus fejlődésen ment keresztül. A módszer a minőségellenőrzés területén mind a minor (szennyező) enantiomer mennyiségének, mind a gyógyszermolekula sztereoizomer-stabilitásának rutinszerű vizsgálatára is alkalmas. A dinamikus metodikai fejlődést jellemzi, hogy a királis HPLC többféle változata is kialkalult. 16
17 Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás (HPLC) módszerek Királis származékképzést követő elválasztás A nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia megjelenésekor használt állófázisok akirálisok voltak, ezért az enantiomerek elválasztása csak ún. közvetett vagy indirekt úton, a kromatográfiás elválasztást megelőzően, oszlop előtti királis származékképzéssel volt megvalósítható [47]. Elsőként Nakanishi és mtsa [48] használta az NMR spektroszkópia területén korábban sikerrel alkalmazott királis származékképzőt, a Mosher reagenst terpén sztereoizomer keverék analízisére. Az irodalomban számos összefoglaló közlemény részletesen ismerteti a királis származékképző reagenseket és reakciókat [49-51]. Ezek azonban elsősorban az elválasztás általános és elméleti kérdéseivel, valamint biológiai minták vizsgálatával foglalkoznak annak ellenére, hogy a leírt módszerek többsége alapvetően alkalmas lehet az enantiomer tisztaság meghatározására is. Legjelentősebb reagensek például az acil-kloridok és anhidridek (pl. (S)-(+)-naproxen-klorid, (R,R)-O,O-diacetilborkősavanhidrid), az izocianátok (pl. (R)-α-metil-benzil-izocianát), az izotiocianátok (pl. 2,3,4,6-tetra-O-acetil-β-D-glukopiranozil-izotiocianát) és egyéb szerkezetű vegyületek (pl. a fluoreszcens tulajdonságú (S)-(+)-2-tercier-butil-2-metil-1,3- benzodioxolán-4-karbonsav), amellyel diacil-glicerin származékok pikomol mennyiségű enantiomer szennyezését határozták meg [52]. Az indirekt HPLC módszer hátránya, hogy alkalmazásához számos feltételnek kell egyidejűleg teljesülnie: (1) Az-enantiomer tisztaság meghatározásához a homokirális származékképzőnek 100%-ban kell tartalmaznia a tiszta enantiomert, amit a következő egyenlet szemléltet: (R + S) + R + (S ) RR + SR + RS + SS I. II. III. IV. ahol (R+S) a racém vegyület, R a királis származékképző, S a származékképzőben jelenlévő szennyező antipód, I-IV. a reakció során keletkezett kovalens kötésű diasztereomer származékok. 17
18 A királis származékképzőben szennyező komponensként jelenlévő S -antipód a III. és IV. diasztereomer származékok képződéséhez vezet, amelyek a két főkomponenssel (I. és II.) enantiomer viszonyban állnak. Mivel az akirális kromatográfiával csak a diasztereomerek választhatók el egymástól, az I.-IV. vegyületeket tartalmazó minta analízise során két csúcs jelenik meg, amelyek közül az egyik kromatográfiás csúcs az I. és III., a másik pedig a II. és IV. vegyületeket tartalmazza. Következésképpen a módszer az (R+S) racém molekula enantiomer összetételére nem ad megfelelő értéket. Ezért a királis származékképző vegyület enantiomer tisztaságát az analitikai protokoll vizsgálat során minden esetben meg kell határozni. (2) A mennyiségi meghatározás pontosságának előfeltétele, hogy a reakció alatt sem a farmakon, sem a királis származékképző racemizációja vagy epimerizációja ne következzen be és a származékképzés kvantitatívan végbemenjen [53]. (3) A megfelelő funkciós csoportot tartalmazó enantiomerek és a királis reagens között végbemenő kémiai reakciók sebessége eltérő lehet, ezért a kinetikus reszolúció elkerülésére a származékképzőt feleslegben kell alkalmazni. A szükséges reagens mennyiséget, valamint a reakció időt pontosan meg kell határozni, ami a módszer kifejlesztésének időigényét jelentősen megnöveli. A módszer leglényegesebb előnyei közé tartozik, hogy alkalmas kromofór vagy fluorofór csoport bevitelével egyidejűleg a detektálás érzékenysége és szelektivítása is nagyságrendekkel növelhető [54]. Fontos azonban megjegyezni, hogy a keletkezett diasztereomer származékok UV vagy fluoreszcencia-jellemzői nem feltétlenül egyeznek meg, ezért a módszervalidálás során azt ellenőrizni kell. Például a propranolol enantiomerek (S)-(-)-fluoro-naproxen-izocianáttal képzett származékainak csúcs-terület aránya a fluorimetriás detektálás során 0,97-1,03 között változott [55]. A tisztaságvizsgálat eredményességét és érzékenységét befolyásoló lényeges szempont, hogy a szennyező csúcs a főcsúcs előtt eluálódjon. A módszer további nagy előnye, hogy általában szintetikus úton a királis származékképző vegyületek mindkét enantiomerje előállítható, így a kívánt elúciós sorrend a megfelelő reagens használatával biztosítható. 18
19 Királis mozgó fázis additívek alkalmazása Az enantiomerek hagyományos normál vagy fordított fázisú oszlopon történő elválasztásának másik lehetséges módja a királis mozgó fázis additívek alkalmazása. A módszert a direkt HPLC közé sorolják, mivel az átmeneti diasztereomer adduktumok nem az oszlop előtt, hanem közvetlenül a kromatográfiás rendszerben keletkeznek. A legjelentősebbek királis reagensek a ligandumcserés fémkomplexek [56], az ionpárképzők [57], a zárványkomplex-képzők [58] és a fehérjemolekulák [59]. Az enantiomerek elválasztása valamennyi esetben a diasztereomer adduktumok különböző stabilitási, valamint az álló-és mozgófázisra vonatkoztatott eltérő megoszlási állandóin alapul ben Karger [60] alkalmazott elsőként fémkomplexeket danzil-aminosavenantiomerek fordított fázisú ligandumcserén alapuló kromatográfiás elválasztására. A módszert Davankov és mtsai [61] vizsgálták részleteiben az aminosav-antipódok analitikai, valamint preperatív elválasztása céljából. Az L-DOPA enantiomer tisztaságának meghatározására Aso [62] L-fenilalanin-Cu II komplex tartalmú eluenst használt. A ligandumcserés módszer alkalmazhatósága kelátkomplex kialakítására képes elektron-donor atomokat tartalmazó vegyületek (aminosavak, savamidok, aminoalkoholok, hidroxisavak stb.) körére korlátozódik. Pettersson és Schill [63] az ionpár kromatográfia területén szerzett tapasztalataik felhasználásával vezették be királis ionpárképzőként a (+)-10-kámforszulfonsavat amino-alkohol enantiomerek normál fázisú rendszerben történő elválasztására. Ugyancsak sikerrel alkalmazták Szepesi és mtsai [64] mind a (+), mind a (-)-10- kámforszulfonsavat a vinkamin nyolc sztereoizomerjének elválasztására és a gyógyászatban felhasznált (+)-cisz-izomer enantiomer tisztaságának meghatározására. Az optimált rendszerben a minor komponens kimutatási határa a (-)-cisz-vinkamin esetén 1%-nak, a (-)-cisz-apovinkaminsav-etilészter esetén 0,1%-nak adódott. E módszer esetében is az enantiomer tisztaság meghatározása szempontjából jelentős, hogy az optikailag tiszta ionpárképző antipódjának megválasztása lényegesen befolyásolja a szelektivítást, azaz a reagens ellentétes antipódját használva a diasztereomer ionpár elúciós sorrendje felcserélhető. A kromatográfiás rendszert meghatározó változók nagy száma és a komponensek retenciójára gyakorolt sokszor 19
