Szervrendszerek szintje. Szervek szintje. Atomok szintje. Sejtek szintje. Szöveti szint. Molekulák szintje
|
|
- Piroska Ráczné
- 7 évvel ezelőtt
- Látták:
Átírás
1
2 Egyed szintje Ökoszisztéma Szervrendszerek szintje Szervek szintje Szöveti szint Sejtek szintje Atomok szintje Molekulák szintje
3 TARTALOM: 1. Molekuláris biológiai/genetikai technikák 2. A genomika technikái 3. Komplex technikák Más előadásokban kerülnek tárgyalásra
4 TARTALOM (1): 1. Molekuláris klónozás 2. Polimeráz láncreakció (PCR) 3. Gél elektroforézis 4. Makromolekulák kimutatása 5. Gél retardáció 6. Footprint analízis 7. Immunhisztokémia 8. In situ hibridizáció 9. FRET 10. Áramlásos citometria 11. FACS
5 1. Molekuláris klónozás a. Restrikciós endonukleázok b. DNS ligázok c. Plazmid vektorok d. Restrikciós/ligálásos klónozás e. Egyéb enzimek
6 A restrikciós enzimek Werner Arber Daniel Nathans Hamilton O. Smith EcoRI
7 A restrikciós enzimek 1 5 túlnyúló vég: (pl. EcoRI) 3 túlnyúló vég: (pl. KpnI) Tompa vég: (pl. SmaI) VÁGÁS ELŐTT VÁGÁS UTÁN 5 - GAATTC G-3 5 -AATTC CTTAAG CTTAA-5 3 -G GGTACC GGTAC-3 5 -C CCATGG C-5 3 -CATGG CCCGGG CCC-3 5 -GGG GGGCCC GGG-5 3 -CCC -5 EcoRI metiláz RESTRIKCIÓS MODIFIKÁCIÓS RENDSZER CH GAATTC G-3 5 -AATTC CTTAAG CTTAA-5 3 -G -5 CH 3 EcoRI RE nem vág X
8 DNS ligáz 2 DNS ligáz Egy DNS molekula Két DNS molekula
9 Plazmidok 3 1. Kisméretű nagy kópiaszámú 1. Fertilitás plazmidok 2. Rezisztencia plazmidok 3. Virulencia plazmidok 2. Nagyméretű kis kópiaszámú
10 3 Plazmid vektorok 1. Klónozó vektorok 2. Génbeviteli vektorok 3. Génexpressziós vektorok
11 3 Plazmid vektorok Plazmid vektor Rekombináns plazmid
12 Molekuláris klónozás 3 Eredeti DNS molekulák: EcoRI hely EcoRI hely EcoRI enzim Ligáz Rekombináns DNS molekula:
13 Molekuláris klónozás 4 Plazmid vektor DNS fragments Rekombináns plazmid Rekombináns plazmid előállítása ligálással Transzformáció (sejtbe juttatás) E. coli Sokszorozódás a sejtben Baktérium sejtek sokszorozódása Egy kolónia egyetlen sejtből származik
14 lac operon 4 DNS P laci C E O lacz lacy laca T DNS represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor laktóz rep
15 lacz gén 4 - X-Gal kromogén szubsztrát DNS P rep laci C E O lacz lacy laca T DNS represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor indoxyl galaktóz IPTG X-Gal
16 lacz gén 4 - X-Gal kromogén szubsztrát DNS P rep laci C E O lacz lacy laca T DNS represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor pol -gal permeáz transzacetiláz
17 lacz gén a klónozásban 4 DNS P lacz laci C E O -fragment lacy laca T DNS represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor lacz -fragment Idegen DNS lacz - lacz -
18 Egyéb enzimek a klónozásban 5 5 -AGTGGGAATTCAAGGC-3 3 -TCACCCTTAAGTTCCG-5 EcoRI hasítás 5 -AGTGGG-3 3 -TCACCCTTAA-5 5 -AATTCAAGGC-3 3 -GTTCCG-5 - Klenow fragment - S1 nukleáz - Alkalikus foszfatázok 5 -AGTGGGAATT-3 3 -TCACCCTTAA-5 5 -AGTGGG-3 3 -TCACCC-5 5 -AGTGGG-OH-3 3 -TCACCCTTAA-P-5 5 -AATTCAAGGC-3 3 -TTAAGTTCCG-5 5 -CAAGGC-3 3 -GTTCCG-5 5 -P-AATTCAAGGC-3 3 -HO-GTTCCG P 3 -HO P - 5 OH-3 P - 5 defoszforiláció 5 -AGTGGG-OH-3 3 -TCACCCTTAA-5 5 -AATTCAAGGC-3 3 -HO-GTTCCG-5
19 2. PCR: polimeráz lánc reakció Forward primer Reverz primer denaturáció annealing szintézis 1. ciklus 2. ciklus 3. ciklus
20 PCR A PCR reakcióhoz szükséges: 1. DNS templát 2. DNS polimeráz 3. Két primer 4. dntp-k 5. Puffer 6 Denaturáció (2 DNS szál szétválik) Összekapcsolás (a primer kapcsolódása az egyszálú DNS-ekhez) Szintézis (új DNS szál képződése a primerről a DNS pol által) A DNS mennyisége minden ciklusban duplázódik (optimális körülmények között) melegítés C -ra hűtés C -ra melegítés C -ra Primer Új DNS Régi DNS
21 3. Gél elektroforézis 7 a. Agaróz gél elektroforézis b. Poliakrilamid gél elektroforézis (PAGE)
22 Agaróz gél elektroforézis 7 Molekulasúly marker
23 Agaróz gél elektroforézis 7 Etidium bromidban való áztatás A DNS csíkok fluoreszkálnak UV UV UV
24 Poliakrilamid gél elektroforézis 7 Molekulasúly marker 40 nukleotid gél 10 nukleotid
25 SDS-PAGE Sodium dodecil szulfát poliakrilamid gél elektroforézis 7 Fehérje 2 alegysége diszulfid híddal összekötve Egy alegységből álló fehérje -S-S- A SH HS B Negatív töltésű SDS molekulák C A C B A futás független a (1) molekulaszerkezettől (denaturáció) (2) és az aminosav összetételtől (maszkírozó hatás)
26 4. Makromolekulák kimutatása a. Southern blot b. Northern blot c. Western blot d. Eastern blot
