Az északi pocok mtdns kontroll régiójának elemzése

Méret: px
Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Az északi pocok mtdns kontroll régiójának elemzése"

Átírás

1 Az északi pocok mtdns kontroll régiójának elemzése DIPLOMADOLGOZAT készítette: ANTAL FERENC biológus hallgató témavezető: Dr. PUTNOKY PÉTER PTE TTK Biológiai Intézet Genetikai és Molekuláris Biológiai Tanszék PÉCS, 2005.

2 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 2 Tartalomjegyzék 1. IRODALMI ÁTTEKINTÉS Az északi pocok A mitokondrium és a mitokondriális DNS CÉLKITŰZÉSEK ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK Mintavétel DNS-izolálás Polimeráz láncreakció (PCR) Gélelektroforézis DNS-fragment izolálás Kompetens sejtek készítése Ligálási reakció Transzformáció Plazmid DNS izolálás, miniprep Plazmid DNS emésztés restrikciós endonukleázokkal DNS-szekvenálás A szekvenciaadatok értékelése EREDMÉNYEK ÉS MEGVITATÁSUK Heterológ primerek tervezése és az mtdns izolálása A tervezett primerekkel felsokszorozhatók a megfelelő mtdns régiók Fajspecifikus primerek tervezése és a szekvencia meghatározása M. oeconomus D-loop szekvenciák az adatbázisokban A kis-balatoni északi pocok populáció előzetes elemzése Szekvenciaeltérések más fajokhoz képest Felmerülő kérdések, folyamatban lévő kísérletek ÖSSZEFOGLALÁS RÖVIDÍTÉSEK KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS FELHASZNÁLT IRODALOM8. 29

3 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája IRODALMI ÁTTEKINTÉS Charles Darwin óta sok biológus álma az, hogy a Földön található összes organizmus evolúciós történetét rekonstruálja és azt egy törzsfa formájában összegezze. Kezdetben csupán a fosszilis leleteket használták a probléma megoldására. Később az összehasonlító morfológia és fiziológia is felkerült az alkalmazott eljárások közé. Ezen módszerek azonban elégtelennek bizonyultak egyrészt azért, mert a fosszíliák helyenként hiányosak, másrészt azért, mert a morfológiai és fiziológiai karakterek olyannyira bonyolultak, hogy nem képesek tiszta képet nyújtani az evolúciós változásokat illetően. A molekuláris biológia eredményei ezt a helyzetet megváltoztatták. Az organizmusok evolúciós leszármazása tanulmányozható a DNS molekulájuk összehasonlításával. Ez az eljárás számos előnnyel rendelkezik a klasszikus módszerekhez képest. Olyan összevetéseket tesz lehetővé, amelyek korábban elképzelhetetlenek voltak. Minden organizmus genomja nukleotidok hosszú szekvenciájából áll és a morfológiai karaktereknél sokkal több filogenetikai információt tartalmaz. A mitokondriális DNS szekvenciák összehasonlítását az utóbbi három évtizedben számos alkalommal alkalmazták, és ma is alkalmazzák a megfelelő következtetések levonására a fajok és populációk evolúciós és demográfiai múltját, illetve jelenlegi állapotát illetően. Célunk az, hogy komplex képet kapjunk az északi pocok hazai populációinak állapotáról mitokondriális DNS-szekvenciák vizsgálatával. Az elkövetkező oldalakon e munka kezdeti lépéseit szeretnénk bemutatni Az északi pocok Az északi pocok (Microtus oeconomus) egy 23 alfajjal rendelkező holarktikus elterjedésű rágcsáló, az egyetlen olyan Microtus faj, amely egyaránt előfordul Észak-Amerikában és Eurázsiában. A jelenlegi előfordulása Alaszkától Észak-Ázsián át egészen Nyugat-Európáig húzódik, ahol számos szigetszerű populációt foglal el (Mitchell-Jones et al. 1999). Az utolsó eljegesedés idején Európában egyetlen nagy egyesült populációban élt a mai Közép-Európa jelentős részén. A jégtakaró visszahúzódásával a habitat északi és keleti irányban kiszélesedett, hátrahagyva számos szétszórt reliktum populációt (Ligtvoet, 1985). Magyarországon lokálisan veszélyeztetett, fragmentálódott és izolálódott populációkban fordul elő. A szétszórt populációk jégkori reliktumok és különböznek a leggyakrabban előfordulóktól. Napjainkban csak 3 fennmaradt populáció található a Nyugat-Dunántúlon (Papp et al. 2000), amelyek a M. oeconomus méhelyi alfajt reprezentálják (Éhik, 1928). A Nemzeti Biodiverzitás-monitorozó Rendszer a kiválasztott monitorozandó objektumoknak

4 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 4 megfelelően különböző léptékben szervezett monitorozási projektekben kívánja megvalósítani hazánk biodiverzitásának hosszabb távú vizsgálatát (Láng, 1997). Ennek megfelelően az összesen tíz projektből álló rendszerben fontos szerepet kapott a Kis-Balaton II. ütem élővilágának monitorozása. Az egyik fő feladat az északi pocok, M. oeconomus elterjedésének pontos megismerése, illetve annak vizsgálata, hogy a vízminőség védelmi rendszernek milyen hatása van a kiválasztott mintaterületek kisemlős-közösségére a diverzitás és az időben történő változás tekintetében. Az izolált populációk kipusztulásának valószínűsége negatív összefüggést mutat a populáció méretével. A környezeti tényezők változása és a demográfiai ingadozások jelentősen befolyásolják a populációk génállományát és a populáció sérülékenységét növelő genetikai erózióhoz vezethetnek (Bijlsma and Loeschke, 1997; Gaines and Whittam, 1980). Az európai populációk genetikai felépítését korábban már tanulmányozták kromoszóma polimorfizmus, izoenzim (Leijs et al., 1999), DNS ujjlenyomat (Stacy et al,. 1994), mikroszatellit (Papp et al., 2000; Van De Zande et al., 2000) elemzések segítségével, valamint szekvencia analízissel (DeWoody, 1999). Az ukrajnai populációkon a nukleáris katasztrófa nyomán kariotípusos, citogenetikai és szekvencia vizsgálatokat végeztek (DeWoody et al., 1999). A hazai populációk genetikai konstitúciójáról jelenleg nem áll rendelkezésre adat ábra: Az északi pocok

5 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ábra: A M. oeconomus méhelyi elterjedése 1.2. A mitokondrium és a mitokondriális DNS A mitokondriumok központi szerepet játszanak a sejtek életében. A legtöbb eukarióta sejtben számos mitokondrium található, amelyek a mitokondriális DNS-molekula számos példányát hordozzák. Ezen sejtszervecskék képesek a sejten belül elmozdulni, osztódni és fúzionálni (Bereiter-Hann and Voth, 1994). Együttesen a citoplazma több mint 25%-át is tartalmazhatják. A mitokondriumok számos anyagcsereútvonalban érdekelt eukarióta sejtszervecskék, legfontosabb funkciójuk az oxidatív foszforilációs rendszeren keresztüli ATP előállítása (Attardi and Schatz, 1988). Az oxidatív foszforiláció melléktermékeként keletkeznek reaktív oxigénformák, például szuperoxidok, hidrogén-peroxidok és szerves hidroperoxidok, melyek károsíthatják a DNS-molekulákat, lipideket illetve fehérjéket. A sejtszervecskék jellegzetes módon, anyai úton öröklődnek, mivel megtermékenyítéskor a spermiummal a petesejtbe jutó példányok megsemmisülnek egy ubiquitin-függő mechanizmus révén (Sutovsky et al., 1999; Sutovsky et al., 2000). A mitokondrium önálló genommal rendelkezik, amely az emlősökben kettős szálú, kör alakú DNS-molekula ( ábra). A két lánc bázisösszetétele olyan mértékben eltér egymástól, hogy a két lánc céziumklorid egyensúlyi sűrűséggrádiens centrifugálással szétválasztható: H (heavy, azaz nehéz) és L (light, azaz könnyű) láncot különböztethetünk meg. A láncokat a guanin-, illetve citozintartalmuk alapján választják el. A mitokondriális és a nukleáris genom számos tulajdonságában eltér egymástól, mint például az öröklődés

6 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 6 módjában, a rekombináció fokában, az intronok méretében és számában, a mutációs rátában, a javító mechanizmusokban stb. (Scheffler, 1999) ábra: A mitokondriális genom felépítése. A kontroll régió a Pro és Phe trns gének között található, helyét nyíl jelzi. Amíg a mitokondriális genomban minden századik, addig a nukleáris genomban csak minden ezredik bázis mutat eltérést. A mitokondriális DNS mutációs rátája jóval nagyobb a nukleáris DNS mutációs rátájánál, nagyjából 2% egymillió évenként (Brown et al., 1979). A mitokondriális genom körülbelül 93%-a kódoló szekvencia, csupán nagyon rövid intronok találhatók benne. Harminchét gént hordoz, amelyek átlagos hossza 450 bázis. Nem kötődnek hozzá hisztonok és más fehérjék, így kevésbé védett a mutagén hatásokkal szemben. A mitokondriumból hiányzik az excíziós javító rendszer is, ami a létrejött mutációkat javítaná. A DNS szekvenciák sokkal szabályszerűbben változnak a morfológiai és a fiziológiai karakterekhez képest (Li, 1997), habár bizonyos esetekben a morfológiai és genetikai evolúciós ráták között korreláció mutatható ki (Omland, 1997). A mitokondriális DNS az állatok evolúciós kutatásának népszerű molekuláris markere. Alkalmas törzsfejlődési vizsgálatok elvégzésére, valamint a populációk szerkezetének, dinamikájának és molekuláris evolúciójának tanulmányozására is (Avise, 1994). A molekula

7 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 7 minden része egy közös leszármazás azonos történeti mintázatában részesül (Wilson et al., 1985). Az mtdns génjei eltérő evolúciós rátákat mutatnak, aminek következtében széles időskálán képesek megfelelő felbontást nyújtani (Hillis et al., 1996). Ezidáig számos taxon teljes mtdns szekvenciáját határozták meg, amelyek segítségével úgynevezett univerzális primereket fejlesztettek. (Kocher et al., 1989). Ezen oligonukleotidok nagymértékben konzerválódottak és olyan taxonokhoz is hozzáférést biztosítanak, amelyekről még nem áll rendelkezésre genetikai háttér-információ (Palumbi, 1996). A leghosszabb nem kódoló szakasz az úgynevezett kontroll régió vagy D-loop, amely mintegy bázispár terjedelmű, és a H lánc átíródási kezdőpontjának a közelében helyezkedik el. E terület jellegzetessége hogy a H lánc replikációja során ideiglenesen egy három szálból álló struktúra keletkezik, és az átmenetileg egyszálúvá vált régi H lánc a jelen lévő oxigén szabadgyökök mutagén hatásával szemben érzékennyé válik. A szabadgyökök leginkább pontmutációkat okoznak. Amennyiben a mutáció nem kódoló régiót érint, akkor az nem szelektálódik ki és új mitokondriális DNS polimorfizmusként mutatható ki az utódokban. A kontroll régióra a kódoló funkció hiányából következően - nem nehezedik szelekciós nyomás, így az itt bekövetkező mutációk nagy gyakorisággal rögzülnek. Ezáltal a szakaszra jellemző mutációs ráta a nukleáris genoménak több mint tízszerese.

8 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája CÉLKITŰZÉSEK Munkánkat megelőzően nem állt rendelkezésre korrekt szekvencia az északi pocok teljes kontroll régiójáról. A korábbi vizsgálatok leginkább a kontroll régiótól 5 irányban található citokróm b génre irányultak és csak részben érintették a D-loop-ot. Célunk 1) elsődlegesen az északi pocok mtdns kontroll régió nukleotid sorrendjének pontos meghatározása volt. 2) A szekvencia ismeretében a következő kitűzött lépés egy polimorfizmusra történő előzetes vizsgálat elvégzése volt a M. oeconomus méhelyi kis-balatoni populációján. 3) Mindezek mellett célul tűztük ki a kontroll régiótól 3 irányban elhelyezkedő 12 S rrns gén szekvenciájának meghatározását, amely a jövőben hasznos alapot szolgáltathat fajok közötti rokonsági viszonyok vizsgálatára.

