Vérkészítmény Tesztelése Tenyésztőmédiumkiegészítőként

Save this PDF as:
 WORD  PNG  TXT  JPG

Méret: px
Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Vérkészítmény Tesztelése Tenyésztőmédiumkiegészítőként"

Átírás

1 Vérkészítmény Tesztelése Tenyésztőmédiumkiegészítőként KÉSZÍTETTE: Babos Kitti Biomérnök szakos hallgató TÉMAVEZETŐ: Vácz Gabriella Budapest, 2014

2 Vérkészítmény Tesztelése Tenyésztőmédium-kiegészítőként Az őssejtekkel kapcsolatos kutatások napjainkban nagyon népszerűek, hiszen ezen sejtek felfedezésével és vizsgálatukkal lehetőség nyílt a regenerációs gyógyítás magasabb szintre emelésére. Az alkalmazásuk és működésük azonban továbbra is kérdőjelekkel teli. Az egyik vitatott terület a sejtek tenyésztésével van összefüggésben. A felnőtt sejteket felhasználó őssejtterápiák lényege ugyanis az, hogy az emberi szervezetben kis számban előforduló őssejteket speciális in vitro körülmények között feldúsítják és ezt a megnövelt, gyógyításra már elegendő mennyiséget jutatják el a probléma helyére. Ehhez a lépéshez olyan tenyésztőmédiumra van szükség, ami tartalmazza a sejtek növekedéséhez és differenciálódásához fontos anyagokat. Az egyik tápoldat-komponens az FBS (fetal bovine serum), azaz magzati szarvasmarha szérum, aminek az alkalmazása erősen vitatott. Az egyik komoly problémát a tudományos oldal jelenti, vagyis az, hogy az állati eredetű vér fertőzött lehet, így az alkalmazása komoly elővigyázatosságot igényel, ami a termék költségeit is megnöveli. Másfelől a szérum gyűjtése során rengeteg borjúmagzatot kell leölni, ami jelentősen megkérdőjelezi a módszer etikusságát. A TDK dolgozatom témája egy megfelelőbb kiegészítő találása az FBS helyett, amely ezeket a problémákat kiküszöböli. A vizsgált anyag egy emberi vérkészítmény, az SPRF (serumderived from platelet-rich fibrin), vagyis trombocitában gazdag fibrinből származtatott szérum volt. Ehhez nincs szükség állatok feláldozására és mivel a dúsításhoz szükséges mennyiség a beteg saját véréből elkészíthető, így az átfertőzéseket is megelőzi. A kísérletsorozat során fiatal, illetve idős donoroktól származó őssejteket kezeltem fiatal donor SPRF-ét, idős donor SPRF-ét, illetve FBS-t tartalmazó tápoldatokkal és vizsgáltam, hogy a három csoport körül melyik hozza a legnagyobb sejtnövekményt. A kapott eredmények arra engedtek következtetni, hogy a humán készítmény felülmúlhatja az állatit és így új távlatokat nyithat az őssejtterápiák felépítéséhez.

3 Testing a Blood Fraction as a Cell Culture Medium Supplement Stem cell based researches are very popular nowadays, because discovering and studying these cells made the chance to take regenerative healing to a higher level. However, their application and mechanisms are questionable so far. One of the most controversial areas is cell growing. The purpose of stem cell therapies, which use adult cells, is to enrich them to an increased number under in vitro conditions, because in the human body these cells are very rare. So then, this raised quantity is taken to the problematic part of the organism. For this step, we need a special culture media, which contains the important factors for cell growing and differentiation. One medium supplement is the FBS (fetal bovine serum), but the use of it is debated. Some problems are scientific, which means that the using of the product needs very serious providence, because it is inhuman. These methods make the FBS expensive. On the other hand, collecting the serum needs a lot of bovine sacrifices, which makes questions about the ethical part of this process. My study is about searching for another supplement instead of the FBS, which does not have the previously mentioned problems. The examined material was a human blood fraction named SPRF (serum-derived from platelet-rich fibrin). For this product we do not need to slaughter animals and there is no threat of contamination, because it can be acquired from the blood of the patients. In the experiments I used mediums with SPRF from an old donor, SPRF from a young donor and FBS as a media supplement to treat old and young mesenchymal stem cell lines. The following step was to test which one of these three groups had the greatest increase in the number of cells. The results showed that the human blood fraction can surpass the animal, and because of this, it can open up new perspectives for the construction of therapies utilizing stem cells.

4 Tartalomjegyzék 1. Bevezetés Irodalom Őssejtterápiák Az őssejtek típusai Mezenchimális őssejtek Terápia mezenchimális őssejtekkel: múlt, jelen és jövő Az őssejtek tápanyagigénye Problémák az FBS használatával Humán alternatívák Szérum-mentes médiumok Kísérletek és módszerek Ötlet a kísérletek megvalósítására Sejtkultúra fenntartása Őssejtek általános ellátása Őssejt médium készítése, sejtek táplálása Passzálás Vérkészítmény tesztelése idős és fiatal donorból származő őssejtvonalakon Tenyésztőmédiumok elkészítése Sejtek számlálása és tálcára tétele Az életképesség mérése Eredmények és értékelésük A médiumok hatása fiatal donorból izolált sejtekre... 27

5 4.2. A médiumok hatása idős donorból izolált sejtekre Az eredmények értékelése A folytatás Összefoglalás Függelék Fiatal őssejtek mérési eredményei Kontroll médiumban Fiatal donor SPRF-ét tartalmazó médiumban Idős donor SPRF-ét tartalmazó médiumban Idős őssejtek eredményei Kontroll médiumban Fiatal donor SPRF-ét tartalmazó médiumban Idős donor SPRF-ét tartalmazó médiumban Eredmények összefoglalása Irodalomjegyzék... 43

6 Rövidítésjegyzék ESC Embrionális őssejt Embryonic stem cell NESC Nem embrionális őssejt Non-embryonic stem cell MSC Mezenchimális őssejt Mesenchymal stem cell BMSC Csontvelő eredetű őssejt Bone marrow-derived stem cell HBMSC Humán csontvelő eredetű őssejt Human bone marrow-derived stem cell FBS Magzati szarvasmarha szérum Fetal bovine serum PRF Trombocitában gazdag fibrin Platelet-rich fibrin SPRF Trombocitában gazdag fibrinből származtatott szérum Serum-derived from platelet-rich fibrin HPL Humán trombocita lizátum Human platelet lysate

7 1. Bevezetés Az őssejtek és a velük kapcsolatos terápiák napjaink orvostudományi kutatásainak egyik fontos területét alkotják. Ezt a tényt az indokolja, hogy a különböző típusú őssejtek képesek más és más sejtvonalbeli sejtekké differenciálódni, így a regenerációs medicina fel tudja őket használni a beteg, illetve sérült szövetek újjáépítéséhez, korrekciójához 1. Használatuk azonban a sorozatos kísérletek ellenére is kérdésekkel teli, a tenyésztésüktől kezdve egészen a hatásmechanizmusukig léteznek eddig megmagyarázatlan és kérdéses jelenségek. Az egyik problémát a sejtek számának feldúsítása jelenti. Az általunk vizsgált úgynevezett MSC-k (mesenchymal stem cells), vagyis mezenchimális őssejtek a szervezetben nagyon kis mennyiségben fordulnak elő, ezért a terápiás célú alkalmazásuk során fontos, hogy egy megfelelő sejtszámot dúsítsunk fel belőlük in vitro körülmények között és ezt a megnövelt mennyiséget juttassuk el a probléma helyére 2. Más módszereken alapuló technikák is igénylik ezt a lépést. A problémát tulajdonképpen az jelenti, hogy az őssejtek számára biztosítani kell a megfelelő összetételű tápközeget. Ma ez úgy történik, hogy a létfontosságú komponenseket tartalmazó, úgynevezett alapmédiumot ki kell egészíteni FBS-el (fetal bovine serum) és sokszor egy antibiotikum-keverékkel. A gondot okozó anyag tulajdonképpen az FBS, ami, mint a neve is mutatja, magzati állapotú borjú vérszérumát jelenti. Ennek a használata felvet ugyanis különböző problémákat 3. Egyrészről az állati eredet miatt jelent gyenge láncszemet, mert ennek okán betegségek forrása lehet. Hogy ezt elkerüljék, a levett vérkészítmény nagyon gondos ellenőrzésen esik át, ami a termék költségeit jelentősen megemeli és továbbra sem jelent százszázalékos biztonságot. Másrészről az őssejtes kutatások népszerűsége miatt hatalmas mennyiségekre van szükség belőle, ami rengeteg borjú lemészárolását jelenti. Mivel ezek a problémák nem elhanyagolhatóak, már régóta próbálkoznak különböző kiegészítőkkel, amik helyettesíteni tudnák az FBS-t. A legjobb természetesen a szérummentes kultúra megteremtése lenne, mellőzve minden állati eredetű összetevőt, de sajnos a tudomány jelenleg állása szerint az eddig létrehozott készítmények hatása még bizonytalan. Ezeknél egyelőre jobbnak tűnnek a humán véralapú termékek 4. A munkám során az SPRF (serum-derived from platelet-rich fibrin) elnevezésű trombocitában gazdag fibrinkészítménnyel kísérleteztem, melynek már több publikációban is bemutatott, jótékony hatása ismeretes az őssejtekre 5, azonban médium-kiegészítőként még nem foglalkoztak vele. 1

8 Az előnye abban is rejlik, hogy ezzel az eljárással akár a beteg saját véréből megteremthetőek lennének a dúsítás feltételei, így állati áldozatot nem igényelne továbbiakban a művelet és jelentősebb kontaminációs kockázatot sem jelent. A kísérletsorozatom célja tehát az volt, hogy különböző életkorú emberekből származó sejteket kezeljek SPRF-el és FBS-el kiegészített alapmédiumokkal, majd vizsgáljam, hogy az emberi vérkészítmény hatása összemérhető-e az állatival. 2

9 2. Irodalom 2.1. Őssejtterápiák A regenerációs gyógyítás napjainkban egy igen gyorsan fejlődő irányzatát jelenti a kutatásoknak. Ennek az alapja az, hogy az emberi test rendelkezik egy belső, regenerációra és javításra specializálódott rendszerrel az őssejteken keresztül, amelyek szinte az összes szövetben megtalálhatóak 6. Ezen sejtek tanulmányozásának megkezdése Becker nevéhez fűződik. A kísérleteiben csontvelő eredetű sejteket fecskendezett sugárkezelt egerekbe, majd arra a megfigyelésre jutott, hogy a kezelt állatok lépében csomók keletkeztek, melyek száma arányos volt a beadott sejtek számával 7. A további tanulmányozások az őssejtek két alapvető tulajdonságára hívták fel a kutatók figyelmét: önmegújulásra képesek, valamint megfelelő körülmények között különböző sejtvonalakba tudnak differenciálódni. Ezek a felfedezések tették lehetővé a szövetépítés fogalmának megteremtését. Az 1970-es években W. T. Green arra a konklúzióra jutott, hogy a biológiai tudományok segítségével lehetséges regenerálni és létrehozni új szöveteket úgy, hogy az életképes sejtekből mérnökölt állványzatokat hozunk létre ban Langer és Vacanti kijelentették, hogy a szövetépítés egy komplex terület, ami alkalmazza a mérnökség alapjait, hogy olyan biológiai helyettesítőket alkosson, amelyek visszaadják, fenntartják vagy javítják a szövet funkcióit 9. Látszik tehát, hogy a fogalom ugyan finomodott az évek során, de a lényege megmaradt és ezt ismerték fel tulajdonképpen az őssejteket felhasználó terápiák Az őssejtek típusai Az őssejtek két típusát különböztethetjük meg: embrionális őssejtek (ESCs) o az első emberi ESC vonalat 1988-ban állapították meg 10 o totipotens tulajdonságúak: mindhárom embrionális csíralemez sejtjeivé tudnak differenciálódni 3

10 o a hólyagcsíra belső sejtcsomójából származnak: ICM (inner cell mass) beágyazódás után embriogenezis történik, amely során az ICM két különböző sejtlemezzé alakul: hipoblaszt epiblaszt o ez alakul tovább a három csíralemezzé, amelyekből képződnek a test különböző szövetei o totipotens tulajdonságuk hatalmas lehetőséget rejt, de az alkalmazás etikai kérdéseket vet fel: embrió morális állapota élet szentsége Nem-embrionális őssejtek (NESCs) o hierarchiában alacsonyabb szinten állnak, mint az embrionális őssejtek totipotens aktivitásukat ugyanis elvesztették 11 nem tudnak mindhárom csíralemez sejtjeivé alakulni o más szóval multipotens differenciálódási aktivitással rendelkeznek o izolálási területüket tekintve nagyon sokfélék: amnion folyadék 12 köldökzsinór szövet 13 zsírszövet 14 központi idegrendszer 15 csontvelő 16 retina 17 bőr 18 o tárgyalásuknál a csontvelőből származó sejtekre szeretnék kitérni, mivel munkám során ezekkel foglalkoztam csontvelő eredetű őssejtek (BMSCs) potenciál, hogy kötőszövetté differenciálódjanak 19 első izolációjuk úgy történt, hogy csontvelőt inkubáltattak műanyag edényben, majd négy óra után a nem letapadt sejteket eltávolították 4

11 o az edény mikroszkópos vizsgálata során heterogén sejtpopulációkat és adherens sejteket figyeltek meg 20 egy részük képes létrehozni a mezenchimát, vagyis azokat a szöveteket, amelyek az embrió mezodermájából keletkeznek: mezenchimális őssejtek (MSCs) Mezenchimális őssejtek A kísérleteket MSC sejttípussal végeztem a kutatás során. Ezt indokolta ezen sejtek sokszínűsége és a kutatócsoport profilja, vagyis az ortopédiai alkalmazások lehetősége. A sejtek legfőbb izolálási területeit, valamint a belőlük differenciáltatható sejtvonalakat az alábbi ábrával szeretném bemutatni 1 : 1. ábra Régóta megállapított tény, hogy a sorozatos megújulások a csontváz összes szövetét jellemzik. Ez tehát azt jelenti, hogy a végső állapotba került sejtek (pl. oszteoblasztok) elpusztulnak és helyükbe újonnan differenciálódottak lépnek. Ez az utánpótlás az MSC-kel 5