20 ellentétes irányú hatása miatt azonban az elválasztás kísérleti paraméterei csak körülményesen optimálhatók. A legáltalánosabban használt királis mozgó fázis additívek a zárványkomplexképzők körébe tartozó ciklodextrinek (CD) és származékaik. Az α-cd-t hat, a β-cd-t hét, a γ-cd-t nyolc glükopiranóz-egység építi fel, ami a ciklodextrin molekulák hidrofób üregének eltérő méretét eredményezi. Az enantioszelektív elválasztás azon alapul, hogy az antipódok hidrofób részükkel a zárványkomplex-képző molekula toroidális üregébe illeszkednek és a sztérikus konfigurációtól függően a királis atom közelében lévő poláris szubsztituensek az üreg nyílásánál elhelyezkedő szekunder alkoholos hidroxil-csoportokkal hidrogén-hidas kölcsönhatást alakítanak ki [65]. Mindezek alapján a különböző szerkezetű vegyületek enantiomerjeinek elválasztásához megfelelő méretű királis szelektorok szükségesek. A levonorgesztrelben (D-( )-norgesztrel) Gazdag és mtsai [66] γ-cd felhasználásával 0,1% L-(+)-norgesztrel szennyezést mutattak ki. A fehérje alapú királis állófázisok előfutáraiként már a mozgó fázisban oldott protein molekulák ígéretes királis szelektornak bizonyultak [59]. Az ilyen típusú kromatográfiás rendszer a széleskörű alkalmazhatóságon túlmenően a szelektív farmakon-protein kölcsönhatás vizsgálatára is egyaránt alkalmas lehet. A humán szérum albumin és az α 1 -savas glikoprotein azonban rendkívül drága, ezért királis szelektorként a fehérje molekulák napjainkban szinte kizárólag immobilizált formában kerülnek felhasználásra. Jóllehet, a nagyszámú, eltérő tulajdonságú additív folytán a királis mozgó fázison alapuló HPLC módszer széleskörű felhasználást nyerhetne, mivel azonban a királis szelektorok az elválasztást követően nem nyerhetők vissza, az esetek nagy részében a módszer igen költségesnek bizonyul. Mindez pedig a már ismertetett egyéb korlátozó tényezőkkel együtt a királis folyadékkromatográfiás állófázisok kifejlesztéséhez, illetve elterjedéséhez vezetett. 20
21 Királis állófázisok alkalmazása A királis állófázisokon (CSP) végzett közvetlen enantiomer elválasztás a legszélesebb körben alkalmazott folyadékkromatográfiás módszer, amit e területen megjelent több száz közlemény is igazol. Meglepő módon azonban az enantiomer tisztaság meghatározásával foglalkozó dolgozatok száma még napjainkban is elenyésző. A szilikagél hordozóhoz kötött királis szelektor lehet kismolekulájú, szintetikus enantiomer, diasztereomer vagy természetes ill. szintetikus eredetű királis polimer, amelyek közül legelterjedtebbek a cellulóz, a ciklodextrin és a glikoprotein alapú oszlopok. A királis felismerés (elválasztás) az enantiomer molekulák és az immobilizált királis szelektor közötti átmeneti diasztereomer komplexek kialakulásán alapul. Termodinamikai szempontból ez akkor lehetséges, ha a két enantiomer királis szelektorral történő asszociációjának szabadenergia értékében eltérés mutatkozik, vagyis G 0. Az alacsonyabb szabadenergia értékű enantiomer-csp komplex enantiomerje magasabb retenciós idővel vándorol, míg a nagyobb szabadenergia értékű komplex antipódja rövidebb idő alatt eluálódik az állófázisról. Az enantiomerek álló - és mozgó fázisra vonatkoztatott egyensúlyi állandóival (K R ill. K S ) felírva a farmakon-csp kölcsönhatáson alapuló szabadenergia változás értékeit ( G o ) (8), majd a két antipód esetén kifejezve a szabadenergia változások különbségét ( G o ) (9) a következő egyenletek írhatók fel [32]: G = -RTlnK (8) G = G R - G S amennyiben K R > K S (9) - G = RTlnK R / K S = RTlnk R / k S = RTlnα (10) ahol k a retenciós faktor; α a szelektivitási faktor / enantioszelektivitás. A fentiek alapján a diasztereomer komplexek szabadenergia értékei közötti különbség a kromatográfiás rendszer sztereoszelektivításának nagyságát, míg a 21
22 vizsgálandó vegyület és a CSP között fellépő valamennyi királis és akirális kölcsönhatás eredő összege a mért retenciós időt határozza meg. Napjainkban már több, mint 100-féle királis kolonna van kereskedelmi forgalomban és számuk várhatóan a jövőben tovább emelkedik. [67]. Az irodalmi adatok azt tükrözik, hogy a királis állófázisokon végzett meghatározások száma rohamosan növekszik, hiszen a megfelelő szelektorok a racém vegyületek gyors és viszonylag egyszerű, rutinszerű analízisét teszik lehetővé. Többek között olyan molekulákét is, amelyek királis származékképzése a funkciós csoportok hiánya (pl.: szénhidrogének) vagy a könnyű racemizálódás miatt nem valósítható meg [68,69]. Az átmeneti diasztereomer komplexen belül a királis megkülönböztetés a Dalgliesh-féle hipotézis [70] szerint az ún. három-pontos kölcsönhatáson alapul, ami az enantiomer és a királis környezet között fennálló, minimum három, egyidejű kölcsönhatás eredménye. Mivel a kromatográfiás elválasztás nagyszámú kölcsönhatások eredőjének tekinthető, egy 10 5 elméleti tányérszámú oszlopon az enantiomerek és a királis állófázis között létrejövő kölcsönhatás már mindössze 42 J/mol szabadenergia érték különbség esetén alapvonal-elválsztást eredményez [71]. Bár számos CSP elválasztási mechanizmusa ismert, a legtöbb, elsősorban a természetes eredetű királis szelektor működését egyszerre több mechanizmus is befolyásolja, amelyek részleteiben még tisztázásra várnak [68]. A királis állófázisokon végzett meghatározások nemcsak analitikai, de preparatív szempontból is igen nagy jelentőségűek [72,73]. A gyógyszerfejlesztés korai fázisában egyre növekvő számban használnak preparatív és félpreparatív királis kolonnákat az új, hatékony királis gyógyszermolekulák tiszta enantiomerjeinek kinyerése céljából, ami új eszközként szolgál a kifejlesztés alatt álló királis vegyületek antipódjainak farmakológiai és toxikológiai vizsgálataihoz. Az eltérő szerkezetű állófázisok különféle lehetőségeket biztosítanak az analitikus számára a kívánt feladat megoldásához. Wainer [2] a királis kolonnákat öt alapvető csoportba osztotta az enantiomer és a CSP között létrejövő kölcsönhatások szerint. A kiterjedt kutatások eredményeként azonban folyamatosan jelennek meg újabb típusú királis szelektorok, amelyek nem minden esetben sorolhatók egyértelműen a Wainer-féle csoportokba. Említést érdemelnek közülük az Armstrong [74] által kifejlesztett makrociklusos antibiotikum (rifampicin, vankomicin és teikoplamin) alapú 22