9 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK 3.1. Mintavétel A minták Dr. Horváth Győző munkája révén kerülhettek hozzánk további feldolgozásra. A mintavétel helyszíne a Kis-Balaton volt, ahol a 76-os műút két oldalán a Középső keresztcsatornától északi irányban, illetve az út déli oldalán lettek kihelyezve a csapdák. Az állatok befogása 11x11-es csapdahálóval, kvadrát módszerrel történt, ahol is a csapdák egymástól 5 méterre helyezkedtek el. Az egyedekből lábujjperc mintát vételeztek, majd az állatokat szabadon engedték. A mintákat a terepen abszolút alkoholba helyezték. Az ujjpercek tárolása laboratóriumi körülmények között, -20 C-on történt DNS-izolálás Az izoláláskor a Chelex-eljárás lépéseit követtük (Walsh et al., 1991). A szövetmintákat kimosott, majd alkohollal kiégetett mozsárban szétmorzsoltuk, ezután eppendorf-csőbe szuszpendáltuk. 200 µl 5%-os Chelex-szuszpenziót (háromszorosan ioncserélt vízben szuszpendálva; Chelex: SIGMA C-7901) adtunk a csövekhez. Munkánk során minden esetben molekuláris munkára alkalmas, sterilizált ioncserélt vizet használtunk. A mintákat 30 percre 56 C-ra helyeztük, majd 10 másodpercig kémcsőkeverővel rázattuk. A következő lépés egy 8 percig tartó 100 C-os inkubáció volt, amit újabb rázatás követett. Ezt követően a csöveket 3 perc hosszan rpm fordulattal centrifugáltuk eppendorf centrifugában, végül a DNS-t tartalmazó felülúszót új csőbe pipettáztuk. Az izolátumokat -20 C-on tároltuk Polimeráz láncreakció (PCR) A polimeráz láncreakció specifikus nukleotid szekvenciák felsokszorozására szolgáló in vitro enzimatikus eljárás. A módszert Mullins és munkatársai írták le (Mullins et al., 1986), habár az alapelveket már korábban lefektették (Kleppe et al., 1971). A reakció alkalmazásával két oligonukleotid primer által behatárolt DNS szakaszt sokszoroztunk meg egy hőstabil DNS polimeráz és számos egymást követő szintézis ciklus segítségével. Egy ciklus három lépését a szálak szétválasztása (denaturálás), a primerek kötődése (annealing) és az új szálak bioszintézise (extension) alkotja, melyek eltérő hőmérsékletet igényelnek. A mitokondriális templátszekvenciát polimeráz láncreakcióval sokszoroztuk meg. A megismerendő DNS szakasz méretéből kifolyólag több fragmentre osztottuk fel azt, és több primerpár alkalmazásával végeztük mind a PCR-t, mind a szekvencia meghatározására irányuló kísérleteket. A tervezett primereket az 1. táblázat, az alkalmazott PCR programokat a

10 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája táblázat mutatja. A PCR reakció összetétele: 0.2 mm dntp, 1 x Taq puffer, 1.5 mm MgCl 2, µm primer(ek), 10 pg 1 µg templát DNS, 2.5 U Taq polimeráz reakciónként 10x Taq puffer: 100 mm TRIS (ph C-on), 500 mm KCl, 0.8%Nonidet P40 A klónozáshoz használt mintákat Pfu polimeráz segítségével sokszoroztuk meg, amely reakció összetétele a következő volt: 0,2 mm dntp, 1x Pfu puffer, µm primer(ek), 50 pg-1µg templát DNS, 1.25 U Pfu polimeráz reakciónként. 10x Pfu puffer: 200 mm Tris-HCl (ph C-on), 100mM (NH 4 ) 2 SO 4, 100mM KCl, 1% Triton X-100, 1 mg/ml BSA, 20mM MgSO táblázat: A PCR reakciókhoz tervezett oligonukleotidok Oligonukleotid neve Nuleotidszekvencia Számított Tm ( C) cb-11 CCCCATATTAAACCCGAATG 58,8 12s-2 TAAGCATAGTGGGGTATCTAATCC 57,5 tg52 GACATGAAAAATCATCGTTG 53,5 tp31 TAATTAGAATATCAGCTTTGG 49 tf52 AGCAAAGCACTGAAAATGC 56,3 tp51 CACCCAAAGCTGATATTCTA 52,6 tf31 CCATCTAAGCATTTTCAGTGC 57,3 12s3 GCTTACCTTGTTACGACTTATCTC 55,5 d-31 TAATACATGCTTATATGCTAGG 49,3 d-52 TGGTTCATCGTCCATACG 55,8 d-32 GGGCATGGGCTGATTAG 57,1 2. táblázat: A PCR reakcióhoz tervezett programok lépés 40 sec C 60 sec C 40 sec C 2. lépés 40 sec C 40 sec C 40 sec C 3. lépés 50 sec C 40 sec C 50 sec C 4. lépés 33x ismétlés, 1-3 lépés 90 sec C 33x ismétlés, 1-3 lépés 5. lépés Vége 33x ismétlés, 2-4 lépés Vége 6. lépés - 60 másodperc - 20 C - 7. lépés - Vége -

11 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája Gélelektroforézis Az elválasztandó DNS-mintához 5x STOP oldatot adtunk (10% ficoll-400, 0,25 M EDTA ph 8.0, 0.2% brómfenolkék), amely a végtérfogat 1/5-ét tette ki. Az elektroforézist 1%-os agaróz minigélen végeztük (60x78 mm), ellenőrzéskor 60 V-, fragmentizoláláskor 40 V feszültség mellett. Az elektroforézishez TBE puffert használtunk. A minták festődését a kész gélfőzetbe tett etídium-bromiddal (0,1 µg/ml) biztosítottuk. Kontrollként PstI enzimmel emésztett λ fág DNS-t alkalmaztunk. 5xTBE törzsoldat: 10 mm EDTA, 450 mm Tris-borate 3.5. DNS-fragment izolálás Az izolálandó fragment elé a gélbe Whatman DE81 papírt tettünk, ami 15 perces (60V) elektroforézis során a fragmentet megkötötte. A papírt eppendorf csőbe helyeztük és a DNS mintát kétszer egymás után 50 µl 1M NaCl oldat segítségével eluáltuk. A DNS kicsapása 10 µl 3M Na-acetát oldattal (ph 7,0) és 75 µl izopropanollal történt (0,1 térfogat; 0,6 térfogat), majd a csapadékot 20 percig tartó -20 C hőmérsékletű inkubálás után centrifugáltuk. Ezt követően a mintákat 70%-os etanollal ( µl) mostuk, majd újra centrifugáltuk. Ezután az alkoholt leöntöttük, majd a DNS-csapadékot 37 C-on szárítottuk és 20 µl ioncserélt vízben oldottuk fel Kompetens sejtek készítése A kompetens sejtek készítéséhez E. coli XL1-blue törzset használtunk. 200 ml SOB táptalajban (2% Bacto trypton, 0,5% Yeast extract, 10mM NaCl, 2.5mM KCl, ph 6,8-7,0) éjszakán át 19 C-on növesztett baktériumkultúrát 10 percre jégre tettük, ezután mindig 0 Con dolgoztunk. A sejteket 10 perces centrifugálással (4000 rpm) gyűjtöttük össze, majd 80 ml hideg TB pufferben (10 mm PIPES, 15 mm CaCl 2, 250 mm KCl ph 6,7) szuszpendáltuk fel. Tíz percig jégen inkubáltuk, majd centrifugáltuk és 20 ml jéghideg TB pufferben szuszpendáltuk. A szuszpenzióhoz 8% dimetil szulfoxifot (DMSO) adtunk, végül a sejteket eppendorf-csövekbe szétosztva -80 C-on tároltuk (Inoue et al., 1990) Ligálási reakció A ligálási elegyet háromszorosan ioncserélt víz, 10x ligáz puffer (500 mm TrisHCL, 100 mm MgCl 2, 10 mm ATP, ph 7,6), vektor DNS oldat és fragment DNS oldat felhasználásával állítottuk össze. A reakcióhoz T4 DNS ligázt használtunk és az elegyet minimum 1 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk.

12 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája Transzformáció 200 µl kompetens sejtet használtunk fel egy transzformáláshoz. A sejteket -80 C-ról jégre tettük és 15 perc elteltével hozzáadtuk a transzformálandó mintákat. 20 percig jégen inkubáltunk, majd 3 perces 37 C-os hősokkot alkalmaztunk. Ezt követően 800 µl LB tápoldatot adtunk a sejtekhez. Egy óra 37 C-os inkubáció után a sejteket szelektív táptalajra szélesztettük (Inoue et al., 1990). A táptalajba 40 µl 100 mm-os IPTG (isopropylthio-β-d galactoside) és 40 µl 20mg/ml koncentrációjú Xgal (5-bromo-4-chloro-3-inodyl-β-Dgalactopiranoside dimetil-formamidban) oldatot tettünk és a fehér színű (feltehetően inszertet tartalmazó) telepekkel folytattuk a munkát Plazmid DNS izolálás, miniprep Az izolálást 3-3 ml LB táptalajban egy éjszakán keresztül növesztett sejtekből végeztük. (Ish-Horovicz and Burke, 1981). 1.5 ml kultúrát eppendorf-csőbe mértünk, a sejteket centrifugálással ülepíttetük, majd felszuszpendáltuk 100 µl TEG oldatban (25 mm TrisHCL, 10 mm EDTA, 50mM glükóz ph 8,0). A feltárást 200 µl NS oldat (0,2 M NaOH, 1% SDS) hozzáadásával végeztük. A mintákat 5 percig jégen (0 C) inkubáltuk, majd 160 µl 0 C-os Naacetát oldatot pipettáztunk az elegyhez, amivel a kromoszómális DNS-t, illetve a fehérjéket denaturáltuk. A keletkezett csapadékot 5 perc 0 C-os inkubáció után lecentrifugáltuk és a felülúszóból 320 µl izopropanollal kicsaptuk a plazmid DNS mintákat. Tíz perc -20 C-os inkubáció után a csapadékot lecentrifugáltuk, mostuk (400 µl 70%-os etanol) és szárítottuk. A csapadékot 100 µl Tris-acetát (50 mm TrisHCL, 100 mm Na-acetát, ph 8,0) oldatban feloldottuk, majd 200 µl 96%-os etanollal ismét kicsaptuk. Tíz perc 0 C-os inkubáció után a csapadékot lecentrifugáltuk, szárítottuk, majd 30 µl ioncserélt vízben oldott RNase (100 µg/ml RNaseA) oldatban vettük fel. A szekvenálásra küldött plazmid preparátumok tisztítása a következőképpen zajlott: A mintákhoz 0,1 térfogat SDS-t (nátrium-dodecil-szulfát) és 1 térfogat 0 C-os 7,5 M NH 4 - acetátot adtunk, majd tizenöt percig 0 C-on állni hagytuk. Ezt követően a csöveket centrifugáltuk és a felülúszót új csőbe pipettáztuk. A mintákhoz 0,6 térfogat izopropanolt adtunk, majd 20 percre -20 C-ra helyeztük őket. Ezután a csöveket centrifugáltuk és leöntöttük a felülúszót. Hozzáadtunk 400µl etanolt, amit újabb centrifugálás követett. Az alkoholt leöntöttük, a csapadékot 37 C-on szárítottuk és 40µl ioncserélt vízben feloldottuk. A folyamat során végig jégen dolgoztunk.