12 valósul meg, amelyek in vivo funkciója a megújítás, és pontosan ezt a tulajdonságot használja ki a terápiás alkalmazás is. Mivel a számuk igen kicsi: sejtmagvas csontvelői sejtre körülbelül 1 darab mezenchimális jut, ezért fel kell őket dúsítani a hatékony terápiás mennyiséghez Terápia mezenchimális őssejtekkel: múlt, jelen és jövő Az MSC-k első klinikai használata 1995-ben történt, amikor tanulmányt írtak abból, hogy 23 betegből kitenyésztettek egy adott mennyiséget és azt intravénásan visszaadagolták. A kísérlet konklúziója a következő: sikerült a sejteket in vitro dúsítani, valamint nem tapasztaltak toxikus hatást ig összesen 338 klinikai kipróbálást írtak le 22. Már a sejtekkel való korai kísérletek szakaszában rájöttek arra, hogy a tenyésztett sejtek gazdasejtbe juttatásához szükséges valamilyen hordozó, amely lokalizálja őket az érintett területhez. Kezdetben rágcsáló és kutya preklinikai modelleket állítottak fel, hogy tanulmányozzák a sejtek masszív csontjavításban való részvételét 23. A kísérlet úgy nézett ki, hogy csontvelőből izolált MSC-ket növesztettek in vitro körülmények között, megfelelő tenyészőmédium segítségével, inkubátorban (37 C, 5%-os CO 2 koncentráció), majd a kitenyésztett sejteket áthelyezték fibronektinnel bevont pórusos kálcium-foszfát kerámiára. Azért erre az anyagra esett a választás, mert előzőekben már felfedezett oszteokonduktív tulajdonságokkal rendelkezik és indukálja az MSC-k útját az oszteogenezis irányába 24. Azt tapasztalták, hogy az MSC-k csontot képeztek a pórusokban, ennek mértéke pedig nagyobb és gyorsabb volt, mint amikor egyszerűen csak csontvelővel dolgoztak. Az így kapott őssejtes hordozót műtét útján juttatták a kísérleti állat sérült testrészébe és azt tapasztalták, hogy az beépült és javította a további gyógyulási folyamatokat. Napjainkban a terápiák fejlődése három különböző irányvonalat alakított ki: 1.) Sejtcserés terápiák o genetikai betegségeknél o mutáns sejtek cseréje allogén (nem saját) donor sejtekre 6

13 2.) MSC-k, mint növekedési faktorok/citokinek pumpái o szívinfarktus és stroke modellben o az 1. ábra szerint nem tudnak szív miocitákká vagy neurális elemekké alakulni mégis javítást érnek el, de hogyan? szekretálnak molekulákat, amelyek stimulálják a javítómechanizmusokat és gátolják a degeneratív jelenségeket 3.) Szövetépítési stratégiák o MSC-k egyesítése egy 3 dimenziós állványban, ezzel helyettesítve in vivo a sérült, javítandó szövetek 3 dimenziós darabjait o például porcjavítás esetén szükség van egy fibronektin bevonatú szivacsra, melyet hialuronsavból készítenek szállító támasztott elvárások: o elősegíti és erősíti a sejttapadást o pórusos, így a differenciált sejtek képesek bőséges és specializált extracelluláris mátrixot kialakítani benne o engedi a bioaktív molekulák hozzáférését a sejtekhez o tökéletesen beépül az új szövetbe vagy lassan felszívódik a folyamat lépései 21 : 2. ábra 7

14 az MSC-ket izoláció után feldúsítját Petri csészékben, majd hozzáadják a fibronektinnel bevont szállítót, hagyják a sejteket rátapadni, végül beültetik a sérülés helyére A jövőbeli tervek természetesen arra vonatkoznak, hogy pontosan kiderítsük ezen sejtek működési mechanizmusait. Nem teljesen tisztázott például még az a terület sem, hogy melyek azok az anyagok, növekedési faktorok, amelyek kellenek ahhoz, hogy biztosítani lehessek a maximálisan hatásos és specifikus differenciálódást. További kérdés ezeknek a szükséges koncentrációja. A mechanizmus vizsgálatára kialakulóban lévő folyamat az úgynevezett sejtfestés 27. Ennek az elve az, hogy egy fúziós proteint használnak festékként, amely hozzá tud kötődni és így megjelölni a protein A vagy G elnevezésű fehérjét, ami nem kovalensen a sejtmembránhoz van horgonyozva a palmitinsav által. Ez a napjainkban fejlődő, sejteket megcélzó (ún. cell-targeting) stratégiák alapja, amit MSC-kre is ki lehet terjeszteni Az őssejtek tápanyagigénye Mint ahogy azt az előző fejezetekben is leszögeztem, az MSC-k mennyisége az emberi szervezetben olyan kevés, hogy a terápiás alkalmazáshoz mindenképpen szükséges feldúsítani őket in vitro körülmények között. Most arra szeretnék kitérni, hogy pontosan hogyan is történik ez a folyamat. Az őssejtek izolációja során a forrást (például csontvelőt) az emberi szervezetből való elkülönítése után egy speciális tenyésztő edénybe helyezik, és növesztő médiumot tesznek rá, amely tartalmazza a sejtek növekedéséhez és differenciálódásához szükséges anyagokat. Hogy megteremtsék a megfelelő körülményeket, amelyek a sejteket eredendően körülveszik, inkubátorban tárolják őket. Ez 37 C-os hőmérsékletet és 5%-os CO 2 koncentrációt jelent. A sejtek néhány nap után letapadnak az edény (általában Petri-csésze) aljára. Ez mikroszkópos vizsgálattal nyomon követhető folyamat. A tenyésztőmédium összetétele sejttípusonként eltér, nincsen olyan univerzális közeg, amely minden őssejtnek megfelelő lenne. A következőben szeretném felsorolni, hogy általánosságban milyen anyagokra van szükség a növesztési folyamat során 4 : 8

15 Aminosavak o az úgynevezett alapmédium tartalmazza, mivel minden őssejt igényli őket Szénhidrátok o alapmédiumban o energiaforrás o általában glükóz Hormonok o fiziológiásan a vérkeringésben szérum tartalmazza őket Növekedési faktorok o szérumban o sejt proliferációjának segítése és specifikus sejtfunkciók stimulálása o a legtöbb sejttípus-specifikus Proteáz inhibitorok o szérumban o tripszinációs folyamat inhibíciója védő hatás Nyíróerő kivédők o szérumban o turbulencia és perfúzió okozta stressz ellen Proteinek o szérumban o alacsony molekulatömegű komponensek szállítása, adhézió könnyítése Vitaminok o alapmédiumban o szerep a növekedésben és a proliferációban Glutamin o alapmédiumban o proteinek és ribonukleotidok szintézisének prekurzora 9

16 o légzési üzemanyag Nyomelemek o alapmédiumban Lipidek o néhány az alapmédiumban o szérumban is (szérum albumin szállítja őket) o energiatárolás, membránstruktúra kialakítása, transzpont- és jelölő rendszerek Antibiotikumok o fertőzések elkerülése érdekében o sokszor negatív befolyás Ezek alapján a tenyésztőmédium a következő összetevőkből áll: 1 3. ábra F Mint a fentiekből látható, a tenyésztőmédium szérum komponense rengeteg fontos anyagot tartalmaz a sejtek számára. 1 Forrás: 10

17 Funkciói összefoglalva 28 : biztosítania kell o hormonális faktorokat, amik stimulálják a sejtnövekedést és proliferációt, valamint előremozdítják a differenciálódást o transzport proteineket, amelyek szállítják a hormonokat, ásványokat és lipideket o lehorgonyzó és kiterjesztő faktorokat o stabilizáló és detoxikáló faktorokat ph biztosítás, proteáz inhíbiálás A tenyésztőmédium fejlesztése során az FBS, vagyis a magzati szarvasmarha szérum vált a legígéretesebb kiegészítővé, így jó eredményei alapján ez terjedt el legszélesebb körben. Használata azonban ellentmondásos Problémák az FBS használatával A problémákat kétféle módon lehet megközelíteni. Egyrészről beszélhetünk tudományos oldalról, ami az FBS állati eredetéből fakad. Ebből kiindulva ugyanis az összetétele erősen variábilis, sokszor magas az endotoxin-tartalma, immunválaszt válthat ki, máig nem azonosított komponenseket tartalmaz 28 és könnyen mikrobiológiai fertőzések forrása lehet. Utóbbi miatt az összegyűjtött szérum komoly ellenőrzési procedúrán megy keresztül, ami a végtermék árát jelentősen megnöveli. A másik problémát az etikusság kérdése jelenti. Mivel az FBS a legelterjedtebb kiegészítő az in vitro eukarióta kultúrák körében, ezért nagy mennyiségekben kell előállítani. Ez a szám évi körülbelül liter, amihez több mint egy millió borjút kell leölni 3. Ez rengeteg állati áldozatot jelent és a mennyiség az in vitro módszerek (mint klónozás, genetikai módosítások) alkalmazásának fejlődése miatt növekedni fog az elkövetkező években. Fontos tehát a magzati borjú jóléte a vérvétel során, hiszen felmerül a fötális tudatosság kérdése

18 A magzati vér gyűjtése különböző hús-előállítási folyamatok során történik, miután a méhet eltávolították a kizsigerelés fázisában a leölt tehénből. A készítés további lépéseit az alábbi ábra mutatja 30 : 4. ábra A fötális tudatosság lehetőségéről a vélemények megosztottak. Ha az állatnak már kialakult a tudata (agyi érettség), akkor az azt jelenti, hogy érez fájdalmat, képes szenvedni. Kísérletes módon sikerült kimutatni, hogy a magzat reagál a fájdalmas stimulációkra a vemhesség késői stádiumában 31. Mivel a vérvétel is ebbe az időszakba esik (nagyobb magzattöbb vér) ezért különböző előírások születtek arra, hogy megelőzzék az állatok szenvedését. Mindemellett a biomedicinában kedvelt módszer az állatok lecserélése, érvényesül a 3R (replace, reduce, refine) elve, vagyis a lecserélés, csökkentés és javítás 32. Ezért 2003-ban szerveztek egy konferenciát, annak megvitatására, hogyan lehetne csökkenteni az FBS használatát és korlátozni-, vagy megszüntetni az élő, még meg nem született borjúk szenvedését ben Dániában ültek össze újra, ahol bemutatták, hogy lehetséges lehet állati termékek nélkül sejteket növeszteni. A kísérleteknek két irányvonala ismert: Emberi helyettesítők keresése Szérum-mentes kultúrák kifejlesztése 12

19 Humán alternatívák Az emberi vérből készült helyettesítők sok problémát ki tudnának küszöbölni, de néhány kellemetlenség továbbra is fennáll az alkalmazásukkor. Előnyök: o nincs állati eredetű vírusveszély o akár a beteg saját véréből is elő lehet állítani a szükséges mennyiséget nincs immunológiai probléma, megbetegítés veszélye o több kipróbált készítmény hatása összemérhető-, vagy akár jobb is volt, mint az FBS-é Hátrányok: o továbbra sem precízen definiált összetevők o immunreakció ritkán, de előfordulhat o humán betegségeket hordozhat Az emberi alternatívák magas trombocita-tartalommal rendelkező vérkészítmények. Ezt azért érdemes kiemelni, mert régóta ismert tény, hogy a trombociták, vagy más néven vérlemezkék nagyon jó növekedési faktor-források. Ezt a trombocita gélek klinikai tanulmányokban való vizsgálata során állapították meg, amikor is azt tapasztalták, hogy csökkentik a műtétekkel járó duzzadást és fájdalmat 33, gyorsítják a lágyszövet helyreállítását 34 és növelik a csontsejtek regenerációját 35. Ennek a magyarázata az, hogy a vérlemezkék szekretálnak egyfelől kemotaxisért és az extracelluláris mátrix alakulásáért felelős faktorokat, mint a PDGF (platelet-derived growth factor) és TGFβ-1 (transforming growth factor β-1) 36. A faktorok másik csoportja a hemosztázist, proliferációt és a sebgyógyulás újraalakulásos fázisát segíti elő: FGF (fibroblast growth factor) 37, IGF (insulin-like growth factor) 38, EGF (epidermal growth factor) 39 és VEGF (vascular endothelial growth factor) 40. A fent említett tulajdonságokból következtethetünk arra, hogy az emberi vérkészítmények alkalmasak lehetnek az FBS helyettesítésére. A továbbiakban kettő alternatívát szeretnék kiemeltem tárgyalni. A hpl-el, vagyis a humán trombocita lizátummal 2005-ben foglalkoztak először és különböző kísérletekben nagyon hatásosnak bizonyult. Ennek hátterében az előbb felsorolt, 13

20 trombociták által szekretált citokinek, növekedési faktorok állnak. Ezt a készítményt PRP-ből, vagyis trombocita-gazdag vérplazmából állítják elő, a következő lépésekben 30 : 5. ábra A másik készítmény a PRF (platelet-rich fibrin), vagyis trombocitában gazdag fibrin, amely nevéből az látszik, hogy itt a vérlemezkék kedvező tulajdonsága mellett a fibrin is jelen van, ami nem más, mint a fibrinogén aktivált alakja 41. Utóbbi egy oldható molekula, amely állandóan jelent van mind a vérplazmában, mind a trombociták α-granuláiban. Szerepe a vérlemezke-aggregáció a hemosztázis alatt, amikor is oldhatatlan fibrinné alakul. A PRF tulajdonképpen egy természetes fibrin mátrix, első fejlesztése Franciaországban történt, szájsebészeti alkalmazásban 42. Sok kísérlet történt az őssejtekkel való kapcsolatának kiderítésére is és azt tapasztalták, hogy elősegítette azok proliferációját és migrációját 43. A fibrin továbbá az angiogenezis, vagyis az új vérerek alakulásának természetes támogatója, valamint elősegíti a sebgyógyulást az epithel sejtek és a fibroblasztok mechanizmusának vezérlése által 44. Összefoglalva tehát rengeteg előnyös tulajdonsággal rendelkezik és az előállítása is igen egyszerű 45 : ábra