27 Gél elektroforézis Southern blot 8 DNS Restrikciós emésztés Sir Edwin Southern Nitrocellulóz membrán Autoradiogram Filter papír Nitrocellulóz Gél Hibridizáció radioaktívan jelölt DNS próbával Lúgos oldat DNS transzfer a kapilláris erő felhasználásával: gélről nitrocellulóz membránra
28 Southern blot 8 (A) DNS transzfer gélről a membránra DNS Megemésztett marker DNS Papír törölköző Nylon membrán Gél Agaróz gél Puffer Nylon membrán (B) Hibridizációs analízis P Jelölt DNS próba Hibridizáló csíkok Nylon membrán Röntgen film
29 Northern blot 9 Sejtek, szövetek RNS kivonat RNS Agaróz gél elektrofotézis RNS marker RNS minta (hasonlóan a genomiális DNS-hez, nincsenek nem egzakt csíkok a molekulák heterogenitása miatt) Szűrő papír Blottolás Nitrocellulóz Gél Hibridizáció és autoradiográfia
30 Northern blot 9 Sejtek RNS kivonat Gél elektroforézis RNS minta Blottolás, Northern hibridizáció, autoradiográfia Elektroblot DNS próba hibridizációja a komplementer RNS molekulához
31 Western blot 10 (A) Elektroforézis/transzfer (B) Antitest reakció Elektromos áram Inkubáció antitest-1-el: Ab 1 ( ) SDS-PAGE Membrán Inkubáció enzimmel kötött antitesttel: Ab-2 ( ) (C) Színreakció Szubsztrát hozzáadása
32 5. Gél retardáció analízis 11 DNS/fehérje kölcsönhatás kimutatása Restrikciós fragmensek Restrikciós fragmensek + magi proteinek DNS marker
33 6. Footprint analízis DNS/fehérje kölcsönhatás kimutatása 12 Végjelölt restrikciós fragmensek - sejtmagi kivonat Végjelölt restrikciós fragmensek + sejtmagi kivonat DNS-kötő protein Részleges DNáz-I emésztés Footprint Gél elektroforézis, autoradiográfia Footprint (lábnyom)
34 7. Immunhisztokémia 13 - immunfluoreszcencia fluoreszcens festék B anti-c antitest B A Y Y C B B B A C B kecske anti-nyúl másodlagos antitest nyúl anti-c elsődleges antitest sejtfelszíni antigének citoplazmatikus antigének E sejtmag D citoplazma sejtfelszíni antigének citoplazmatikus antigének E sejtmag D citoplazma Közvetlen (direkt) módszer Közvetett (indirekt) módszer
35 7. Immunhisztokémia - immunperoxidáz módszerek 13 DAB + H 2 O 2 Ni-DAB + H 2 O 2 - peroxidáz diamino-benzidin (peroxid jelenlétében): barna csapadék - biotin avidin peroxidáz peroxidáz B B A Y C B kecske anti-nyúl másodlagos antitest nyúl anti-c elsődleges antitest Y peroxidáz Kecske anti-nyúl antitest (másodlagos antitest) Nyúl anti-c antitest sejtfelszíni antigének citoplazmatikus antigének E sejtmag D citoplazma Közvetett (indirekt) módszer peroxidáz biotin anti-nyúl antitest (másodlagos antitest) Y anti-c antitest peroxidáz peroxidáz avidin
36 7. Immunhisztokémia - immunperoxidáz módszerek 13 DAB + H 2 O 2 Ni-DAB + H 2 O 2 ABC módszer (ABC = avidin-biotin complex) Y avidin biotin peroxidáz Y Y anti-nyúl antitest (másodlagos antitest) elsődleges antitest antigén
37 7. Immunhisztokémia 13 - alkalikus foszfatáz - digoxigenin anti-digoxigenin alkalikus foszfatáz alkalikus foszfatáz B B A sejtmag Y C citoplazma kecske anti-nyúl másodlagos antitest nyúl anti-c elsődleges antitest Közvetett (indirekt) módszer B sejtfelszíni antigének citoplazmatikus antigének E D DIG Y anti-c antitest alk. foszfatáz anti-nyúl antitest Y alk. foszfatáz anti-nyúl antitest anti-c antitest Y DIG anti-c antitest alk. foszfatáz
38 8. In situ hibridizáció 14 - DNS vagy mrns kimutatása A próba jelölése: 1. Radioaktív (S 35 ) 2. Nem radioaktív - fluoreszcens - enzimatikus Radioaktív S 35 biotin próba (DNS vagy RNS) fluoreszcens festék sztreptavidin Fluoreszcens FISH avidin biotin Enzimatikus peroxidáz anti-dig antitest cél-dns DIG fluoreszcens festék fluoreszcencia Anti-DIG antitest DIG anti-dig-peroxidáz DIG próba cél-dns
39 Fluoreszcens in situ hibridizáció Metafázisos kromoszóma Osztódó sejt 14 tárgylemez A DNS denaturálódik Fluoreszcens jelölés
40 9. FRET Fluorescence resonance energy transfer 15 Kék fluoreszcens protein Sárga fluoreszcens protein UV fény gerjesztés Kék fény kibocsátás Kék fény gerjesztés Sárga fény kibocsátás Protein X Protein Y Nincs fehérje kölcsönhatás Van fehérje kölcsönhatás UV fény Kék fény UV fény Sárga fény
41 10. Áramlásos citometria 16 Flow cytometry PMT3 PMT4 Minta Fotomultiplier-ek PMT2 PMT1 szűrők Kétszínű szűrők sejtek Scatter detektorok Lézer Válogató
42 11. FACS Fluorescence activated cell sorting 17 Minta Burok folyadék Zöld fluoreszcencia vörös fluoreszcencia Fénysugár megosztó Lézer 90 0 fényszóró (garnularitás) Előre fényszóró (méret) Töltő gallér Detekciós lemezek Gyűjtő csövek Hulladék