13 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája Plazmid DNS emésztés restrikciós endonukleázokkal A tisztított DNS-ből 0,1-0,2 µg-ot használtunk az emésztésekhez. A mintákhoz 15 µl enzim oldatot adtunk, amelynek az összetétele a gyártó által megadott paramétereknek megfelelő volt. Az emésztés 37 C-on zajlott és legalább 1 órán át tartott. A keletkezett termékeket agaróz gélelektroforézissel választottuk el DNS-szekvenálás A szekvenálási reakció a didezoxinukleotid láncterminációs eljáráson alapult ( Sanger et al., 1977). Az oligonukleotid a PCR reakcióhoz hasonlóan az egyszálú templát DNS szekvenciához kötődik. Az ezt követő polimerizáció véletlenszerűen szakad meg a rendszerben elenyésző mennyiségben jelen lévő 3 OH csoporttal nem rendelkező didezoxinukleotid trifoszfát láncbaépülésének következtében. A sikeres reakció a jelölt termék lineáris megsokszorozódását eredményezi (Hillis et al., 1996) Az izolált fragmentek szekvenciájának meghatározása a MTA Szegedi Biológiai Központ DNS-Szekvenáló Laboratóriumában történt A szekvenciaadatok értékelése A munkához felhasznált DNS-szekvenciaadatokhoz saját kísérletek illetve a szekvenciaadatbázisokban végzett keresés útján jutottunk. A szekvenálási eredményeket a DNASTAR cég LASERGENE programcsomagjának felhasználásával javítottuk, szereltük össze, illetve illesztettük egymáshoz. Az általunk meghatározott 1860 bp szekvenciát az AJ szám alatt regisztrálták az EMBL Nukleotidszekvencia Adatbázisban.

14 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája EREDMÉNYEK ÉS MEGVITATÁSUK 4.1. Heterológ primerek tervezése és az mtdns izolálása A munka kezdetén szekvenciaspecifikus oligonukleotid primerekre volt szükségünk ahhoz, hogy a mitokondriális szekvencián PCR-reakciókat tudjunk végrehajtani további vizsgálatok céljából. Munkánkat megelőzően a DNS-szekvencia adatbázisok nem tartalmaztak korrekt, a teljes kontroll régiót lefedő szekvenciaadatokat. A korábban mások által végzett szekvenciameghatározások a D-loop-tól 5 irányban található citokróm b génre irányultak, illetve részlegesen érintették a kontroll régió bal oldalát. Tehát kezdetben nem volt lehetőség arra, hogy fajspecifikus primereket tervezzünk. Éppen ezért az első oligonukleotid primereket rokon fajok ismert szekvenciaadatainak felhasználásával terveztük meg. A felhaszált mitokondriális szekvenciák adatait foglalja össze a 3. táblázat. 3. táblázat: A primertervezéshez felhasznált rokon fajok, és mtdns szekvenciáik regisztrációs száma faj Myoxus glis nagy pele Mus musculus háziegér Oryctolagus cuniculus üregi nyúl Rattus norvegicus vándorpatkány adatbázis azonosító NC_ J01420 NC_ X14848 A kiválasztott szekvenciák illesztése után olyan részeket kerestünk a D-loop két oldalán, amelyek többé-kevésbé konzerválódottak és ez által alkalmasak olyan primerek tervezésére, amelyek alkalmazásával az ismeretlen szekvenciájú kontroll régiót és annak környezetét izolálni lehet. A D-loop-on kívül, a tőle 5 irányban elhelyezkedő citokróm b és trns-pro gének, illetve a tőle 3 irányban található trns-phe és 12S rrns gének meghatározására is terveztünk primereket. A ábrán a tp51-es oligonukleotid tervezésének menete látható. A 3. táblázatban említett rokon fajok adatbázisban fellelhető hasonló szekvenciáit összeillesztettük és konszenzus részeket kerestünk a kontroll régió bal oldalánál. A kiemelt rész tekintetében a vándorpatkány és az üregi nyúl szekvenciája megegyezik, a háziegér egy, míg a nagy pele négy eltérést mutat, amely különbségeket a képen lefedtük. A tp51 primer szekvenciájául a vándorpatkány és az üregi nyúl megegyező szekvenciáját választottuk.

15 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ábra: A tp51 primer tervezése. A trns-pro gént lefedő DNS-szakaszok illesztése után kiválasztott konzerválódott szekvenciát, amely egyben a tp51 primer szekvenciája is, jelzi a sötétebb háttér. A konszenzustól eltérő bázisokat kitakartuk. Mglis: Myoxus glis, Mmusc: Mus musculus, Ocuni: Oryctolagus cuniculus, Rnorv: Rattus norvegicus (lásd még 3. táblázat). A polimeráz láncreakciót megelőző pocok-dns izolálása az anyagok és módszerek fejezetben leírtaknak megfelelően, a Chelex-módszer lépéseit követve zajlott. A kontroll régió szekvenciájának PCR-reakcióval történő felsokszorozására a tp51, tf31 primerpár szolgált. A ábrán látható a kontroll régió és környezetére tervezett heterológ primerek elhelyezkedése. A primerek nukleotid szekvenciái az 1. táblázatban találhatók ábra: A tervezett heterológ primerek helyzete. A nyilak a primerek által indított reakció irányát jelzik 4.2. A tervezett primerekkel felsokszorozhatók a megfelelő mtdns régiók A tervezett nem fajspecifikus oligonukleotid primerekkel sikeres PCR reakciókat hajtottunk végre a kontroll régió területén, illetve a környező gének szekvenciáján ( ábra). A D-loop bázissorrendjét nem lehet egy-egy szekvenálási reakcó segítségével mindkét irányban, teljes hosszúságában meghatározni, mert túlságosan hosszú. A tp51-tf31 primerpárral végrehajtott PCR reakció után ugyanezekkel a primerekkel elvben mindkét irányból bázispárnyi terület "leolvasására" van csak lehetőség ( ábra). Azt

16 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 16 terveztük, hogy a D-loop középső részén kapott, mindkét irányból leolvasott korrekt szekvenciát fogjuk fajspecifikus primerek tervezésére felhasználni. Azonban az említett heterológ primerpárral végrehajtott polimeráz láncreakció termékének szekvenálása nem az elvárásoknak megfelelően sikerült. Csak a baloldalról lehetett a felsokszorozott DNS szakasz szekvenciáját meghatározni. A jobb oldali szekvenálási reakció valamivel száz bázispár után egy GC gazdag részen elakadt ( ábra), aminek következtében nem kaptunk a kontroll régió jobb oldaláról értékelhető részszekvenciát. Így a baloldalról származó egyszálú szekvenciát használtuk fel fajspecifikus belső oligonukleotidok tervezésére ábra : A tp51-tf31 primerpárral végrehajtott PCR reakció eredménye. A kép bal oldalán a kontrollként használt PstI enzimmel hasított λ fág DNS-e látható ábra: A tp51-tf31 primerpárral létrehozott DNS fragment szekvenciájának meghatározása a PCR primerekkel

17 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája Fajspecifikus primerek tervezése és a szekvencia meghatározása Az előző pontban leírtaknak megfelelően a kontroll régió bal oldaláról indított szekvenálási reakcióban sikeresen leolvasott szekvencia felhasználásával lehetőségünk nyílt arra, hogy a D-loop területére fajspecifikus belső primereket tervezzünk, amelyek segítségével 5' és 3' irányban is folytatni lehetett a szekvencia pontos meghatározását. Két oligonukleotid primert terveztünk (d-52 és d-32), amelyek lehetővé tették, az eredeti PCR primerekkel együtt, a tp51-tf31 DNS fragment szekvenciájának mindkét szálon való meghatározását. A ábra a kontroll régió területére tervezett összes primer elhelyezkedését ábrázolja ábra: A kontroll régió nem fajspecifikus és fajspecifikus primerei. A primerek szekvenciáját az 1. táblázat tartalmazza. Az imént említett két fajspecifikus oligonukleotidon kívül később még egy fajspecifikus primert terveztünk, a d-31-est. A ciokróm b és a 12S rrns gének területére tervezett belső oligonukleotidok (Cb11 és 12S-2) a D-loop belső primereivel együtt alkalmazva fontos szerepet játszottak a kontroll régió két oldalára tervezett primerek (tp51;tf31) helyein a szekvencia pontos meghatározásában. A kontroll régió jobb oldalán a nukleotidszekvencia meghatározása nehézségekbe ütközött egy GC gazdag régió miatt, ahogy az már az első szekvenálási reakciónál is látszott ( ábra). A terület szekvenciáját csak úgy sikerült megállapítani, hogy a tp51-tf31 primerpárral létrehozott PCR-terméket plazmid vektorba építettük, és E. coli baktériumba transzformáltuk. Az izolált, inszert DNS tartalmú plazmidokat küldtük szekvenálásra. A polimeráz láncreakció termékét közvetlenül templátként alkalmazva, a d-52 és tf31 primerekkel több próbálkozás ellenére sem sikerült értékelhető szekvenciát kapni, mert a reakció mindkét oldalról a GC gazdag (attccccccccccggccttcccaggct) szekvenciában elakadt. Ennek magyarázatát egyenlőre

18 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 18 nem találjuk, hiszen a szekvencia nem túl hosszú és nem rejt olyan fordított ismétlődést a környezete, amely indokolhatná e jelenséget ábra: A kontroll régió felsokszorozása heterológ és specifikus primerekkel. A reakciók során heterológ és fajspecifikus oligonukleotidokat alkalmaztunk kétféle összetételben: az 1-es számmal jelölt sáv a tp51-d32 primerpárral végrehajtott PCR reakciót mutatja, míg a 2-es számú sáv a d52-tf31 oligonukleotidokkal kivitelezett reakciót jelöli. A kép jobb oldalán a kontrollként szolgáló Pst I enzimmel emésztett λ fág DNS látható. A PCR reakciók termékeinek szekvenáltatása után a különböző szekvenciarészletek elemzésével és összeillesztésével hozzájutottunk a vizsgált terület korrekt szekvenciájához, amelynek összesített képe a ábrán látható. A meghatározott szekvencia kódoló régióinak és a D-loopnak a koordinátáit a 4. táblázat tartalmazza.

19 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ábra: A kontroll régió és környezetének szekvenciája. Regisztrációs szám: AJ táblázat: A gének és régiók helyzete a meghatározott szekvenciában koordináta (bp) gén / régió 1-16 trns-pro (részleges) D-loop trns-phe S rrns (részleges) 4.4. M. oeconomus D-loop szekvenciák az adatbázisokban A kontroll régió szekvenciájának megállapítása után összevetettük azt az adatbázisban fellelhető más populációk idevonatkozó szekvenciáival. Mint azt már korábban említettem, munkánkat megelőzően az adatbázisok nem tartalmaztak olyan szekvenciaadatokat, amelyek a M. oeconomus-ból származtak és a teljes kontroll régiót lefedték volna. Csupán a D-loop bal oldaláról találtunk részleges adatokat. Az összehasonlítás eredményét a ábra tükrözi. Az n241 jelű szekvenciát mi határoztuk meg, míg az aj00988 megjelölésű egy norvég M. oeconomus populáció egy egyedét reprezentálja. A téglalappal bekeretezett bázisok a mi szekvenciánktól való eltéréseket mutatják. Az összehasonlítás pontosságát csökkenti, hogy a norvég populációból származó szekvencia csak részleges és ráadásul hibákat is tartalmaz. A 286. pozícióban N betű található, ami minden kétséget kizáróan szekvenálási hibából ered. A 240. és a 267. pozíciónál hiányjel van, amely vagy egy-egy bázis delécióját jelenti ez

20 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 20 könnyen elképzelhető, mert a kontroll régió nem kódoló terület -, vagy szintén szekvenálási hiba eredménye ábra: A meghatározott szekvencia egy részletének összehasonlítása egy norvég mintával. Ez is mutatja, hogy a pontosabb populáció genetikai elemzésekhez szükséges a D-loop szekvenciájának korrekt meghatározása, hogy a megfelelő fajspecifikus primer megtervezése után a vizsgált egyedekből a szekvencia mindkét irányban meghatározható legyen. Munkánk révén lehetővé vált a tp51 és d-32 primerek segítségével az északi pocok D-loop szekvenciák bal oldali részének pontos meghatározása, mintegy 500 bp hosszan. Előzetes kísérletként a kis-balatoni északi pocok populáció néhány további egyedének szekvenciáját határoztuk meg.

