befolyásol soló hormon Miseta Attila, Tudományegyetem

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "befolyásol soló hormon Miseta Attila, Tudományegyetem attila.miseta@aok.pte.hu"

Artúr Horváth
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 A hepcidin: egy új, a vas-transzportot befolyásol soló hormon Miseta Attila, Laboratóriumi riumi Medicina Intézet, ÁOK, Pécsi Tudományegyetem H-7624 Pécs, 13. Ifjúság Str. HUNGARY attila.miseta@aok.pte.hu

Medicina Intézet, ÁOK, Pécsi Tudományegyetem H-7624

2 Hepcidin A hepcidin a vasanyagcserében közvetlenül involvált egyedüli hormon. Hepcidin hatására a ferroportin receptorokhoz kötött vas internalizálódik. Ez olyan módon történik, hogy a hepcidin gátolja a ferroportint, ami normálisan a sejtbıl távolítja el a vasat. Következésképpen a sejten belüli vas raktárak töltıdnek, míg a szérum vas csökken. A hormon hasonlóan más peptid hormonokhoz- hosszabb prekurzor (preprohormon) formájában keletkezik (84AA) ami egy 60AA hosszúságú prohormonná alakul. Az érett hormon hossza 25AA. A folyamatban szerin peptidázok (furin) játssza a fı szerepet. Érdekes módon azonban a periférián is megtalálható jelentıs mennyiségő prohormon. a b c d MALSSQIWAACLLLLLLLASLTSGSVFPQQTGQLAELQPQDRAGARASWMPMFQRRRRR DTHFPICIFCCGCCHRSKCGMCCKT Signal region Hep-84 Hep-20 Hep-25

A hormon hasonlóan más peptid hormonokhoz- hosszabb prekurzor (preprohormon) formájában keletkezik (84AA) ami egy 60AA hosszúságú prohormonná alakul. Az érett hormon hossza 25AA.

3 Hepcidin Antibakteriális hatású peptideket keresve két kutatócsoport is ugyanazon peptidre talált. Thomas Ganz és csoportja vizeletbıl izolálta. Adermann és társai a szérum ultrafiltrátumban találták meg. Mindkét csoport mint a májban termelıdı antimikrobiális hatású peptidet azonosította az ezredforduló idején. (Érdekes módon a a szervezetben szaporódó pathogén kórokozók egy része erısen vas dependens, így a szérum vas csökkenése elınytelenül hat rájuk. A hepcidin antifungális hatása valószínősíthetı, de antibakteriális hatását többen megkérdıjelezik.) Ugyanakkor a hepcidin legjelentısebb hatása valószínőleg a vasháztartás hormonális regulációja. A hepcidint expresszáló tumor esetében pl. súlyos anémia léphet fel. Valószínősíthetı, hogy az ismeretlen eredető vagy krónikus gyulladásos állapotokban jelentkezı vérszegénységek egy részének a hátterében is citokin indukálta fokozott hepcidin expresszió és hatás áll.

(Érdekes módon a a szervezetben szaporódó pathogén kórokozók egy része erısen vas dependens, így a szérum vas csökkenése elınytelenül hat rájuk.

4 Hepcidin A ferroportin nagy mennyiségben az enterocytákban, makrofágokban és májsetekben expresszálódik. Ennek megfelelıen a ferroportin gátlás az enterocytákban a vas felszívódását lassítja. A makrofágokban és májsejtekben pedig a vasraktárakat növeli, a vas kibocsájtását lassítja. Összeségében a sejt vasraktározás fokozása (hepato- és enterocyták) és a felszívódás gátlása a szérum vasat csökkentı hatásúak.

A makrofágokban és májsejtekben pedig a vasraktárakat növeli, a vas kibocsájtását lassítja.

5 Hepcidin laboratóriumi riumi diagnosztika Sajnos a hepcidin mérése nem egyszerő. Általában prohepcidin ELISA kitek érhetık el. Az eredmények nem kielégítıek. A prohepcidin szintek és a vasháztartás különféle zavarai nem függenek szorosan össze. A közelmúltban jelent meg az elsı hepcidin ELISA kit. Diagnosztikus értéke még nem igazolt.