23 szorbensek, ahol az elválasztás mechanizmusa leginkább a zárványkomplex-képzéshez hasonlítható, azonban a π-π, a dipólus-dipólus és a hidrogén-hidas kölcsönhatások mellett jelentős az ionos kölcsönhatások szerepe is. Teikoplamin alapú állófázison Doležalová és Tkaczyková [75] levodopa és metildopa, Cheung és mtsai [76] aril-oxifenoxi-propánsav enantiomer tisztaságának meghatározására alkalmas módszert dolgoztak ki. Pirkle és munkacsoportja [77] az NMR kutatások során szerzett tapasztalatok felhasználásával, az ún. három-pontos hipotézis alapján fejlesztette ki 1979-ben az első királis állófázist, amely a Wainer-féle osztályozás szerint az I. csoportba tartozik. A CSP-enantiomer komplex kialakításában π-π töltésátvitel, dipólus-dipólus kölcsönhatás, valamint hidrogén-hidas kötés vesz részt. A Pirkle-típusú normál fázisú kolonnák többsége kisméretű, szintetikus úton előállított aminosav származékot tartalmaz, ahol az egyik funkciós csoport a retenciós folyamatban döntő szerepet játszó töltésátviteli komplex kialakítása miatt aromás. A legismertebb π-akceptor szelektor a 3,5-dinitro-benzoil-fenilglicin, amely π- donor aromás gyűrűt tartalmazó racém vegyületek elválasztására alkalmas [78]. A legújabb kutatások eredményeként π-donor és π-akceptor csoportokat egyaránt tartalmazó szelektorok kerültek kifejlesztésre, mint pl.: a Whelk-O 1 oszlop, amelyet eredetileg az NSAID vegyületek enantiomerjeinek elválasztására szintetizáltak, jelenleg azonban szélesebb körű felhasználást nyernek, mint az eredeti Pirkle-típusú fázisok [79,80]. A II. csoportba tartozó állófázisok működésében a másodlagos kölcsönhatások mellett jelentős szerepet játszik a zárvány-komplex kialakulás. Ez a mechanizmus jellemző a cellulóz alapú szorbensekre, amelyek közül elsőként a cellulóz részleges hidrolízisével előállított természetes eredetű polimer, a mikrokristályos cellulóz-triacetát (MCTA) került felhasználásra [81]. A szorbens nagymértékű összenyomhatósága és inhomogén részecskemérete a hátrányos tulajdonságok közé tartozik, azonban nagy a kapacitása, alacsony az előállítási költsége és különféle szerkezetű, akár funkciós csoportot nem tartalmazó vegyületek elválasztására is alkalmas. Francotte és mtsai [82] behatóan vizsgálták az elválasztás mechanizmusát. Eredményeik igazolták Hesse és Hagel [83] eredeti elképzeléseit, miszerint a királis felismerés szempontjából alapvető 23
24 jelentőségű, hogy az enantiomerek a poliszacharid láncot felépítő glükóz egységek meghatározott térbeli elrendeződésű szerkezetébe beilleszkedjenek. A cellulóz-triacetát (CTA) immobilizálásával az állófázis hatékonysága és stabilitása jelentősen megnövekedett [84]. Okamoto és mtsai [85] további cellulóz, amilóz és más szénhidrátpolimer tribenzoát, valamint trisz-fenil-karbamát származékok előállításában vettek részt. Az irodalmi adatok alapján az enantiomer tisztaság meghatározására igen elterjedt a cellulóz trisz-(3,5-dimetil-fenil-karbamát) (Chiralcel OD) oszlop, amelynek felhasználásával pl.: Rustum és mtsa [86] a görcsgátló hatású R-tiagabin-klorid izomerben jelenlévő minor komponens kimutatási határát a többségi enantiomer mellett 0,03%-nak állapította meg. A gyógyszerkönyvek közül elsőként az Angol Gyógyszerkönyv (B.P.1998) ellenőrizteti az enantiomer tisztaságot királis HPLC módszerrel, amely az R-szelegilin vizsgálatára Chiralcel OD oszlopot ír elő [87a]. A cikkely követelménye szerint a kromatográfiás felbontás értéke (R S ) 1,5, a szennyező antipód legfeljebb 0,5%-ban lehet jelen. Az Angol Gyógyszerkönyv azonos követelményt támaszt az (S)-dexklórfenil-amin-maleát esetében is, állófázisként azonban trisz-(3,5-dimetil-fenil-karbamát)- amilózt alkalmaztat [87b]. Ez utóbbi vegyület 1999-ben hivatalossá vált az Európai Gyógyszerkönyvben (Ph.Eur.III.) is, amely az enantiomer tisztaság ellenőrzését a B.P.1998 megfelelő cikkelye szerint végezteti [88]. A III. csoport állófázisainál az enantioszelektivitás alapja a mintakomponensnek a szelektor királis üregébe történő megfelelő illeszkedése, a host-guest zárványkomplex képzés. A csoport klasszikus képviselője az Armstrong [89] által kifejlesztett, fordított fázisú rendszerben működő ciklodextrin (CD) alapú állófázis. Az elválasztás mechanizmusát a fejezetben tárgyaltuk. A zárvány-komplex kialakulásának feltétele a mintakomponens királis centrumának közvetlen közelében lévő aromás gyűrű jelenléte. A kereskedelemben forgalomban lévő α-cd főleg az egy aromás gyűrűt tartamazó enantiomerek elválasztására alkalmas, a β-cd a naftil-csoport vagy a többszörösen szubsztituált fenil gyűrű jelenléte esetén biztosít megfelelő szelektivítást, míg a γ-cd a nagykiterjedésű vegyületek, pl. a szteroidok meghatározására alkalmas. A szélesebb körű felhasználhatóság céljából a cellulóz alapú fázisokkal analóg módon a ciklikus oligoszacharid molekulát felépítő glükózegységek szekunder 24
25 alkoholos hidroxil-csoportjainak származékképzésével további CD-alapú oszlopokat is kifejlesztettek [90]. A koronaéter alapú zárvány-komplex képző állófázis belső felülete hat darab oxigén jelenléte miatt poláris, míg külső felszíne apoláris tulajdonságú. A szelektor primer amino-csoportot tartalmazó enantiomerek elválasztására alkalmas, ahol a királis atomon vagy a közvetlen közelében lévő másik szénatomon az aromás gyűrű szubsztitúció a szelektivítást fokozza. Az enantiomerek királis üregbe történő illeszkedését a sztérikus kölcsönhatások mellett a protonált amino-csoport jelenléte segíti elő. Az oxigén atomok nemkötő elektronpárjai a szubsztituált ammónium ionokkal hidrogén-hidak kialakításával képeznek stabil komplexet [91]. Mivel mind a balra, mind a jobbra forgató koronaéter alapú állófázis kereskedelmi forgalomban van, lehetőség nyílik a szennyező antipód meghatározásakor a kedvező elúciós sorrend biztosítására. A királis felismerés mechanizmusa alapján ugyanebbe a csoportba tartoznak a Blaschke és mtsa [92] által kifejlesztett helikális poliakrilamid és polimetakrilamid alapú állófázisok, amelyek közül említést érdemel a poli-(n-akriloil-s-fenilalaninetilészter) származék [68]. A IV. típusú állófázisokat a Davankov [93] által meghonosított ligandumcserés folyadékkromatográfiás szorbensek alkotják. Az elválasztás - amint a fejezetben ismertetettük - az eltérő stabilitású, reverzibilis terner diasztereomer fémkomplexek kialakulásán alapul. A komplex központi fémionja rendszerint Cu 2+, a királis komplexképző ligandum egy kelátképzésre alkalmas, lehetőség szerint ciklusos α-aminosav, L-prolin vagy L-hidroxiprolin, amelyek a Cu 2+ -vel igen hatékony királis szelektornak bizonyultak [94,95]. A módszer alkalmazása jelenleg csak a meglehetősen stabil kelátkomplexek kialakítására képes α-aminosav, valamint α-hidroxisav enantiomerek analízisére korlátozódik. A Wainer-féle osztályozás szerint az V. csoportba tartoznak a fehérje alapú állófázisok. A királis felismerésben egyaránt jelentősek a hidrofób és a poláris kölcsönhatások, azonban az elválasztás mechanizmusa valamennyi eddig tárgyalt szelektorral összehasonlítva a legösszetettebb. A fehérjék a biológiai rendszerekben különböző szerepet töltenek be. Többek között receptorok, mediátorok és enzimek 25