21 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája A kis-balatoni északi pocok populáció előzetes elemzése Miután a korrekt szekvencia a rendelkezésünkre állt, kiszélesítettük a munkát a kontroll régió tekintetében. Több egyednél megvizsgáltuk a D-loop bal oldalán található hipervariábilis régiót esetleges eltérések után kutatva. Ezidáig kilenc egyed tekintetében ismerjük a D-loop eme területét. A szekvenálás eredményeinek elemzése eddig nem tárt fel eltérést, a szekvenciák teljes azonosságot mutatnak. A variabilitásnak a vizsgált egyedeknél tapasztalt hiánya az anyai leszármazási vonalak kis számára utal. A jövőben további egyedeknél is meg kívánjuk vizsgálni az említett területet, hogy elegendő mennyiségű adattal rendelkezzünk populációbiológiai következtetések megállapításához Szekvenciaeltérések más fajokhoz képest A kontroll régió szekvenciáját összehasonlítottuk más, a Microtus nemzetségbe tartozó fajokéval is. Ennek eredményét mutatja a ábra. Az általunk meghatározott szekvenciától (PTE_sh.seq) való eltérést a bekeretezett bázisok jelzik. A különbségek száma fajonként változó, azonban a szekvenciaadatok többsége nem nyújt korrekt összehasonlítási alapot, mert szekvenálási hibákat tartalmaz. A hibás pozíciókban itt is N betű található. Egyedül a M. mexicanus szekvenciája az, amelyik hibáktól mentes és ennél fogva megbízható elemzést tesz lehetővé. A M. mexicanus szekvenciával elvégzett összehasonlító elemzést a ábra mutatja. A szekvencia korrekt és lefedi az egész kontroll régiót. A D-loop jobb és bal oldalán található hipervariábilis régiók eltérő mértékű különbözőséget mutatnak a két szekvencia esetében: a baloldalon 60, míg a jobb oldalon 129 eltérést tapasztaltunk. Ez arra enged következtetni, hogy a kontroll régió jobb oldala az evolúció során valószínűleg gyorsabban változik. Ezt támasztja alá a más rágcsálókkal végzett összehasonlítás is ( ábra), amely itt csupán szemléltető jellegű, de jól érzékelhetően láttatja a kontroll régió jobb oldalát érintő nagyobb számú eltérést.

22 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ábra: A D-loop részleges szekvenciájának összehasonlítása a nemzetség más fajaival.

23 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ábra: A kontroll régió szekvenciájának összehasonlítása a M. mexicanus szekvenciájával. A téglalapokkal részlegesen letakart bázisok eltérnek az általunk megállapított szekvenciától.

24 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ábra: A D-loop teljes szekvenciájának összevetése rokon rágcsálók szekvenciájával. A sötét hátterű betűk mutatják a szekvencia eltéréseket az általunk meghatározott kontroll régió szekvenciájához képest. A szekvencia második felében jóval több különbség látható. M_oeco_D: M. oeconomus, M_mexi_D: M. mexicanus, M_musc_D: Mus musculus, R_norv_D: Rattus norvegicus

25 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája Felmerülő kérdések, folyamatban lévő kísérletek A vizsgálatoknak még koránt sincs vége. A kontroll régió bal oldalán kilenc egyedből rendelkezünk korrekt szekvenciával. Célunk az, hogy további egyedeknél is meghatározzuk e terület szekvenciáját, hogy populációbiológiai szempontú következtetések megállapításához megfelelő mennyiségű adattal rendelkezzünk. A fajok közötti összehasonlító elemzések eredményei arra utalnak, hogy a kontroll régió jobb oldalán lévő hipervariábilis régió gyorsabban változik a baloldalon találhatónál, ami felveti annak lehetőségét, hogy a jobb oldal szekvenciájának elemzése esetleg alkalmasabb populációbiológiai vizsgálatok elvégzésére, mivel valószínűleg érzékenyebb felbontást eredményez. A D-loop ezen részének vizsgálata azonban meglehetősen nehézkes, mint ahogy arról a 4.3. résznél már beszámoltunk. A további vizsgálatok során szeretnénk e probléma leküzdésével átfogó képet kapni a kontroll régió jobb oldalán található hipervariábilis régióról megfelelő számú egyed mtdns-ének megvizsgálásával.

26 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája ÖSSZEFOGLALÁS Az északi pocok (Microtus oeconomus) egy 23 alfajjal rendelkező holarktikus elterjedésű rágcsáló, az egyetlen Microtus faj, amely egyaránt előfordul Észak-Amerikában és Eurázsiában. Az utolsó eljegesedés idején Európában egyetlen nagy, egyesült populációban élt a mai Közép-Európa jelentős részén. A jégtakaró visszahúzódásával a habitat északi és keleti irányban kiszélesedett, hátrahagyva számos lefűződött reliktum populációt. Magyarországon fokozottan védett, lokálisan veszélyeztetett, fragmentálódott és izolálódott populációkban fordul elő. Napjainkban csak 3 fennmaradt populáció található a Nyugat- Dunántúlon, amelyek a M. oeconomus méhelyi alfajt reprezentálják. A genetikai variációk tanulmányozása kiemelkedő fontossággal bír a célpopulációk jellemzése szempontjából. A hazai populációk genetikai összetételéről jelenleg nem áll rendelkezésre adat. A genetikai variációk vizsgálatához a mitokondriális DNS (mtdns) egyes szakaszainak elemzése is alkalmas. A mitokondriális genom kevésbé védett a mutagén hatásokkal szemben és a mitokondriumból hiányzik az excíziós javító rendszer is. Ezért adott idő alatt több mutáció halmozódhat fel benne, mint a nukleáris genomban. A leghosszabb nem kódoló szakasz az bázis hosszúságú kontroll régió (D-loop). Az itt létrejövő összes mutáció rögzül, mivel erre a területre nem nehezedik szelekciós nyomás. Ezért a D-loop különösen alkalmas a populációk genetikai változatosságának vizsgálatára. Célunk a teljes kontroll régió DNS szekvenciának meghatározása, és hazai populációkban található változatok megismerése. Elsőként meghatároztuk az mtdns mintegy 1860 bp hosszúságú szekvenciáját, mely a 908 bp hosszú kontroll régión kívül tartalmazza a trna Phe és a 12S rrns géneket is. A korrekt szekvencia ismeretében, fajspecifikus primerekkel, kilenc egyedből meghatároztuk a kontroll régió bal oldali felének szekvenciáját. Ezek elemzése nem tárt fel egyetlen eltérést sem, ami a vizsgált populáció alacsony genetikai változatosságára utal. A teljes kontroll régiót összehasonlítva más rokon fajok hasonló szekvenciájával megállapítottuk, hogy a jobb oldali régióban kétszer több az eltérő bázisok száma. Ezért elemzése valószínűleg érzékenyebb populációgenetikai vizsgálatokat tesz lehetővé. A kontroll régiótól 3 irányban elhelyezkedő 12S rrns gén szekvenciájának csaknem teljes meghatározása a fajok közötti rokonsági vizsgálatokhoz szolgáltathat jó alapot a jövőben.

27 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája RÖVIDÍTÉSEK Amp ATP DNS EDTA IPTG mtdns PCR SDS Tris X-gal ampicillin adenozin-trifoszfát dezoxi-ribonukleinsav etilén-diamino-tetra-acetát izopropil-β-d-tiogalaktopiranozid mitokondriális dezoxi-ribonukleinsav polimeráz láncreakció nátrium-dodecil-szulfát tris-(hidroxi-metil)-amino-metán 5-bromo-4-kloro-3-indolil-β-D-galaktopiranozid

28 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS Köszönettel tartozom témavezetőmnek, Dr. Putnoky Péternek a munka irányításáért és az alkalmazott molekuláris módszerek elsajátításában nyújtott segítségéért. Köszönetet mondok Dr. Horváth Győzőnek a felhasznált minták rendelkezésre bocsátásáért, valamint Dr. Hoffmann Gyulának és Mátics Róbertnek a rengeteg hasznos tanácsért, továbbá a tanszék munkatársainak a technikai háttér folyamatos biztosításáért. Köszönöm a Környezetvédelmi és Vízügyi Minisztérium Természetmegőrzési Főosztályának és a Balaton-felvidéki Nemzeti Park Igazgatóságának a munkához nyújtott támogatást.

29 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája FELHASZNÁLT IRODALOM Attardi, G., and Schatz, G. (1988) Biogenesis of mitochondria. Annu Rev Cell Biol 4: Avise, J.C. (1994) Molecular Markers, Natural History, and Evolution. New York: Chapman and Hall. Bereiter-Hann, J., and Voth, M. (1994) Dynamics of mitochondria in living cells: shape changes, dislocations, fusion, and fission of mitochondria. Microscopy Research Techniques 27: Bijlsma, R., and Loeschke, V. (1997) Environmental Stress, Adaptation and Evolution. Basel: Birkhäuser Verlag. Brown, W.M., George, M.J., and Wilson, A.C. (1979) Rapid evolution of animal mitochondrial DNA.,. PNAS 76: DeWoody, J.A. (1999) Nucleotide variation in the p53 tumor-suppressor gene of voles from Chernobyl, Ukraine. Mutat. Res. 439: Éhik, J. (1928) Einige Daten zur Saugertierkunde Ungarns. Annls hist. -nat. Mus. Natn. hung. 25: Gaines, M.S., and Whittam, T.S. (1980) Genetic changes in fluctuating vole populations: selective vs. non-selective forces. Genetics 96: Hillis D. M., Mable B. K., Larson A., Davis S. K. & E. A. Zimmer (1996): Nucleic Acids IV: Sequencing and Cloning. In: Hillis D. M., Moritz C. & B. K. Mable (eds.): Molecular Systematics. 2nd Ed. Sinauer, Sunderland, USA. pp: Inoue, H., Nojima, H., and Okayama, H. (1990) High efficiency transformation of Escherichia coli with plasmids. Gene 96:

30 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 30 Ish-Horovicz, D., and Burke, J.F. (1981) Rapid and efficient cosmid cloning. Nucl. Acids Res. 9: Kleppe K., Ohtsuka E., Kleppe R., Molineux I. & H. G. Khorana (1971): Studies on polynucleotides XCVI. Repair replication of short synthetic DNA s as catalysed by DNA polymerases. Journal of Molecular Biology 56: Kocher T. D., Thomas W. K., Meyer A., Edwards S. V., Pääbo S., Villablanca F. X. & A. C. Wilson (1989): Dynamics of mitochondrial DNA evolution in animals: Amplification and sequencing with conserved primers. Proceedings of the national Academy of Sciences, USA 86: Láng, E. (1997) Bevezetés: A Nemzeti Biodiverzitás-monitorozó Rendszer. In Informatikai alapozás. Nemzeti Biodiverzitás-monitorozó Rendszer I. Horváth, F., Rapcsák, T. and Szilágyi, G. (eds). Budapest: Magyar Természettudományi Múzeum. Leijs, R., Van Apeldoorn, R.C., and Bijlsma, R. (1999) Low genetic differentiation in northwest European populations of fhe locally endangered root vole, Microtus oeconomus. Biological Conservation 87: Li W.-H. (1997): Molecular Evolution. Sinauer, Sunderland. 488 pp. Ligtvoet, W. (1985) The Root Vole, Microtus oeconomus, done in a hole. De Levende Natuur, 86: 2-7. Mitchell-Jones, A.J., Amori, G., and Bogdanowicz, W. (1999) The Atlas of European Mammals,. San Diego, USA: Academic Press Inc. Mullis K. B., Faloona F., Scharf S., Saiki R., Horn G. & H. Erlich (1986): Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: The polymerase chain reaction. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology 5(1): Omland K. E. (1997): Correlated rates of molecular and morphological evolution. Evolution 51(5):