A BIOTECHNOLÓGIA ALKALMAZÁSI LEHETŐSÉGEI A GYÓGYSZERKUTATÁSBAN
Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 A BIOTECHNOLÓGIA
RészletesebbenA molekuláris biológia eszközei
A molekuláris biológia eszközei I. Nukleinsavak az élő szervezetekben Reverz transzkripció replikáció transzkripció transzláció DNS DNS RNS Fehérje DNS feladata: információ tárolása és a transzkripció
Részletesebben5. Molekuláris biológiai technikák
5. Molekuláris biológiai technikák DNS szaporítás kémcsőben és élőben. Klónozás, PCR, cdna, RT-PCR, realtime-rt-pcr, Northern-, Southernblotting, génexpresszió, FISH 5. Molekuláris szintű biológiai technikák
RészletesebbenFehérje expressziós rendszerek. Gyógyszerészi Biotechnológia
Fehérje expressziós rendszerek Gyógyszerészi Biotechnológia Expressziós rendszerek Cél: rekombináns fehérjék előállítása nagy tisztaságban és nagy mennyiségben kísérleti ill. gyakorlati (therapia) felhasználásokra
RészletesebbenDNS-szekvencia meghatározás
DNS-szekvencia meghatározás Gilbert 1980 (1958) Sanger 3-1 A DNS-polimerázok jellemzői 5'-3' polimeráz aktivitás 5'-3' exonukleáz 3'-5' exonukleáz aktivitás Az új szál szintéziséhez kell: templát DNS primer
RészletesebbenAlapfogalmak I. Elsősorban fehérjék és ezek szénhidrátokkal és lipidekkel alkotott molekulái lokalizációjának meghatározásának eszköze.
Alapfogalmak I. Immunhisztokémia: Az immunhisztokémia módszerével szöveti antigének, vagy félantigének (haptének) detektálhatók in situ, specifikus antigén-antitest kötés alapján. Elsősorban fehérjék és
RészletesebbenA bioinformatika gyökerei
A bioinformatika gyökerei 1944: Avery a transforming principle a DNS 1952: Hershey és Chase perdöntő bizonyíték: a bakteriofágok szaporodásakor csak a DNS jut be a sejtbe 1953: Watson és Crick a DNS szerkezete
RészletesebbenMolekuláris biológiai technikák
Molekuláris biológiai technikák Wunderlich Lívius A Molekuláris biológiai technikák jegyzet igyekszik átfogó képet adni a jövő tudományának, a molekuláris biológiának a módszertanáról. A technikák elméleti
RészletesebbenBajtay Zsuzsa
Immunológia II GY 2018.03.09. Bajtay Zsuzsa 4. Antigén-ellenanyag kapcsolódás kimutatásán alapuló jelöléses módszerek ELISA, ELISPOT, Western blot, Immunhisztokémia Antigén-ellenanyag kapcsolódáson alapuló
RészletesebbenEllenanyag reagensek előállítása II Sándor Noémi
Ellenanyag reagensek előállítása II 2019.03.04. Sándor Noémi noemi.sandor@ttk.elte.hu Ellenanyagok módosítása 1. Kémiai módosítás Részleges redukció láncok közötti diszulfid hidak megszűnnek, szabad SH
RészletesebbenGyógyszerrezisztenciát okozó fehérjék vizsgálata
Gyógyszerrezisztenciát okozó fehérjék vizsgálata AKI kíváncsi kémikus kutatótábor 2017.06.25-07.01. Témavezetők : Telbisz Ágnes, Horváth Tamás Kutatók : Dobolyi Zsófia, Bereczki Kristóf, Horváth Ákos Gyógyszerrezisztencia
RészletesebbenA GENOM MEGISMERÉSÉNEK MÓDSZEREI
A GENOM MEGISMERÉSÉNEK MÓDSZEREI 20 GENETIKA ALAPOK 3-1 Jóslatok és a valóság a molekuláris biológiában. Mennyire látható előre a tudomány fejlődése? 1968 Simone de Beauvoir "Minden ember halandó" 1-2
RészletesebbenNÖVÉNYGENETIKA. Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP /1/A
NÖVÉNYGENETIKA Az Agrármérnöki MSc szak tananyagfejlesztése TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0010 A citológia és a genetika társtudománya Citogenetika A kromoszómák eredetét, szerkezetét, genetikai funkcióját,
Részletesebben7. A b-galaktozidáz indukciója Escherichia coliban
7. A b-galaktozidáz INDUKCIÓJA ESCHERICHIA COLIBAN 7. A b-galaktozidáz indukciója Escherichia coliban dr. Bauer Pál 7.1. Az enzimindukció jelensége Az élõlények valamennyi génjének állandó és folyamatos
RészletesebbenAz ellenanyagok orvosbiológiai. PhD kurzus 2011/2012 II. félév
Az ellenanyagok orvosbiológiai alkalmazása PhD kurzus 2011/2012 II. félév Ellenanyaggal működő módszerek Analitikai felhasználás Analitikai felhasználás Ellenanyag / antigén kapcsolódás Az Ab/Ag kapcsolat
RészletesebbenSzedimentáció, Biofizika szeminárium 2. szemeszter
Szedimentáció, Elektroforézis Biofizika szeminárium 2. szemeszter Makromolekulák analízise és elválasztása Szedimentáció Szedimentáció Miért van szükség centrifugálásra? A nehézségi erőtérben való ülepítés
RészletesebbenÚj temékek az UD- GenoMed Kft. kínálatában!
