Célcsoportok. + Ser, -NH 2. + (N-glikozid) α(n), Lys. etanol amin. + Ser, -COOH/-PO(OH) 2 Glu, Asp. zsírsavak. + primer, szekunder (O-glikozid)

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Célcsoportok. + Ser, -NH 2. + (N-glikozid) α(n), Lys. etanol amin. + Ser, -COOH/-PO(OH) 2 Glu, Asp. zsírsavak. + primer, szekunder (O-glikozid)"

Ignác Barna
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 élcsoportok Funkciós csoport Fehérjék zénhidrátok ukleinsavak Lipidek 2 α(), Lys (glikozid) er, etanol amin /P() 2 α(), Glu, Asp 5 er, zsírsavak er, Thr primer, szekunder (glikozid) szekunder 3 glicerin, inozitol, gangliozid Tyr ys Met

2 Funkciós csoport Fehérjék zénhidrátok ukleinsavak Lipidek Phe 2 Gln, Asn 2 Arg is 2 Trp ,6 2,3,4(5) E ,6,8 1,3,4,7,8 E

3 Miért hozunk létre funkciós csoportot? 1. incs jelen ami kell pl agyobb reaktivitásra van szükség pl. 3. zelektivitás pl Távolságtartás pl. spacer Taktika: Trial and error 1. 2 csoport kiépítése 2. 2 csoport kiépítése 3. csoport kiépítése 4. csoport kiépítése 5. csoport kiépítése 6. csoport kiépítése

4 Amino csoport kiépítése I. A) 2 ( 2 ) 2 2 etiléndiamin ( 2 ) ( 2 ) 3 2 1,3diamino propán 2 ( 2 ) 6 2 1,6diamino hexán 2 ( 2 ) 2 ( 2 ) 2 2 3,3'iminobispropilamin etiléndiamin Fehérje pozitívan töltött aminokkal és negatívan töltött karboxilátokkal Kationizált fehérje blokkolt karboxilátokkal és további pozitívan töltött aminokkal

5 1. Aktiváláshoz szükséges: = ED; aktív észter;, karbonildiimidazol 2. sökkenti a és növeli a számot pi! pl. BA pi 4.9 pi Közvetett (spacer) hidrofób kölcsönhatás 4. Alkalmazás: fehérje pl. RP, csak 2 2 van glikoprotein sziálsav B) P 2 ( 2 ) 2 2 P ( 2 ) 2 2 Alkalmazás R, D (5 ) foszforamidát hu, BF et al. ucleic Acid Res (1986)

6 ) 2 a) 3 p 710 chiff bázis a B 3 redukció b) 2 ( 2 ) 2 2 ( 2 ) 2 2 redukció ( 2 ) pontán, p 710, 10x felesleg 2. öveli a számot, pit 3. Közvetlen: a); közvetett: b) kiterjeszthető 4. Alkalmazás: szénhidrát, glikoprotein

7 D) Lindley,. ature (1956) a) Br ( 2 ) 2 2 p 810 ( 2 ) 2 2 tioéter b) c) I etilénimin ( 2 ) 2 ( 2 ) 2 2 ( 2 ) 2 hidrolízis (spontán) F 3 F 3 1. pontán, p 810, 10x felesleg (DTT), reagens metanolban, 6 M guanidium. l 2. öveli a számot, pit 3. Közvetett védőcsoport jódetiltrifluoracetamid 4. Alkalmazás: fehérje

8 idrazid csoport kiépítése a) hidrazin hidrát (Me) 2 2 b) c) 2 2 karbonsav dihidrazid (vízoldékony) hidrazon 2 adipinsav dihidrazid (vízoldékony) 1. em spontán reakció, előaktiválás (átalakítás reaktív vegyületté) 2 karbodiimid fenol komponens aktív észter szerves oldószer vízoldékony karbodiimid vizes oldószer 2. sökkenti a számot, nő pi 3. a) közvetlen; b) közvetett (spacer) 4. Alkalmazás: fehérjék, mikrotites lemezek (töltés mentesítés is)