21 A PRF izolációnál a vért alvadásgátlót nem tartalmazó vérvételi csőbe kell levenni, majd megfelelő időtartamú és fordulatszámú centrifugálás után azt tapasztaljuk, hogy a vér 3 különböző frakcióra válik szét: egy alsó, vörösvérsejteket tartalmazó (RBC, red blood cell)-; egy felső, trombocitában szegény plazmát tartalmazó (PPP, platelet-poor plasma)- és a közöttük elhelyezkedő, kocsonyás részre, ami nem más, mint a PRF. Mint az felső ábra jobb oldali képe is mutatja, ez csipesszel megfogható és kihúzható a csőből, ami megkönnyíti az izolálását. Médium-kiegészítőként még nem tesztelték ugyan a kocsonyás állaga miatt, de mivel az előbb említett, előnyös tulajdonságokkal rendelkezik, ezért a kipróbálása mindenképpen indokolt. Jelen dolgozatom célja a kinyomkodása utána kapott ún. SPRF (serum from platelet-rich fibrin) vizsgálata, mint támogató-komponens Szérum-mentes médiumok Természetesen a legjobb megoldást az a tenyésztőmédium jelentené, amely nem tartalmaz semmilyen emberi, vagy állati eredetű összetevőt, de ennek a kifejlesztése még nem teljesen megoldott. Néhány cég ugyan már árul használatra kész termékeket, de ezek továbbra is tartalmaznak állati eredetű fehérjéket. Ha ezektől is meg tudnánk szabadítani a médiumot, akkor beszélhetnénk kémiailag definiált szérum-mentes médiumról 46. Ennek a megvalósítása érdekében rekombináns technológiával hoznák létre a kívánt növekedési faktorokat, de ez az eljárás igen drága. Az új terméknek a következő kritériumoknak kell továbbá megfelelni: könnyen elérhető standardizált összetevők tripszin-kompatibilitás regisztrált összetevők Vannak továbbá köztes technikák is, amelyek a sejttenyésztés elején még teljesen mértékben FBS-es médiumot használnak, majd szépen fokozatosan, mintegy hozzászoktatják a sejteket a szérum-mentes tápoldathoz 4. Az eddig piacra hozott médiumoknak létezik egy adatbázisa is, ahol körülbelül 450 különböző termék található, ám a hatásosságukról egyelőre szűkös információk állnak rendelkezésünkre

22 3. Kísérletek és módszerek 3.1. Ötlet a kísérletek megvalósítására A kísérleteink célja az volt, hogy egy olyan vérkészítményt teszteljünk médiumkiegészítőként, amivel az irodalmak ilyen megközelítésben még nem foglalkoztak. Ez nem volt más, mint az SPRF vagyis trombocitában gazdag fibrinből nyert szérum, ami a kutatócsoport saját fejlesztése. A készítmény tulajdonképpen a PRF származéka, ugyanis az előállításából kapott zselés állagú enyvet egy tálcában kinyomkodjuk és így folyékony halmazállapotú termékhez jutunk, amely megkönnyíti a vele kapcsolatos további munkákat. Ez teszi lehetővé azt is, hogy kiegészítsük vele a sejttenyésztő-médiumot. Mint ahogy arra az irodalmi áttekintésben is kitértem, a PRF-nek bizonyítottan nagyon előnyös tulajdonságai ismeretesek az őssejtek feldúsítására, így ezek alapján az SPRF nagyon jó anyagnak tűnik. A kiindulási gondolat az volt, hogy a vérkészítmények azért alkalmasak megfelelő támogató anyagnak, mert akár a beteg saját véréből is elkészíthetőek, így nem igényelnek sem állati áldozatot, sem pedig drága technológiákat. Ez viszont felveti azt a kérdést, hogy a donor kora nem befolyásolja-e egyrészt az őssejtjei, másrészt a vérszérumának lehetőségeit a hatékony gyógyításra. A humán trombocita lizátum kapcsán leírtak ugyanis egy olyan megfigyelést, hogy ennek a stimulációs hatása az MSC-kre korfüggő, ám a pontos mechanizmus még nem teljesen tisztázott 48. Másrészről arról sem szabad megfeledkezni, hogy az idő előrehaladtával mind az MSC-k száma, mind pedig az aktivitásuk csökkenni kezd 49. Hogy ezt a két hatást vizsgálni tudjuk fiatal és idősebb donoroktól is tenyésztettünk őssejteket és mindkét korcsoportú sejteket kezeltünk idős és fiatal donortól származó SPRF-et tartalmazó médiumokkal. Azért, hogy ezek hatása összemérhető lehessen az FBS-ével, mindkét sejttípushoz tartozott egy-egy kontroll (FBS-t tartalmazó) médiumot kapó kategória is. Mindkét támogatóanyagot 10%-os koncentrációban alkalmaztuk. A mérések úgy zajlottak, hogy a két csoport sejtjeit 24-lyukú tálcákon, hét napig növesztettem az adott médiumokban és mindegyik nap mértem a sejtek életképességét MTT esszé segítségével. Az adatokat végül összesítettem és kiértékeltem. 16

23 3.2. Sejtkultúra fenntartása A munkám során HBMSC-kel, azaz humán származású, csontvelő-eredetű mezenchimális őssejtekkel foglalkoztam. A sejtekkel kapcsolatos tevékenységek fontos alapköve a steril körülmények biztosítása, hiszen a levegőben szennyeződések és spórák találhatóak, melyek negatívan befolyásolhatják a sejtek életét és így a kísérletek kimenetelét Őssejtek általános ellátása Az őssejteket ideális összetételű őssejtmédiumot tartalmazó Petri csészékben inkubáltattam a növesztési folyamat során. Az inkubáció 37 C-on, 5%-os CO 2 koncentráció mellett történt. Az MSC-ket mikroszkóp alatt vizsgálva nyúlványosan letapadt sejteket figyelhetünk meg, melyek a csésze alján egy monolayert alkotnak 50 : 7. ábra A sejtekkel kapcsolatosan 3 rutinművelet különböztethető meg 51. Etetés o őssejtek friss médiummal való ellátása 17

24 o a sejtek növekedése során a tápközegből a szükséges faktorok elfogynak, így ezeket pótolni kell Szétosztás o más néven passzálás o akkor végezzük, amikor a sejtek száma a kultúrában túlnövi a csésze kapacitását Fagyasztás o sejtekkel való munka ideiglenes felfüggesztése A feladataim során az első két műveletet láttam el Őssejt médium készítése, sejtek táplálása Az etetésnél az első feladat a megfelelő őssejt médium elkészítése volt. Az ehhez szükséges anyagok: 1 db 500 ml DMEM (with 1 g/l glucose, with L-glutamine) médium o 1g/l glükóz tartalommal o alapmédium, amelyet még ki kell egészíteni további szükséges anyagokkal 50 ml FBS (Fetal Bovine Serum) o fontos növekedési faktorokat tartalmaz o 10%-os koncentrációban tartalmazza a tenyésztőmédium 5 ml PEST (Penicillin-Streptomycin) o antibiotikumkeverék Penicillin: 100 U/ml Streptomycin: 100 µg/ml o 1%-os koncentrációban tartalmazza a tenyésztőmédium A hőérzékeny összetevők miatt a médiumot +4 C-on, a szérumot és az antibiotikum keveréket pedig -20 C-on tároljuk. Az elkészítés menete a következő: az összetevőket felmelegítettem vízfürdőben, az alapmédium felbontása után abból 50 ml-t kipipettáztam, majd helyette 50 ml FBS-t és 5 ml PEST-t tettem bele. Az így elkészült őssejt médiumot az előbb leírtak alapján, előzetes feliratozás után a +4 C-os hűtőszekrénybe raktam. 18

25 A sejtek etetése előtt fontos, hogy a médiumot vízfürdőben felmelegítsük 37 C-ra, hiszen ez a sejtek számára ideális hőfok, ennél alacsonyabb hőmérsékletű anyaggal sokkolnánk őket, ami negatívan befolyásolná a növekedésüket. A sejtek táplálása heti háromszor történik. Az elhasznált médiumot biológiai fülke alatt kell kicserélni, ami egy olyan berendezés, amely a bejáratánál laminárisan felfelé levegőt áramoltat, ezzel elválasztja egymástól a fülke belső terét a környezettől és így segíti a kontamináció-mentes munkát. A sejteken lévő elhasznált oldatot pipettor segítségével távolítottam el és szintén ezzel helyeztem rájuk 8-10 ml friss médiumot Passzálás A passzálás lényege az, hogy ha a sejtek benövik a csésze alját, akkor szét kell őket oszlatni több másik csészébe, különben egy idő után a túl nagy szám miatt pusztulni kezdenek, vagy nem kedvező sejtvonalakba differenciálódnak. A folyamat első lépésében fülke alatt eltávolítottam a sejtekről a médiumot és mostam őket kétszer 5 ml PBS-el (phosphate buffered saline), ami egy fiziológiás oldat. Mivel a HBMSC-k a csésze aljára vannak letapadva, ezért a következő lépésben fel kell őket szedni onnan, ami egy tripszin nevű fehérjebontó enzim segítségével történik. Ez a sejtek letapadó nyúlványait kezdi el emészteni, ennek következtében pedig a HBMSC-k oldatba kerülnek. A PBS eltávolítása után tehát 1 ml, 10%-os töménységű tripszint pipettáztam az adott csészébe, amit ezután inkubátorba helyeztem azért, mert az enzim működésének ideális hőmérséklete 37 C. Az edényt ezután 2 percenként mikroszkóp alatt vizsgálva figyeltem a sejteket. Körülbelül 4-5 perc után azt tapasztaltam, hogy a sejtek túlnyomó többsége felgömbölyödve úszik az enzimes oldatban, tehát a folyamat leállítható. Ez 6 ml őssejt médiummal, mint szubsztrát-felesleggel történik. A leállítást követően a csésze tartalmát centrifugacsőbe pipettáztam és centrifugáltam 6 percig 1400 rpm fordulatszámon. Ezután a csőből leöntöttem a felülúszót és a letapadt sejthalmazt kiegészítettem 1 ml-re őssejt médiummal, majd szuszpendáltam az oldatot. Közben 2-3 Petri csészét előkészítettem (feliratozás, 10 ml őssejt médiummal való feltöltés) és a cső tartalmát eloszlatva megfelelő részletekbe, a sejtes oldatot beléjük pipettáztam. Ezután a csészéket az inkubátorba helyeztem és az etetésüket a fentebb ismertetett módon végeztem. 19

26 3.2. Vérkészítmény tesztelése idős és fiatal donorból származő őssejtvonalakon A fenti pontokban említett tevékenységek tehát az őssejtek általános ellátásával kapcsolatosak. Ezeket a műveleteket végeztem a dúsítási folyamat közben is. A sejteket a Semmelweis Egyetem Ortopédiai Klinikától kaptuk, csontvelő formájában. Ezt közvetlenül a műtét után a laborba vittük és ott Petri csészékbe helyeztük, majd őssejt-médiumban inkubáltattuk. Kétnaponta ezeket is etetni, valamint mosni kellett, egészen addig, amíg a csésze alját szépen be nem nőtték a sejtek. Hogy a sejtszám biztosan elegendő legyen, ezért passzáltam mind az idős, mind a fiatal donortól származó sejtvonalat. Az egyszerűség kedvéért innentől szeretnék úgy hivatkozni rájuk, hogy idős, illetve fiatal őssejtek, habár ez az elnevezés így pontatlan, de a használat szempontjából praktikus. A kísérleteket végül P2-es fiatal, valamint P3-as idős sejtekkel végeztem el. Hat darab 24-lyukú tálcára volt szükségem, hiszen kétféle őssejtünk van (idős-fiatal), melyeket három-három különböző médiummal kezeltem, összefoglalva tehát: Kontroll médiumos kezelés 3 db fiatal sejtes tálca Fiatal SPRF-es kezelés Idős SPRF-es kezelés 6 db 24-lyukú tálca Kontroll médiumos kezelés 3 db idős sejtes tálca Fiatal SPRF-es kezelés Idős SPRF-es kezelés 8. ábra A kísérletek eredetileg úgy zajlottak volna, hogy sejtet teszek mindegyik használni kívánt lyukba és egy napig hagyom a sejteket letapadni. Másnap, a kísérleti időben vett 1. napon mindegyik tálcáról megmértem volna 3 darab lyukat, amelyek az MTT esszé hatására 20

27 elvesztik az életképességüket, így ezekkel többet nem kell foglalkozni. A mérések mindennap, médiumcserék pedig minden másnap történtek volna, tehát a 2. napon van esszé és csere is, a többi napon pedig ennek megfelelően. A könnyebb vizualizáció kedvéért egy időskálán is bemutatom az elképzelést: 9. ábra Ezen a protokollon végül sejthiány miatt változtatni kellett egy kicsit Tenyésztőmédiumok elkészítése Az elkészítéshez először ki kellett számolni, hogy mekkora térfogatú médiumokra van szükség készítményenként. A számolást a fiatal donor SPRF-ét tartalmazó médiummal szeretném bemutatni, a másik vérkészítményből ugyanennyire volt szükség. Két olyan 24-lyukú tálcánk volt, amelyikhez fiatal donortól származó SPRF-es médiumot kell adni: egy fiatal őssejtes és egy idős őssejtes csoport. Hét napi mérésünk van, 3 lyuk/mérési alkalom felbontásban, és egy lyukba 1 ml médium kerül, tehát csak a feltöltésre kell 2x7x3 ml, azaz 42 ml. Nem szabad megfeledkezni továbbá a médimcserékről sem, amelyek kétnaponta történnek. Mivel a már lemért lyukakban a sejteket az életképességet mérő eljárás elpusztítja, azokkal már nem kell számolni, így az első cserénél (2. nap) 2x15 ml kell, a 4. napon 2x9 ml, az 6. egyben utolsó cserés napon már csak 2x3 ml. Ez összesen 52 ml. Összefoglalva: 2(tálca) x 7(mérési nap) x 3(lyuk/mérés)ml + 54 ml (médiumcsere) = 96 ml tenyésztőmédium 21