Új temékek az UD- GenoMed Kft. kínálatában! Szolgáltatásaink: Medical Genomic Technologies Kft. Betegtoborzás és biobanking Bioinformatika o Adatelemzés/adatbányászás o Integrált adatbázis készítés Sejtvonal
RészletesebbenAz áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése, diagnosztikai alkalmazásai
Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése, diagnosztikai alkalmazásai Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése Kereskedelmi forgalomban kapható készülékek 1 Fogalmak
RészletesebbenGENOMIKA TÖBBFÉLE MAKROMOLEKULA VIZSGÁLATA EGYIDŐBEN
GENOMIKA TÖBBFÉLE MAKROMOLEKULA VIZSGÁLATA EGYIDŐBEN Strukturális genomika Genomkönyvtárak DNS szekvenálás Genom programok Polimorfizmusok RFLP DNS könyvtár készítés humán genom 1. Emésztés RE-kal Emberi
RészletesebbenÁramlási citometria, sejtszeparációs technikák. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet ÁOK, PTE
Áramlási citometria, sejtszeparációs technikák Immunológiai és Biotechnológiai Intézet ÁOK, PTE Az áramlási citometria elve Az áramlási citometria ( Flow cytometria ) sejtek gyors, multiparaméteres vizsgálatára
RészletesebbenA Legionella jelenlétének kimutatása
A Legionella jelenlétének kimutatása Diagnosztikai lehetőségek Kari András Budapest 2016. 04.07. Legionella nemzetség: aerob coccoid-pálca Gram (gyengén festődik) kataláz +, oxidáz +, hippurátot hidrulizálja
RészletesebbenEngedélyszám: 18211-2/2011-EAHUF Verziószám: 1. 2460-06 Humángenetikai vizsgálatok követelménymodul szóbeli vizsgafeladatai
1. feladat Ismertesse a gyakorlaton lévő szakasszisztens hallgatóknak a PCR termékek elválasztása céljából végzett analitikai agaróz gélelektroforézis során használt puffert! Az ismertetés során az alábbi
RészletesebbenWestern blot technika
Western blot technika Immunoblot vagy Western blot - fehérjék vizsgálatára fejlesztették ki - módszer során az elektroforetikusan szétválasztott komponenseket szilárd hordozóra viszik - érzékenység vetekszik
RészletesebbenMolekuláris biológiai vizsgálatok
Molekuláris biológiai vizsgálatok Készítette: Dr. Polgár Beáta Dr. Schneider György 2015 Tartalomjegyzék Általános bevezető 1. Hibridizációs módszerek Szilárd fázisú hibridizáció 1.1. Southern blot 1.2.
RészletesebbenMolekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén
Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén Dr. Dallmann Klára A molekuláris biológia célja az élőlények és sejtek működésének molekuláris szintű
RészletesebbenDNS-számítógép. Balló Gábor
DNS-számítógép Balló Gábor Bevezetés A nukleinsavak az élő szervezetek egyik legfontosabb alkotórészei. Ezekben tárolódnak ugyanis az öröklődéshez, és a fehérjeszintézishez szükséges információk. Bár a
RészletesebbenGenomika. Mutációk (SNP-k) és vizsgálatuk egyszerű módszerekkel. DNS szekvenálási eljárások. DNS ujjlenyomat (VNTR)
Genomika (A genom, génállomány vizsgálata) Mutációk (SNP-k) és vizsgálatuk egyszerű módszerekkel DNS szekvenálási eljárások DNS ujjlenyomat (VNTR) DNS chipek statikus és dinamikus információk vizsgálata
RészletesebbenIII/3. Gének átvitele vektorokkal
III/3. Gének átvitele vektorokkal Vektor: (molekuláris) biológiai rendszer, amely képes új/idegen genetikai információt bejuttatni egy sejtbe. Független szaporodásra képes. Fajtái: Plazmidok (1-10 kb)
RészletesebbenMutáció detektáló módszerek
Mutáció detektáló módszerek Molekuláris genetikai vizsgáló módszerek 2014.03.19. Bármilyen eltérés a referencia szekvenciától Lehet Egy bázispárnyi szubsztitúció, deléció, inzerció Kromoszóma deléció,
RészletesebbenGlükoproteinek (GP) ELŐADÁSVÁZLAT ORVOSTANHALLGATÓK RÉSZÉRE
Glükoproteinek (GP) ELŐADÁSVÁZLAT ORVOSTANHALLGATÓK RÉSZÉRE SZTE ÁOK Biokémia Intézet összeállította: dr Keresztes Margit Jellemzők - relative rövid oligoszacharid láncok ( 30) (sok elágazás) (1-85% GP
Részletesebben5. Előadás Nukleinsavak kimutatása, szekvenálás
5. Előadás ukleinsavak kimutatása, szekvenálás A nukleinsav kimutatás etidiumbromid 3,8-diamino-5-etil-6-fenil-fenantrédiumbromid λ g =254-366 nm λ e =590 nm 2 2 + C25 Br - X + C3 C3 C3 C (C3)2 + (C2)3
RészletesebbenA FISH technika alkalmazása az előnemesítésben
Linc Gabriella A FISH technika alkalmazása az előnemesítésben Czuczor Gergely Bencés Gimnázium és Kollégium Győr, 2016. április 13. www.meetthescientist.hu 1 26 - 1997-98 vendégkutató - növény genetikai
Részletesebben11. Dr. House. Biokémiai és sejtbiológiai módszerek alkalmazása az orvoslásban
11. Dr. House. Biokémiai és sejtbiológiai módszerek alkalmazása az orvoslásban HIV fertőzés kimutatása - (fiktív) esettanulmány 35 éves nő, HIV fertőzöttség gyanúja. Két partner az elmúlt időszakban. Fertőzött-e
RészletesebbenSzakkifejezések III.
a hónap témája BIOTECHNOLÓGIA ROVA TVEZETŐ: Dr. Heszky László akadémikus Az előző 11-16. részekben a transzgénikus (GM) fajták nemesítésének alternatív módszereit mutattuk be. A korábbi I-II. fejezetekhez
Részletesebben12/4/2014. Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció. 1952 Hershey & Chase 1953!!!
Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció 1859 1865 1869 1952 Hershey & Chase 1953!!! 1879 1903 1951 1950 1944 1928 1911 1 1. DNS szerkezete Mi az örökítő anyag? Friedrich Miescher
RészletesebbenA basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan
A basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan fehérjét (FC-1 killer toxint) választ ki a tápközegbe, amely elpusztítja az opportunista patogén Cryptococcus neoformans-t.
RészletesebbenKönyvtárak, szekvenálás, mutagenezis
Könyvtárak, szekvenálás, mutagenezis GÉNKÖNYVTÁRAK GENOMIÁLIS KÖNYVTÁR (könyvtár rendelésre: pl. Stratagene) vektor: -fág (helyettesítő), kozmid, YAC, PAC, BAC méret: N = ln(1-p)/ln[1-(i/g)] klónok száma
RészletesebbenIn Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van.
In Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van. Kneif Józsefné PTE KK Pathologiai Intézet Budapest 2017. 05. 26 Kromoszóma rendellenesség kimutatás PCR technika: izolált nukleinsavak
RészletesebbenDNS KLÓNOZÁS: Egy DNS molekula megsokszorozása. In vivo-különféle gazdasejtekben
DNS KLÓNOZÁS DNS KLÓNOZÁS: Egy DNS molekula megsokszorozása In vitro-pcr In vivo-különféle gazdasejtekben POLIMERÁZ LÁNCREAKCIÓ (PCR) PCR A POLIMERÁZ LÁNC REAKCIÓ DNS MOLEKULÁK MEGSOKSZOROZÁSÁRA (AMPLIFIKÁLÁSÁRA)
RészletesebbenAntigén ellenanyag kapcsolódás kimutatásán alapuló
Antigén ellenanyag kapcsolódás kimutatásán alapuló analitikai módszerek ELISA, ELISPOT, Western blot, immunhisztokémia 2019.03.18. Józsi Mihály mihaly.jozsi@ttk.elte.hu (köszönet Sándor Noéminek) 4. Az
RészletesebbenDNS KLÓNOZÁS: Egy DNS molekula. In vivo-különféle gazdasejtekben
DNS KLÓNOZÁS DNS KLÓNOZÁS: Egy DNS molekula megsokszorozása In vitro-pcr In vivo-különféle gazdasejtekben POLIMERÁZ LÁNCREAKCIÓ (PCR) PCR A POLIMERÁZ LÁNC REAKCIÓ DNS MOLEKULÁK MEGSOKSZOROZÁSÁRA (AMPLIFIKÁLÁSÁRA)
RészletesebbenA PCR TECHNIKA ÉS ALKALMAZÁSI TERÜLETEI
Polimeráz láncreakció A PCR TECHNIKA ÉS ALKALMAZÁSI TERÜLETEI Tetszõleges DNS-szakaszról (templát) rövid idõ alatt korlátlan számú másolatot készíthetünk két iniciáló oligonukleotid (primer) és a DNS-polimeráz
RészletesebbenAz áramlási citometria gyakorlati alkalmazása az ondó rutin analízisben. Hajnal Ágnes, Dr Mikus Endre, Dr Venekeiné Losonczi Olga
Az áramlási citometria gyakorlati alkalmazása az ondó rutin analízisben Hajnal Ágnes, Dr Mikus Endre, Dr Venekeiné Losonczi Olga Labmagister Kft aktivitásai HumanCell SynLab Diagnosztika MensMentis LabMagister
RészletesebbenPÉCSI TUDOMÁNYEGYETEM ÁLTALÁNOS ORVOSTUDOMÁNYI KAR Áramlási citometria, sejtszeparálás ÁRAMLÁSI CITOMETRIA, SEJTSZEPARÁLÁS BIOFIZIKA 2. 2015. március 3. Dr. Bugyi Beáta Biofizikai Intézet ÁRAMLÁSI folyadékáramban
Részletesebben6. Fehérjék kimutatása. Biokémiai és sejtszintű vizsgálatok
6. Fehérjék kimutatása. Biokémiai és sejtszintű vizsgálatok Immunaffinitás, ellenanyagok. Western blot, ELISA, FACS, immuncitokémia, mikroszkópok (fény, EM, fluoreszcens, konfokális) 6. Fehérjék kimuatásának
RészletesebbenBiológiai módszerek alkalmazása környezeti hatások okozta terhelések kimutatására
Szalma Katalin Biológiai módszerek alkalmazása környezeti hatások okozta terhelések kimutatására Témavezető: Dr. Turai István, OSSKI Budapest, 2010. október 4. Az ionizáló sugárzás sejt kölcsönhatása Antone
RészletesebbenDNS munka a gyakorlatban. 2012.10.12. Természetvédelmi genetika
DNS munka a gyakorlatban 2012.10.12. Természetvédelmi genetika Munka fázisok DNS kivonás elektroforézis (fakultatív lépés) PCR Elektroforézis Szekvenálás Szekvencia elemzés faji azonosítás; variabilitás,
RészletesebbenNANOTECHNOLOGIA 6. előadás
NANOTECHNOLOGIA 6. előadás A plazmid: Ha meg akarjuk ismerni egy fehérje működését, akkor sokat kell belőle előállítanunk. Ezt akár úgy is megtehetjük, hogy a kívánt géndarabot egy baktérumba ültetjük
RészletesebbenDNS replikáció. DNS RNS Polipeptid Amino terminus. Karboxi terminus. Templát szál
DNS replikáció DNS RNS Polipeptid Amino terminus Templát szál Karboxi terminus Szuper-csavarodott prokarióta cirkuláris DNS Hisztonok komplexe DNS hisztonokra történő felcsvarodása Hiszton-kötött negatív
RészletesebbenImmundiagnosztikai módszerek
Western blot/immunoblot Immundiagnosztikai módszerek Katona Éva 2015-03-24 Ag Enzim/Fluorochrome/ izotóp Másodlagos, jelzett At Primer At Western Blotting fehérje/ag preparálás (1) Fehérje tisztítás/extrahálás
RészletesebbenSzedimentáció, Elektroforézis. Kollár Veronika
