Vizsgálati Központ. Eü.i Min. Tanúsítvány: 158/245/2005 IRATSZ.: AM1379-2

Átírás

1 Oldalszám: 7/1 Nyomtatva: IRATSZ.: AM ALUMÍNIUM LEMEZRE FELHORDOTT HATÓANYAG PSEUDOMONAS AERUGINOSA ELLENÉBEN KIFEJTETT MIKRÓBAELLENES HATÁSÁNAK ASTM E 2180/01 SZERINTI ÉRTÉKELÉSE Tanulmányprogram sz.: AM1379 Szerződéssz.: M06/0879.1MI Megrendelő: ALP s.r.l. Via Vezze, 62/ CALCINATE (BG) Vizsgált anyag: ALPactive Tanulmány vezetője:... Kelt:... (Dr. M. Cavalleri) Ezen jelentés részleges reprodukciója csak a laboratórium írásos jóváhagyásával megengedett.

2 Oldalszám: 7/2 Nyomtatva: VIZSGÁLT ANYAG A vizsgálat tárgyát egy ezüstalapú mikróbaellenes anyagot tartalmazó polimerrel bevont alumíniumlemez képezi. Elnevezése: Minőségi-mennyiségi összetétele: Stabilitása: ALPactive meghatározása folyik a Biolab SpA-nál feltételezések szerint meghaladja a 10 évet ELEMZÉSNEK ALÁVETETT MINTADARAB Az elemzésnek alávetett mintadarabok ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt, a vizsgált anyagot reprezentáló fémlemezekből állnak. Ezen belül is, az A jelű mintadarab ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt fém tesztdarabokból, míg a B jelű mintadarab olyan, ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt fém tesztdarabokból áll, amelyeket takarítási művelet szimulálására - kefés súrolásnak, valamint - a mostoha környezeti körülmények szimulálására - 72 órán keresztül 150 C-os hőmérsékletnek tettünk ki. Tételszám: 88804/10 Előállítás ideje: Átvételi sz.: R Átvétel ideje: Mintadarab azonosító sz.:

3 Oldalszám: 7/3 KÍSÉRLETI KÖRÜLMÉNYEK Tesztelési módszer Teszt mikroorganizmus Tesztdarabok A mikroorganizmusnak a vizsgált anyaggal való érintkezésének időtartama Teszthőmérséklet és relatív páratartalom Fertőző anyag koncentrációja Fertőző anyag térfogata ASTM E2180 Pseudomonas aeruginosa ATCC15442 Ezüstalapú mikróbaellenes szerrel kezelt fémlemezek (2.5x2.5 cm) Nem kezelt (ezüstalapú mikróbaellenes szer nélküli) fémlemezek (2.5x2.5 cm) 24±1 óra 37±1 C; 75±5% RH 1-5x10 6 /ml 1 ml ANYAGOK ÉS MÓDSZEREK MŰSZEREK: - általános laboratóriumi műszerek, ezen belül: - szárítószekrény (MEMMERT) - gőzös autokláv (FEDEGARI) - termosztát (MEMMERT) - ph-mérő (BECKMANN) - vortex rázó-keverő (VELP) - ultrahangos mosó (BRANSONIC) REAGENSEK: TSA: - Pancreatic digest of casein 17.0g - Papaic digest of soya bean 3.0g - NaCl 5.0g - K 2 HPO 4 2.5g - glükóz monohidrát 2.5g - steril víz 1000 ml-hez szükséges mennyiségben NaCl tartalmú (0.85%) fiziológiás oldat A baktériumtörzset TSA-kémcsőben órán át tenyésztettük, majd fiziológiás vízben körülbelül 10 8 CFU/ml koncentrációra felhígítottuk. Ezután 1 ml oldatot 1:100 arányban egy 0,3%-os koncentrációjú agar-agar-ból, illetve 0,85%-osNaCl-ból álló, félig kocsonyás, 45 ±2 C-on kiegyensúlyozott folyadékban felhígítottunk.