A prohepcidin szintek és a vasháztartás különféle zavarai nem függenek szorosan

6 Milyen fehérj rjék védik (esetleg) a prepro- és prohepcidineket az érett formává tört rténı átalakul talakulást stól? Bakteriális két hibrid rendszer: egy - egy plazmid lacz és carbenicillin rezisztencia géneket tartalmaz. A gének akkkor íródnak aktívan át, ha a két plazmid által kódolt csali ill. cél fehérjék egymással kapcsolatban kerülnek. Az eredmény lemérhetı olyan módon, hogy a sejtek carbenicillin rezisztensek lesznek és laktóz bontó aktivitást mutatnak. Target protein Swiss-Prot no. Function Localization Transthyretin P02766 Thyroid hormone binding Secreted to plasma a-1 Acid protein P02763 Acute-phase protein Secreted to plasma a -1 Antitrypsin P01009 Serine protease inhibitor Secreted to plasma CytochromeP450 P05181 Drug metabolism Membrane protein ATP ADP translocase P12235 ATP ADP exchange Mitochondrion Enoyl-CoA hydratase P30084 Fatty acid oxidation Mitochondrion

cél fehérjék egymással kapcsolatban kerülnek. Az eredmény lemérhetı olyan módon, hogy a sejtek carbenicillin rezisztensek lesznek és laktóz bontó aktivitást mutatnak. Target protein Swiss-Prot no.

7 Az A1AT interakciói i a hepcidinnel és elılaalakjaival laalakjaival Insert in pbt Insert in ptrg Growth on CTCK plates Preprohepcidin a-1 Antitrypsin +++ Prohepcidin a-1 Antitrypsin +++ Hepcidin a-1 Antitrypsin - Colony growth was classified as follows: - no growth; +++ strong growth.

Antitrypsin +++ Prohepcidin a-1 Antitrypsin +++ Hepcidin a-1

8 In vitro elúci ciós esszé az A1AT és preprohepcidin interakciójának nak bizonyítására Glutathion Sepharose (GST) gyöngyök felszinére GST, vagy GST-preprohepcidin fúziós fehérje asszociál. A fúziós fehérje elúciója után vizsgáljuk, hogy az hoz-e magával A1AT-t. (Western blott anti-a1at IgG-vel.) A, a, pozitív kontrol: A1AT-t expresszáló sejtek (BL21) lizátuma b, negatív kontrol: A1AT lizátum + GST gyöngyök c, A1AT lizátum + GST-preprohepcidin gyöngyök B, a, emberi szérum + GST gyöngyök b, emberi szérum + GST-preprohepcidin gyöngyök

9 A preprohepcidin expessziója és annak gátl tlása azonos irány nyú változ ltozásokat okoz az A1AT expressziójában

10 A prohepcidin kötıdik a fehérj rjékhez a szérumban, ill. A1AT fokozza a kötıdést Ultrafiltrációs kísérletet követıen prohepcidint mértünk ELISA-val. +A1AT

11 A prohepcidin A1AT vel ko-immunoprecipit immunoprecipitálódik az emberi szérumb rumból CNBr aktivált Sepharose 4B gyöngyökhöz anti- A1AT- IgG-t kötöttünk, majd inkubáltuk a, szérum ultrafiltrátumban (negatív kontrol, csak szabad prohepcidin, b, szintetikus prohepcidinnel (pozitív kontrol) c, szérumban Az immunreakcióban anti-hepcidin ellenanyagot használtunk.

szérum ultrafiltrátumban (negatív kontrol, csak szabad prohepcidin, b, szintetikus

12 Tömegspektrometri megspektrometriás s profil az affinitás tisztított tott mintáról kontrol Zip tip affinitás tisztított szérum minta

13 Kösz szönöm a figyelemet!

Hasonló dokumentumok

A hepcidin szerepe a vas anyagcseréjében: lehetséges új aspektusok. Laboratóriumi Medicina Intézet, PTE, Klinikai Központ Pécs, Ifjúság u. 13.

A hepcidin szerepe a vas anyagcseréjében: lehetséges új aspektusok Miseta Attila, Pandur Edina, Fekete Zsuzsanna, Nagy Judit, Sipos Katalin Laboratóriumi Medicina Intézet, PTE, Klinikai Központ Pécs, Ifjúság