31 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 31 Palumbi S. R. (1996): Nucleic Acids II: The Polymerase Chain Reaction. In: Hillis D. M., Moritz C. & B. K. Mable (eds.): Molecular Systematics. 2nd Ed. Sinauer, Sunderland, USA. pp Papp, T., Gubányi, A., and Rácz, G. (2000) Establishing Microsatellite Analysis for locally endangered populations of root vole (Microtus oeconomus). - Acta zool. hung. 46: Sanger F., Nicklen S. & A. R. Coulson (1977): DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 74: Scheffler, I.E. (1999) Mitochondria. New York: John Wiley & Sons Inc. Stacy, J.E., Refseth, U.H., Thorensen, M., Ims, R.A., Stenseth, N.C., and Jakobsen, K.S. (1994) Genetic variability among root voles (Microtus oeconomus) from different geographic regions: populations can be distinguised by DNA fingerprinting. Biol J Linnean Society 52: Sutovsky, P., Moreno, R.D., and Schatten, G. (1999) Ubiquitin tag for sperm mitochondria. Nature 402: 371. Sutovsky, P., Moreno, R.D., Ramalho-Santos, J., Dominko, T., Simerly, C., and Schatten, G. (2000) Ubiquitinated sperm mitochondria, selective proteolysis, and the regulation of mitochondrial inheritance in mammalian embryos. Biol Reprod 63: Van De Zande, L., Van Apeldoorn, R.C., Blijdenstein, A.F., De Jong, D., Van Delden, W., and Bijlsma, R. (2000) Microsatellite analysis of population structure and genetic differentiation within and between populations of the root vole, Microtus oeconomus in the Netherlands. Molecular Ecology 9: Walsh, P.S., Metzger, D.A., and Higuchi, R. (1991) Chelex 100 as a medium for simple extraction of DNA for PCR-based typing from forensic material. Biotechniques 10:

32 Az északi pocok kontroll-régió DNS-szekvenciája - 32 Wilson A. C., Cann R. L., Carr S. M., George M. Jr., Gyllensten U. B., Helm-Bychowski K., Higuchi, R. C., Palumbi S. R., Prager E. M., Sage R. D. & M. Stoneking (1985): Mitochondrial DNA and two perspectives on evolutionary genetics. Biological Journal of the Linnean Society 26:

DNS-szekvencia meghatározás

DNS-szekvencia meghatározás DNS-szekvencia meghatározás Gilbert 1980 (1958) Sanger 3-1 A DNS-polimerázok jellemzői 5'-3' polimeráz aktivitás 5'-3' exonukleáz 3'-5' exonukleáz aktivitás Az új szál szintéziséhez kell: templát DNS primer

Részletesebben

A bioinformatika gyökerei

A bioinformatika gyökerei A bioinformatika gyökerei 1944: Avery a transforming principle a DNS 1952: Hershey és Chase perdöntő bizonyíték: a bakteriofágok szaporodásakor csak a DNS jut be a sejtbe 1953: Watson és Crick a DNS szerkezete

Részletesebben

A humán mitokondriális genom: Evolúció, mutációk, polimorfizmusok, populációs vonatkozások. Egyed Balázs ELTE Genetikai Tanszék

A humán mitokondriális genom: Evolúció, mutációk, polimorfizmusok, populációs vonatkozások. Egyed Balázs ELTE Genetikai Tanszék A humán mitokondriális genom: Evolúció, mutációk, polimorfizmusok, populációs vonatkozások Egyed Balázs ELTE Genetikai Tanszék Endoszimbiotikus gén-transzfer (Timmis et al., 2004, Nat Rev Gen) Endoszimbiotikus

Részletesebben

DNS molekulák elválasztása agaróz gélelektroforézissel és kapilláris elektroforézissel

DNS molekulák elválasztása agaróz gélelektroforézissel és kapilláris elektroforézissel DNS molekulák elválasztása agaróz gélelektroforézissel és kapilláris elektroforézissel Gyakorlat helye: BIOMI Kft. Gödöllő, Szent-Györgyi A. u. 4. (Nemzeti Agrárkutatási és Innovációs Központ épülete volt

Részletesebben

Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén

Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén Dr. Dallmann Klára A molekuláris biológia célja az élőlények és sejtek működésének molekuláris szintű

Részletesebben

3. gyakorlat: nukleinsav-tisztítás, polimeráz láncreakció

3. gyakorlat: nukleinsav-tisztítás, polimeráz láncreakció 3. gyakorlat: nukleinsav-tisztítás, polimeráz láncreakció A vírus genetikai anyagának vizsgálata (direkt víruskimutatási módszer) biztosítja a legrészletesebb és legspecifikusabb információkat a kimutatott

Részletesebben

Bakteriális identifikáció 16S rrns gén szekvencia alapján

Bakteriális identifikáció 16S rrns gén szekvencia alapján Bakteriális identifikáció 16S rrns gén szekvencia alapján MOHR ANITA SIPOS RITA, SZÁNTÓ-EGÉSZ RÉKA, MICSINAI ADRIENN 2100 Gödöllő, Szent-Györgyi Albert út 4. info@biomi.hu, www.biomi.hu TÖRZS AZONOSÍTÁS

Részletesebben

ADATBÁNYÁSZAT I. ÉS OMICS

ADATBÁNYÁSZAT I. ÉS OMICS Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 ADATBÁNYÁSZAT

Részletesebben

A növény inváziójában szerepet játszó bakteriális gének

A növény inváziójában szerepet játszó bakteriális gének A növény inváziójában szerepet játszó bakteriális gének merisztéma korai szimbiotikus zóna késői szimbiotikus zóna öregedési zóna gyökér keresztmetszet NODULÁCIÓ növényi jel Rhizobium meliloti rhizobium

Részletesebben

Mivel korábban már végeztünk mikroszatellit elemzést (Liker et al 2009), a kiértékeléshez szükséges szoftverek és tapasztalat rendelkezésre áll.

Mivel korábban már végeztünk mikroszatellit elemzést (Liker et al 2009), a kiértékeléshez szükséges szoftverek és tapasztalat rendelkezésre áll. Genetikai változatosság (állat csoportok) Pénzes Zsolt, Bihari Péter és Raskó István SZBK Genetika Intézet A pályázati munkatervnek megfelelően első évben elsősorban a részletes elemzésre kiválasztott

Részletesebben

Biológus MSc. Molekuláris biológiai alapismeretek

Biológus MSc. Molekuláris biológiai alapismeretek Biológus MSc Molekuláris biológiai alapismeretek A nukleotidok építőkövei A nukleotidok szerkezete Nukleotid = N-tartalmú szerves bázis + pentóz + foszfát N-glikozidos kötés 5 1 4 2 3 (Foszfát)észter-kötés

Részletesebben

A gidrán fajta genetikai változatosságának jellemzése mitokondriális DNS polimorfizmusokkal Kusza Szilvia Sziszkosz Nikolett Mihók Sándor,

A gidrán fajta genetikai változatosságának jellemzése mitokondriális DNS polimorfizmusokkal Kusza Szilvia Sziszkosz Nikolett Mihók Sándor, 1 A gidrán fajta genetikai változatosságának jellemzése mitokondriális DNS polimorfizmusokkal Kusza Szilvia Sziszkosz Nikolett Mihók Sándor, (Debreceni Egyetem Állattenyésztéstani Tanszék) A bármilyen

Részletesebben

DNS munka a gyakorlatban. 2012.10.12. Természetvédelmi genetika

DNS munka a gyakorlatban. 2012.10.12. Természetvédelmi genetika DNS munka a gyakorlatban 2012.10.12. Természetvédelmi genetika Munka fázisok DNS kivonás elektroforézis (fakultatív lépés) PCR Elektroforézis Szekvenálás Szekvencia elemzés faji azonosítás; variabilitás,

Részletesebben

Algaközösségek ökológiai, morfológiai és genetikai diverzitásának összehasonlítása szentély jellegű és emberi használatnak kitett élőhelykomplexekben

Algaközösségek ökológiai, morfológiai és genetikai diverzitásának összehasonlítása szentély jellegű és emberi használatnak kitett élőhelykomplexekben Algaközösségek ökológiai, morfológiai és genetikai diverzitásának összehasonlítása szentély jellegű és emberi használatnak kitett élőhelykomplexekben Duleba Mónika Környezettudományi Doktori Iskola I.

Részletesebben

Tarsza fajok (Isophya, Orthoptera) összehasonlító elemzése mtdns analízissel és aktivitásvizsgálattal DIPLOMAMUNKA

Tarsza fajok (Isophya, Orthoptera) összehasonlító elemzése mtdns analízissel és aktivitásvizsgálattal DIPLOMAMUNKA Tarsza fajok (Isophya, Orthoptera) összehasonlító elemzése mtdns analízissel és aktivitásvizsgálattal DIPLOMAMUNKA Készítették: Boros Melinda és Szloboda Anita V. éves biológia-környezettan szakos hallgatók

Részletesebben

GÉNTECHNOLÓGIA ÉS PROTEIN ENGINEERING GYAKORLAT

GÉNTECHNOLÓGIA ÉS PROTEIN ENGINEERING GYAKORLAT GÉNTECHNOLÓGIA ÉS PROTEIN ENGINEERING GYAKORLAT 2018 A gyakorlat célja az alapvető DNS technikák gyakorlása és egy látványos fehérje expressziós kísérlet elvégzése. A hallgatók párosával végzik a gyakorlatot.

Részletesebben

Populációgenetikai. alapok

Populációgenetikai. alapok Populációgenetikai alapok Populáció = egyedek egy adott csoportja Az egyedek eltérnek egymástól morfológiailag, de viselkedésüket tekintve is = genetikai különbségek Fenotípus = külső jellegek morfológia,

Részletesebben

A géntechnológia genetikai alapjai (I./3.)

A géntechnológia genetikai alapjai (I./3.) Az I./2. rész (Gének és funkciójuk) rövid összefoglalója A gének a DNS információt hordozó szakaszai, melyekben a 4 betű (ATCG) néhány ezerszer, vagy százezerszer ismétlődik. A gének önálló programcsomagként

Részletesebben

Pórusos polimer gélek szintézise és vizsgálata és mi a közük a sörgyártáshoz

Pórusos polimer gélek szintézise és vizsgálata és mi a közük a sörgyártáshoz Pórusos polimer gélek szintézise és vizsgálata és mi a közük a sörgyártáshoz Póta Kristóf Eger, Dobó István Gimnázium Témavezető: Fodor Csaba és Szabó Sándor "AKI KÍVÁNCSI KÉMIKUS" NYÁRI KUTATÓTÁBOR MTA

Részletesebben

Molekuláris genetikai vizsgáló. módszerek az immundefektusok. diagnosztikájában

Molekuláris genetikai vizsgáló. módszerek az immundefektusok. diagnosztikájában Molekuláris genetikai vizsgáló módszerek az immundefektusok diagnosztikájában Primer immundefektusok A primer immundeficiencia ritka, veleszületett, monogénes öröklődésű immunhiányos állapot. Családi halmozódást

Részletesebben

Engedélyszám: 18211-2/2011-EAHUF Verziószám: 1. 2460-06 Humángenetikai vizsgálatok követelménymodul szóbeli vizsgafeladatai

Engedélyszám: 18211-2/2011-EAHUF Verziószám: 1. 2460-06 Humángenetikai vizsgálatok követelménymodul szóbeli vizsgafeladatai 1. feladat Ismertesse a gyakorlaton lévő szakasszisztens hallgatóknak a PCR termékek elválasztása céljából végzett analitikai agaróz gélelektroforézis során használt puffert! Az ismertetés során az alábbi

Részletesebben

Dobzhansky: In Biology nothing makes sense except in the light of Evolution.

