Immunhisztokémiai vizsgálatok hematoxylinnal festett keneteken

Átírás

1 Immunhisztokémiai vizsgálatok hematoxylinnal festett keneteken Polgár Zoltánné Semmelweis Egyetem I.sz.Patológiai és Kísérleti Rákkutató Intézet, Budapest

2 A gyakorlatban számtalan esetben fordul elő, hogy a speciális kiegészítő vizsgálatokat, mint az immuncitokémia, a fluorescens in situ hibridizáció - kevés számú kenet lévén a már hematoxylineozinnal megfestett keneteken kell elvégezni. A kenetek színtelenítésével járó nehézségeket és az immuncitokémiai módszerek esetleges változtatását vizsgáltuk meg a három leggyakrabban használt hematoxilin ( Mayer, Harris, Erlich ) tükrében, tekintettel a festékek összetételében lévő különbségekre.

3 Anyag és módszer: A vizsgálathoz igyekeztünk olyan szövetet választani, amely natív állapotban érkezik vizsgálatra,formalin fixálás nélkül. Így alkalmasnak találtuk a fagyasztásra küldött emlőszövetet. Keneteket készítettünk,fixáltuk methanolban és megfestettük a három féle Hematoxylinnal, majd a kiválasztott keneteken elvégeztük az immunhisztokémiai reakciókat. (ösztrogén,progeszteron,citokeratin7).

4 NÉZZÜK A HEMATOXYLINOK ÖSSZETÉTELÉT MAYER.féle: Vizes oldat Hematoxylin, Deszt.víz Natrium jodát, Timsó Klorálhidrát Citromsav HARRIS-féle: Alkoholos oldat Hematoxylin(alkoholos) Timsó(vizes) A kettő összeöntve, felforralva Higany(II) oxid ERLICH-féle: Alkoholos oldat Hematoxylin(alkoholos) Timsó Glicerin Deszt.víz Ecetsav

5 Harris

6 Immunreakciók: sósavas alkoholos színtelenítéssel Mayer Harris Erlich ER PGR CK 7

7 Az antigén feltárás nélkül, sósavas alkoholos színtelenítés után elvégzett immunhisztokémiai reakciók - a CK 7 nagyon gyenge reakcióját kivéve nem voltak eredményesek. Technikai módosítások: 1. A sósavas alkoholos színtelenítés elhagyása 2. Antigén feltárás magas hővel - alacsony és magas ph n.

8 Immunreakciók: antigén feltárás magas hővel Mayer Harris Erlich ER PGR CK 7

9 Eredmények: Van-e különbség? 2.- magas hővel történő antigén feltárás Alacsony ph CK 7 Magas ph ER, PGR ER és PGR esetében: Legjobb eredmény MAYER és a HARRIS Gyenge ERLICH hematoxylin utáni reakció volt. A CK 7 mindhárom esetben jó eredményt adott. 3.-TRS magas nyomáson ( kukta): Csak a CK 7 adott jobb reakciót. Az ER és PGR nem.

10 TRS antigén feltárással magas nyomáson CK 7 Harris Mayer Erlich

11 Mi az oka a különbségnek? - a festékoldat -alkoholtartalma Mayer vizes Harris és az Erlich alkoholos -savtartalma Mayerben és az Erlichben is van Harrisban nincs -timsó tartalma - mindegyikben van - a festés módja Mayer és Harris progresszív festési mód ( optimális ideig festünk) Erlich regresszív festési mód ( hosszú ideig festünk-túlfestjük a keneteket, majd sósavas alkohollal differenciálunk)

12 Szövettani metszeteken az ER és a PGR NEGATÍV Mayer Harris ER PGR

13 Alkalmazni tudjuk : aspirációs citológiai vizsgálatok megfestett kenetein: TTF 1 (TRS) Szövettani feldolgozás HE

14 Kissejtes carcinoma Lymphoma

15 Lágyrész tumorok esetében FISH vizsgálatok elvégzésére: Syn.sc. t(x;18)

16 A FISH vizsgálatok metodikájban is kisebb változtatást kellett eszközölni a szokásos natív keneteken végzett reakciókhoz képest. Előkezelésként beiktattunk: -5 perces pepszines emésztést 37 fokon, ami meghozta a kívánt eredményt.

17 Syn.sc. t(x;18)

18 Mixoid lyposarcoma FUS (16p11) Jól differenciált lyposarcoma MDM2 (12q15) CHOP t(12q13) MDM2 Amplifikációs pr.

19 A tüdőcitológia területén: Pleuralis folyadék Adenocarcinoma TTF-1 HE

20 Kissejtes carcinoma HE Chr A

21 Mellkasi folyadék CK 7 Adenocarcinoma HE TTF-1

22 Felhasználhatók még molekuláris vizsgálatokra Pl: K-ras és EGFR génmutáció kimutatására: - a sejteket lekaparva a lemezről DNS izolálást végezhetünk - PCR vizsgálat génmutáció, ami a beteg további kezelését is meghatározza.

23 Összegezve tehát: jól megválasztva a hematoxylint és a különböző előkezeléseket, biztonsággal használhatjuk a HE festett keneteket további kiegészítő vizsgálatokra.

24 Köszönöm a segítséget: Prof. Dr.Sápi Zoltánnak Dr.Pápay Juditnak kolléganőimnek: Tamási Annának és Szilágyiné Paulusz Mónikának KÖSZÖNÖM A FIGYELMET