26 építőkövei, ezen kívül részt vesznek a farmakonok aktív transzport útján történő felvételében, szállításában, ami a gyógyszermolekulák reverzibilis kötődésén alapul és számos esetben nagyfokú sztereoszelektivítást mutat [96]. Például a nem szelektív β- szimpatolitikus hatású propranolol in vitro sztereoszelektíven kötődik a humán α 1 savas glikoproteinhez (AGP) és a humán szérum albuminhoz (HSA), azonban míg a humán AGP-hez az S-( )-propranolol kötődik nagyobb affinitással [97], addig a HSA esetén fordított szelektivítást figyeltek meg [98]. A fehérjék azon tulajdonsága, hogy a farmakonokat reverzibilis módon, sztereoszelektíven képesek kötni, protein alapú királis állófázisok kifejlesztésére használható fel. A jelenleg forgalomban lévő állófázisok közül említendők a szilikagélre immobilizált AGP-t [99], HSA-t [100], szarvasmarha szérum albumint [101], csirketojás fehérje részéből izolált ovomukoidot (OVM) [102] és mikrobális eredetű cellobiohidrolázt [103] tartalmazó oszlopok. A fenti szelektorok egyik legelőnyösebb tulajdonsága, hogy egymástól lényegesen eltérő szerkezetű vegyületek esetében is alkalmazhatók. Azonban míg a cellobiohidroláz bázikus és semleges, az albumin savas és semleges karakterű molekulák analízisére használható, addig az AGP és az OVM egyaránt alkalmas savas, bázikus és semleges tulajdonságú farmakonok enantiomerjeinek elválasztására. Jelentőségüket mutatja az is, hogy az Európai Gyógyszerkönyv Gyógyszerkönyvi Bizottságának döntése alapján a kálcium-levofolinát - amely a Ph. Eur. IV. kiadásában lesz hivatalos enantiomer tisztaságának ellenőrzésére a megfelelő cikkely Chiral-HSA oszlopot ír elő. A gyógyszerkönyv az alábbi követelményeket támasztja: R S 1,5, a disztomer legfeljebb 0,5%-ban lehet jelen [104]. Bár a fehérje alapú állófázisok nagyfokú sztereoszelektivítást mutatnak, az egységnyi tömegű szilikagél hordozóra immobilizált viszonylag kis mennyiségű szelektor miatt az állófázis kapacitása meglehetősen alacsony. Napjainkban azonban az újabb technológiai eljárások a félpreparatív kolonnák megjelenéséhez vezettek, amelyekkel az optimált kromatográfiás rendszerből az egyes enantiomerek 100%-os királis tisztasággal nyerhetők ki [67]. A szelektorok komplex szerkezeti felépítése miatt a királis felismerést egyidejűleg többféle kromatográfiás mechanizmus határozza meg, amelyek máig sem ismertek részleteiben. A mintakomponensek kémiai szerkezetének és a mozgó fázis 26
Kromatográfiás módszerek
Kromatográfiás módszerek Mi a kromatográfia? Kromatográfia ugyanazon az elven működik, mint az extrakció, csak az egyik fázis rögzített ( állófázis ) és a másik elhalad mellette ( mozgófázis ). Az elválasztást
RészletesebbenAnalitikai módszerek a 20. század közepén és az ezredfordulón
Analitikai módszerek a 20. század közepén és az ezredfordulón Módszer 1950 Ezredforduló Klasszikus módszerek Gravimetria, titrimetria (vizes közegben, indikátoros végpontjelzéssel) Titrimetria (vizes,
RészletesebbenNagyhatékonyságú folyadékkromatográfia (HPLC)
Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia (HPLC) Kromatográfiás módszerek osztályba sorolása 2 Elúciós technika A mintabevitel ún. dugószerűen történik A mozgófázis a kromatogram kifejlesztése alatt folyamatosan
RészletesebbenAdatgyőjtés, mérési alapok, a környezetgazdálkodás fontosabb mőszerei
GazdálkodásimodulGazdaságtudományismeretekI.Közgazdaságtan KÖRNYEZETGAZDÁLKODÁSIMÉRNÖKIMScTERMÉSZETVÉDELMIMÉRNÖKIMSc Tudományos kutatásmódszertani, elemzési és közlési ismeretek modul Adatgyőjtés, mérési
RészletesebbenAz elválasztás elméleti alapjai
Az elválasztás elméleti alapjai Az elválasztás során, a kromatogram kialakulása közben végbemenő folyamatok matematikai leirása bonyolult, ezért azokat teljességgel nem tárgyaljuk. Cél: * megismerni az
RészletesebbenÁttekintő tartalomjegyzék
4 Áttekintő tartalomjegyzék Új trendek a kromatográfiában (Gyémánt Gyöngyi, Kurtán Tibor, Lázár István) 5 Új technikák és alkalmazási területek a tömegspektrometriában (Gyémánt Gyöngyi, Kéki Sándor, Kuki
RészletesebbenCiklodextrinek alkalmazása folyadékkromatográfiás módszerekben Dr. Szemán Julianna
Ciklodextrinek alkalmazása folyadékkromatográfiás módszerekben Dr. Szemán Julianna Cyclolab Ciklodextrin Kutató-Fejlesztő Laboratórium Kft. 197. Budapest, Illatos u. 7. cyclolab@cyclolab.hu www.cyclolab.hu
RészletesebbenSzerves Kémiai Problémamegoldó Verseny
Szerves Kémiai Problémamegoldó Verseny 2015. április 24. Név: E-mail cím: Egyetem: Szak: Képzési szint: Évfolyam: Pontszám: Név: Pontszám: / 3 pont 1. feladat Egy C 4 H 10 O 3 összegképletű vegyület 0,1776
Részletesebben9. Hét. Műszeres analitika Folyadékkromatográfia Ionkromatográfia Gélkromatográfia Affinitás kromatográfia Gázkromatográfia. Dr.
Bioanalitika előadás 9. Hét Műszeres analitika Folyadékkromatográfia Ionkromatográfia Gélkromatográfia Affinitás kromatográfia Gázkromatográfia Dr. Andrási Melinda Kromatográfia Nagy hatékonyságú, dinamikus
Részletesebbenhttp://apps.usp.org/app/uspnf/columnsdb.html Miben segít a lgd ph diagram? Mi olvasható le a diagramról? Szükséges-e ph kontrol (ha igen milyen ph-n dolgozzunk)? Milyen kromatográfiás technikát alkalmazzunk
RészletesebbenVéralvadásgátló hatású pentaszacharidszulfonsav származék szintézise
Véralvadásgátló hatású pentaszacharidszulfonsav származék szintézise Varga Eszter IV. éves gyógyszerészhallgató DE-GYTK GYÓGYSZERÉSZI KÉMIAI TANSZÉK Témavezető: Dr. Borbás Anikó tanszékvezető, egyetemi
RészletesebbenKromatográfia Bevezetés. Anyagszerkezet vizsgálati módszerek
Kromatográfia Bevezetés Anyagszerkezet vizsgálati módszerek Pannon Egyetem Mérnöki Kar Anyagszerkezet vizsgálati módszerek Kromatográfia 1/ 37 Analitikai kémia kihívása Hagyományos módszerek Anyagszerkezet
RészletesebbenSzerves Kémiai Problémamegoldó Verseny
Szerves Kémiai Problémamegoldó Verseny 2015. április 24. Név: E-mail cím: Egyetem: Szak: Képzési szint: Évfolyam: Pontszám: Név: Pontszám: / 3 pont 1. feladat Egy C 4 H 10 O 3 összegképletű vegyület 0,1776
RészletesebbenCélkitűzés/témák Fehérje-ligandum kölcsönhatások és a kötődés termodinamikai jellemzése
Célkitűzés/témák Fehérje-ligandum kölcsönhatások és a kötődés termodinamikai jellemzése Ferenczy György Semmelweis Egyetem Biofizikai és Sugárbiológiai Intézet Biokémiai folyamatok - Ligandum-fehérje kötődés
RészletesebbenEnzim-katalizált (biokatalitikus) reakcióutak tervezése. Schönstein László Enzimtechnológiai Fejlesztő Csoport Debrecen, November 11.
Enzim-katalizált (biokatalitikus) reakcióutak tervezése Schönstein László Enzimtechnológiai Fejlesztő Csoport Debrecen, 2016. November 11. ENANTIOMEREK JELENTŐSÉGE A GYÓGYSZERKUTATÁSBAN Mik az enantiomerek?
RészletesebbenVeszprémi Egyetem, Vegyipari Mveleti Tanszék. Veszprém, 2006.január 13.
Királis vegyületek elválaszt lasztása sa szimulált lt mozgóréteges kromatográfi fiával Veszprémi Egyetem, Vegyipari Mveleti Tanszék Dr. Szánya Tibor Témavezet Gál Gábor PhD hallgató Veszprém, 2006.január
RészletesebbenHagyományos HPLC. Powerpoint Templates Page 1
Hagyományos HPLC Page 1 Elválasztás sík és térbeli ábrázolása Page 2 Elválasztás elvi megoldásai 3 kromatográfiás technika: frontális kiszorításos elúciós Page 3 Kiszorításos technika minta diszkrét mennyisége
RészletesebbenCiklodextrin komplexképzésen alapuló királis elválasztás vizsgálata kapilláris elektroforézissel
Ciklodextrin komplexképzésen alapuló királis elválasztás vizsgálata kapilláris elektroforézissel Sohajda Tamás Cyclolab Ciklodextrin Kutató-Fejlesztő Laboratórium Kft. 1097. Budapest, Illatos u. 7. cyclolab@cyclolab.hu
RészletesebbenSztereokémia, királis molekulák: (királis univerzum, tükörképi világ?) memo: a földi élet királis elemek sokasága!