Dobzhansky: In Biology nothing makes sense except in the light of Evolution. Dobzhansky: In Biology nothing makes sense except in the light of Evolution. Az Evolúcióbiológia Története Molnár István im54@invitel.hu Mai témák 1. Mi az evolúció? 2. Hogyan alakult ki a mai evolúciós

Részletesebben

Patogén mikroorganizmusok vizsgálata molekuláris biológiai módszerekkel

Patogén mikroorganizmusok vizsgálata molekuláris biológiai módszerekkel Patogén mikroorganizmusok vizsgálata molekuláris biológiai módszerekkel Rohonczy Kata, Zoller Linda, Fodor Andrea, Tabajdiné, dr. Pintér Vera FoodMicro Kft. Célkitűzés Élelmiszerekben és takarmányokban

Részletesebben

A DNS replikációban kulcsszerepet játszó PCNA fehérje variánsok előállítása és rekombináns DNS technológia segítségével való kifejezése

A DNS replikációban kulcsszerepet játszó PCNA fehérje variánsok előállítása és rekombináns DNS technológia segítségével való kifejezése A DNS replikációban kulcsszerepet játszó PCNA fehérje variánsok előállítása és rekombináns DNS technológia segítségével való kifejezése PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) Csiszár Mónika, Kós Tamás,

Részletesebben

Genetika. Tartárgyi adatlap: tantárgy adatai

Genetika. Tartárgyi adatlap: tantárgy adatai Genetika Előadás a I. éves Génsebészet szakos hallgatók számára Tartárgyi adatlap: tantárgy adatai 2.1. Tantárgy címe Genetika 2.2. Előadás felelőse Dr. Mara Gyöngyvér, docens 2.3. Egyéb oktatási tevékenységek

Részletesebben

12/4/2014. Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció. 1952 Hershey & Chase 1953!!!

12/4/2014. Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció. 1952 Hershey & Chase 1953!!! Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció 1859 1865 1869 1952 Hershey & Chase 1953!!! 1879 1903 1951 1950 1944 1928 1911 1 1. DNS szerkezete Mi az örökítő anyag? Friedrich Miescher

Részletesebben

Polimeráz láncreakció a géntechnológia nélkülözhetetlen eszköze

Polimeráz láncreakció a géntechnológia nélkülözhetetlen eszköze Polimeráz láncreakció a géntechnológia nélkülözhetetlen eszköze László Éva Babeş-Bolyai Tudományegyetem, Kolozsvár A polimeráz láncreakció (PCR) napjaink molekuláris biológiai (genetikai) kutatásának nélkülözhetetlen

Részletesebben

Biomassza alapú bioalkohol előállítási technológia fejlesztése metagenomikai eljárással

Biomassza alapú bioalkohol előállítási technológia fejlesztése metagenomikai eljárással Biomassza alapú bioalkohol előállítási technológia fejlesztése metagenomikai eljárással Kovács Zoltán ügyvezető DEKUT Debreceni Kutatásfejlesztési Közhasznú Nonprofit Kft. Problémadefiníció Első generációs

Részletesebben

Bogácsi-Szabó Erika. Ph.D. értekezés tézisei. Témavezető: Prof. Dr. Raskó István. Szegedi Tudományegyetem, Molekuláris és sejtbiológiai Ph.D.

Bogácsi-Szabó Erika. Ph.D. értekezés tézisei. Témavezető: Prof. Dr. Raskó István. Szegedi Tudományegyetem, Molekuláris és sejtbiológiai Ph.D. Populációgenetikai és diagnosztikai célú mitokondriális DNS és autoszómális marker vizsgálatok Magyarországon feltárt régészeti csontleletekből és modern mintákból Bogácsi-Szabó Erika Ph.D. értekezés tézisei

Részletesebben

2011. január április 10. IPK Gatersleben (Németország) május 17. Kruppa Klaudia

2011. január április 10. IPK Gatersleben (Németország) május 17. Kruppa Klaudia 2011. január 10. 2011. április 10. IPK Gatersleben (Németország) Gatersleben (G-life) Country State District Town Administration Germany Saxony-Anhalt Salzlandkreis Seeland Basic statistics Area 16.00

Részletesebben

Fehérje expressziós rendszerek. Gyógyszerészi Biotechnológia

Fehérje expressziós rendszerek. Gyógyszerészi Biotechnológia Fehérje expressziós rendszerek Gyógyszerészi Biotechnológia Expressziós rendszerek Cél: rekombináns fehérjék előállítása nagy tisztaságban és nagy mennyiségben kísérleti ill. gyakorlati (therapia) felhasználásokra

Részletesebben

5. Molekuláris biológiai technikák

5. Molekuláris biológiai technikák 5. Molekuláris biológiai technikák DNS szaporítás kémcsőben és élőben. Klónozás, PCR, cdna, RT-PCR, realtime-rt-pcr, Northern-, Southernblotting, génexpresszió, FISH 5. Molekuláris szintű biológiai technikák

Részletesebben

NUKLEINSAVAK. Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag

NUKLEINSAVAK. Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag NUKLEINSAVAK Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag RNS = Ribonukleinsav DNS = Dezoxi-ribonukleinsav A nukleinsavak

Részletesebben

Evolúcióbiológia. Biológus B.Sc tavaszi félév

Evolúcióbiológia. Biológus B.Sc tavaszi félév Evolúcióbiológia Biológus B.Sc. 2011. tavaszi félév A biológiában minden csak az evolúció fényében válik érthetővé Theodosius Dobzhansky : Nothing in biology makes sense except in the light of evolution.

Részletesebben

A genetikai lelet értelmezése monogénes betegségekben

A genetikai lelet értelmezése monogénes betegségekben A genetikai lelet értelmezése monogénes betegségekben Tory Kálmán Semmelweis Egyetem, I. sz. Gyermekklinika A ~20 ezer fehérje-kódoló gén a 23 pár kromoszómán A kromoszómán található bázisok száma: 250M

Részletesebben

Molekuláris biológiai módszerek alkalmazása a biológiai környezeti kármentesítésben

Molekuláris biológiai módszerek alkalmazása a biológiai környezeti kármentesítésben Molekuláris biológiai módszerek alkalmazása a biológiai környezeti kármentesítésben Dr. Kovács Tamás, Kovács Árpád László Kármentesítés Aktuális Kérdései 2013 Budapest, 2013.03.21-22 Bioremediáció során

Részletesebben

Összehasonlító környezetmikrobiológiai. Böddi-szék vizében egy alga tömegprodukció idején

Összehasonlító környezetmikrobiológiai. Böddi-szék vizében egy alga tömegprodukció idején Összehasonlító környezetmikrobiológiai vizsgálatok a Böddi-szék vizében egy alga tömegprodukció idején Czeibert Katalin Témavezető: Dr. Borsodi Andrea Eötvös Loránd Tudományegyetem, Mikrobiológiai Tanszék

Részletesebben

Magyar vakcsiga (Bythiospeum hungaricum (Soós, 1927)) egy szisztematikai probléma vizsgálata genetikai módszerekkel

Magyar vakcsiga (Bythiospeum hungaricum (Soós, 1927)) egy szisztematikai probléma vizsgálata genetikai módszerekkel Földtan, őslénytan, flóra, fauna, természetvédelem www.mecsek.gportal.hu 2013.07.01. Szerkesztő: Fazekas Imre E-mail: fazekas.hu@gmail.com Magyar vakcsiga (Bythiospeum hungaricum (Soós, 1927)) egy szisztematikai

Részletesebben

A 16-3 bakteriofág host-range mutációi

A 16-3 bakteriofág host-range mutációi DIPLOMAMUNKA A 16-3 bakteriofág host-range mutációi Maász Anita biológus hallgató témavezető: Dr. Putnoky Péter Pécsi Tudományegyetem Természettudományi Kar Genetikai és Molekuláris Biológiai Tanszék 2004.

Részletesebben

DNS-számítógép. Balló Gábor

DNS-számítógép. Balló Gábor DNS-számítógép Balló Gábor Bevezetés A nukleinsavak az élő szervezetek egyik legfontosabb alkotórészei. Ezekben tárolódnak ugyanis az öröklődéshez, és a fehérjeszintézishez szükséges információk. Bár a

Részletesebben

Alu-inszerciós polimorfizmus saját hajszálból izolált DNS mintákbon

Alu-inszerciós polimorfizmus saját hajszálból izolált DNS mintákbon Alu-inszerciós polimorfizmus saját hajszálból izolált DNS mintákbon A kisérlet 60 perces előkészitő fázisra + 2 gyakorlati alkalomra tervezett. Előkészités: hajhagymák kiszedése, sejtek lizise, előkészités

Részletesebben

Tipizálási módszerek alkalmazása methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) törzsek molekuláris epidemiológiai vizsgálatai során

Tipizálási módszerek alkalmazása methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) törzsek molekuláris epidemiológiai vizsgálatai során Tipizálási módszerek alkalmazása methicillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) törzsek molekuláris epidemiológiai vizsgálatai során Ungvári Erika, Tóth Ákos Magyar Infektológiai és Klinikai Mikrobiológiai

Részletesebben

7. A b-galaktozidáz indukciója Escherichia coliban

7. A b-galaktozidáz indukciója Escherichia coliban 7. A b-galaktozidáz INDUKCIÓJA ESCHERICHIA COLIBAN 7. A b-galaktozidáz indukciója Escherichia coliban dr. Bauer Pál 7.1. Az enzimindukció jelensége Az élõlények valamennyi génjének állandó és folyamatos

Részletesebben

A DNS szerkezete. Genom kromoszóma gén DNS genotípus - allél. Pontos méretek Watson genomja. J. D. Watson F. H. C. Crick. 2 nm C G.

A DNS szerkezete. Genom kromoszóma gén DNS genotípus - allél. Pontos méretek Watson genomja. J. D. Watson F. H. C. Crick. 2 nm C G. 1955: 46 emberi kromoszóma van 1961: mrns 1975: DNS szekvenálás 1982: gén-bank adatbázisok 1983: R (polymerase chain reaction) Mérföldkövek 1 J. D. Watson F. H.. rick 2008 1953 2003 Watson genomja DNS

Részletesebben

MIKROSZKÓPIKUS GOMBÁK MIKOTOXIN-BONTÓ KÉPESSÉGÉNEK. Péteri Adrienn Zsanett DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI

MIKROSZKÓPIKUS GOMBÁK MIKOTOXIN-BONTÓ KÉPESSÉGÉNEK. Péteri Adrienn Zsanett DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI MIKROSZKÓPIKUS GOMBÁK MIKOTOXIN-BONTÓ KÉPESSÉGÉNEK VIZSGÁLATA Péteri Adrienn Zsanett Témavezetők: Dr. Varga János, Egyetemi docens Dr. Vágvölgyi Csaba, Tanszékvezető egyetemi

Részletesebben

Scan 1200 teljesítmény-értékelés evaluation 1/5

Scan 1200 teljesítmény-értékelés evaluation 1/5 evaluation 1/5 interscience Feladat Összefoglalónk célja a Scan 1200 teljesítmény-értékelése manuális és automata telepszámlálások összehasonlításával. Az összehasonlító kísérleteket Petri-csészés leoltást

Részletesebben

Genetikailag módosított növények detektálása élelmiszerekben polimeráz láncreakcióval

Genetikailag módosított növények detektálása élelmiszerekben polimeráz láncreakcióval Genetikailag módosított növények detektálása élelmiszerekben polimeráz láncreakcióval Szabó Erika és Szamos Jenõ Központi Élelmiszeripari Kutató Intézet, Budapest Érkezett: 2001. június 20. A nemesítõk

Részletesebben

Human genome project

Human genome project Human genome project Pataki Bálint Ármin 2017.03.14. Pataki Bálint Ármin Human genome project 2017.03.14. 1 / 14 Agenda 1 Biológiai bevezető 2 A human genome project lefolyása 3 Alkalmazások, kitekintés

Részletesebben

MINTAJEGYZŐKÖNYV A VÉRALVADÁS VIZSGÁLATA BIOKÉMIA GYAKORLATHOZ

MINTAJEGYZŐKÖNYV A VÉRALVADÁS VIZSGÁLATA BIOKÉMIA GYAKORLATHOZ MINTAJEGYZŐKÖNYV A VÉRALVADÁS VIZSGÁLATA BIOKÉMIA GYAKORLATHOZ Feladatok 1. Teljes vér megalvasztása rekalcifikálással 1.1 Gyakorlat kivitelezése 1.2 Minta jegyzőkönyv 2. Referenciasor készítése fehérjeméréshez

Részletesebben

Orvosi Genomtudomány 2014 Medical Genomics 2014. Április 8 Május 22 8th April 22nd May

Orvosi Genomtudomány 2014 Medical Genomics 2014. Április 8 Május 22 8th April 22nd May Orvosi Genomtudomány 2014 Medical Genomics 2014 Április 8 Május 22 8th April 22nd May Hét / 1st week (9. kalendariumi het) Takács László / Fehér Zsigmond Magyar kurzus Datum/ido Ápr. 8 Apr. 9 10:00 10:45

Részletesebben

2.6.16. VIZSGÁLATOK IDEGEN KÓROKOZÓKRA HUMÁN ÉLŐVÍRUS-VAKCINÁKBAN

2.6.16. VIZSGÁLATOK IDEGEN KÓROKOZÓKRA HUMÁN ÉLŐVÍRUS-VAKCINÁKBAN 2.6.16. Vizsgálatok idegen kórokozókra Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.7.0 1 2.6.16. VIZSGÁLATOK IDEGEN KÓROKOZÓKRA HUMÁN ÉLŐVÍRUS-VAKCINÁKBAN 01/2011:20616 Azokhoz a vizsgálatokhoz, amelyekhez a vírust előzőleg

Részletesebben

GLUCAGONUM HUMANUM. Humán glükagon

GLUCAGONUM HUMANUM. Humán glükagon 01/2008:1635 GLUCAGONUM HUMANUM Humán glükagon C 153 H 225 N 43 O 49 S M r 3483 DEFINÍCIÓ A humán glükagon 29 aminosavból álló polipeptid; szerkezete megegyezik az emberi hasnyálmirígy α-sejtjei által

Részletesebben

A nukleinsavak polimer vegyületek. Mint polimerek, monomerekből épülnek fel, melyeket nukleotidoknak nevezünk.