28 Mivel úgy gondoltuk, hogy inkább ráhagyással, de természetesen az arányok megtartásával fogunk dolgozni (10% szérum, 1% antibiotikum), ezért a végső tenyésztőmédium-összetétel a következőképpen alakult: 100 ml alapmédium 11,1 ml SPRF 1,11 ml PEST A vérkészítmények elkészítésének első lépése véradó donorok keresése volt. A kritériumunk az volt, hogy az idős donor legyen 60 év feletti, a fiatal pedig 25 alatti, egészséges ember. Miután találtunk megfelelő jelentkezőket, behívtuk őket vérvételre. Általánosságban az igaz, hogy 1 fiolányi (6ml) vérből körülbelül 1 ml SPRF nyerhető, ezért mindkét donorunktól fiola vért vettünk le alvadásgátlót nem tartalmazó csövekbe és ezeket gyorsan (hogy ne induljon meg az alvadás) lecentrifugáltam 5 percig 3000 rpm fordulaton. Miután ez megtörtént, a keletkezett fibrin csomót kihúztam mindegyik csőből és attól függően, hogy az idős, vagy a fiatal donor véréből készült, két külön csészébe tettem, majd kinyomkodtam a tartalmukat. Ezután feliratoztam két darab zárható, 0.5 literes üvegedényt, majd mindkettőbe belepipettáztam ml alapmédiumot és a megfelelő SPRF-ből 11,1-11,1 ml-t, végül pedig az antibiotikumot. Kontroll médiumot külön nem készítettünk, hiszen ez megegyezik az általános sejttenyésztő médiummal, ami mindig rendelkezésünkre állt a sejtek táplálása miatt. A két edényt a használatuk után mindig hűtőszekrénybe tettem +4 C-ra, ahol a legjobb az eltarthatóságuk Sejtek számlálása és tálcára tétele A következő művelet a sejtek tálcára való kitétele volt. Mint azt illusztráltam is, sejtvonalanként 3-3 tálcát használtam. Az elgondolás az volt, hogy a legmegfelelőbb sejtszám sejt/lyuk lesz, arra alapozva, hogy ez a szám nem fogja még teljesen benőni a rendelkezésre álló terek a 7. napra, ezért elviekben azt fogjuk tapasztalni, hogy a sejtszám szép fokozatosan, de reményeink szerint médiumoktól eltérő mértékben nő. 22

29 A következő kérdés tehát az, hogy hány darab sejtre van szükségünk sejtvonalanként. 3-3 csészére tesszük ki a sejteket, csészénként 21 lyukat használva (7 mérés x 3 lyuk/mérés), tehát típusonként 3x21x sejtre van szükségünk, ami sejt/vonal. A sejtszám meghatározása tulajdonképpen a passzálás egy későbbi lépésében történik, amikor a lecentrifugált sejtes oldat felülúszóját leöntve a letapadt sejtcsomót ki kell egészíteni 1 ml-re őssejt médiummal. A számlálást Bürker kamrával végeztem, ami a számlálókamrák csoportjába tartozik. Ezek tulajdonképpen különlegesen kiképzett tárgylemezek. Az általunk használt egy vastag üveglemezből és egy vékonyabb fedőlemezből állt, amelyeket egymásra helyezve, a közöttük lévő rés pontosan 0,1 mm vastagságú. Az üveglemezen ismert távolságú beosztások találhatóak, így ezek ismeretében kiszámolhatóvá válik az adott térfogategységben lévő sejtek száma. A műveletet úgy végeztem el, hogy a sejteket tartalmazó oldatból kipipettáztam 10 μl-t egy eppendorf csőbe, majd kiegészítettem 10 μl tripán-kék festékkel, melynek segítségével a sejtek a mikroszkóp alatt jól láthatóvá válnak. Az így kapott keveréket jól összeszuszpendáltam és 10 μl-t egyenletesen a fedőlemez alá fecskendeztem. A festék rögtön megfesti a sejteket, így a mikroszkópos vizsgálat azonnal kezdhető. A nagyított kamrára nézve négyzetes hálózatot figyelhetünk meg. A feladat az, hogy két egymás követő sorba és további egy négyzetben megszámoljuk a sejteket. Ezt a műveletet a tárgylemez másik két helyén is elvégezzük. Az így kapott három számnak vesszük az átlagát, és ha ezt a számot a hígítás és a kamraparaméterek függvényében megszorozzuk el, akkor megkapjuk, hogy mennyi sejtünk van az elkészített 1 ml oldatban és így kiszámolhatóvá válik, hogy az általunk szükséges mennyiség mekkora térfogatban van jelen. 23

30 A fiatal sejteket felszedve és megszámolva már egy Petri csészében megvolt az elegendő mennyiség, szám szerint sejt. Ez volt benne 1000 µl sejtszuszpenzióban, tehát egyszerű aránypárral számolva azt kaptam, hogy a kívánt sejt 15,6 µl oldatban lesz jelen. Ennek megfelelően a 3x21 lyukat feltöltöttem 1-1 ml fiatal SPRF-et tartalmazó médiummal és ebbe pipettáztam bele lyukanként 15,6 µl-t a sejtoldatos centrifugacsőből. A fiatal sejteket tartalmazó 3 csoport tehát a következőképpen nézett ki: Fiatal donortól származó MSC-k Fiatal SPRF-es médium 1. nap 1. nap 1. nap 2. nap 2. nap 2. Nap Öreg SPRF-es médium 1. nap 1. nap 1. nap 2. nap 2. nap 2. Nap 3. nap 3. nap 3.nap 4. nap 4. nap 4. Nap 3. nap 3. nap 3.nap 4. nap 4. nap 4. Nap 5. nap 5. nap 5. nap 6. nap 6. nap 6. Nap 5. nap 5. nap 5. nap 6. nap 6. nap 6. Nap 7. nap 7. nap 7. nap 7. nap 7. nap 7. nap Kontroll médium 1. nap 1. nap 1. nap 2. nap 2. nap 2. Nap 3. nap 3. nap 3.nap 4. nap 4. nap 4. Nap 5. nap 5. nap 5. nap 6. nap 6. nap 6. Nap 7. nap 7. nap 7. nap 10. ábra 24

31 Az idős sejteknél sajnos nem tapasztaltam ilyen nagy mennyiségeket, ami valószínűleg azzal magyarázható, hogy korral ezek aktivitása és proliferációs képessége csökkent. Az összes Petri csészét felhasználva is csak sejtet kaptam, ezért itt módosítani kellett a kísérleti protokollon. Úgy gondoltuk, hogy csak 2 lyukat vizsgálunk egy tálcáról mérésenként és ezeket nem naponta, hanem csak minden másnap mérjük. Tehát ebből végső soron az jött ki, hogy egy tálcán csak 8 lyukat használtunk. Habár ez rontotta a mérésünk megbízhatóságát, ennek ellenére úgy gondoltuk, hogy valamennyi használható információval így is gazdagabbak leszünk a kísérlet során. Így tehát a tálcák elrendezése a következő: Idős donortól származó MSC-k Fiatal SPRF-es médium 1. nap 1. nap 3. nap 3. nap 5. nap 5. nap Öreg SPRF-es médium 1. nap 1. nap 3. nap 3. nap 5. nap 5. nap 7. nap 7. nap 7. nap 7. nap Kontroll médium 1. nap 1. nap 3. nap 3. nap 5. nap 5. nap 7. nap 7. nap 11. ábra Az életképesség mérése Az MTT esszé egy olyan elemzési forma, amely jelen kísérletben arra szolgált, hogy a különböző médiumokkal kezelt sejtcsoportokban megadja az élő sejtek mennyiségét. A mérés egy tetrazónium són, pontosabban a halványsárga 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil bromidon alapszik, amit szubsztrátként az élő sejtek mitokondriális enzimei át tudnak 25

32 alakítani sötétkék formazánná 52. Mivel ez kristály állapotú, ezért oldatba kell vinni, amihez izopropanolt használnak 53. A keletkezett formazán mennyisége pedig széles határok között egyenesen arányos az élő sejtszámmal. Ez az elemzés az életképesség mellett alkalmas a proliferáció és az aktiváció mérésére is 54. Az MTT oldatot előzetesen készítjük el úgy, hogy a koncentrációja 5 mg/ml legyen. Az MTT sót tartalmazó üvegcséből tehát analitikai mérlegen kimértem 0,05 g-ot és ehhez a mennyiséghez 10 ml PBS-t pipettáztam. Az oldatot vortex segítségével homogenizáltam, majd 1-1 ml-es részletekben pipettáztam szét eppendorf csövekbe, melyeket ezután a -20 Cos mélyhűtőbe helyeztem. A kísérlet során az elemzési lépés úgy történt, hogy az adott mérési napokon elkészítettem az esszéhez szükséges oldatot aszerint, hogy az MTT: őssejt médium aránynak 1: 9-nek kell lennie. Például a 3. mérési napon, amikor mértem 3 fiatal őssejtes tálcáról 3-3 lyukat és 3 idős őssejtesről 2-2-t, összesen 3x3+3x2 ml, azaz 15 ml MTT esszére volt szükségem. Az aránynak megfelelően 1500 µl MTT oldatot pipettáztam µl őssejt-médiumban. Ehhez kontrollmédiumot használtam, nem foglalkoztam azzal, hogy a megfelelő SPRF-et tartalmazó legyen, mert úgy gondoltam, hogy ez plusz információt nem adna a kísérlethez és így kevesebb vért is elegendő volt venni a donoroktól. A mérni kívánt lyukakból ezután eltávolítottam a médiumokat, majd a helyükbe 1-1 ml MTT esszét tettem. Mivel az enzimes reakció 37 C-on valósul meg és a tálca többi részén még érzékeny, növeszteni kívánt sejtek vannak, amelyek nem bírják a tartós szobahőmérsékletet, ezért a tálcákat 1 órára inkubátorba helyeztem. Az 1 óra letelte után az oldatot kipipettáztam a lyukakból és helyette 1-1 ml izopropanolt helyeztem beléjük, majd további egy óráig inkubáltattam őket. Ezután spektrofotométer segítségével mértem az egyes lyukak abszorbanciáját 2 hullámhosszon: 570 és 690 nm-en. Utóbbin azért, hogy a háttér zavarásából adódó hiba kiküszöbölődjön. 26

33 abszorbancia 4. Eredmények és értékelésük A sejtéletképesség méréséből származó eredményeket a kísérlet lezajlása után összegyűjtöttük és kiértékeltük a GraphPad nevű program segítségével. Az eredményeket a következő, kapott ábrákon szeretném bemutatni A médiumok hatása fiatal donorból izolált sejtekre Eredmények elemzése a fiatal sejtes csoportoknál: Sejtszám növekedés helyett az életképesség csökkenést tapasztaltuk Ennek ellenére a fiatal SPRF szinte végig felülmúlta a többit Az idős donor SPRF-ével kiegészített médium általánosságban szintén jobbnak bizonyult a kontroll médiuménál o Ahol nem teljesített jobban, ott is összemérhető volt a hatása az FBS-tartalmú médiummal 27

34 Az előző három pontbeli megfigyelésnek ellentmond a 6. nap, amikor a kontroll médiumban mértük a legjobb életképességet és meglepő módon a fiatal SPRF-ben a legrosszabbat 4.2. A médiumok hatása idős donorból izolált sejtekre Eredmények elemzése az idős sejtes csoporoknál: Itt szintén folyamatos sejtszám-csökkenést tapasztaltam A fiatal donor SPRF-ét tartalmazó médium mind a négy mérési napon jobb eredményt hozott a másik kettőnél Az idős SPRF az esetek felében nyújtott rosszabb teljesítményt a kontrollnál, de ezeknél sem igazán számottevő mértékben 28

35 4.3. Az eredmények értékelése Természetesen az, hogy mindkét csoportnál fokozatos sejtpusztulást figyeltünk meg, nem jó. Ennek sokféle oka lehet. Az egyik felmerülő gondolat az, hogy nem volt megfelelő a kiinduláshoz használt sejtszám ( sejt/lyuk), ezért a sejtek tulajdonképpen már az első napon telenőtték a csésze alját és ezután helyhiány miatt pusztulni kezdtek. Másrészről az is előfordulhat, hogy kontamináció lépett fel az inkubátorban, ami megfertőzte a vizsgált sejteket is. Sajnos ebben az időszakban többször tapasztaltunk hasonlókat egyéb sejttenyészetekben is. A harmadik lehetséges magyarázat az, hogy az MTT esszé hatására kezdtek el pusztulni a sejtek, esetleg az egy órás izopropanolos inkubálás során az elpárolgó propanol beleoldódott a mérésre még nem került lyukakba. Mindenesetre az mindenképpen pozitív eredmény, hogy a kontroll médiumnál is tapasztaltam az életképesség-csökkenést, ráadásul általában jóval nagyobb mértékben, mint az SPRF-et tartalmazó médiumoknál. Mint az várható volt, a legjobb teljesítményt a fiatal donorból származó SPRF-et tartalmzó médium produkálta mindkét sejtcsoportnál. Tehát beigazolódni látszik az a lehetőség, hogy a vérben a különböző növekedési faktorok és más őssejteket segítő molekulák száma, illetve aktivitása a korral valamilyen mértékben csökkent. Az látszik továbbá az eredményekből, hogy a két őssejtcsoport életképessége egészen más értékekről indult. Míg a fiatal sejteknél a maximális abszorbancia mindössze volt, addig az öregnél körülbelül A kísérlet tehát nem igazolta azt, hogy az idősebb emberekből származó őssejtek proliferációja rosszabb lenne a fiatalokénál, sőt, ezzel ellentétes hatást mutatott. 29