Sztereokémia, királis molekulák: (királis univerzum, tükörképi világ?) memo: a földi élet királis elemek sokasága! (pl. a földön az L-aminosavak vannak túlnyomó többségben. - Az enantiomer szelekció, módját
RészletesebbenA CIRKULÁRIS DIKROIZMUS /CD/ ÉS KOMBINÁLT CD/UV
A CIRKULÁRIS DIKROIZMUS /CD/ ÉS KOMBINÁLT CD/UV SPEKTROSZKÓPIA FELHASZNÁLÁSI LEHETŐSÉGEI A KÉMIAI ANALÍZISBEN DR. HORVÁTH PÉTER SEMMELWEIS EGYETEM GYÓGYSZERÉSZI KÉMIAI INTÉZET BUDAPEST 2000 1 TARTALOMJEGYZÉK
RészletesebbenENANTIOMEREK KIRÁLIS ELVÁLASZTÁSA ÉS MEGKÜLÖNBÖZTETÉSE
ENANTIOMEREK KIRÁLIS ELVÁLASZTÁSA ÉS MEGKÜLÖNBÖZTETÉSE DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI Készítette: Berkecz Róbert Témavezetők: Péter Antal egyetemi tanár Ilisz István egyetemi adjunktus SZEGEDI TUDOMÁNYEGYETEM
RészletesebbenAMINO-CSOPORTOT TARTALMAZÓ VEGYÜLETEK ENANTIOMERJEINEK ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS FOLYADÉKKROMATOGRÁFIÁS MÓDSZEREKKEL. PhD értekezés tézisei
AMINO-CSOPORTOT TARTALMAZÓ VEGYÜLETEK ENANTIOMERJEINEK ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS FOLYADÉKKROMATOGRÁFIÁS MÓDSZEREKKEL PhD értekezés tézisei Sztojkov-Ivanov Anita Szegedi Tudományegyetem Gyógyszerkémiai Intézet
RészletesebbenFordított fázisú ionpár- kromatográfia ( Reversed Phase Ion-Pair Chromatography, RP-IP-HPLC )
Fordított fázisú ionpár- kromatográfia ( Reversed Phase Ion-Pair Chromatography, RP-IP-HPLC ) Az ionos vagy ionizálható vegyületek visszatartása az RP-HPLC-ben kicsi. A visszatartás növelésére és egyúttal
RészletesebbenSZAK: KÉMIA Általános és szervetlen kémia 1. A periódusos rendszer 14. csoportja. a) Írják le a csoport nemfémes elemeinek az elektronkonfigurációit
SZAK: KÉMIA Általános és szervetlen kémia 1. A periódusos rendszer 14. csoportja. a) Írják le a csoport nemfémes elemeinek az elektronkonfigurációit b) Tárgyalják összehasonlító módon a csoport első elemének
RészletesebbenDózis-válasz görbe A dózis válasz kapcsolat ábrázolása a legáltalánosabb módja annak, hogy bemutassunk eredményeket a tudományban vagy a klinikai
Dózis-válasz görbe A dózis válasz kapcsolat ábrázolása a legáltalánosabb módja annak, hogy bemutassunk eredményeket a tudományban vagy a klinikai gyakorlatban. Például egy kísérletben növekvő mennyiségű
RészletesebbenKROMATOGRÁFIÁS VIZSGÁLATI MÓDSZEREK
KROMATOGRÁFIÁS VIZSGÁLATI MÓDSZEREK KÖRNYEZETMÉRNÖK HAGYOMÁNYOS KÉPZÉS TANTÁRGYI KOMMUNIKÁCIÓS DOSSZIÉ MISKOLCI EGYETEM MŐSZAKI ANYAGTUDOMÁNYI KAR KÉMIAI TANSZÉK Miskolc, 2008. Tartalomjegyzék 1. Tantárgyleírás,
RészletesebbenIgény a pontos minőségi és mennyiségi vizsgálatokra: LC-MS/MS módszerek gyakorlati alkalmazása az élelmiszer-analitikában
: LC-MS/MS módszerek gyakorlati alkalmazása az élelmiszer-analitikában Tölgyesi Ádám Hungalimentária, Budapest 2017. április 26-27. Folyadékkromatográfiás hármas kvadrupol rendszerű tandem tömegspektrometria
RészletesebbenKatalízis. Tungler Antal Emeritus professzor 2017
Katalízis Tungler Antal Emeritus professzor 2017 Fontosabb időpontok: sósav oxidáció, Deacon process 1860 kéndioxid oxidáció 1875 ammónia oxidáció 1902 ammónia szintézis 1905-1912 metanol szintézis 1923
RészletesebbenEnantiomer elválasztás és felismerés nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás rendszerekben
Enantiomer elválasztás és felismerés nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás rendszerekben DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI Készítette: Pataj Zoltán Témavezetők: Dr. Péter Antal egyetemi tanár Dr. habil Ilisz
RészletesebbenEnantiomerelválasztás ciklodextrin alapú királis szelektorokkal DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI
Enantiomerelválasztás ciklodextrin alapú királis szelektorokkal DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI Készítette: Fodor Gábor Témavezetők: Dr. Péter Antal egyetemi tanár Dr. Ilisz István habil. egyetemi adjunktus
Részletesebben& Egy VRK módszer stabilitásjelz képességének igazolása
& Egy VRK módszer stabilitásjelz képességének igazolása Árki Anita, Mártáné Kánya Renáta Richter Gedeon Nyrt., Szintetikus I. Üzem Analitikai Laboratóriuma, Dorog E-mail: ArkiA@richter.hu Összefoglalás
Részletesebben5. Az adszorpciós folyamat mennyiségi leírása a Langmuir-izoterma segítségével
5. Az adszorpciós folyamat mennyiségi leírása a Langmuir-izoterma segítségével 5.1. Átismétlendő anyag 1. Adszorpció (előadás) 2. Langmuir-izoterma (előadás) 3. Spektrofotometria és Lambert Beer-törvény
RészletesebbenSzerves kémiai analízis TANTÁRGYI KOMMUNIKÁCIÓS DOSSZIÉ
BSC ANYAGMÉRNÖK SZAK VEGYIPARI TECHNOLÓGIAI SZÁMÁRA KÖTELEZŐ TANTÁRGYI KOMMUNIKÁCIÓS DOSSZIÉ MISKOLCI EGYETEM MŰSZAKI ANYAGTUDOMÁNYI KAR KÉMIAI INTÉZET Miskolc, 2016 1 Tartalomjegyzék 1. Tantárgyleírás,
RészletesebbenSZERVES KÉMIAI ANALÍZIS
SZERVES KÉMIAI ANALÍZIS ANYAGMÉRNÖK ALAPKÉPZÉS TANTÁRGYI KOMMUNIKÁCIÓS DOSSZIÉ MISKOLCI EGYETEM MŐSZAKI ANYAGTUDOMÁNYI KAR KÉMIAI TANSZÉK Miskolc, 2008. Tartalomjegyzék 1. Tantárgyleírás, tárgyjegyzı,
RészletesebbenI. Szerves savak és bázisok reszolválása
A pályázat négy éve alatt a munkatervben csak kisebb módosításokra volt szükség, amelyeket a kutatás során folyamatosan nyert tapasztalatok indokoltak. Az alábbiakban a szerződés szerinti bontásban foglaljuk
RészletesebbenMűszeres analitika. Abrankó László. Molekulaspektroszkópia. Kémiai élelmiszervizsgálati módszerek csoportosítása
Abrankó László Műszeres analitika Molekulaspektroszkópia Minőségi elemzés Kvalitatív Cél: Meghatározni, hogy egy adott mintában jelen vannak-e bizonyos ismert komponensek. Vagy ismeretlen komponensek azonosítása
RészletesebbenTRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL
TRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL Az egyes biomolekulák izolálása kulcsfontosságú a biológiai szerepük tisztázásához. Az affinitás kromatográfia egyszerűsége, reprodukálhatósága
RészletesebbenAMIKACINUM. Amikacin
07/2012:1289 AMIKACINUM Amikacin C 22 H 43 N 5 O 13 M r 585,6 [37517-28-5] DEFINÍCIÓ 6-O-(3-Amino-3-dezoxi-α-D-glükopiranozil)-4-O-(6-amino-6-dezoxi-α-D-glükopiranozil)-1-N-[(2S)-4- amino-2-hidroxibutanoil]-2-dezoxi-d-sztreptamin.