A nukleinsavak polimer vegyületek. Mint polimerek, monomerekből épülnek fel, melyeket nukleotidoknak nevezünk. Nukleinsavak Szerkesztette: Vizkievicz András A nukleinsavakat először a sejtek magjából sikerült tiszta állapotban kivonni. Innen a név: nucleus = mag (lat.), a sav a kémhatásukra utal. Azonban nukleinsavak

Részletesebben

MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI GYAKORLATOK

MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI GYAKORLATOK Molekuláris biológiai gyakorlatok - 1 MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI GYAKORLATOK Putnoky Péter PTE, TTK Genetikai és Molekuláris Biológiai Tanszék Tartalom Balesetvédelem 2. 3. DNS koncentráció meghatározás 10.

Részletesebben

Hazai méhészeti genomikai és genetikai vizsgálatok

Hazai méhészeti genomikai és genetikai vizsgálatok AKÁCKÖRÚTON Hazai méhészeti genomikai és genetikai vizsgálatok Előző cikkünkben arról írtunk, milyen új eszköztárral rendelkezünk a XXI. században a genetikai vizsgálatok területén, és mit adhat a molekuláris

Részletesebben

MIKROSZATELIT DNS- VIZSGÁLATOK A MOCSÁRI TEKNŐS NÉGY DUNÁNTÚLI ÁLLOMÁNYÁN

MIKROSZATELIT DNS- VIZSGÁLATOK A MOCSÁRI TEKNŐS NÉGY DUNÁNTÚLI ÁLLOMÁNYÁN MIKROSZATELIT DNS- VIZSGÁLATOK A MOCSÁRI TEKNŐS NÉGY DUNÁNTÚLI ÁLLOMÁNYÁN Molnár Tamás 1, Lanszki József 1, Magyary István 1, Jeney Zsigmond 2, Lehoczky István 2 1 Kaposvári Egyetem Állattudományi Kar,

Részletesebben

ÚJ GENERÁCIÓS SZEKVENÁLÁS

ÚJ GENERÁCIÓS SZEKVENÁLÁS VÍZMIKROBIOLÓGUSOK XI. ORSZÁGOS KONFERENCIÁJA - 2012 ÚJ GENERÁCIÓS SZEKVENÁLÁS LEHETŐSÉG, VAGY NEHÉZSÉG? MÁRIALIGETI KÁROLY EÖTVÖS LORÁND TUDOMÁNYEGYETEM, BUDAPEST 1953 JAMES D. WATSON, FRANCIS CRICK:

Részletesebben

GENOMIKA TÖBBFÉLE MAKROMOLEKULA VIZSGÁLATA EGYIDŐBEN

GENOMIKA TÖBBFÉLE MAKROMOLEKULA VIZSGÁLATA EGYIDŐBEN GENOMIKA TÖBBFÉLE MAKROMOLEKULA VIZSGÁLATA EGYIDŐBEN Strukturális genomika Genomkönyvtárak DNS szekvenálás Genom programok Polimorfizmusok RFLP DNS könyvtár készítés humán genom 1. Emésztés RE-kal Emberi

Részletesebben

10. CSI. A molekuláris biológiai technikák alkalmazásai

10. CSI. A molekuláris biológiai technikák alkalmazásai 10. CSI. A molekuláris biológiai technikák alkalmazásai A DNS mint azonosító 3 milliárd bázispár az emberi DNS-ben (99.9%-ban azonos) 0.1%-nyi különbség elegendő az egyedek megkülönböztetéséhez Genetikai

Részletesebben

A molekuláris biológia eszközei

A molekuláris biológia eszközei A molekuláris biológia eszközei I. Nukleinsavak az élő szervezetekben Reverz transzkripció replikáció transzkripció transzláció DNS DNS RNS Fehérje DNS feladata: információ tárolása és a transzkripció

Részletesebben

A termesztett búza diploid őseinek molekuláris citogenetikai elemzése: pachytén- és fiber-fish.

A termesztett búza diploid őseinek molekuláris citogenetikai elemzése: pachytén- és fiber-fish. OTKA K67808 zárójelentés 2012. A termesztett búza diploid őseinek molekuláris citogenetikai elemzése: pachytén- és fiber-fish. A fluoreszcens in situ hibridizáció (FISH) olyan technikai fejlettséget ért

Részletesebben

Fiatal kutatói beszámoló

Fiatal kutatói beszámoló Talajbiológiai- és biokémiai osztály Fiatal kutatói beszámoló Gazdag Orsolya tudományos segédmunkatárs Témavezető: Dr. Ködöböcz László 2013.12.03. Témacím: Különböző gazdálkodási módok hatása a talaj baktérium-közösségeinek

Részletesebben

Prenatalis diagnosztika lehetőségei mikor, hogyan, miért? Dr. Almássy Zsuzsanna Heim Pál Kórház, Budapest Toxikológia és Anyagcsere Osztály

Prenatalis diagnosztika lehetőségei mikor, hogyan, miért? Dr. Almássy Zsuzsanna Heim Pál Kórház, Budapest Toxikológia és Anyagcsere Osztály Prenatalis diagnosztika lehetőségei mikor, hogyan, miért? Dr. Almássy Zsuzsanna Heim Pál Kórház, Budapest Toxikológia és Anyagcsere Osztály Definíció A prenatális diagnosztika a klinikai genetika azon

Részletesebben

KUTATÁSI JELENTÉS. DrJuice termékek Ezüstkolloid Hydrogél és Kolloid oldat hatásvizsgálata

KUTATÁSI JELENTÉS. DrJuice termékek Ezüstkolloid Hydrogél és Kolloid oldat hatásvizsgálata KUTATÁSI JELENTÉS A Bay Zoltán Alkalmazott Kutatási Közalapítvány Nanotechnológiai Kutatóintézet e részére DrJuice termékek Ezüstkolloid Hydrogél és Kolloid oldat hatásvizsgálata. E z ü s t k o l l o

Részletesebben

Genomika. Mutációk (SNP-k) és vizsgálatuk egyszerű módszerekkel. DNS szekvenálási eljárások. DNS ujjlenyomat (VNTR)

Genomika. Mutációk (SNP-k) és vizsgálatuk egyszerű módszerekkel. DNS szekvenálási eljárások. DNS ujjlenyomat (VNTR) Genomika (A genom, génállomány vizsgálata) Mutációk (SNP-k) és vizsgálatuk egyszerű módszerekkel DNS szekvenálási eljárások DNS ujjlenyomat (VNTR) DNS chipek statikus és dinamikus információk vizsgálata

Részletesebben

mintasepcifikus mikrokapilláris elektroforézis Lab-on-Chip elektroforézis / elektrokinetikus elven DNS, RNS, mirns 12, fehérje 10, sejtes minta 6

mintasepcifikus mikrokapilláris elektroforézis Lab-on-Chip elektroforézis / elektrokinetikus elven DNS, RNS, mirns 12, fehérje 10, sejtes minta 6 Agilent 2100 Bioanalyzer mikrokapilláris gélelektroforézis rendszer G2943CA 2100 Bioanalyzer system forgalmazó: Kromat Kft. 1112 Budapest Péterhegyi u. 98. t:36 (1) 248-2110 www.kromat.hu bio@kromat.hu

Részletesebben

Conserved ortholog set (COS) markerek térképezése Aegilops kromoszómákon

Conserved ortholog set (COS) markerek térképezése Aegilops kromoszómákon Conserved ortholog set (COS) markerek térképezése Aegilops kromoszómákon Rövid tanulmányút 2011. 01.03-03. 30., John Inn Centre, Dept. of Crop Genetics, Norwich Research Park, Norwich NR4 7UH, UK Supervisor:

Részletesebben

Bioinformatika és genomanalízis az orvostudományban. Biológiai adatbázisok. Cserző Miklós 2018

Bioinformatika és genomanalízis az orvostudományban. Biológiai adatbázisok. Cserző Miklós 2018 Bioinformatika és genomanalízis az orvostudományban Biológiai adatbázisok Cserző Miklós 2018 A mai előadás Mi az adatbázis A biológia kapcsolata az adatbázisokkal Az adatbázisok típusai Adatbázis formátumok,

Részletesebben

Diagnosztikai célú molekuláris biológiai vizsgálatok

Diagnosztikai célú molekuláris biológiai vizsgálatok Diagnosztikai célú molekuláris biológiai vizsgálatok Dr. Patócs Attila, PhD MTA-SE Molekuláris Medicina Kutatócsoport, Semmelweis Egyetem II. sz. Belgyógyászati Klinika Laboratóriumi Medicina Intézet Genetikai

Részletesebben

Új temékek az UD- GenoMed Kft. kínálatában!

Új temékek az UD- GenoMed Kft. kínálatában! Új temékek az UD- GenoMed Kft. kínálatában! Szolgáltatásaink: Medical Genomic Technologies Kft. Betegtoborzás és biobanking Bioinformatika o Adatelemzés/adatbányászás o Integrált adatbázis készítés Sejtvonal

Részletesebben

NANOTECHNOLOGIA 6. előadás

NANOTECHNOLOGIA 6. előadás NANOTECHNOLOGIA 6. előadás A plazmid: Ha meg akarjuk ismerni egy fehérje működését, akkor sokat kell belőle előállítanunk. Ezt akár úgy is megtehetjük, hogy a kívánt géndarabot egy baktérumba ültetjük

Részletesebben

A nukleinsavak polimer vegyületek. Mint polimerek, monomerekből épülnek fel, melyeket nukleotidoknak nevezünk.

A nukleinsavak polimer vegyületek. Mint polimerek, monomerekből épülnek fel, melyeket nukleotidoknak nevezünk. Nukleinsavak Szerkesztette: Vizkievicz András A nukleinsavakat először a sejtek magjából sikerült tiszta állapotban kivonni. Innen a név: nucleus = mag (lat.), a sav a kémhatásukra utal. Azonban nukleinsavak

Részletesebben

A vira szekvenciák azonosítása Agrobacterium vitis törzsekből

A vira szekvenciák azonosítása Agrobacterium vitis törzsekből A vira szekvenciák azonosítása Agrobacterium vitis törzsekből DIPLOMADOLGOZAT Készítette: RADVÁNYI ATTILA Biológus MSc szakos hallgató Témavezető: DR. PUTNOKY PÉTER PTE TTK Biológiai Intézet Genetikai

Részletesebben

MOLEKULÁRIS BIOLÓGIA GYAKORLATOK

MOLEKULÁRIS BIOLÓGIA GYAKORLATOK MOLEKULÁRIS BIOLÓGIA GYAKORLATOK biológia BSc szakos hallgatók számára Dr. Putnoky Péter PTE TTK Biológiai Intézet 2005. A jegyzet elkészítését pályázat támogatta: A kétciklusú képzés bevezetése a magyar

Részletesebben

A doktori értekezés tézisei. A növényi NRP fehérjék lehetséges szerepe a hiszton defoszforiláció szabályozásában, és a hőstressz válaszban.