36 5. A folytatás Mivel a kísérleti eredményeink folyamatos sejtszámcsökkenést mutattak be növekedés helyett, ezért ezt a méréssorozatot mindenképpen meg kell ismételni. A kapott adatok azonban azt mutatják, hogy ez nagyon jó kiindulási pont lehet egy új tenyésztőközeg fejlesztéséhez, hiszen az SPRF-es médiumok többségben felülmúlták a kontrollt és a legrosszabb esetben is ahhoz nagyon közeli értéket mutattak. Amit el kell végezni egy következő sorozat előtt, az egy arra irányuló kontrollkísérlet, hogy pontosan mennyi sejtre van szükség egy lyukban, mert a használt mennyiség ( sejt) felvetett kérdéseket a kimenettel kapcsolatban. Érdemes lenne tehát egy olyan kísérletet csinálni, amelyben különböző mennyiségű sejteket teszünk ki 1-1 tálcára és rájuk a megszokott tenyésztőmédiumot téve vizsgáljuk egy hétig minden nap a sejtek mennyiségét. Az is könnyen előfordulhat, hogy nem is szükséges ilyen hosszú időtartamig vizsgálni a sejtek alakulását, hiszen a rendelkezésükre álló felület olyan kicsi, hogy még nagyon kevés sejt is gyorsan benövi. Ha ennél az ideális-sejtszám meghatározó kísérletnél is azt tapasztaljuk, hogy az összes tálcában csökken az idő függvényében a sejtek száma, akkor az azt jelenti, hogy az életképesség meghatározására használt MTT elemzési eljárás károsan befolyásolja a mérés alá még nem vetett sejtek életét. Ezt úgy tudjuk majd kiküszöbölni, ha a különböző mérési csoportokat különböző tálcákon kezeljük. Habár ez feleslegesen sok eszközt jelent (hiszen így egy 24-lyukú tálcáról csak 3 lyukat használunk ki), de teljesen megóvja a többi sejtet a módszer negatív befolyásolásától. 30

37 6. Összefoglalás A TDK dolgozatom célja az volt, hogy keressek egy megfelelő alternatívát napjaink legelterjedtebb őssejtmédium-kiegészítője, az FBS helyett. Erre azért van szükség, mert a használatát a tudomány erősen vitatja. Egyrészt az állati eredetéből adódóan potenciális fertőzések forrása lehet, valamint mivel az összetétele változékony, így a kísérletek kimenetelét is különféleképpen befolyásolhatja. A másik problémacsoport szintén a származásából ered, méghozzá azért, mert az előállítása rengeteg állat életébe kerül. Az általam vizsgált anyag egy emberi vérkészítmény, az SPRF volt. Erre azért esett a választás, mert a géles formáját, a PRF-et már nagyon sok tanulmány bemutatta, mint potenciális forrás az őssejtek növekedéséhez, osztódásához. A másik nagyon pozitív érv mellette az, hogy őssejterápiáknál a beteg saját véréből elő lehetne állítani egy megfelelő közeget, hogy az előzetesen kinyert sejtmennyiséget feldúsítsuk a terápiás mennyiségre, ami ezután visszaültethető lenne. A kísérletsorozat úgy zajlott, hogy idős és fiatal donortól is tenyésztettem sejteket, majd mindkét sejttípust kezeltem 3-3 különböző tenyésztőmédiummal: idős embertől származó SPRF-et, fiatal emberből származó SPRF-et és FBS-t, mint kiegészítőt tartalmazóval. Ezt az magyarázza, hogy megfigyelések alapján az idősebb vonalból származó őssejtek vesztenek a proliferációjuk sebességéből és ez a vér növekedési faktor mennyiségére is igaz lehet. Így hát az előbb leírt hat csoportot egy hétig növesztettem a megfelelő médiumban és mindennap mértem a sejtéletképességüket MTT esszé segítségével. Az eredmények bizakodásra adnak okot, ám nem tökéletesek. A fiatal donor véréből készült SPRF mindegyik csoportban általánosan a legjobb eredményt produkálta és az idős donoré is elérte, vagy sokszor meg is haladta az FBS-sel kapott értékeket. A következő lépés az alkalmazandó sejtmennyiség pontos kikísérletezése kontroll médiumban, majd ezután a kapott értékkel a kísérletsorozat megismétlése. 31

A CSONTPÓTLÓ MŰTÉTEK BIOLÓGIAI ALAPJAI, A JÖVŐ LEHETŐSÉGEI

A CSONTPÓTLÓ MŰTÉTEK BIOLÓGIAI ALAPJAI, A JÖVŐ LEHETŐSÉGEI Semmelweis Egyetem Arc- Állcsont- Szájsebészeti- és Fogászati Klinika Igazgató: Prof. Németh Zsolt A CSONTPÓTLÓ MŰTÉTEK BIOLÓGIAI ALAPJAI, A JÖVŐ LEHETŐSÉGEI Dr. Barabás Péter, Dr. Huszár Tamás SE Szak-

Részletesebben

A születéskor gyűjthető. őssejtekről, felhasználási. lehetőségükről, valamint a KRIO Intézet. szolgáltatásairól

A születéskor gyűjthető. őssejtekről, felhasználási. lehetőségükről, valamint a KRIO Intézet. szolgáltatásairól A születéskor gyűjthető őssejtekről, felhasználási lehetőségükről, valamint a KRIO Intézet szolgáltatásairól krio Családi Őssejtbank A KRIO Intézet Sejt- és Szövetbank Zrt. 2004 óta végzi köldökzsinórvér

Részletesebben

Virológia gyakorlatok

Virológia gyakorlatok Virológia gyakorlatok A virológia gyakorlatok célja, hogy a hallgatók betekintést nyerhessenek az állatorvosi virológiai diagnosztika különböző módszereibe. A hallgatók a gyakorlatokon esetfeldolgozás

Részletesebben

Sejttenyésztési alapismeretek

Sejttenyésztési alapismeretek Sejttenyésztési alapismeretek 1. Bevezetés A sejteknek ún. sejtkultúrákban történő tenyésztése (a sejteket az eredeti helyükről eltávolítva in vitro tartjuk fenn ill. szaporítjuk) és tanulmányozása több

Részletesebben

SPORT ÉS A REKOMBINÁNS DNS TECHNIKÁK, BIOTECHNOLÓGIÁK

SPORT ÉS A REKOMBINÁNS DNS TECHNIKÁK, BIOTECHNOLÓGIÁK SPORT ÉS A REKOMBINÁNS DNS TECHNIKÁK, BIOTECHNOLÓGIÁK Biotechnológia és a sport kapcsolata Orvostudományi alkalmazások Aminosavak és fehérjék előállítására régóta használnak mikroorganizmusokat Oltóanyagok

Részletesebben

A proteomika új tudománya és alkalmazása a rákdiagnosztikában

A proteomika új tudománya és alkalmazása a rákdiagnosztikában BIOTECHNOLÓGIAI FEJLESZTÉSI POLITIKA, KUTATÁSI IRÁNYOK A proteomika új tudománya és alkalmazása a rákdiagnosztikában Tárgyszavak: proteom; proteomika; rák; diagnosztika; molekuláris gyógyászat; biomarker;

Részletesebben

A vér vizsgálata. 12. B. biológia fakultációsainak projektje 2015.03.30-31.

A vér vizsgálata. 12. B. biológia fakultációsainak projektje 2015.03.30-31. A vér vizsgálata 12. B. biológia fakultációsainak projektje 2015.03.30-31. Vérkenet készítése Menete: Alkoholos vattával letörölt ujjbegyünket szúrjuk meg steril tűvel.töröljük le az első vércseppet, majd

Részletesebben

PLASMA HUMANUM COAGMENTATUM CONDITUMQUE AD EXSTIGUENDUM VIRUM. Humán plazma, kevert, vírus-inaktiválás céljából kezelt

PLASMA HUMANUM COAGMENTATUM CONDITUMQUE AD EXSTIGUENDUM VIRUM. Humán plazma, kevert, vírus-inaktiválás céljából kezelt conditumque ad exstinguendum virum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-1 01/2009:1646 PLASMA HUMANUM COAGMENTATUM CONDITUMQUE AD EXSTIGUENDUM VIRUM Humán plazma, kevert, vírus-inaktiválás céljából kezelt DEFINÍCIÓ

Részletesebben

Az őssejtek felhasználhatósága a kemoterápiaban

Az őssejtek felhasználhatósága a kemoterápiaban Az őssejtek felhasználhatósága a kemoterápiaban A kemoterápia során olyan daganatellenes (citotoxikus) gyógyszereket alkalmaznak, melyek elpusztítják a leukémia sejteket. Hatásukkal a sejtek osztódását

Részletesebben

Vérképző és egyéb szöveti őssejtek

Vérképző és egyéb szöveti őssejtek Vérképző és egyéb szöveti őssejtek Uher Ferenc Országos Vérellátó Szolgálat, Őssejt-biológia, Budapest Őssejtek Totipotens őssejtek Pluripotens (embrionális) őssejtek Multipotens (szöveti) őssejtek Elkötelezett

Részletesebben

Sportélettan zsírok. Futónaptár.hu

Sportélettan zsírok. Futónaptár.hu Sportélettan zsírok Futónaptár.hu A hétköznapi ember csak hallgatja azokat a sok okos étkezési tanácsokat, amiket az egészségének megóvása érdekében a kutatók kiderítettek az elmúlt 20 évben. Emlékezhetünk

Részletesebben

A magvak életképességétiek meghatározása festési eljárással

A magvak életképességétiek meghatározása festési eljárással A vegyszer kiszórására, a vegyi védekezés végrehajtására ezért csak a kézi porozó vagy permetezőgépek alkalmasak, mivel ezekkel lehet legjobban hozzáférni a tuskóhoz, a hajtások alsó részéhez és vegyszer

Részletesebben

TÁPLÁLKOZÁSI AKADÉMIA

TÁPLÁLKOZÁSI AKADÉMIA V. évfolyam 11. szám, Tisztelt Olvasó! A Táplálkozási Akadémia című hírlevél célja az, hogy az újságírók számára hiteles információkat nyújtson az egészséges táplálkozásról, életmódról, valamint a legújabb

Részletesebben

I.sz. MELLÉKLET A KÉSZÍTMÉNY JELLEMZŐINEK ÖSSZEFOGLALÓJA

I.sz. MELLÉKLET A KÉSZÍTMÉNY JELLEMZŐINEK ÖSSZEFOGLALÓJA I.sz. MELLÉKLET A KÉSZÍTMÉNY JELLEMZŐINEK ÖSSZEFOGLALÓJA 1 1. AZ ÁLLATGYÓGYÁSZATI KÉSZÍTMÉNY NEVE Aivlosin 42,5 mg/g gyógypremix sertések részére 2. MINŐSÉGI ÉS MENNYISÉGI ÖSSZETÉTEL Hatóanyag: Tilvalozin

Részletesebben

I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS

I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS 1 1. A GYÓGYSZER MEGNEVEZÉSE VPRIV 200 egység por oldatos infúzióhoz. 2. MINŐSÉGI ÉS MENNYISÉGI ÖSSZETÉTEL Egy injekciós üveg 200 egység* velagluceráz-alfát tartalmaz.

Részletesebben

Speciálkollégium. Dr. Fintor Krisztián Magyary Zoltán Posztdoktori Ösztöndíj TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 Nemzeti Kiválóság Program Szeged 2014

Speciálkollégium. Dr. Fintor Krisztián Magyary Zoltán Posztdoktori Ösztöndíj TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 Nemzeti Kiválóság Program Szeged 2014 Speciálkollégium Dr. Fintor Krisztián Magyary Zoltán Posztdoktori Ösztöndíj TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 Nemzeti Kiválóság Program Szeged 2014 A beton öregedése A öregedés egy olyan természetes folyamat

Részletesebben

A sugárvédelem rendszere, mentességi, dóziskorlátozási, beavatkozási, cselekvési és más vonatkoztatási szintek

A sugárvédelem rendszere, mentességi, dóziskorlátozási, beavatkozási, cselekvési és más vonatkoztatási szintek A sugárvédelem rendszere, mentességi, dóziskorlátozási, beavatkozási, cselekvési és más vonatkoztatási szintek Dr. Voszka István 487/2015. (XII. 30.) Korm. rendelet az ionizáló sugárzás elleni védelemről

Részletesebben

Reumás láz és sztreptokokkusz-fertőzés utáni reaktív artritisz

Reumás láz és sztreptokokkusz-fertőzés utáni reaktív artritisz www.printo.it/pediatric-rheumatology/hu/intro Reumás láz és sztreptokokkusz-fertőzés utáni reaktív artritisz Verzió 2016 1. MI A REUMÁS LÁZ 1.1 Mi ez? A reumás láz nevű betegséget a sztreptokokkusz baktérium

Részletesebben

Szakmai zárójelentés

Szakmai zárójelentés Szakmai zárójelentés A témavezető neve: dr. Antus Balázs A téma címe: A bronchiolitis obliterans szindróma pathomechanizmusa OTKA nyilvántartási szám: F 046526 Kutatási időtartam: 2004-2008. A kutatási

Részletesebben

ANTICANCER RESEARCH [Rákkutatás]

ANTICANCER RESEARCH [Rákkutatás] ANTICANCER RESEARCH [Rákkutatás] Nemzetközi rákkutatási és rákgyógyászati folyóirat Az MGN-3/Biobran rizskorpából kivont módosított arabinoxilán in vitro növeli a metasztatikus emlőráksejtek érzékenységét

Részletesebben

15. * A sejtbiológia gyakorlata. 15.1. Sejt- és szövettenyésztés: módszertani alapismeretek MADARÁSZ EMÍLIA

15. * A sejtbiológia gyakorlata. 15.1. Sejt- és szövettenyésztés: módszertani alapismeretek MADARÁSZ EMÍLIA 15. * A sejtbiológia gyakorlata 15.1. Sejt- és szövettenyésztés: módszertani alapismeretek MADARÁSZ EMÍLIA 15.1.1. A sejt- és szövettenyészetek típusai 15.1.2. Sejttenyészetek készítése 15.1.2.1. Primer

Részletesebben

KEDVES BETEGÜNK! MI A VÉRÁTÖMLESZTÉS (TRANSZFÚZIÓ)?

KEDVES BETEGÜNK! MI A VÉRÁTÖMLESZTÉS (TRANSZFÚZIÓ)? KEDVES BETEGÜNK! Az Ön tervezett műtétjéhez valószínűleg vérpótlásra lesz szükség. Fontos, hogy ismereteket szerezzen az ezzel kapcsolatos tudnivalókról, lehetőségekről. Éppen ezért kérjük, olvassa el

Részletesebben

ÁLLATI EREDETŰ, EMBERGYÓGYÁSZATI IMMUNSZÉRUMOK. Immunosera ex animale ad usum humanum

ÁLLATI EREDETŰ, EMBERGYÓGYÁSZATI IMMUNSZÉRUMOK. Immunosera ex animale ad usum humanum Immunosera ex animale ad usum humanum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.8-1 ÁLLATI EREDETŰ, EMBERGYÓGYÁSZATI IMMUNSZÉRUMOK Immunosera ex animale ad usum humanum 07/2007:0084 DEFINÍCIÓ Az állati eredetű, embergyógyászati

Részletesebben

A DOHÁNYZÁS OKOZTA DNS KÁROSODÁSOK ÉS JAVÍTÁSUK VIZSGÁLATA EMBERI CUMULUS ÉS GRANULOSA SEJTEKBEN. Sinkó Ildikó PH.D.