9 a) hidrazin hidrát (Me) 2 2 redukció pl. ab 4 2 b) c) 2 2 karbonsav dihidrazid (vízoldékony) adipinsav dihidrazid (vízoldékony) 1. pontán reakció 2. em változtatja a töltésviszonyokat 3. Alkalmazás: szénhidrátok (dextrán, affinitás krom.) glikoproteinek (ellenanyag, enzim {P})

10 2 2 Fehérje molekula perjodátoxidált poliszacchariddal (aldehid csoporttal rendelkezik) Adipinsav dihidrazid idrazon kötés terminális hidrazid csoporttal 2

11 Ghosh, et al. Anal Biochem (1998) P b) a) 2 2 karbonsav dihidrazid ED imidazol, p 6 P foszforamid P adipinsav dihidrazid 2 Zanocco J. (1993) 1. Előaktiválás 2. sökkenti a számot 3. Alkalmazás: R, D (5 )

12 A) Karboxil csoport kiépítése 2 savamid borostyánkősav anhidrid Klotz, IM Methods in Enzymol (1967) glutár anhidrid maleinsav anhidrid telítetlen 3 citrakonsav anhidrid 3 p 3 2 2metilmaleinsav 3 1. pontán reakció 2. sökkenti, növeli, csökkenti pi 3. Közvetett 4. Alkalmazás: fehérjék, szénhidrát (amino)

13 B) észter ) l 2 2 éter klórecetsav 1. pontán reakció 2. Közvetett 3. Alkalmazás: szénhidrát, fehérjék Plotz, P Biochemistry (1982) p 8.5 (Br)I tioéter 2 I > Br > l > F

14 Aldehid csoport kiépítése A) Vicinális diolok oxidációja Bobbit, JM Adv arbohyd hem (1956) 10 mm nátrium perjodát 2, p 7 βd mannóz részlet poliszacharid láncban Van Lenten, L J Biol hem (1971) terminális, vicinális, cisz kötés hasadás oxidáció közben (aldehid képződés) sziálsavspecificitás 1 mm nátrium perjodát 0 o acetildneuraminic sav részlet a sziálsav rész szelektív oxidálása

15 B) Enzimatikus oxidáció Avigad, E et al. J Biol hem (1962) 6 6 euac euraminadáz v. galaktóz oxidáz βd galaktóz [AcDgalaktóz] 1. pontán reakció 2. Közvetlen 3. Alkalmazás: szénhidrát, glikoprotein

16 2 pformilbenzoesav hidroxiszukcinimid észter amid UVkromofór glutáraldehid ab 3 redukció szekunder amin p pontán reakció 2. Közvetett 3. Alkalmazás: fehérje, nukleinsav, szénhidrát ( 2 ) p x α,βtelítettlen 4hidroxi nonenal

17 Miért hozunk létre funkciós csoportot? 1. incs jelen ami kell pl agyobb reaktivitásra van szükség pl. 3. zelektivitás pl Távolságtartás pl. spacer Taktika: Trial and error 1. 2 csoport kiépítése 2. 2 csoport kiépítése 3. csoport kiépítése 4. csoport kiépítése 5. csoport kiépítése 6. csoport kiépítése

18 idroxil csoport kiépítése ab 3 p 8 szekunder amin 2 etanol amin ED amid 1. Aktiválás/redukció 2. Közvetett 3. Alkalmazás: fehérje, szénhidrát

19 Tiol csoport kiépítése, stratégiák Előny: vonzó mert viszonylag kevés van a fehérjékben átrány: könnyen oxidálódik ( ) 1. oxigén/nitrogén atmoszféra 2. EDTA alkalmazása ( M) fémkatalízis (pl. BAhoz 0.1M) A) Amino csoportból B) idroxi csoportból ) xo csoportból D) Karboxi csoportból E) Diszulfid kötésből