RészletesebbenSEMMELWEIS EGYETEM GYÓGYSZERTUDOMÁNYOK DOKTORI ISKOLA. Doktori (Ph.D.) tézisek
SEMMELWEIS EGYETEM GYÓGYSZERTUDMÁYK DKTRI ISKLA Doktori (Ph.D.) tézisek A differencia cirkuláris dikroizmus (CD) spektroszkópia alkalmazása gyógyszervegyületek meghatározásában. Sztereoizomerek vizsgálata
RészletesebbenGYÓGYSZERÉSZI KÉMIA KOLLOKVIUMI TÉTELEK 2008
GYÓGYZEÉZI KÉMIA KOLLOKVIUMI TÉTELEK 2008 I.1. Gyógyszerkönyvek, gyógyszerkönyvi minőség. Ph. Hg. VIII. I. és II. kötet. Általános és egyedi cikkelyek fogalma. Egyedi cikkelyek szerkezeti felépítése. I.2.
RészletesebbenGyógyszerészi kémia szigorlati tételek 2015/2016
Gyógyszerészi kémia szigorlati tételek 2015/2016 1. Szedato-hipnotikus és anxiolitikus hatású vegyületek. A barbitursavszármazékok néhány képviselője. A benzodiazepinek típusai, példákkal. Szerkezet, fizikai
RészletesebbenPOLISZACHARID ÉS CIKLOFRUKTÁN TÍPUSÚ
Doktori (Ph.D.) értekezés tézisei POLISZACHARID ÉS CIKLOFRUKTÁN TÍPUSÚ KIRÁLIS ÁLLÓFÁZISOK ALKALMAZÁSA ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSÁRA Készítette: Aranyi Anita Témavezetők: Péter Antal egyetemi tanár Ilisz
RészletesebbenZárójelentés. ICP-OES paraméterek
Zárójelentés Mivel az előző, 9. részfeladat teljesítésekor optimáltuk a mérőrendszer paramétereit, ezért most a korábbi optimált paraméterek mellett, a feladat teljesítéséhez el kellett végezni a módszer
RészletesebbenFotoszintézis. fotoszintetikus pigmentek Fényszakasz - gránum/sztrómalamella. Sötétszakasz - sztróma
Fotoszintézis fotoszintetikus pigmentek Fényszakasz - gránum/sztrómalamella Sötétszakasz - sztróma A növényeket érı hatások a pigmentösszetétel változását okozhatják I. Mintavétel (inhomogén minta) II.
RészletesebbenAerogél alapú gyógyszerszállító rendszerek. Tóth Tünde Anyagtudomány MSc
Aerogél alapú gyógyszerszállító rendszerek Tóth Tünde Anyagtudomány MSc 2016. 04. 22. 1 A gyógyszerszállítás problémái A hatóanyag nem oldódik megfelelően Szelektivitás hiánya Nem megfelelő eloszlás A
RészletesebbenIntra- és intermolekuláris reakciók összehasonlítása
Intra- és intermolekuláris reakciók összehasonlítása Intr a- és inter molekulár is r eakciok összehasonlítása molekulán belüli reakciók molekulák közötti reakciók 5- és 6-tagú gyűrűk könnyen kialakulnak.
RészletesebbenNEHÉZFÉMEK ELTÁVOLÍTÁSA IPARI SZENNYVIZEKBŐL Modell kísérletek Cr(VI) alkalmazásával növényi hulladékokból nyert aktív szénen
NEHÉZFÉMEK ELTÁVOLÍTÁSA IPARI SZENNYVIZEKBŐL Modell kísérletek Cr(VI) alkalmazásával növényi hulladékokból nyert aktív szénen Készítette: Battistig Nóra Környezettudomány mesterszakos hallgató A DOLGOZAT
RészletesebbenAl-Mg-Si háromalkotós egyensúlyi fázisdiagram közelítő számítása
l--si háromalkotós egyensúlyi fázisdiagram közelítő számítása evezetés Farkas János 1, Dr. Roósz ndrás 1 doktorandusz, tanszékvezető egyetemi tanár Miskolci Egyetem nyag- és Kohómérnöki Kar Fémtani Tanszék
RészletesebbenSzabó Dénes Molekulák és reakciók három dimenzióban
Szabó Dénes Molekulák és reakciók három dimenzióban Alkímia ma, 2012. április 19. Egy kis tudománytörténet -O azonos kémiai szerkezet -O Scheele (1769) -O különböző tulajdonságok -O Kestner (1822) borkősav
RészletesebbenVersenyző rajtszáma: 1. feladat
1. feladat / 5 pont Jelölje meg az alábbi vegyület valamennyi királis szénatomját, és adja meg ezek konfigurációját a Cahn Ingold Prelog (CIP) konvenció szerint! 2. feladat / 6 pont 1887-ben egy orosz
RészletesebbenSzteroid gyógyszeranyagok tisztaságvizsgálata kromatográfiás technikákkal
A doktori értekezés tézisei Szteroid gyógyszeranyagok tisztaságvizsgálata kromatográfiás technikákkal Bagócsi Boglárka Kémia Doktori Iskola Analitikai, kolloid- és környezetkémia, elektrokémia Témavezető:
Részletesebben& Többkomponens gyógyszerkészítmények vizsgálata UV spektroszkópiával
& Többkomponens gyógyszerkészítmények vizsgálata UV spektroszkópiával Csábi Júlia Semmelweis Egyetem Gyógyszerésztudományi Karának hallgatója Bevezetés A gyógyszergyártás egyik, ha nem legfontosabb eleme
RészletesebbenAz anyagi rendszer fogalma, csoportosítása
Az anyagi rendszer fogalma, csoportosítása A bemutatót összeállította: Fogarasi József, Petrik Lajos SZKI, 2011 1 1 A rendszer fogalma A körülöttünk levő anyagi világot atomok, ionok, molekulák építik
RészletesebbenSERTRALINI HYDROCHLORIDUM. Szertralin-hidroklorid
Sertralini hydrochloridum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.7.1-1 SERTRALINI HYDROCHLORIDUM Szertralin-hidroklorid 01/2011:1705 javított 7.1 C 17 H 18 Cl 3 N M r 342,7 [79559-97-0] DEFINÍCIÓ [(1S,4S)-4-(3,4-Diklórfenil)-N-metil-1,2,3,4-tetrahidronaftalin-1-amin]
RészletesebbenDR. FEKETE JENŐ. 1. ábra: Átviteli módok HPLC, GC ill. CE technikák esetén
KÖRNYEZETI ANALITIKA I. DR. FEKETE JENŐ JEGYZET A 2003/04 ES TANÉV ŐSZI FÉLÉVÉNEK 3. ELŐADÁSÁHOZ. (02. 24) 1. KAPILLÁRIS ELEKTROFORÉZIS (CE) KÉSZÍTETTE: KELEMEN PÉTER, KORDA ANDRÁS A korábbi előadások
RészletesebbenAnyagszerkezet vizsgálati módszerek
Kromatográfia Folyadékkromatográfia-tömegspektrometria Anyagszerkezet vizsgálati módszerek Pannon Egyetem Mérnöki Kar Anyagszerkezet vizsgálati módszerek Kromatográfia 1/ 25 Folyadékkromatográfia-tömegspektrometria
RészletesebbenMozgófázisok a HILIC-ban. Módszer specifikus feltétel: kevésbé poláris, mint az állófázis vagy a víz Miért a víz?