A DOHÁNYZÁS OKOZTA DNS KÁROSODÁSOK ÉS JAVÍTÁSUK VIZSGÁLATA EMBERI CUMULUS ÉS GRANULOSA SEJTEKBEN. Sinkó Ildikó PH.D. A DOHÁNYZÁS OKOZTA DNS KÁROSODÁSOK ÉS JAVÍTÁSUK VIZSGÁLATA EMBERI CUMULUS ÉS GRANULOSA SEJTEKBEN Sinkó Ildikó PH.D. ÉRTEKEZÉS TÉZISEI Témavezető: Dr. Raskó István Az értekezés a Szegedi Tudományegyetem

Részletesebben

Klinikai metionin-anyagcsere kutatásainkhoz, amint már említettem, 35. S radioaktív kénizotóppal jelzett metionint használtunk (gondolom, a

Klinikai metionin-anyagcsere kutatásainkhoz, amint már említettem, 35. S radioaktív kénizotóppal jelzett metionint használtunk (gondolom, a TUDOMÁNYOS MŰHELY Szaktudományok interferenciája A huszadik században a tudományok fejlődését első közelítésben két, méreteiben és jelentőségében nagyjából azonos forradalommal" lehet jellemezni: a fizika

Részletesebben

Szakmai zárójelentés

Szakmai zárójelentés Szakmai zárójelentés A csoporttechnológia (Group Technology = GT) elvi és módszertani alapjaihoz, valamint a kapcsolódó módszerek informatikai alkalmazásaihoz kötődő kutatómunkával a Miskolci Egyetem Alkalmazott

Részletesebben

RONCSOLÁSMENTES VIZSGÁLATTECHNIKA

RONCSOLÁSMENTES VIZSGÁLATTECHNIKA RONCSOLÁSMENTES VIZSGÁLATTECHNIKA NDT TECHNICS FÉMLEMEZEK VASTAGSÁGÁNAK MÉRÉSE RÖNTGENSUGÁRZÁS SEGÍTSÉGÉVEL THICKNESS MEASURING OF METAL SHEETS WITH X-RAY METHODDS BOROMISZA LÁSZLÓ Kulcsszavak: vastagság

Részletesebben

Szabóné Schmidt Mária Konzultáns kód: 000-0058575 TEL: +36 20 386 6434. Website: http://fittlesz.com http://www.fittmellekes.com

Szabóné Schmidt Mária Konzultáns kód: 000-0058575 TEL: +36 20 386 6434. Website: http://fittlesz.com http://www.fittmellekes.com E-mail: maria.fittlady@gmail.com Skype: fittlesz Website: http://fittlesz.com http://www.fittmellekes.com Mit jelent a Wellness? Ez az új fogalom túlságosan összetett ahhoz, hogy egy szóval megfogalmazható

Részletesebben

Különböző módon táplált tejelő tehenek metánkibocsátása, valamint ezek tárolt trágyájának metánés nitrogénemissziója

Különböző módon táplált tejelő tehenek metánkibocsátása, valamint ezek tárolt trágyájának metánés nitrogénemissziója LEVEGÕTISZTASÁG-VÉDELEM 2.1 Különböző módon táplált tejelő tehenek metánkibocsátása, valamint ezek tárolt trágyájának metánés nitrogénemissziója Tárgyszavak: ammónia, tejelő tehenek, zsírok, trágyatárolás,

Részletesebben

NYOMÁSOS ÖNTÉS KÖZBEN ÉBREDŐ NYOMÁSVISZONYOK MÉRÉTECHNOLÓGIAI TERVEZÉSE DEVELOPMENT OF CAVITY PRESSURE MEASUREMENT FOR HIGH PRESURE DIE CASTING

NYOMÁSOS ÖNTÉS KÖZBEN ÉBREDŐ NYOMÁSVISZONYOK MÉRÉTECHNOLÓGIAI TERVEZÉSE DEVELOPMENT OF CAVITY PRESSURE MEASUREMENT FOR HIGH PRESURE DIE CASTING Anyagmérnöki Tudományok, 39/1 (2016) pp. 82 86. NYOMÁSOS ÖNTÉS KÖZBEN ÉBREDŐ NYOMÁSVISZONYOK MÉRÉTECHNOLÓGIAI TERVEZÉSE DEVELOPMENT OF CAVITY PRESSURE MEASUREMENT FOR HIGH PRESURE DIE CASTING LEDNICZKY

Részletesebben

Betegtájékoztató STREPTASE 1 500 000 NE LIOFILIZÁTUM OLDATOS INJEKCIÓHOZ/INFÚZIÓHOZ

Betegtájékoztató STREPTASE 1 500 000 NE LIOFILIZÁTUM OLDATOS INJEKCIÓHOZ/INFÚZIÓHOZ STREPTASE 1 500 000 NE LIOFILIZÁTUM OLDATOS INJEKCIÓHOZ/INFÚZIÓHOZ Streptase 1 500 000 NE liofilizátum oldatos injekcióhoz/infúzióhoz streptokinase HATÓANYAG: Stabilizált tiszta sztreptokináz. A Streptase

Részletesebben

Ismeretlen eredetű tüdőgyulladás megjelenése a SARS kórokozó vírusának azonosítása nemzetközi összefogással

Ismeretlen eredetű tüdőgyulladás megjelenése a SARS kórokozó vírusának azonosítása nemzetközi összefogással BIOTECHNOLÓGIA AZ EGÉSZSÉGÜGYBEN Ismeretlen eredetű tüdőgyulladás megjelenése a SARS kórokozó vírusának azonosítása nemzetközi összefogással Tárgyszavak: SARS; vírus; koronavírus; vakcina; kutatás; vírusmutáció.

Részletesebben

A hem-oxigenáz/vegf rendszer indukciója nőgyógyászati tumorokban. Óvári László

A hem-oxigenáz/vegf rendszer indukciója nőgyógyászati tumorokban. Óvári László A hem-oxigenáz/vegf rendszer indukciója nőgyógyászati tumorokban Óvári László HO-1, CO,VEGF biokémia rendszer Gyulladások Sebgyógyulás Placentáció HO-1, VEGF-onkológia-irodalom HO-1 nagy mértékében expresszálódik

Részletesebben

TDA-TAR ÉS O-TDA FOLYADÉKÁRAMOK ELEGYÍTHETŐSÉGÉNEK VIZSGÁLATA STUDY OF THE MIXABILITY OF TDA-TAR AND O-TDA LIQUID STREAMS

TDA-TAR ÉS O-TDA FOLYADÉKÁRAMOK ELEGYÍTHETŐSÉGÉNEK VIZSGÁLATA STUDY OF THE MIXABILITY OF TDA-TAR AND O-TDA LIQUID STREAMS Anyagmérnöki Tudományok, 37. kötet, 1. szám (2012), pp. 147 156. TDA-TAR ÉS O-TDA FOLYADÉKÁRAMOK ELEGYÍTHETŐSÉGÉNEK VIZSGÁLATA STUDY OF THE MIXABILITY OF TDA-TAR AND O-TDA LIQUID STREAMS HUTKAINÉ GÖNDÖR

Részletesebben

A humán tripszinogén 4 expressziója és eloszlási mintázata az emberi agyban

A humán tripszinogén 4 expressziója és eloszlási mintázata az emberi agyban A humán tripszinogén 4 expressziója és eloszlási mintázata az emberi agyban Doktori (PhD) értekezés Siklódi Erika Rozália Biológia Doktori Iskola Iskolavezető: Prof. Erdei Anna, tanszékvezető egyetemi

Részletesebben

A DEBRECENI MÉRNÖK INFORMATIKUS KÉPZÉS TAPASZTALATAIRÓL. Kuki Attila Debreceni Egyetem, Informatikai Kar. Összefoglaló

A DEBRECENI MÉRNÖK INFORMATIKUS KÉPZÉS TAPASZTALATAIRÓL. Kuki Attila Debreceni Egyetem, Informatikai Kar. Összefoglaló A DEBRECENI MÉRNÖK INFORMATIKUS KÉPZÉS TAPASZTALATAIRÓL TEACHING EXPERIENCES OF THE IT ENGINEERING COURSE OF UNIVERSITY OF DEBRECEN Kuki Attila Debreceni Egyetem, Informatikai Kar Összefoglaló A Debreceni

Részletesebben

A fehérje triptofán enantiomereinek meghatározása

A fehérje triptofán enantiomereinek meghatározása A fehérje triptofán enantiomereinek meghatározása Dr. Csapó János A kutatás célja megfelelő analitikai módszer kidolgozása a triptofán-enantiomerek meghatározására, és a módszer alkalmazhatóságának vizsgálata.

Részletesebben

Zárójelentés a Hisztamin hatása a sejtdifferenciációra, összehasonlító vizsgálatok tumor - és embrionális őssejteken című 62558 számú OTKA pályázatról

Zárójelentés a Hisztamin hatása a sejtdifferenciációra, összehasonlító vizsgálatok tumor - és embrionális őssejteken című 62558 számú OTKA pályázatról Zárójelentés a Hisztamin hatása a sejtdifferenciációra, összehasonlító vizsgálatok tumor - és embrionális őssejteken című 62558 számú OTKA pályázatról A hisztaminnak az allergiás reakciókban betöltött

Részletesebben

6. Zárványtestek feldolgozása

6. Zárványtestek feldolgozása 6. Zárványtestek feldolgozása... 1 6.1. A zárványtestek... 1 6.1.1. A zárványtestek kialakulása... 2 6.1.2. A feldolgozási technológia... 3 6.1.2.1. Sejtfeltárás... 3 6.1.2.2. Centrifugálás, tisztítás...

Részletesebben

A VÉR BIOKÉMIÁJA VÉRKÉSZÍTMÉNYEK, PLAZMADERIVÁTUMOK A VÉR BIOKÉMIÁJA A VÉR ÖSSZETÉTELE VÉRKÉSZÍTMÉNYEK VÉRKÉSZÍTMÉNYEK

A VÉR BIOKÉMIÁJA VÉRKÉSZÍTMÉNYEK, PLAZMADERIVÁTUMOK A VÉR BIOKÉMIÁJA A VÉR ÖSSZETÉTELE VÉRKÉSZÍTMÉNYEK VÉRKÉSZÍTMÉNYEK VÉRKÉSZÍTMÉNYEK, PLAZMADERIVÁTUMOK Dr. Pécs Miklós Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem, Alkalmazott Biotechnológia és Élelmiszertudomány Tanszék A VÉR BIOKÉMIÁJA Áramló folyadék, amely anyagokat

Részletesebben

A SZEMCSEALAK ALAPJÁN TÖRTÉNŐ SZÉTVÁLASZTÁS JELENTŐSÉGE FÉMTARTALMÚ HULLADÉKOK FELDOLGOZÁSA SORÁN

A SZEMCSEALAK ALAPJÁN TÖRTÉNŐ SZÉTVÁLASZTÁS JELENTŐSÉGE FÉMTARTALMÚ HULLADÉKOK FELDOLGOZÁSA SORÁN Műszaki Földtudományi Közlemények, 83. kötet, 1. szám (2012), pp. 61 70. A SZEMCSEALAK ALAPJÁN TÖRTÉNŐ SZÉTVÁLASZTÁS JELENTŐSÉGE FÉMTARTALMÚ HULLADÉKOK FELDOLGOZÁSA SORÁN SIGNIFICANCE OF SHAPE SEPARATION

Részletesebben

A nyugdíjban, nyugdíjszerű ellátásban részesülők halandósága főbb ellátástípusok szerint

A nyugdíjban, nyugdíjszerű ellátásban részesülők halandósága főbb ellátástípusok szerint SZENT ISTVÁN EGYETEM, GÖDÖLLŐ Gazdálkodás és Szervezéstudományok Doktori Iskola Doktori (PHD) értekezés tézisei A nyugdíjban, nyugdíjszerű ellátásban részesülők halandósága főbb ellátástípusok szerint

Részletesebben

III. A tudományos tények, melyek ezt az áttörést visszafordíthatatlanná teszik

III. A tudományos tények, melyek ezt az áttörést visszafordíthatatlanná teszik III. A tudományos tények, melyek ezt az áttörést visszafordíthatatlanná teszik A rák legyőzése - 1. kötet: Az elképzelhetetlen megvalósítható Dr. Niedzwiecki bevezetője a fejezethez A rák az egyik legnagyobb

Részletesebben

ANATÓMIA FITNESS AKADÉMIA

ANATÓMIA FITNESS AKADÉMIA ANATÓMIA FITNESS AKADÉMIA sejt szövet szerv szervrendszer sejtek általános jellemzése: az élet legkisebb alaki és működési egysége minden élőlény sejtes felépítésű minden sejtre jellemző: határoló rendszer

Részletesebben

AKTUÁLIS. Az ország lakosságának érsebészeti ellátását biztosító központok átszervezése

AKTUÁLIS. Az ország lakosságának érsebészeti ellátását biztosító központok átszervezése AKTUÁLIS Hogyan tovább érsebészet? Írta: DR. ACSÁDY GYÖRGY Soltész Lajos Emlékelőadás, Pécs, 2005. október 12. Bevezetés Azok a nagy tekintélyű kollégák, akik korábban abban a megtiszteltetésben részesülhettek,

Részletesebben

Úttörő formula az egészségmegőrzés és helyreállítás természetes képességének mindennapi támogatására

Úttörő formula az egészségmegőrzés és helyreállítás természetes képességének mindennapi támogatására Úttörő formula az egészségmegőrzés és helyreállítás természetes képességének mindennapi támogatására A Természet megalkotta a Tökéletes Organizmust, az Embert Soha ember még nem hozott létre ehhez mérhető

Részletesebben

A FATERMÉKEK ÉS A HELYETTESÍTŐ TERMÉKEK ÁRARÁNYAI

A FATERMÉKEK ÉS A HELYETTESÍTŐ TERMÉKEK ÁRARÁNYAI Dr. Feszler Lajos: 434.0.83:737 088,4 A FATERMÉKEK ÉS A HELYETTESÍTŐ TERMÉKEK ÁRARÁNYAI A tervutasításos rendszerről a különböző közgazdasági szabályozókkal irányított gazdálkodásra áttért gazdaságunkban

Részletesebben

Tárgyszavak: táplálkozás; egészség; funkcionális élelmiszer.