20 A) Aminocsoportból R 2 védett c) védett PDP MPT a) egyenes láncú b) gyűrűs ATA 2iminotiolán (Traut reagens) ATP acetil homocisztein tiolakton AMA

21 a) ATA 3 tioecetsav Duncan et al. Anal Biochem (1983) ATP AMA 3 (2 ) 2 tiopropionsav Fuji et al. hem Pharm Bull (1985) 3 merkapto borostyánkősav anhidrid 2 ( 2 ) 2 3 ( 2 ) 2 3 Klotz et al. Arch Biochem Biophys (1962) 2 Előny: nincs redukció specificitás lásd: AcoA

22 b) 2 l λ = 248 nm ε = 8840 M 1 cm 1 2iminotiolan p l EDTA! vízoldékony Traut, Biochemistry (1973) 2 3 Achomoszerin tiolakton 1020x p 77.5 Ag 3 segít 3 (IMMBILIZÁLÁ) Eldjarn et al. Acta hem cand (1963)

23 c) piridilditio ( 2 ) 2 ( 2 ) 2 PDP propionsav (Me) DTT 2 arlsson et al. Biochem J (1978) ( 2 ) 2 MPT 3 "benzoesav" (A) DTT 3 λ = 343 nm ε = 8880 M 1 cm 1 Thorpe et al. ancer Res (1987) 3 átrány: redukció! (UV!)

24 B) idroxi csoportból 2 l 2 l Tarentino et al. Glycobiology (1993) ) xo csoportból hidrazid 2 ( 2 ) 2 acetamido 10x EDTA ( 2 ) 2 AMB 3 "butánsav" (Et) 3 hidrazon kötés Taylor et al. Biochem Int (1980)

25 D) Karboxi csoportból ciszteamin 2 P ED p P redukció (DTT) 1. Előaktiválás (ED) 2. Áttölt 3. Alkalmazás: R, D (5 ), fehérjék

26 DE: 3 2 isztaminnal módosított fehérje Tiolcsoportot tartalmazó fehérje 2 2merkaptoetilamin 3 Diszulfid kötést tartalmazó fehérje konjugátum Inzulin diftéria toxin A lánc Miskimins et al Ellenanyag toxin eltmann et al. 1981

27 E) Diszulfid kötésből ditiotreitol (DTT, transz) ditioeritrol (DTE, cisz) X vegyes diszulfid leland WW Biochemistry (1964) X Y ( 2 ) 2 2merkaptoetanol X Y X Y 3 l 2merkaptoetilamin. l X Y l 3 3 l

28 incs komponens X Y ( 2 ) 2 P ( 2 ) 2 ( 2 ) 2 X Y Tris(2karboxietil)foszfin ( 2 ) 2 P oxidált foszfin ( 2 ) 2 ( 2 ) 2 ab 4 p 810, puffer Gailit J Anal Biochem (1993) 1. pontán 2. Felesleg fontos! (min. 20x) 3. Alkalmazás: fehérjék (szerkezet vizsgálat) kiépített X kötések 4. Denaturáló szerek: urea, guanidin, D 5. Egyebek: ys, 2 (tioglikolsav)

29 tartalmú redukálószerek X Y R X R Y vegyes diszulfid X R R R R X X Y R R R Y 2 X oxidált redukálószer

30 Tiol csoport kiépítése immobilizált redukálószerekkel spacer 3 acetilhomocisztein (1975) X Y diamino dipropilamin spacer Előny: nincs melléktermék (oxidált redukálószer) redukálószer immobil regenerálható dihidrolipoamid (1964)

31 MIBŐL? 2 2 M I T? 2 2

Hasonló dokumentumok

Biokonjugátumok. Hudecz Ferenc

Biokonjugátumok. Hudecz Ferenc Biokonjugátumok udecz Ferenc Előzmények 1) Fehérjék szerkezet hatás összefüggéseinek kutatása (1925 umner, J.B., Graham V.A.: The nature of insoluble crease Proc oc Exp Biol Med 22 504 (1925) Melyik aminosav