Dr Fekete Jenı: A folyadékkromatográfia újabb fejlesztési irányai - HILIC Mozgófázisok a HILIC-ban Módszer specifikus feltétel: kevésbé poláris, mint az állófázis vagy a víz Miért a víz? Mitıl l poláris
RészletesebbenCD-spektroszkópia. Az ORD spektroskópia alapja
CD-spektroszkópia Az ORD spektroskópia alapja - A XIX. század elején Biot megfigyelte, hogy bizonyos, a természetben előforduló szerves anyagok a lineárisan polarizált fény síkját elforgatják. - 1817-ben
RészletesebbenPer-Form Hungária Kft Budapest, Komócsy u. 52. Felnőttképz. nyilv. szám: Akkredit. lajstromszám: AL-1666/
XXV. Kromatográfiás iskola Azonosító szám: 5400, műszaki technikusi képesítések (szakmai tanfolyamok felnőttképzés keretében) Tájékoztató felnőttképzési programról A Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi
RészletesebbenCLOXACILLINUM NATRICUM. Kloxacillin-nátrium
Cloxacillinum natricum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.7-1 04/2007:0661 CLOXACILLINUM NATRICUM Kloxacillin-nátrium C 19 H 17 ClN 3 NaO 5 S.H 2 O M r 475,9 DEFINÍCIÓ Nátrium-[(2S,5R,6R)-6-[[[3-(2-klórfenil)-5-metilizoxazol-4-il]karbonil]amino]-
RészletesebbenUV-sugárzást elnyelő vegyületek vizsgálata GC-MS módszerrel és kimutatásuk környezeti vízmintákban
UV-sugárzást elnyelő vegyületek vizsgálata GC-MS módszerrel és kimutatásuk környezeti vízmintákban Készítette: Kovács Tamás Környezettudomány szakos hallgató Témavezető: Zsigrainé Dr. Vasanits Anikó adjunktus
RészletesebbenA fehérje triptofán enantiomereinek meghatározása
A fehérje triptofán enantiomereinek meghatározása Dr. Csapó János A kutatás célja megfelelő analitikai módszer kidolgozása a triptofán-enantiomerek meghatározására, és a módszer alkalmazhatóságának vizsgálata.
RészletesebbenVILÁGÍTÓ GYÓGYHATÁSÚ ALKALOIDOK
VILÁGÍTÓ GYÓGYHATÁSÚ ALKALIDK Biczók László, Miskolczy Zsombor, Megyesi Mónika, Harangozó József Gábor MTA Természettudományi Kutatóközpont Anyag- és Környezetkémiai Intézet Hordozóanyaghoz kötődés fluoreszcenciás
RészletesebbenA CIRKULÁRIS DIKROIZMUS /CD/ ÉS A KOMBINÁLT CD/UV
A CIRKULÁRIS DIKROIZMUS /CD/ ÉS A KOMBINÁLT CD/UV SPEKTROSZKÓPIA FELHASZNÁLÁSI LEHETŐSÉGEI A KÉMIAI ANALÍZISBEN PH.D. ÉRTEKEZÉS TÉZISEI HORVÁTH PÉTER TÉMAVEZETŐ: DR. GERGELY ANDRÁS A KÉMIAI TUDOMÁNY KANDIDÁTUSA
RészletesebbenA kromatográfia és szerepe a sokalkotós rendszerek minőségi és mennyiségi jellemzésében. Dr. Balla József 2019.
A kromatográfia és szerepe a sokalkotós rendszerek minőségi és mennyiségi jellemzésében. Dr. Balla József 2019. 1 Kromatográfia 2 3 A kromatográfia definíciója 1. 1993 IUPAC: New Unified Nomenclature for
RészletesebbenAbszorpciós spektroszkópia
Tartalomjegyzék Abszorpciós spektroszkópia (Nyitrai Miklós; 2011 február 1.) Dolgozat: május 3. 18:00-20:00. Egész éves anyag. Korábbi dolgozatok nem számítanak bele. Felmentés 80% felett. A fény; Elektromágneses
RészletesebbenBiocidok és kábítószerek mérési tanulmánya a gázkromatográfia- tömegspektrometria felhasználásával: elemzésük környezeti vízmintákban
Biocidok és kábítószerek mérési tanulmánya a gázkromatográfia- tömegspektrometria felhasználásával: elemzésük környezeti vízmintákban Készítette: Balogh Zsanett Edit Környezettudomány MSc Témavezető: Perlné
RészletesebbenSzemináriumi feladatok (alap) I. félév
Szemináriumi feladatok (alap) I. félév I. Szeminárium 1. Az alábbi szerkezet-párok közül melyek reprezentálják valamely molekula, vagy ion rezonancia-szerkezetét? Indokolja válaszát! A/ ( ) 2 ( ) 2 F/
RészletesebbenVezető kutató: Farkas Viktor OTKA azonosító: 71817 típus: PD
Vezető kutató: Farkas Viktor TKA azonosító: 71817 típus: PD Szakmai beszámoló A pályázat kutatási tervében kiroptikai-spektroszkópiai mérések illetve kromatográfiás vizsgálatok, ezen belül királis HPLC-oszloptöltet
RészletesebbenA TÖMEGSPEKTROMETRIA ALAPJAI
A TÖMEGSPEKTROMETRIA ALAPJAI web.inc.bme.hu/csonka/csg/oktat/tomegsp.doc alapján tömeg-töltés arány szerinti szétválasztás a legérzékenyebb módszerek közé tartozik (Nagyon kis anyagmennyiség kimutatására
RészletesebbenAlapösszef. és s azok lasztásrasra
Alapösszef sszefüggések és s azok hatása az elválaszt lasztásrasra (A kromatográfia felosztása. Retenciós idő, reletív retenciós idő,visszatartási tényező, szelektivitás, elválasztási tényező, csúcsszimmetria,
RészletesebbenLACTULOSUM. Laktulóz
Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-1 01/2009:1230 LACTULOSUM Laktulóz és C* epimere C 12 H 22 O 11 M r 342,3 [4618-18-2] DEFINÍCIÓ 4-O-(β-D-galaktopiranozil)-D-arabino-hex-2-ulofuranóz- Tartalom: 95,0 102,0
RészletesebbenKlórbenzol lebontásának vizsgálata termikus rádiófrekvenciás plazmában
Klórbenzol lebontásának vizsgálata termikus rádiófrekvenciás plazmában Fazekas Péter Témavezető: Dr. Szépvölgyi János Magyar Tudományos Akadémia, Természettudományi Kutatóközpont, Anyag- és Környezetkémiai
RészletesebbenÉlelmiszerek. mikroszennyezőinek. inek DR. EKE ZSUZSANNA. Elválasztástechnikai Kutató és Oktató Laboratórium. ALKÍMIA MA november 5.
Élelmiszerek mikroszennyezőinek inek nyomában DR. EKE ZSUZSANNA Elválasztástechnikai Kutató és ktató Laboratórium ALKÍMIA MA 2009. november 5. Kémiai veszélyt lytényezők Természetesen előforduló mérgek
RészletesebbenMICONAZOLI NITRAS. Mikonazol-nitrát
Miconazoli nitras Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.7.3-1 01/2012:0513 MICONAZOLI NITRAS Mikonazol-nitrát, HNO 3 C 18 H 15 Cl 4 N 3 O 4 M r 479,1 [22832-87-7] DEFINÍCIÓ [1-[(2RS)-2-[(2,4-Diklórbenzil)oxi]-2-(2,4-diklórfenil)etil]-1H-imidazol-3-ium]-nitrát.
Részletesebben1. feladat. Versenyző rajtszáma:
1. feladat / 4 pont Válassza ki, hogy az 1 és 2 anyagok közül melyik az 1,3,4,6-tetra-O-acetil-α-D-glükózamin hidroklorid! Rajzolja fel a kérdésben szereplő molekula szerkezetét, és értelmezze részletesen
RészletesebbenGyógyszerkutatás és gyógyszerfejlesztés. Az új molekulától a gyógyszerig
Gyógyszerkutatás és gyógyszerfejlesztés Az új molekulától a gyógyszerig A gyógyszerkutatás idő-és költségigénye 10-14 évi kutató-és fejlesztő munka mintegy egymilliárd dollár ráfordítás (egy 2001-ben induló
RészletesebbenGYÓGYSZERÉSZI KÉMIA KOLLOKVIUMI TÉTELEK 2011/2012
GYÓGYZEÉZI KÉMIA KOLLOKVIUMI TÉTELEK 2011/2012 I.1. Gyógyszerkönyvek, gyógyszerkönyvi minőség. Ph. Hg. VIII. I., II. és III. kötet. Általános és egyedi cikkelyek fogalma. Egyedi cikkelyek szerkezeti felépítése.