Tárgyszavak: táplálkozás; egészség; funkcionális élelmiszer. ÉLELMISZERIPARI BIOTECHNOLÓGIÁK Kritikus szemmel a funkcionális élelmiszerekről Tárgyszavak: táplálkozás; egészség; funkcionális élelmiszer. Az egészség és táplálkozás kapcsolatának tanulmányozása kb.

Részletesebben

A PLURIPOTENS ŐSSEJTEK KÜLÖNLEGES BIOLÓGIAI PROGRAMJA, EMBRIONÁLIS ÉS INDUKÁLT PLURIPOTENS ŐSSEJTEK

A PLURIPOTENS ŐSSEJTEK KÜLÖNLEGES BIOLÓGIAI PROGRAMJA, EMBRIONÁLIS ÉS INDUKÁLT PLURIPOTENS ŐSSEJTEK A PLURIPOTENS ŐSSEJTEK KÜLÖNLEGES BIOLÓGIAI PROGRAMJA, EMBRIONÁLIS ÉS INDUKÁLT PLURIPOTENS ŐSSEJTEK Az embrionális, illetve az indukált pluripotens őssejtek szinte korlátlan fejlődési képességgel rendelkező

Részletesebben

Szennyezőanyag-tartalom mélységbeli függése erőművi salakhányókon

Szennyezőanyag-tartalom mélységbeli függése erőművi salakhányókon Szennyezőanyag-tartalom mélységbeli függése erőművi salakhányókon Angyal Zsuzsanna 1. Bevezetés Magyarország régi nehézipari vidékeit még ma is sok helyen csúfítják erőművekből vagy ipari üzemekből származó

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 093 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 093 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000093T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 093 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 749886 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS

I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS 1 Ez a gyógyszer fokozott felügyelet alatt áll, mely lehetővé teszi az új gyógyszerbiztonsági információk gyors azonosítását. Az egészségügyi szakembereket arra kérjük,

Részletesebben

Génátvitel magasabb rendű állatokba elméleti megfontolások, gyakorlati eredmények és génterápiás lehetőségek

Génátvitel magasabb rendű állatokba elméleti megfontolások, gyakorlati eredmények és génterápiás lehetőségek MEZÕGAZDASÁGI BIOTECHNOLÓGIÁK Génátvitel magasabb rendű állatokba elméleti megfontolások, gyakorlati eredmények és génterápiás lehetőségek Tárgyszavak: génátvitel; transzfekció; transzgenézis; génterápia;

Részletesebben

Állományvédelem Lengyelországban. Beszámoló egy lengyelországi tanulmányútról

Állományvédelem Lengyelországban. Beszámoló egy lengyelországi tanulmányútról Beszámoló egy lengyelországi tanulmányútról A tanulmányútra 2006. május 15. és 19. között került sor Kastaly Beatrix (az Országos Széchényi Könyvtár Restauráló osztályának vezetője), Orosz Katalin (főrestaurátor,

Részletesebben

AZ EURÓPAI KÖZÖSSÉGEK BIZOTTSÁGA. Javaslat: A TANÁCS RENDELETE. az állatok leölésük során való védelméről. (előterjesztő: a Bizottság)

AZ EURÓPAI KÖZÖSSÉGEK BIZOTTSÁGA. Javaslat: A TANÁCS RENDELETE. az állatok leölésük során való védelméről. (előterjesztő: a Bizottság) HU HU HU AZ EURÓPAI KÖZÖSSÉGEK BIZOTTSÁGA Brüsszel, 18.9.2008 COM(2008) 553 végleges 2008/0180 (CNS) Javaslat: A TANÁCS RENDELETE az állatok leölésük során való védelméről (előterjesztő: a Bizottság) {SEC(2008)

Részletesebben

MŰANYAGOK ALKALMAZÁSA

MŰANYAGOK ALKALMAZÁSA MŰANYAGOK ALKALMAZÁSA Geoműanyagok A környezetszennyeződés megakadályozása érdekében a szemétlerakókat környezetüktől hosszú távra el kell szigetelni. Ebben nagy szerepük van a műanyag geomembránoknak.

Részletesebben

Két kevéssé ismert humán ABCG fehérje expressziója és funkcionális vizsgálata: ABCG1 és ABCG4 jellemzése

Két kevéssé ismert humán ABCG fehérje expressziója és funkcionális vizsgálata: ABCG1 és ABCG4 jellemzése Két kevéssé ismert humán ABCG fehérje expressziója és funkcionális vizsgálata: ABCG1 és ABCG4 jellemzése Doktori tézisek Dr. Cserepes Judit Semmelweis Egyetem Molekuláris Orvostudományok Doktori Iskola

Részletesebben

Kutatási beszámoló 2006-2009. A p50gap intracelluláris eloszlásának és sejtélettani szerepének vizsgálata

Kutatási beszámoló 2006-2009. A p50gap intracelluláris eloszlásának és sejtélettani szerepének vizsgálata Kutatási beszámoló 6-9 Kutatásaink alapvetően a pályázathoz benyújtott munkaterv szerint történtek. Először ezen eredményeket foglalom össze. z eredeti tervektől történt eltérést a beszámoló végén összegzem.

Részletesebben

A basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan

A basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan A basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan fehérjét (FC-1 killer toxint) választ ki a tápközegbe, amely elpusztítja az opportunista patogén Cryptococcus neoformans-t.

Részletesebben

A felszíni ektoderma differenciációja

A felszíni ektoderma differenciációja A felszíni ektoderma differenciációja - elkülönülése - kialakulása az egyedfejlődés során - szerkezete és a felnőttkori őssejtek -interfollikuláris epidermis -szőrtüsző -faggyúmirigy - a bőrpótlás (klinikai)

Részletesebben

Zöld élelmiszerek Tibet, Hawaii, Peru, Tajvan, Ecuador, Kalifornia és Brazília

Zöld élelmiszerek Tibet, Hawaii, Peru, Tajvan, Ecuador, Kalifornia és Brazília Zöld élelmiszerek Tibet, Hawaii, Peru, Tajvan, Ecuador, Kalifornia és Brazília A természet kvintesszenciái A kvintesszencia szó Arisztotelész természeti filozófiájából indul ki és a latin quinta essentia,

Részletesebben

már mindenben úgy kell eljárnunk, mint bármilyen viaszveszejtéses öntés esetén. A kapott öntvény kidolgozásánál még mindig van lehetőségünk

már mindenben úgy kell eljárnunk, mint bármilyen viaszveszejtéses öntés esetén. A kapott öntvény kidolgozásánál még mindig van lehetőségünk Budapest Régiségei XLII-XLIII. 2009-2010. Vecsey Ádám Fémeszterga versus viaszesztergálás Bev e z e t é s A méhviaszt, mint alapanyagot nehéz besorolni a műtárgyalkotó anyagok különböző csoportjaiba, mert

Részletesebben

2.6.13. NEM STERIL TERMÉKEK MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATA: VIZSGÁLAT MEGHATÁROZOTT MIKROORGANIZMUSOKRA

2.6.13. NEM STERIL TERMÉKEK MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATA: VIZSGÁLAT MEGHATÁROZOTT MIKROORGANIZMUSOKRA 2.6.13. Nem steril termékek mikrobiológiai vizsgálata Ph.Hg.VIII. - Ph.Eur.6.0. 1 01/2008:20613 javított 6.0 2.6.13. NEM STERIL TERMÉKEK MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATA: VIZSGÁLAT MEGHATÁROZOTT MIKROORGANIZMUSOKRA

Részletesebben

MEZŐGAZDASÁGI HULLADÉKOT FELDOLGOZÓ PELLETÁLÓ ÜZEM LÉTESÍTÉSÉNEK FELTÉTELEI

MEZŐGAZDASÁGI HULLADÉKOT FELDOLGOZÓ PELLETÁLÓ ÜZEM LÉTESÍTÉSÉNEK FELTÉTELEI Multidiszciplináris tudományok, 2. kötet. (2012) 1 sz. pp. 115-120. MEZŐGAZDASÁGI HULLADÉKOT FELDOLGOZÓ PELLETÁLÓ ÜZEM LÉTESÍTÉSÉNEK FELTÉTELEI Szamosi Zoltán*, Dr. Siménfalvi Zoltán** *doktorandusz, Miskolci

Részletesebben

I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS

I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS I. MELLÉKLET ALKALMAZÁSI ELŐÍRÁS 1 1. A GYÓGYSZER NEVE Mixtard 30 40 nemzetközi egység/ml szuszpenziós injekció 2. MINŐSÉGI ÉS MENNYISÉGI ÖSSZETÉTEL 1 injekciós üveg 10 ml-t tartalmaz, ami 400 NE-gel egyenértékű.

Részletesebben

Válasz Bereczki Dániel Professzor Úr bírálatára

Válasz Bereczki Dániel Professzor Úr bírálatára Válasz Bereczki Dániel Professzor Úr bírálatára Először is hálás köszönettel tartozom Bereczki Professzor Úrnak, amiért elvállalta a disszertációm bírálatát és azt védésre alkalmasnak tartotta. A formai

Részletesebben

Trypsinum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-1 TRYPSINUM. Tripszin

Trypsinum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-1 TRYPSINUM. Tripszin 1 TRYPSINUM Tripszin 01/2009:0694 [9002-07-7] DEFINÍCIÓ A tripszin proteolitikus enzim, melyet az egészséges emlõsök hasnyálmirigyébõl kivont tripszinogén aktiválásával nyernek. Szárított anyagra vonatkoztatott

Részletesebben

2006 1. Nemszinaptikus receptorok és szubmikronos Ca2+ válaszok: A két-foton lézermikroszkópia felhasználása a farmakológiai vizsgálatokra.

2006 1. Nemszinaptikus receptorok és szubmikronos Ca2+ válaszok: A két-foton lézermikroszkópia felhasználása a farmakológiai vizsgálatokra. 2006 1. Nemszinaptikus receptorok és szubmikronos Ca 2+ válaszok: A két-foton lézermikroszkópia felhasználása a farmakológiai vizsgálatokra. A kutatócsoportunkban Közép Európában elsőként bevezetett két-foton

Részletesebben

Vállalkozás alapítás és vállalkozóvá válás kutatás zárójelentés

Vállalkozás alapítás és vállalkozóvá válás kutatás zárójelentés TÁMOP-4.2.1-08/1-2008-0002 projekt Vállalkozás alapítás és vállalkozóvá válás kutatás zárójelentés Készítette: Dr. Imreh Szabolcs Dr. Lukovics Miklós A kutatásban részt vett: Dr. Kovács Péter, Prónay Szabolcs,

Részletesebben

A corneális stromahomály (haze) kialakulásának biokémiai háttere photorefraktív lézerkezelést követően

A corneális stromahomály (haze) kialakulásának biokémiai háttere photorefraktív lézerkezelést követően A corneális stromahomály (haze) kialakulásának biokémiai háttere photorefraktív lézerkezelést követően Vállalt feladatok a) A könny plazminogén aktivátor aktivitás (PAA) - nak, valamint plazminogén aktivátor

Részletesebben

A vér folyékony sejtközötti állományú kötőszövet. Egy átlagos embernek 5-5,5 liter vére van, amely két nagyobb részre osztható, a vérplazmára

A vér folyékony sejtközötti állományú kötőszövet. Egy átlagos embernek 5-5,5 liter vére van, amely két nagyobb részre osztható, a vérplazmára VÉR A vér folyékony sejtközötti állományú kötőszövet. Egy átlagos embernek 5-5,5 liter vére van, amely két nagyobb részre osztható, a vérplazmára (55-56%) és az alakos elemekre (44-45%). Vérplazma: az

Részletesebben

A 2012/12. SZÁM TARTALMA. Sárdi S., Szentpáli-Gavallér K., Bakonyi T., Szenci O., Kutasi O.: Lovak

A 2012/12. SZÁM TARTALMA. Sárdi S., Szentpáli-Gavallér K., Bakonyi T., Szenci O., Kutasi O.: Lovak A 2012/12. SZÁM TARTALMA LÓ Sárdi S., Szentpáli-Gavallér K., Bakonyi T., Szenci O., Kutasi O.: Lovak nyugat-nílusi vírus okozta agy- és gerincvelő-gyulladása. Irodalmi áttekintés / 708 SZARVASMARHA Mee,

Részletesebben

TÜZELÉSTECHNIKA A gyakorlat célja:

TÜZELÉSTECHNIKA A gyakorlat célja: TÜZELÉSTECHNIKA A gyakorlat célja: Gáztüzelésű háztartási kombinált fűtő-melegvizet és használati melegvizet szolgáltató berendezés tüzeléstechnikai jellemzőinek vizsgálata: A tüzelőberendezés energetikai

Részletesebben

A DEMOGRÁFIÁI ÉS A SZOCIOLÓGIAI ÉLETRAJZ EGYESÍTÉSE A NŐI ÉLETÜT V IZSG ÁLATA ALAPJÁN DR. M O LNÁR LÁSZLÓ

A DEMOGRÁFIÁI ÉS A SZOCIOLÓGIAI ÉLETRAJZ EGYESÍTÉSE A NŐI ÉLETÜT V IZSG ÁLATA ALAPJÁN DR. M O LNÁR LÁSZLÓ A DEMOGRÁFIÁI ÉS A SZOCIOLÓGIAI ÉLETRAJZ EGYESÍTÉSE A NŐI ÉLETÜT V IZSG ÁLATA ALAPJÁN DR. M O LNÁR LÁSZLÓ A gazdaságilag aktív nő életútjának, életciklusainak kutatását bemutató tanulmányomban (Molnár,