Szedimentáció, Elektroforézis Kollár Veronika 2010. 11. 25. Makromolekulák analízise és elválasztása Szedimentáció Miért van szükség centrifugálásra? A nehézségi erıtérben való ülepítés a 2-50 µm tartományban
RészletesebbenAntiszenz hatás és RNS interferencia (a génexpresszió befolyásolásának régi és legújabb lehetőségei)
Antiszenz hatás és RNS interferencia (a génexpresszió befolyásolásának régi és legújabb lehetőségei) Az antiszenz elv története Reverz transzkripció replikáció transzkripció transzláció DNS DNS RNS Fehérje
RészletesebbenTEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301)
Biokémia és molekuláris biológia I. kurzus (bb5t1301) Tematika 1 TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301) 0. Bevezető A (a biokémiáról) (~40 perc: 1. heti előadás) A BIOkémia tárgya
RészletesebbenMolekuláris biológiai módszerek m. hibridizációs s technikák
Molekuláris biológiai módszerek m II: közvetlen k szekvencia analízis, hibridizációs s technikák Tordai Attila OVSZ Molekuláris Diagnosztikai Labor Bp., 2011. április 21. Labordiagnosztikai szinten tartó
Részletesebbenmintasepcifikus mikrokapilláris elektroforézis Lab-on-Chip elektroforézis / elektrokinetikus elven DNS, RNS, mirns 12, fehérje 10, sejtes minta 6
Agilent 2100 Bioanalyzer mikrokapilláris gélelektroforézis rendszer G2943CA 2100 Bioanalyzer system forgalmazó: Kromat Kft. 1112 Budapest Péterhegyi u. 98. t:36 (1) 248-2110 www.kromat.hu bio@kromat.hu
RészletesebbenImmunológiai módszerek a klinikai kutatásban
Immunológiai módszerek a klinikai kutatásban 8. előadás Immunszerológia, immunkémia Az immunoassay-k érzékenysége A fő szérumfehérje frakciók és az ahhoz tartozó fehérjék Az Ig valencia és aviditás viszonya
RészletesebbenA T sejt receptor (TCR) heterodimer
Immunbiológia - II A T sejt receptor (TCR) heterodimer 1 kötőhely lánc lánc 14. kromoszóma 7. kromoszóma V V C C EXTRACELLULÁRIS TÉR SEJTMEMBRÁN CITOSZÓL lánc: VJ régió lánc: VDJ régió Nincs szomatikus
RészletesebbenÚj temékek az UD-GenoMed Kft. kínálatában!
Új temékek az UD-GenMed Kft. kínálatában! Műanyag termékek: SARSTEDT műanyag termékek teljes választéka Egyszer használats labratóriumi műanyag eszközök szövet és sejttenyésztéshez Vérvételi és diagnsztikai
RészletesebbenTranszgénikus növények előállítása
Transzgénikus növények előállítása Növényi biotechnológia Területei: A növények szaporításának új módszerei Növényi sejt és szövettenyészetek alkalmazása Mikroszaporítás Vírusmentes szaporítóanyag előállítása
Részletesebben6. Fehérjék kimutatása. Biokémiai és sejtszintű vizsgálatok
6. Fehérjék kimutatása. Biokémiai és sejtszintű vizsgálatok Immunaffinitás, ellenanyagok. Western-blot, ELISA, FACS, immuncitokémia, mikroszkópok (fény, EM, fluoreszcens, konfokális) 6. Fehérjék kimutatásának
RészletesebbenA géntechnológia genetikai alapjai (I./3.)
Az I./2. rész (Gének és funkciójuk) rövid összefoglalója A gének a DNS információt hordozó szakaszai, melyekben a 4 betű (ATCG) néhány ezerszer, vagy százezerszer ismétlődik. A gének önálló programcsomagként
Részletesebben(1) A T sejtek aktiválása (2) Az ön reaktív T sejtek toleranciája. α lánc. β lánc. V α. V β. C β. C α.
Immunbiológia II A T sejt receptor () heterodimer α lánc kötőhely β lánc 14. kromoszóma 7. kromoszóma 1 V α V β C α C β EXTRACELLULÁRIS TÉR SEJTMEMBRÁN CITOSZÓL αlánc: VJ régió β lánc: VDJ régió Nincs
RészletesebbenMozgékony molekulák vizsgálata modern mikroszkópiával
Dr. Vámosi György Mozgékony molekulák vizsgálata modern mikroszkópiával Debreceni Egyetem ÁOK Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet Debrecen, 2015. nov. 25. www.meetthescientist.hu 1 26 Fulbright ösztöndíj
RészletesebbenIn situ hibridizáció különböző módszereinek adaptálása és továbbfejlesztése búza genetikai alapanyagok elemzésére
OTKA F037331 Zárójelentés 2006. In situ hibridizáció különböző módszereinek adaptálása és továbbfejlesztése búza genetikai alapanyagok elemzésére Kísérleteinkben célul tűztük ki a transzgének kimutatására
Részletesebben6. Fehérjék kimutatása. Biokémiai és sejtszintű vizsgálatok
6. Fehérjék kimutatása. Biokémiai és sejtszintű vizsgálatok Immunaffinitás, ellenanyagok. Western-blot, ELISA, FACS, immuncitokémia, mikroszkópok (fény, EM, fluoreszcens, konfokális) 6. Fehérjék kimutatásának
RészletesebbenMOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI GYAKORLATOK
Molekuláris biológiai gyakorlatok - 1 MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI GYAKORLATOK Putnoky Péter PTE, TTK Genetikai és Molekuláris Biológiai Tanszék Tartalom Balesetvédelem 2. 3. DNS koncentráció meghatározás 10.