RészletesebbenR R C X C X R R X + C H R CH CH R H + BH 2 + Eliminációs reakciók
Eliminációs reakciók Amennyiben egy szénatomhoz távozó csoport kapcsolódik és ugyanazon a szénatomon egy (az ábrákon vel jelölt) bázis által protonként leszakítható hidrogén is található, a nukleofil szubsztitúció
RészletesebbenSZABADALMI IGÉNYPONTOK. képlettel rendelkezik:
SZABADALMI IGÉNYPONTOK l. Izolált atorvasztatin epoxi dihidroxi (AED), amely az alábbi képlettel rendelkezik: 13 2. Az l. igénypont szerinti AED, amely az alábbiak közül választott adatokkal jellemezhető:
RészletesebbenLakos István WESSLING Hungary Kft. Zavaró hatások kezelése a fémanalitikában
Lakos István WESSLING Hungary Kft. Zavaró hatások kezelése a fémanalitikában AAS ICP-MS ICP-AES ICP-AES-sel mérhető elemek ICP-MS-sel mérhető elemek A zavarások felléphetnek: Mintabevitel közben Lángban/Plazmában
Részletesebben2.4. Az enantiomer összetétel meghatározás módszerei 1
2.4. z enantiomer összetétel meghatározás módszerei 1 Enantiomer keverékek összetételének jellemzésére leggyakrabban alkalmazott mód a feleslegben lévő enantiomer százalékos összetételének megadása. (100*X
RészletesebbenOrszágos Középiskolai Tanulmányi Verseny 2010/2011. tanév Kémia II. kategória 2. forduló Megoldások
ktatási Hivatal rszágos Középiskolai Tanulmányi Verseny 2010/2011. tanév Kémia II. kategória 2. forduló Megoldások I. FELADATSR 1. C 6. C 11. E 16. C 2. D 7. B 12. E 17. C 3. B 8. C 13. D 18. C 4. D 9.
RészletesebbenZÁRÓJELENTÉS. Fény hatására végbemenő folyamatok önszerveződő rendszerekben
ZÁRÓJELENTÉS Fény hatására végbemenő folyamatok önszerveződő rendszerekben Jól megválasztott anyagok elegyítésekor, megfelelő körülmények között másodlagos kötésekkel összetartott szupramolekuláris rendszerek
RészletesebbenKötések kialakítása - oktett elmélet
Kémiai kötések Az elemek és vegyületek halmazai az atomok kapcsolódásával - kémiai kötések kialakításával - jönnek létre szabad atomként csak a nemesgázatomok léteznek elsődleges kémiai kötések Kötések
RészletesebbenVízben oldott antibiotikumok (fluorokinolonok) sugárzással indukált lebontása
Vízben oldott antibiotikumok (fluorokinolonok) sugárzással indukált lebontása Doktori beszámoló 6. félév Készítette: Tegze Anna Témavezető: Dr. Takács Erzsébet 1 Antibiotikumok a környezetben A felhasznált
RészletesebbenMinőségbiztosítás, validálás
Minőségbiztosítás, validálás Előzetes tanulmányok (BSc): Műszeres analitika gyakorlatok inorg.unideb.hu/oktatas Kapcsolódó tanulmányok (MSc): Minőségbiztosítás című előadás Tételek: 1. Minőségbiztosítási
RészletesebbenAz egyensúly. Általános Kémia: Az egyensúly Slide 1 of 27
Az egyensúly 6'-1 6'-2 6'-3 6'-4 6'-5 Dinamikus egyensúly Az egyensúlyi állandó Az egyensúlyi állandókkal kapcsolatos összefüggések Az egyensúlyi állandó számértékének jelentősége A reakció hányados, Q:
RészletesebbenSzemináriumi feladatok (alap) I. félév
Szemináriumi feladatok (alap) I. félév I. Szeminárium 1. Az alábbi szerkezet-párok közül melyek reprezentálják valamely molekula, vagy ion rezonancia-szerkezetét? Indokolja válaszát! A/ ( ) 2 ( ) 2 F/
RészletesebbenA tisztítandó szennyvíz jellemző paraméterei
A tisztítandó szennyvíz jellemző paraméterei A Debreceni Szennyvíztisztító telep a kommunális szennyvizeken kívül, időszakosan jelentős mennyiségű, ipari eredetű vizet is fogad. A magas szervesanyag koncentrációjú
RészletesebbenFémorganikus vegyületek
Fémorganikus vegyületek A fémorganikus vegyületek fém-szén kötést tartalmaznak. Ennek polaritása a fém elektropozitivitásának mértékétől függ: az alkálifém-szén kötések erősen polárosak, jelentős százalékban
RészletesebbenInzulinutánzó vanádium-, és cinkkomplexek kölcsönhatásának vizsgálata vérszérum fehérjékkel
Inzulinutánzó vanádium-, és cinkkomplexek kölcsönhatásának vizsgálata vérszérum fehérjékkel Mivel a vizsgált komplexek inzulinutánzó hatása összetett és a hatásmechanizmusuk csak részben feltárt az irodalomban,
RészletesebbenCiklodextrinek alkalmazási lehetőségei kolloid diszperz rendszerekben
Ciklodextrinek alkalmazási lehetőségei kolloid diszperz rendszerekben Vázlat I. Diszperziós kolloidok stabilitása általános ismérvek II. Ciklodextrinek és kolloidok kölcsönhatása - szorpció - zárványkomplex-képződés
RészletesebbenBiológiai egyenértékűség és vizsgálata. Dr. Lakner Géza. members.iif.hu/lakner
Biológiai egyenértékűség és vizsgálata Dr. Lakner Géza members.iif.hu/lakner Originalitás, generikum Originalitás, innovatív gyógyszerkészítmény = első ízben kifejlesztett, új hatóanyagból előállított
RészletesebbenA gyógyszerek és a kiralitás
Szent László TÖK A gyógyszerek és a kiralitás Dr. Zsigmond Ágnes SZTE Szerves Kémiai Tanszék Budapest, 2012.04.26. Vázlat Mi az a kiralitás? A kiralitás és a gyógyszerek. A királis katalizátorok alkalmazása.
RészletesebbenSzakmai önéletrajz Szegedi Tudományegyetem, Természettudományi és Informatikai Kar, Kémia Doktori Iskola, Analitikai kémia program
Szakmai önéletrajz OROSZ TÍMEA Elérhetőségek: Telefonszám: +36(62)54-5804 Email: orosz.ti@chem.u-szeged.hu TANULMÁNYOK 2016- Szegedi Tudományegyetem, Természettudományi és Informatikai Kar, Kémia Doktori
RészletesebbenKÖRNYEZETI VIZEK SZERVES SZENNYEZŐINEK ELEMZÉSE GC- MS/MS MÓDSZERREL
KÖRNYEZETI VIZEK SZERVES SZENNYEZŐINEK ELEMZÉSE GC- MS/MS MÓDSZERREL Készítette: Vannai Mariann Környezettudomány MSc. Témavezető: Perlné Dr. Molnár Ibolya 2012. Vázlat 1. Bevezetés 2. Irodalmi áttekintés
RészletesebbenAdatgyőjtés, mérési alapok, a környezetgazdálkodás fontosabb mőszerei
GazdálkodásimodulGazdaságtudományismeretekI.Közgazdaságtan KÖRNYEZETGAZDÁLKODÁSIMÉRNÖKIMScTERMÉSZETVÉDELMIMÉRNÖKIMSc Tudományos kutatásmódszertani, elemzési és közlési ismeretek modul Adatgyőjtés, mérési
RészletesebbenKIRÁLIS GYÓGYSZEREK. Dr. Szökő Éva egyetemi tanár Semmelweis Egyetem Gyógyszerhatástani Intézet
KIRÁLIS GYÓGYSZEREK Dr. Szökő Éva egyetemi tanár Semmelweis Egyetem Gyógyszerhatástani Intézet Gyógyszer-enantiomerek tulajdonságai FARMAKODINÁMIÁS FARMAKOKINETIKAI kötődés a támadásponton metabolizmus
RészletesebbenNEM TERMÉSZETES -AMINOSAV ENANTIOMEREK NAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIÁS ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS ÁLLÓFÁZISOKON
NEM TERMÉSZETES -AMINOSAV ENANTIOMEREK NAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIÁS ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS ÁLLÓFÁZISOKON PhD értekezés tézisei Sipos László Témavezetők: Prof. Dr. Fülöp Ferenc, tanszékvezető egyetemi
Részletesebben