Részletesebben

01/2008:40202 4.2.2. MÉRŐOLDATOK

01/2008:40202 4.2.2. MÉRŐOLDATOK Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.6-6.0-1 4.2.2. MÉRŐOLDATOK 01/2008:40202 A mérőoldatokat a szokásos kémiai analitikai eljárások szabályai szerint készítjük. A mérőoldatok előállításához használt eszközök megfelelő

Részletesebben

Egyetemi doktori (PhD) értekezés tézisei A SZOCIÁLIS SZOLGÁLTATÁSOK SZERVEZÉSÉNEK SZABÁLYOZÁSA A KÖZSZEKTOR SZEREPLŐINEK FELADATAI SZEMSZÖGÉBŐL

Egyetemi doktori (PhD) értekezés tézisei A SZOCIÁLIS SZOLGÁLTATÁSOK SZERVEZÉSÉNEK SZABÁLYOZÁSA A KÖZSZEKTOR SZEREPLŐINEK FELADATAI SZEMSZÖGÉBŐL Egyetemi doktori (PhD) értekezés tézisei A SZOCIÁLIS SZOLGÁLTATÁSOK SZERVEZÉSÉNEK SZABÁLYOZÁSA A KÖZSZEKTOR SZEREPLŐINEK FELADATAI SZEMSZÖGÉBŐL dr. Krizsai Anita Témavezető: Dr. Horváth M. Tamás, DSc,

Részletesebben

Gyógyszervegyületek elektrofiziológiai szűrése nagy hatáskereszt-metszetű ( semi high-troughput ) rendszereken

Gyógyszervegyületek elektrofiziológiai szűrése nagy hatáskereszt-metszetű ( semi high-troughput ) rendszereken Gyógyszervegyületek elektrofiziológiai szűrése nagy hatáskereszt-metszetű ( semi high-troughput ) rendszereken Szegedi Tudományegyetem, Általános Orvostudomány Kar Farmakológiai és Farmakoterápiai Intézete

Részletesebben

Flexove 625 mg Tabletta Szájon át történő alkalmazás 1327 Lysaker, Norvégia Belgium - Navamedic ASA Vollsveien 13 C 1327 Lysaker, Norvégia

Flexove 625 mg Tabletta Szájon át történő alkalmazás 1327 Lysaker, Norvégia Belgium - Navamedic ASA Vollsveien 13 C 1327 Lysaker, Norvégia I. MELLÉKLET FELSOROLÁS: MEGNEVEZÉS, GYÓGYSZERFORMA, GYÓGYSZERKÉSZÍTMÉNY- DÓZISOK, ALKALMAZÁSI MÓDOK, KÉRELMEZŐ, FORGALOMBA HOZATALI ENGEDÉLY JOGOSULTJA A TAGÁLLAMOKBAN 1 Tagállam Forgalomba hozatali engedély

Részletesebben

Károly Róbert Fıiskola Gazdaság és Társadalomtudományi Kar tudományos közleményei Alapítva: 2011

Károly Róbert Fıiskola Gazdaság és Társadalomtudományi Kar tudományos közleményei Alapítva: 2011 Károly Róbert Fıiskola Gazdaság és Társadalomtudományi Kar tudományos közleményei Alapítva: 2011 ͳ ȋͳȍ ACTA CAROLUS ROBERTUS 1 (1) FOGLALKOZTATÁS A ZÖLD ZÖLDSÉGHAJTATÓ MODELLGAZDASÁGOKBAN Összefoglalás

Részletesebben

A mesenchymalis őssejtek funkcionális heterogenitása nem gyulladásos és gyulladásos mikrokörnyezetben

A mesenchymalis őssejtek funkcionális heterogenitása nem gyulladásos és gyulladásos mikrokörnyezetben SZEGEDI TUDOMÁNYEGYETEM TERMÉSZETTUDOMÁNYI ÉS INFORMATIKAI KAR BIOLÓGIA DOKTORI ISKOLA ÉS MTA SZEGEDI BIOLÓGIAI KUTATÓKÖZPONT A mesenchymalis őssejtek funkcionális heterogenitása nem gyulladásos és gyulladásos

Részletesebben

XXIV. évfolyam, 2014. 1. szám

XXIV. évfolyam, 2014. 1. szám Kasza Anett tű. főhadnagy 1 XXIV. évfolyam, 2014. 1. szám A BUDAPESTI METRÓBAN VÉGREHATJHATÓ GYAKORLATOK FAJTÁI, ÉS EGY SZEKTORT ÉRINTŐ METRÓ ÜZEMI POLGÁRI VÉDELMI GYAKORLAT BEMUTATÁSA 2 Napjainkban vita

Részletesebben

A GC speciális kiadványa

A GC speciális kiadványa A GC speciális kiadványa Fosztfátbázisú beágyazóanyagok korona- és hídtechnikákhoz Tartalomjegyzék Bevezetés 3 A korona- és hídtechnikákhoz készült foszfátbázisú beágyazóanyagok optimális használatának

Részletesebben

Magyarország működőtőke vonzása a nemzetközi tőkeáramlás folyamatában

Magyarország működőtőke vonzása a nemzetközi tőkeáramlás folyamatában Budapesti Gazdasági Főiskola KÜLKERESKEDELMI FŐISKOLAI KAR KÜLGAZDASÁGI SZAK Nappali francia tagozat Gazdaságdiplomácia szakirány Magyarország működőtőke vonzása a nemzetközi tőkeáramlás folyamatában Készítette:

Részletesebben

http://www.geneticliteracyproject.org Nagy Krisztina Semmelweis Egyetem, Orálbiológiai Tanszék

http://www.geneticliteracyproject.org Nagy Krisztina Semmelweis Egyetem, Orálbiológiai Tanszék ŐSSEJTEK http://www.geneticliteracyproject.org 2015. május 6. Nagy Krisztina Semmelweis Egyetem, Orálbiológiai Tanszék Az őssejt definíciója korlátlan önmegújító képesség differenciált utódsejtek létrehozása

Részletesebben

DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI AZ OPPORTUNISTA HUMÁNPATOGÉN CANDIDA PARAPSILOSIS ÉLESZTŐGOMBA ELLENI TERMÉSZETES ÉS ADAPTÍV IMMUNVÁLASZ VIZSGÁLATA

DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI AZ OPPORTUNISTA HUMÁNPATOGÉN CANDIDA PARAPSILOSIS ÉLESZTŐGOMBA ELLENI TERMÉSZETES ÉS ADAPTÍV IMMUNVÁLASZ VIZSGÁLATA DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI AZ OPPORTUNISTA HUMÁNPATOGÉN CANDIDA PARAPSILOSIS ÉLESZTŐGOMBA ELLENI TERMÉSZETES ÉS ADAPTÍV IMMUNVÁLASZ VIZSGÁLATA TÓTH ADÉL TÉMAVEZETŐ: DR. GÁCSER ATTILA TUDOMÁNYOS FŐMUNKATÁRS

Részletesebben

A rosszindulatú daganatos halálozás változása 1975 és 2001 között Magyarországon

A rosszindulatú daganatos halálozás változása 1975 és 2001 között Magyarországon A rosszindulatú daganatos halálozás változása és között Eredeti közlemény Gaudi István 1,2, Kásler Miklós 2 1 MTA Számítástechnikai és Automatizálási Kutató Intézete, Budapest 2 Országos Onkológiai Intézet,

Részletesebben

IT KOCKÁZATOK, ELEMZÉSÜK, KEZELÉSÜK

IT KOCKÁZATOK, ELEMZÉSÜK, KEZELÉSÜK Póserné Oláh Valéria Budapesti Műszaki Főiskola NIK, poserne.valeria@nik.bmf.hu IT KOCKÁZATOK, ELEMZÉSÜK, KEZELÉSÜK Absztrakt Napjainkban már a legtöbb szervezet működése elképzelhetetlen informatikai

Részletesebben

Leukémia (fehérvérûség)

Leukémia (fehérvérûség) Leukémia (fehérvérûség) Leukémia - fehérvérûség A leukémia a rosszindulatú rákos megbetegedések azon formája, amely a vérképzõ sejtekbõl indul ki. A leukémia a csontvelõben lévõ éretlen és érettebb vérképzõ

Részletesebben

40,0 mg aciklovir 1 ml szuszpenzióban (200,0 mg aciklovir 5 ml 1 adag szuszpenzióban).

40,0 mg aciklovir 1 ml szuszpenzióban (200,0 mg aciklovir 5 ml 1 adag szuszpenzióban). 1. A GYÓGYSZER NEVE Zovirax 40 mg/ml belsőleges szuszpenzió 2. MINŐSÉGI ÉS MENNYISÉGI ÖSSZETÉTEL 40,0 mg aciklovir 1 ml szuszpenzióban (200,0 mg aciklovir 5 ml 1 adag szuszpenzióban). Ismert hatású segédanyagok:

Részletesebben

A CSALÁDOK ÉS HÁZTARTÁSOK ELŐRESZÁMÍTÁSA, 1986-2021 BUDAPEST 1988/2

A CSALÁDOK ÉS HÁZTARTÁSOK ELŐRESZÁMÍTÁSA, 1986-2021 BUDAPEST 1988/2 A CSALÁDOK ÉS HÁZTARTÁSOK ELŐRESZÁMÍTÁSA, 1986-2021 BUDAPEST 1988/2 TARTALOMJEGYZÉK BEVEZETÉS... 7 I. AZ ELŐRESZÁMÍTÁS FELTÉTELRENDSZERE ÉS VÉGREHAJTÁSA... 10 1. A népesség családi állapot szerinti összetételének

Részletesebben

Fogyatékossággal élő emberek életminősége és ellátási költségei különböző lakhatási formákban

Fogyatékossággal élő emberek életminősége és ellátási költségei különböző lakhatási formákban Fogyatékossággal élő emberek életminősége és ellátási költségei különböző lakhatási formákban Zárótanulmány a VP/2013/013/0057 azonosítószámú New dimension in social protection towards community based

Részletesebben

1. Bevezetés. 2. Anyag és módszer

1. Bevezetés. 2. Anyag és módszer DR. FODOR MÓNIKA * Értékrend, élelmiszerfogyasztói preferencia és a szolgáltatás-választás indítékai közötti összefüggések a hazai munkahelyi étkezés piacán 1. Bevezetés Correlations between the individual

Részletesebben

Az üzemeltető számára. Rendszerleírás és kezelési utasítás. aurostep plus. Rendszer napenergiával történő használati melegvíz készítéshez

Az üzemeltető számára. Rendszerleírás és kezelési utasítás. aurostep plus. Rendszer napenergiával történő használati melegvíz készítéshez Az üzemeltető számára Rendszerleírás és kezelési utasítás aurostep plus Rendszer napenergiával történő használati melegvíz készítéshez 2.350 P 3.350 P HU Az üzemeltető számára Rendszerleírás aurostep

Részletesebben

TABLETTÁK. Compressi

TABLETTÁK. Compressi Gyógyszerformák Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.5-1 TABLETTÁK 07/2006:0478 Compressi E cikkely követelményeit a nem bevételre szánt tablettákra nem kell feltétlenül alkalmazni. Ezekre a készítményekre esetenként

Részletesebben

Az értékpapír fogalma a régi és az új magyar Ptk.-ban

Az értékpapír fogalma a régi és az új magyar Ptk.-ban Acta Univ. Sapientiae, Legal Studies, 3, 2 (2014) 117 138 Az értékpapír fogalma a régi és az új magyar Ptk.-ban Havasi Bálint Attila közjegyzőhelyettes, Bicske E-mail: havasibalint@mokk.hu Összefoglalás.

Részletesebben

Tömegnövelő edzésterv

Tömegnövelő edzésterv Tömegnövelő edzésterv Ajánlott: - azoknak, akik nagy izmokat szeretnének - azoknak, akik csupán feszesebb, tónusosabb testre vágynak - sportolóknak, akik szeretnék a sportági mozgásból eredő aránytalanságokat

Részletesebben

A sejtek lehetséges sorsa. A sejtek differenciálódása. Sejthalál. A differenciált sejtek tulajdonságai

A sejtek lehetséges sorsa. A sejtek differenciálódása. Sejthalál. A differenciált sejtek tulajdonságai A sejtek lehetséges sorsa A sejtek differenciálódása, öregedése Sejthalál osztódás az osztódási folyamatok befejezése és specializálódás egy (összetett) funkra: differenciá elöregedés (szeneszcencia) elhalás

Részletesebben

Hypertonia kezelésére önmagában vagy egyéb antihipertenzívumokkal, pl. béta-blokkolókkal, diuretikumokkal vagy ACE-inhibitorokkal kombinálva.

Hypertonia kezelésére önmagában vagy egyéb antihipertenzívumokkal, pl. béta-blokkolókkal, diuretikumokkal vagy ACE-inhibitorokkal kombinálva. 1. A GYÓGYSZER NEVE Lacipil 2 mg filmtabletta Lacipil 4 mg filmtabletta 2. MINŐSÉGI ÉS MENNYISÉGI ÖSSZETÉTEL 2 mg, ill. 4 mg lacidipin filmtablettánként. Ismert hatású segédanyag: laktóz-monohidrát. A

Részletesebben

K-46171 Egér klónozás testi- és embrionális ős-sejtekből: A donor sejtek eredetének és kezelésének hatása a genetikai újraprogramozás folyamatára

K-46171 Egér klónozás testi- és embrionális ős-sejtekből: A donor sejtek eredetének és kezelésének hatása a genetikai újraprogramozás folyamatára Zárójelentés K-46171 Egér klónozás testi- és embrionális ős-sejtekből: A donor sejtek eredetének és kezelésének hatása a genetikai újraprogramozás folyamatára A testi sejtes klónozás módszere az elmúlt

Részletesebben

A ROBBANÓANYAGOK KEZELÉSBIZTOSSÁGÁRÓL

A ROBBANÓANYAGOK KEZELÉSBIZTOSSÁGÁRÓL A ROBBANÓANYAGOK KEZELÉSBIZTOSSÁGÁRÓL Dr. BOHUS Géza*, BŐHM Szilvia* * Miskolci Egyetem, Bányászati és Geotechnikai Tanszék ABSTRACT By emitted blasting materials, treatment-safeness is required. These

Részletesebben