A doktori értekezés tézisei. A növényi NRP fehérjék lehetséges szerepe a hiszton defoszforiláció szabályozásában, és a hőstressz válaszban. A doktori értekezés tézisei A növényi NRP fehérjék lehetséges szerepe a hiszton defoszforiláció szabályozásában, és a hőstressz válaszban. Bíró Judit Témavezető: Dr. Fehér Attila Magyar Tudományos Akadémia

Részletesebben

Készült: Módosítva: július

Készült: Módosítva: július Tananyag címe: Transzaminázok vizsgálata Szerző: Dr. Mótyán János András egyetemi tanársegéd Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet Általános Orvostudományi Kar Debreceni Egyetem Készült: 2014.12.01-2015.01.31.

Részletesebben

AZ EMBERI MIKROBIOM: AZ EGYÉN, MINT SAJÁTOS ÉLETKÖZÖSSÉG Duda Ernő

AZ EMBERI MIKROBIOM: AZ EGYÉN, MINT SAJÁTOS ÉLETKÖZÖSSÉG Duda Ernő AZ EMBERI MIKROBIOM: AZ EGYÉN, MINT SAJÁTOS ÉLETKÖZÖSSÉG Duda Ernő Az NIH, az Egyesült Államok Nemzeti Egészségügyi Hivatala (az orvosi- és biológiai kutatásokat koordináló egyik intézmény) 2007 végén

Részletesebben

Agrobacterium vitis rezisztencia kialakítása az iaam szekvencia segítségével DIPLOMAMUNKA

Agrobacterium vitis rezisztencia kialakítása az iaam szekvencia segítségével DIPLOMAMUNKA Agrobacterium vitis rezisztencia kialakítása az iaam szekvencia segítségével DIPLOMAMUNKA készítette: GALAMBOS ANIKÓ biológus hallgató témavezető: Dr. PUTNOKY PÉTER PTE TTK Biológiai Intézet Genetikai

Részletesebben

NÖVÉNYGENETIKA. Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP /1/A

NÖVÉNYGENETIKA. Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP /1/A NÖVÉNYGENETIKA Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0010 A citológia és a genetika társtudománya Citogenetika A kromoszómák eredetét, szerkezetét, genetikai funkcióját,

Részletesebben

A Telomerase-specific Doxorubicin-releasing Molecular Beacon for Cancer Theranostics

A Telomerase-specific Doxorubicin-releasing Molecular Beacon for Cancer Theranostics A Telomerase-specific Doxorubicin-releasing Molecular Beacon for Cancer Theranostics Yi Ma, Zhaohui Wang, Min Zhang, Zhihao Han, Dan Chen, Qiuyun Zhu, Weidong Gao, Zhiyu Qian, and Yueqing Gu Angew. Chem.

Részletesebben

Növényi minták GMO-tartalmának kvalitatív meghatározása

Növényi minták GMO-tartalmának kvalitatív meghatározása Növényi minták GMO-tartalmának kvalitatív meghatározása Uri Csilla 1 Prokisch József 1 Sándor Erzsébet 2 Győri Zoltán 1 Debreceni Egyetem Agrártudományi Centrum, Mezőgazdaságtudományi Kar, 1 Élelmiszertudományi,

Részletesebben

A tananyag felépítése: A BIOLÓGIA ALAPJAI. I. Prokarióták és eukarióták. Az eukarióta sejt. Pécs Miklós: A biológia alapjai

A tananyag felépítése: A BIOLÓGIA ALAPJAI. I. Prokarióták és eukarióták. Az eukarióta sejt. Pécs Miklós: A biológia alapjai A BIOLÓGIA ALAPJAI A tananyag felépítése: Környezetmérnök és műszaki menedzser hallgatók számára Előadó: 2 + 0 + 0 óra, félévközi számonkérés 3 ZH: október 3, november 5, december 5 dr. Pécs Miklós egyetemi

Részletesebben

Tudományos Diákköri Konferencia. Dobrotka Paula

Tudományos Diákköri Konferencia. Dobrotka Paula Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem Vegyészmérnöki és Biomérnöki Kar Tudományos Diákköri Konferencia Dobrotka Paula Biomérnök MSc szak Egészségvédő szakirány Staphylococcus aureus transzkripciós

Részletesebben

Új temékek az UD-GenoMed Kft. kínálatában!

Új temékek az UD-GenoMed Kft. kínálatában! Új temékek az UD-GenMed Kft. kínálatában! Műanyag termékek: SARSTEDT műanyag termékek teljes választéka Egyszer használats labratóriumi műanyag eszközök szövet és sejttenyésztéshez Vérvételi és diagnsztikai

Részletesebben

KERINGŐ EXTRACELLULÁRIS VEZIKULÁK ÁLTAL INDUKÁLT GÉNEXPRESSZIÓS MINTÁZAT VIZSGÁLATA TROPHOBLAST SEJTVONALBAN

KERINGŐ EXTRACELLULÁRIS VEZIKULÁK ÁLTAL INDUKÁLT GÉNEXPRESSZIÓS MINTÁZAT VIZSGÁLATA TROPHOBLAST SEJTVONALBAN 2016. 10. 14. KERINGŐ EXTRACELLULÁRIS VEZIKULÁK ÁLTAL INDUKÁLT GÉNEXPRESSZIÓS MINTÁZAT VIZSGÁLATA TROPHOBLAST SEJTVONALBAN Kovács Árpád Ferenc 1, Pap Erna 1, Fekete Nóra 1, Rigó János 2, Buzás Edit 1,

Részletesebben

TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301)

TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301) Biokémia és molekuláris biológia I. kurzus (bb5t1301) Tematika 1 TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301) 0. Bevezető A (a biokémiáról) (~40 perc: 1. heti előadás) A BIOkémia tárgya

Részletesebben

SALMONELLA SSP. GYORS, MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI MÓDSZEREKKEL TÖRTÉNŐ DETEKTÁLÁSA

SALMONELLA SSP. GYORS, MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI MÓDSZEREKKEL TÖRTÉNŐ DETEKTÁLÁSA SALMONELLA SSP. GYORS, MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI MÓDSZEREKKEL TÖRTÉNŐ DETEKTÁLÁSA Nyirő-Fekete B., Tabajdi-Bajza N., Kovácsné Kis É., Pocklán E., Zoller L., Micsinai A., Gasparikné Reichardt J. Hungalimentaria

Részletesebben

Nukleinsavak. Szerkezet, szintézis, funkció

Nukleinsavak. Szerkezet, szintézis, funkció Nukleinsavak Szerkezet, szintézis, funkció Nukleinsavak, nukleotidok, nukleozidok 1869-ben Miescher a sejtmagból egy savas természetű, lúgban oldódó foszfortartalmú anyagot izolált, amit később, eredetére

Részletesebben

Evolúció. Dr. Szemethy László egyetemi docens Szent István Egyetem VadVilág Megőrzési Intézet

Evolúció. Dr. Szemethy László egyetemi docens Szent István Egyetem VadVilág Megőrzési Intézet Evolúció Dr. Szemethy László egyetemi docens Szent István Egyetem VadVilág Megőrzési Intézet Mi az evolúció? Egy folyamat: az élőlények tulajdonságainak változása a környezethez való alkalmazkodásra Egy

Részletesebben

TRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL

TRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL TRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL Az egyes biomolekulák izolálása kulcsfontosságú a biológiai szerepük tisztázásához. Az affinitás kromatográfia egyszerűsége, reprodukálhatósága

Részletesebben

Evolúcióelmélet és az evolúció mechanizmusai

Evolúcióelmélet és az evolúció mechanizmusai Evolúcióelmélet és az evolúció mechanizmusai Az élet Darwini szemlélete Melyek az evolúció bizonyítékai a világban? EVOLÚCIÓ: VÁLTOZATOSSÁG Mutáció Horizontális géntranszfer Genetikai rekombináció Rekombináció

Részletesebben

4.4 BIOPESZTICIDEK. A biopeszticidekről. Pécs Miklós: A biotechnológia természettudományi alapjai

4.4 BIOPESZTICIDEK. A biopeszticidekről. Pécs Miklós: A biotechnológia természettudományi alapjai 4.4 BIOPESZTICIDEK A mezőgazdasági termelésnél a kártevők irtásával, távoltartásával növelik a hozamokat. Erre kémiai szereket alkalmaztak, a környezeti hatásokkal nem törődve. pl. DDT (diklór-difenil-triklór-etán)

Részletesebben

Agrobacterium rezisztens növények létrehozása géncsendesítéssel

Agrobacterium rezisztens növények létrehozása géncsendesítéssel Agrobacterium rezisztens növények létrehozása géncsendesítéssel DIPLOMAMUNKA Készítette: CSEH ATTILA Biológus MSc szakos hallgató Témavezetők: GALAMBOS ANIKÓ, DR. PUTNOKY PÉTER PTE TTK Biológiai Intézet

Részletesebben

Az örökítőanyag. Az élőlények örökítőanyaga minden esetben nukleinsav (DNS,RNS) (1)Griffith, (2)Avery, MacLeod and McCarty (3)Hershey and Chase

Az örökítőanyag. Az élőlények örökítőanyaga minden esetben nukleinsav (DNS,RNS) (1)Griffith, (2)Avery, MacLeod and McCarty (3)Hershey and Chase SZTE, Orv. Biol. Int., Mol- és Sejtbiol. Gyak., VIII. Az örökítőanyag Az élőlények örökítőanyaga minden esetben nukleinsav (DNS,RNS) (1)Griffith, (2)Avery, MacLeod and McCarty (3)Hershey and Chase Ez az

Részletesebben

Igazságügyi genetika alapjai

Igazságügyi genetika alapjai Nyomok - Death Valley, CA 2007 / 10 / 11 Igazságügyi genetika alapjai Molekuláris orvostudomány - molekuláris bűnjelek genetikai analízise Pádár Zsolt Igazságügyi genetika vannak az ÉLET dolgai és vannak

Részletesebben

Filogenetikai analízis. Törzsfák szerkesztése

Filogenetikai analízis. Törzsfák szerkesztése Filogenetikai analízis Törzsfák szerkesztése Neighbor joining (szomszéd összevonó) módszer A fában egymás mellé kerülı objektumok kiválasztása a távolságmátrix értékei és az objektumoknak az összes többivel

Részletesebben

SZÉRUM KOLESZTERIN ÉS TRIGLICERID MEGHATÁROZÁS

SZÉRUM KOLESZTERIN ÉS TRIGLICERID MEGHATÁROZÁS SZÉRUM KOLESZTERIN ÉS TRIGLICERID MEGHATÁROZÁS A koleszterin, a koleszterin észterek, triacilglicerolok vízben oldhatatlan vegyületek. E lipidek a májból történő szintézist, és/vagy táplálék abszorpciót

Részletesebben

Gyakorlati Forduló Válaszlap Fizika, Kémia, Biológia

Gyakorlati Forduló Válaszlap Fizika, Kémia, Biológia Gyakorlati Forduló Válaszlap Fizika, Kémia, Biológia Töltsd ki az alábbiakat! A DIÁKOK NEVEI: CSOPORT JELE: ORSZÁG: ALÁÍRÁSOK: 1 Milyen változás(oka)t figyeltetek meg az alkoholnak a DNS-oldathoz adása

Részletesebben

In Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van.

In Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van. In Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van. Kneif Józsefné PTE KK Pathologiai Intézet Budapest 2017. 05. 26 Kromoszóma rendellenesség kimutatás PCR technika: izolált nukleinsavak

Részletesebben

A genetikai sodródás

A genetikai sodródás A genetikai sodródás irányított, nem véletlenszerű Mindig a jobb nyer! természetes szelekció POPULÁCIÓ evolúció POPULÁCIÓ A kulcsszó: változékonyság a populáción belül POPULÁCIÓ nem irányított, véletlenszerű

Részletesebben