4 Oldalszám: 7/4 Ily módon egy 1-5x10 6 CFU/ml-es baktériumoldathoz jutottunk. Ezen oldatból fecskendővel 1 ml-t közvetlenül az A és B jelű, illetve a kontroll tesztdarabokra oltottunk, olymódon, hogy az oltvány a vizsgálati felületen egyenletesen terüljön el, egyfajta ál biofilm-réteget képezve rajta. A tesztdarabokat 24±1 órán át, 37±1 C hőmérsékleten és 75±5%-os relatív páratartalom mellett hagytuk érintkezni a baktériumoldattal. A visszanyerés - amelyre 0 órás, valamint 24 órás érintkezést követően került sor olymódon történt, hogy a tesztdarabokat steril csipesszel megfogva 100 ml fiziológiás oldatba merítettük, majd 1 percre ultrahangnak tettük ki őket. A fiziológiás oldat semlegesítő hatását egy előzetes vizsgálat során leellenőriztük. Ezt követően vételeztünk 1 ml-t a visszanyerésre használt oldatból, TSA-táptalajra ültettük és 37±1 C-on 48±1 órán át tenyésztettük. A CFU/ml számának kiszámítása háromszor egymás utáni, fiziológiás oldatban való 1:10 arányú hígítás, illetve 1 ml-nek táptalajra való hintése útján történt. BIBLIOGRÁFIA 1 ASTM E 2180/01 (jelen módszer) 2 ASTM E 1054: Practice for evaluation of inactivators of antimicrobial agents used in disinfectant, sanitizer, antiseptic, or preserved products 3 ASTM G 21/96: Practice for determining resistance od synthetic polymeric materials to fungi. EREDMÉNYEK KISZÁMÍTÁSA ÉS KIFEJEZÉSE Az eredmények a kezelt anyagnak a kontroll (kezeletlen) anyaghoz viszonyított bakteriális fertőzöttségének százalékosan csökkenésén keresztül kerültek kifejezésre, az ASTM E 2180/01 módszer által előírtaknak megfelelően: Kiszámítottuk a két kezelt (A és B jelű) tesztdarab illetve a kontroll tesztdarab tekintetében elvégzett három ismétlés során visszanyert mikroorganizmusok számának mértani közepét; majd kiszámítottuk a kontroll tesztdarab mértani átlagának antilogaritmusa, illetve a kezelt tesztdarab mértani átlagának antilogaritmusa közötti százalékos különbséget. Mértani átlag = (LogR1 + LogR2 + LogR3)/3 R1 = a vizsgált anyagnak, vagy a kontrollnak való expozíciót és tenyésztést követően visszanyert mikroorganizmusok száma (1. ismétlés) R2 = a vizsgált anyagnak, vagy a kontrollnak való expozíciót és tenyésztést követően visszanyert mikroorganizmusok száma (2. ismétlés) R3 = a vizsgált anyagnak, vagy a kontrollnak való expozíciót és tenyésztést követően visszanyert mikroorganizmusok száma (3. ismétlés) Csökkenés %-ban = (a-b)x100/a a = a kezelt mintadarab antilogaritmusa (mértani közepe) b = a kontroll antilogaritmusa (mértani közepe) A vizsgálatot akkor tekintettük érvényesnek, amikor a kezdeti számolás egyenlő vagy nagyobb számot adott, mint 10 6 CFU/ml.

5 Oldalszám: 7/5 EREDMÉNYEK A kezdeti oldat koncentrációjának értéke 1.0x10 6 volt. Teljesültek tehát a vizsgálat elfogadhatóságának előfeltételei. Az alábbi táblázat mutatja a vizsgált anyagnak vagy a kontrollnak való expozíció, majd tenyésztés háromszori ismétlése során visszanyert mikroorganizmusok számának mértani átlagát (ez a szám tehát figyelembe veszi úgy a számítás tárgyát képező táptalaj hígításának tényezőjét, mint azon, 1:100 arányú hígítást, amelyet az 1 ml kezdeti oldattal beoltott fém tesztdarabnak 100 ml visszanyerési hígítóba való bemerítése okozott). P. aeruginosa (visszanyerés 24 órát követően) B (ALPactive + kefés súrolás A (ALPactive) os expozíció 72 órán át) <2 < A vizsgált anyagnak 24 órán át való expozíciót követően az A jelű tesztdarab azonos kísérleti körülmények között a kontrollhoz képest 99,99%-ot meghaladó fertőzés csökkenést mutat. A vizsgált anyagnak 24 órán át való expozíciót követően a B jelű tesztdarab azonos kísérleti körülmények között a kontrollhoz képest 99,99%-ot meghaladó fertőzés csökkenést mutat. Megjegyzés: Az A és B jelű tesztdaraboknál a kontrollhoz képest még ha csak minimális mértékben is, de - már 0 óránál is tapasztalható volt csökkenés a CFU/ml tekintetében (lsd. Függelék).

6 Oldalszám: 7/6 ALUMÍNIUM LEMEZRE FELHORDOTT HATÓANYAG PSEUDOMONAS AERUGINOSA ELLENÉBEN KIFEJTETT MIKRÓBAELLENES HATÁSÁNAK ASTM E 2180/01 SZERINTI ÉRTÉKELÉSE FÜGGELÉK

7 Oldalszám: 7/7 TÁBLÁZATOK Az alábbi táblázatok a teszt-mikroorganizmusnak a vizsgált anyagnak való 0 órányi illetve 24±1 órányi expozícióját követően visszanyert Pseudomonas aeruginosa CFU/ml-adatait tartalmazzák, a számítás tárgyát képező táptalaj hígítási tényezőjének figyelembe vételével. P. aeruginosa (visszanyerés 0 órát követően) Anyag A (ALPactive) B (ALPactive + kefés súrolás os expozíció 72 órán át) CFU/ml P. aeruginosa (visszanyerés 24 órát követően) Anyag A (ALPactive) B (ALPactive + kefés súrolás os expozíció 72 órán át) 1. ismétlés <1 < ismétlés <1 < ismétlés <1 <1 9500