RészletesebbenAutoimmun vizsgálatok (ML AU)
mennyisége Autoimmun vizsgálatok (ML AU) ML AU 1.100 ANA ELISA(QuantaLite) ELISA - Szérum 200 l < 20 U/ml ML AU 1.200 Anti-dsDNA ELISA Szérum 200 l < 20 IU/ml ML AU 1.210 Anti-dsDNA IgG (Alegria) ELISA
RészletesebbenA tananyag felépítése: A BIOLÓGIA ALAPJAI. I. Prokarióták és eukarióták. Az eukarióta sejt. Pécs Miklós: A biológia alapjai
A BIOLÓGIA ALAPJAI A tananyag felépítése: Környezetmérnök és műszaki menedzser hallgatók számára Előadó: 2 + 0 + 0 óra, félévközi számonkérés 3 ZH: október 3, november 5, december 5 dr. Pécs Miklós egyetemi
RészletesebbenADATBÁNYÁSZAT I. ÉS OMICS
Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 ADATBÁNYÁSZAT
RészletesebbenGénszerkezet és génfunkció
Általános és Orvosi Genetika jegyzet 4. fejezetének bővítése a bakteriális genetikával 4. fejezet Génszerkezet és génfunkció 1/ Bakteriális genetika Nem szükséges külön hangsúlyoznunk a baktériumok és
RészletesebbenA géntechnológiát megalapozó felfedezések
2010. december BIOTECHNOLÓGIA Rova tvezető: Dr. Heszky László akadémikus A géntechnológia genetikai alapjai c. I. fejezet 1-5. részében azokat a tudományos eredményeket mutattuk be, melyek bizonyítják,
RészletesebbenGénexpresszió prokariótákban 1
β-galaktozidáz-szint laktóz elfogy a laktóz Génexpresszió prokariótákban 1 14. A GÉNEXPRESSZIÓ SZABÁ- LYOZÁSA PROKARIÓTÁKBAN Enzimindukció, indukálható operon. Policisztronos. Katabolit represszió, represszálható
RészletesebbenBiológus MSc. Molekuláris biológiai alapismeretek
Biológus MSc Molekuláris biológiai alapismeretek A nukleotidok építőkövei A nukleotidok szerkezete Nukleotid = N-tartalmú szerves bázis + pentóz + foszfát N-glikozidos kötés 5 1 4 2 3 (Foszfát)észter-kötés
Részletesebben13. RNS szintézis és splicing
13. RNS szintézis és splicing 1 Visszatekintés: Az RNS típusai és szerkezete Hírvivő RNS = mrns (messenger RNA = mrna) : fehérjeszintézis pre-mrns érett mrns (intronok kivágódnak = splicing) Transzfer
Részletesebben2011.11.25. Modern Biofizikai Kutatási Módszerek 2011.11.03. Kereskedelmi forgalomban kapható készülékek. Áramlási citometria (flow cytometry)
Modern Biofizikai Kutatási Módszerek 2011.11.03. Kereskedelmi forgalomban kapható készülékek Áramlási citometria (flow cytometry) Eljárás vagy mérési módszer, amellyel folyadékáramban lévő önálló részecskék,
RészletesebbenA termesztett búza diploid őseinek molekuláris citogenetikai elemzése: pachytén- és fiber-fish.
OTKA K67808 zárójelentés 2012. A termesztett búza diploid őseinek molekuláris citogenetikai elemzése: pachytén- és fiber-fish. A fluoreszcens in situ hibridizáció (FISH) olyan technikai fejlettséget ért
Részletesebben10. CSI. A molekuláris biológiai technikák alkalmazásai
10. CSI. A molekuláris biológiai technikák alkalmazásai A DNS mint azonosító 3 milliárd bázispár az emberi DNS-ben (99.9%-ban azonos) 0.1%-nyi különbség elegendő az egyedek megkülönböztetéséhez Genetikai
RészletesebbenA preventív vakcináció lényege :
Vakcináció Célja: antigénspecifkus immunválasz kiváltása a szervezetben A vakcina egy olyan készítmény, amely fokozza az immunitást egy adott betegséggel szemben (aktiválja az immunrendszert). A preventív
RészletesebbenÁramlási citometria 2011. / 4. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE KK
Áramlási citometria 2011. / 4 Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE KK Az áramlási citometria elve Az áramlási citometria ( Flow cytometria ) sejtek gyors, multiparaméteres vizsgálatára alkalmas
RészletesebbenMOLEKULÁRIS BIOLÓGIA GYAKORLATOK
MOLEKULÁRIS BIOLÓGIA GYAKORLATOK biológia BSc szakos hallgatók számára Dr. Putnoky Péter PTE TTK Biológiai Intézet 2005. A jegyzet elkészítését pályázat támogatta: A kétciklusú képzés bevezetése a magyar
RészletesebbenGÉNKLÓNOZÁS ÉS GÉNMANIPULÁCIÓ
GÉNKLÓNOZÁS ÉS GÉNMANIPULÁCIÓ Génklónozás Bármilyen klónozási eljárás célja, hogy egy ún. klónt, azaz tökéletesen egyforma szervezetek csoportját állítsák elő. Néhány növény, egyszerűen dugványozással
RészletesebbenBiofizika szeminárium
Szedimentáció, elektroforézis Biofizika szeminárium 013.04.3-5. Makromolekulák analízise és elválasztása Miért van szükség centrifugára? 50kg / mol 3 6 10 / mol = 3 8,33 10 kg Helyzeti energia változása
Részletesebbena NAT-1-1678/2012 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz
Nemzeti Akkreditáló Testület RÉSZLETEZÕ OKIRAT a NAT-1-1678/2012 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz Az Országos Epidemiológiai Központ Bakteriológiai Mikológiai Parazitológiai és Tipizáló fõosztály
RészletesebbenImmunológiai módszerek a klinikai kutatásban 14-15
Western blot/immunoblot Immunológiai módszerek a klinikai kutatásban 14-15 Enzim/ Fluorochrome 2 0 t 1 0 t Katona Éva g Western lotting fehérje/g preparálás (1) Fehérje tisztítás/extrahálás -Totál protein
RészletesebbenGéntechnológia és fehérjemérnökség
Géntechnológia és fehérjemérnökség elektronikus-jegyzet szerzők: Az ELTE Biokémiai Tanszék Munkaközössége Alexa Anita (12. és 13. fejezet), Fodor Krisztián (3. és 9. fejezet), Garai Ágnes (4. és 5. fejezet),
RészletesebbenAZ IS30 BAKTERIÁLIS INSZERCIÓS ELEM CÉLSZEKVENCIA VÁLASZTÁSÁNAK MOLEKULÁRIS TÉNYEZŐI DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI SZABÓ MÓNIKA
AZ IS30 BAKTERIÁLIS INSZERCIÓS ELEM CÉLSZEKVENCIA VÁLASZTÁSÁNAK MOLEKULÁRIS TÉNYEZŐI DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI SZABÓ MÓNIKA Gödöllő 2007. 1 A Doktori Iskola megnevezése: Szent István Egyetem Biológia Tudományi
RészletesebbenA lézer-szkenning citometria lehetőségei. Laser-scanning cytometer (LSC) Pásztázó citométer. Az áramlási citometria fő korlátai
Az áramlási citométer bevezetésének fontosabb állomásai A lézer-szkenning citometria lehetőségei Bacsó Zsolt Coulter, 1949 Coulter számláló szabadalmaztatása Crosland-Taylor, 1953 sejtek hidrodinamikai
RészletesebbenA nukleinsavak polimer vegyületek. Mint polimerek, monomerekből épülnek fel, melyeket nukleotidoknak nevezünk.
Nukleinsavak Szerkesztette: Vizkievicz András A nukleinsavakat először a sejtek magjából sikerült tiszta állapotban kivonni. Innen a név: nucleus = mag (lat.), a sav a kémhatásukra utal. Azonban nukleinsavak
RészletesebbenAntigén szervezetbe bejutó mindazon corpuscularis vagy solubilis idegen struktúra, amely immunreakciót vált ki Antitest az antigénekkel szemben az
Antigén szervezetbe bejutó mindazon corpuscularis vagy solubilis idegen struktúra, amely immunreakciót vált ki Antitest az antigénekkel szemben az immunválasz során termelődött fehérjék (immunglobulinok)
RészletesebbenA BIOTECHNOLÓGIA TERMÉSZETTUDOMÁNYI ALAPJAI
A BIOTECHNOLÓGIA TERMÉSZETTUDOMÁNYI ALAPJAI Műszaki menedzser MSc hallgatók számára Előadó: 2 + 0 + 0 óra, félévközi számonkérés 3 ZH: március 06?, április 10?, május 02?. dr. Pécs Miklós egyetemi docens
RészletesebbenAz ellenanyag mint eszköz, diagnosztikum, gyógyszer. Vizler Csaba 2010
Azellenanyagminteszköz, diagnosztikum,gyógyszer VizlerCsaba2010 Azellenanyag kötésesetében helyesebblenneaviditásrólbeszélni, deinkábbaffinitásthasználunk AzismétlődőimmunizálásokegyretöbbspecifikusIgG
RészletesebbenImmunológia alapjai. 16. előadás. Komplement rendszer
Immunológia alapjai 16. előadás Komplement rendszer A gyulladás molekuláris mediátorai: Plazma enzim mediátorok: - Kinin rendszer - Véralvadási rendszer Lipid mediátorok Kemoattraktánsok: - Chemokinek:
RészletesebbenImmunológia alapjai. 10. előadás. Komplement rendszer
Immunológia alapjai 10. előadás Komplement rendszer A gyulladás molekuláris mediátorai: Miért fontos a komplement rendszer? A veleszületett (nem-specifikus) immunválasz része Azonnali válaszreakció A veleszületett
RészletesebbenGÉNSEBÉSZET- DNS-KLÓNOZÁS
GÉNSEBÉSZET- DNS-KLÓNOZÁS A génsebészet olyan in vitro módszereket, technikát foglal magába, mely a génkészlet nagymérték megváltoztatását, célzott keveredését teszi lehetvé. A genetikai információt az
RészletesebbenTóth Mónika Ágnes PTE ÁOK Biofizikai Intézet Kereskedelmi forgalomban kapható készülékek
Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése, diagnosztikai alkalmazásai Az áramlási citométer és sejtszorter felépítése és működése Biofizika szeminárium Tóth Mónika Ágnes PTE ÁOK Biofizikai
RészletesebbenExtracelluláris vezikulák
Extracelluláris vezikulák izolálása és detektálási módszerei Dr. Kovács Árpád Ferenc 2016. 10. 5 Ōsumi Yoshinori japán tudós ÁTTEKINTÉS (1) György et al 2011 ÁTTEKINTÉS (2) I. Izolálási módszerek 1. Differenciál
RészletesebbenSzedimentáció, elektroforézis
014.04.14. Makromolekulák analízise és elválasztása Miért van szükség centrifugára? A fehérje molekulatömege 40 kda = 40 kg/mol T= 0 C =93 K m=(40 kg/mol):(6 10 3 mol)=6,67 10-3 kg Helyzeti energia változása
RészletesebbenCHO H H H OH H OH OH H CH2OH HC OH HC OH HC OH CH 2
4. Előadás ukleozidok, nukleotidok, nukleinsavak Történeti háttér Savas karakterű anyagok a sejtmagból 1869-71 DS a sejtmag fő komponense F. Miescher (Svájc) 1882 Flemming: Chromatin elnevezés Waldeyer:
RészletesebbenA glükóz reszintézise.
A glükóz reszintézise. A glükóz reszintézise. A reszintézis nem egyszerű megfordítása a glikolízisnek. A glikolízis 3 irrevezibilis lépése más úton játszódik le. Ennek oka egyrészt energetikai, másrészt
RészletesebbenAz orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP-4.1.2-08/1/A-2009-0011 Az orvosi
Részletesebben